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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
GUIA PARASITOLOGÍA
REQUERIMIENTOS DE LABORATORIO
1. Manual de prácticas
2. Bata de laboratorio
3. Gafas de seguridad
4. Preguntas de la guía resueltas
5. Leer la teoría de la práctica correspondiente
6. Ser puntual y entrar en el grupo designado
Es importante que recuerde cada una de las partes del microscopio, su función y la forma apropiada de
utilizarlo
Indique este microscopio cuales son las principales partes y su función al lado.
INTRODUCCION- TAXONOMIA.
LABORATORIO N° 1 DIAGNÓSTICO DE MALARIA ....................................................................... 14
LABORATORIO No. 2 DEMOSTRACIONES DE PLASMODIOS DE IMPORTANCIA MÉDICA .. 18
2.1 Esporozoito coloreado .................................................................................................................... 18
2.2 Esquizonte hepático ........................................................................................................................ 18
2.3 Trofozoitos ameboides de P. vivax extendido ............................................................................... 18
2.4 Esquizonte en extendido ................................................................................................................. 19
2.5 Macrogametocito en extendido ....................................................................................................... 19
2.6 Microgametocitos en extendido ...................................................................................................... 19
2.7 Trofozoito ameboide en gota gruesa ............................................................................................... 19
2.8 Esquizonte en gota gruesa ............................................................................................................... 19
2.9 Macrogametocito en gota gruesa .................................................................................................... 20
2.10 Microgametocitos en gota gruesa ................................................................................................. 20
2.11 Anillos en extendido ..................................................................................................................... 20
2.12 Esquizonte en extendido ............................................................................................................... 20
2.13 Macrogametocito en extendido ..................................................................................................... 21
2.14 Microgametocitos en extendido .................................................................................................... 21
2.15 Anillos en gota gruesa ................................................................................................................... 21
2.16 Esquizonte en gota gruesa ............................................................................................................. 21
2.17 Macrogametocito en gota gruesa .................................................................................................. 21
2.18 Microgametocitos en gota gruesa ................................................................................................. 22
2.19 Trofozoitos en extendido y/o gota gruesa ..................................................................................... 22
2.20 Esquizonte en extendido y/o gota gruesa ...................................................................................... 22
2.21 Macrogametocito en extendido y/o gota gruesa ........................................................................... 22
2.22 Microgametocitos en extendido y/o gota gruesa .......................................................................... 23
LABORATORIO No. 3 DIAGNÓSTICO DE MALARIA..................................................................... 29
LABORATORIO No. 4 ESTADIOS DIAGNÓSTICOS DE COCCIDIAS ............................................ 31
4.1 Ooquiste de Cystoisospora belli ..................................................................................................... 31
4.2 Ooquiste de Cystoisospora belli ..................................................................................................... 31
4.3 Ooquiste de Cyclospora cayetanensis ............................................................................................ 31
4.4 Ooquiste de Cystoisospora belli ..................................................................................................... 32
4.5 Ooquiste de Cryptosporidium sp ................................................................................................... 32
4.6 Taquizoitos de Toxoplasma gondii ................................................................................................. 32
4.7 Cyclospora cayetanensis en directo (para montar) ......................................................................... 32
LABORATORIO NO. 5. DEMOSTRACIONES DE AMEBAS ............................................................. 34
5.1 Entamoeba histolytica Trofozoito................................................................................................... 34
5.2 Entamoeba histolytica Quiste ......................................................................................................... 34
5.3 Entamoeba histolytica Trofozoito................................................................................................... 34
5.4 Entamoeba histolytica Quiste ........................................................................................................ 34
5.5 Entamoeba coli Trofozoito ............................................................................................................. 35
5.6 Entamoeba coli Quiste .................................................................................................................... 35
El término parásito tiene un significado muy amplio y se refiere a un organismo que vive a expensas de otro
generalmente causando daño al hospedero. En ciencias el término parásito hace referencia a protozoos y
helmintos, éstos últimos incluyendo los nemátodos, céstodos, tremátodos y acantocéfalos. En la parasitología
médica, alrededor de 200 especies de helmintos y 80 especies de protozoarios causan infecciones humanas de
importancia. En el laboratorio de parasitología se estudiarán la clasificación, morfología, características y métodos
que permitan la detección e identificación de los parásitos más relevantes encontrados en humanos.
La clasificación consiste en establecer y definir grupos sistemáticos de organismos en una forma jerárquica que
refleje las relaciones evolutivas pasadas y presentes entre los grupos. La taxonomía es el estudio de la
clasificación de los organismos vivos. Todos los organismos son colocados en grupos específicos o taxones (en
latín taxa). Las especies son agrupadas en géneros, los géneros en familias, las familias en órdenes, los órdenes
en clases, las clases en filos y los filos dentro de uno de los seis reinos existentes ( Bacteria, Animalia, Fungi,
Plantae, Chromista, Protozoa) (figura 1.)
La morfología y características han sido el estándar de oro para el sistema de clasificación e identificación de
parásitos. Sin embargo, recientemente otros métodos han permitido determinar las distancias evolutivas y una
base racional para las jerarquías. Estos métodos incluyen el análisis de secuencias de ADN y ARN, matrices que
miden las distancias genéticas, probabilidad Bayesiana entre otros. Aunque no existe un consenso en cuanto a la
clasificación definitiva, para efectos del estudio de parásitos de interés en infección humana, se ha adoptado una
clasificación que sea menos compleja para aquellos profesionales y científicos que estudian los parásitos desde la
perspectiva del impacto en salud humana.
La clasificación que se adoptará será la desarrollada por Cavalier-Smith la cual considera al reino Protozoa en
lugar del anterior reino Protista y todas las especies se nombran de acuerdo con el código internacional de
nomenclatura zoológica (http://www.iczn.org). (cuadros 1 al 6)
Dominios
de vida
Plantae
Archaea Bacteria Eukarya Animalia Helmintos
Fungi
Protozoa Protozoos
Chromista
Bacteria
Angiostrongylidae Angiostrongylus
(Parastrongylus)
cantonensis, A.
costaricensis
Strongyloidea Chabertiidae Oesophagostomum
bifurcum
Sygamidae Mammomonogamus
laryngeus
Thelazioidea Thelaziidae Thelazia californiensis, T.
callipaeda
Trichostrongyloidea Trichostrongylidae Trichostrongylus axei,
Trichostrongylus spp
Dioctophymatidae Dioctophyme renale
Cuadros tomados de Cox F.E. Taxonomy and Classification of Human Parasitic Protozoa and Helminths. En :
Manual of clinical microbiology.ASM Press, Washington DC 2015. Modificado por Maria del Pilar Crespo, 2017.
Los apicomplexos son protozoarios que durante su ciclo de vida, uno o mas estadios, presentan una serie de
organelas que en conjunto conocemos como el complejo apical. En general los miembros del grupo son
Intracelulares obligatorios, con complejo apical en una o mas fases del ciclo de vida, la membrana esta compuesta
por 2 o tres componentes llamados membrana externa, membrana interna y, cuando existe membrana intermedia;
la membrana interna se interrumpe en el sitio donde se desarrollan los microporos. Reproducción sexual y asexual,
parasitan en muchos grupos de animales, vertebrados e invertebrados y algunos tiene notable importancia como
causantes de enfermedad en animales de importancia comercial y en el hombre ya como parásitos propios de él o
como zoonosis. El complejo apical está involucrado en los procesos de ingreso del parásito a la célula hospedera y
en la mayoría de los casos, una vez el parásito llega al interior de la célula, el complejo apical desaparece y se
vuelve a sintetizar para los estadios desarrollados que deben liberarse para ingresar en una nueva célula. Las
organelas que componen el complejo apical, visible solo por microscopía electrónica, son roptrías u órganos pares,
micronemas, anillos polares y conoide. El conoide no está presente en todos los grupos y constituye la
característica básica para separar las 2 clases mas importantes dentro del filum.
El ciclo de vida incluye fases asexuales y sexuales. La fusión de los gametos genera un cigoto que por fisión
múltiple o esporogonia da origen a los esporozoitos que en realidad son troozoitos infectivos y que una vez dentro
de la célula cada esporozoito crece y multiplica por esquizogonia para dar origen a múltiples merozoitos; las
generaciones de merozoitos pueden ser una o varias y dependen de la especie, cepa, hospedero, tamaño del
inóculo o del estado inmune de este. Para cerrar el ciclo, algunos merozoitos darán origen a macrogamontes que
maduran a macrogametos mientras que otros dan origen a microgamontes que pueden dar origen a un
microgameto o, por fisión binaria o múltiple dar origen a 2 o mas microgametos. Un microgametos se fusiona con
un macrogameto para originar un cigoto y dar inicio a un nuevo ciclo. En total el ciclo incluye 3 fases
esquizogónicas, merogonia, gametogonia y esporogonia. Aunque en general solo se reconoce como esquizogonia
la merogonia, es incorrecto ya que todos los procesos dependen de fisión múltiple. Los estadios del ciclo de vida
son haploides excepto por el cigoto.
Los organismos causantes de la malaria son apicomplexos de amplia distribución en reptiles, aves y mamíferos.
Son intracelulares obligatorios con fases asexuales y sexuales que requieren de un insecto hematófago como
vector en el cual llevan a cabo las fases sexuales. En los vertebrados ocurren fases asexuales y el desarrollo de
estadios sexuales inmaduros que deben pasar al vector para completar el ciclo de vida. La forma más común para
diferenciar las especies es la observación directa de los parásitos mediante procedimientos de tinción.
Para hacer una buena preparación se debe disponer de láminas portaobjetos limpias, preferiblemente nuevas y
colóquelas en alcohol de 70% de un día para otro, antes de usarlas.
Se deben hacer dos tipos de preparación:
a. Extendido de sangre periférica
b. Gota gruesa
A. Extendido de sangre periférica: en esta preparación los glóbulos rojos se conservan intactos y se puede
estudiar en detalle la morfología de los parásitos dentro de la célula; como la muestra presenta una sola capa
de células el examen debe ser exhaustivo debido a la poca concentración de parásitos.
B. Gota gruesa: esta preparación implica la destrucción de los glóbulos rojos; se presentan varias capas de
células, lo cual permite una mayor concentración de parásitos y, por consiguiente se requiere menos tiempo
para hacer el diagnóstico.
Deje secar las láminas a temperatura ambiente, por lo menos 20 minutos en un lugar protegido de hormiga, mosca
u otro animal.
Sumerja la lámina en azul de metileno fosfatado de 1 a 3 segundos.
Lave la lámina sumergiéndola rápidamente en dos cambios de Buffer fosfato pH 7.0 a 7.2 para eliminar el exceso
del azul de metileno.
Deje secar la lámina
Coloque las láminas con la muestra de sangre hacia abajo en una cubeta de coloración.
Añada la solución diluida de Giemsa (1 gota de Giemsa por cada ml de buffer.
Deje actuar el colorante durante 10 minutos.
Lave la lámina con agua de grifo y deje secar.
Examine la preparación con objetivo de 100X.
Colores de los diferentes elementos celulares: glóbulos rojos de color rosado pálido.
Parásitos malárico: núcleo rojo, citoplasma azul pálido, pigmento malárico amarillo-café o negro.
Plaquetas , rosa intenso a violeta.
Leucocitos: núcleo azul intenso a violeta y citoplasma azul claro.
Preguntas
¿Cuáles son las pruebas rutinarias para diagnóstico más usadas en Colombia?
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¿Cuál es la coloración usada para el diagnóstico?
Limpie el dedo con una torunda de Haga presión para obtener una gota Limpie la primera gota
algodón humedecida con alcohol de sangre
Obtenga una segunda gota y lleve la Para preparar el extendido coloque Arrastre la sangre sin pasar sobre ella
lámina a la gota otra lámina delante de la gota
El extendido tiene una sola capa de La gota gruesa se hace con un ángulo Gire en espiral del centro hacia afuera
células de otro portaobjetos hasta obtener un círculo de 1 cm
1. Reconocer las características morfológicas de los plasmodios que afectan al hombre tanto en extendido
como en gota gruesa.
DEMOSTRACIONES
1. Diagnosticar en extendido y gota gruesa no identificadas la o las especies de Plasmodium sp. Usted
recibirá dos láminas ya coloreadas y según la morfología observada usted hará el diagnóstico
correspondiente
Los organismos que conocemos como coccidias son apicomplexos parásitos de vertebrados e invertebrados, con
ciclos de vida monoxénicos (un solo hospedero), heteroxénicos facultativos (un solo hospedero pero con
hospederos intermediarios facultativos) o heteroxénicos o sea con 2 hospederos obligatorios, uno intermediarios
en el cual ocurren las fases asexuales y el definitivo en el cual se llevan a cabo las fases sexuales con o sin fases
asexuales. Solo una especies monoxénica (Cystoisospora belli) y dos heteroxénicas (Sarcocystis hominis y S.
suihominis) son parásitos exclusivo del hombre, las demás especies son organismos propios de animales
silvestres y/o domésticos que pueden infectar al hombre (zoonosis).
Objetivos:
DEMOSTRACIÓN DE COCCIDIAS
COLORACION DE KINYOUN
PROCEDIMIENTO:
Con un aplicador o palillo, haga un extendido delgado de materia fecal en una lámina limpia.
Si las heces son duras coloque una gota de solución salina 0,85% sobre la lámina y luego haga el extendido.
Deje secar a temperatura ambiente.
Fije en metanol absoluto durante 3 a 5 minutos. Deje secar a temperatura ambiente.
Agregue carbol fucsina sobre la lámina de tal manera que cubra todo el extendido, deje actuar por 1 minuto.
Lave con agua de grifo.
Decolore con alcohol ácido al 5% durante 30 segundos.
Lave con agua de grifo.
Cubra la lámina con la solución de trabajo del azul de metileno por 1 minuto.
Lave con agua.
Deje secar a temperatura ambiente.
Examine al microscopio con objetivo 100X y aceite de inmersión para buscar los ooquistes, que se tiñen de color
rojo.
PROCEDIMIENTO:
1. Con las láminas en un soporte de coloración agregue el colorante de carbol fucsina, flamee evitando que el
colorante hierva o se seque. Déjelo actuar durante 5 minutos.
2. Lave con agua de la llave.
3. Enjuague con etanol al 50%, para quitar el exceso de carbol fucsina.
4. Decolore durante 30 segundos con la solución de ácido sulfúrico al 5%.
5. Lave con agua de la llave.
6. Agregue el azul de metileno alcalino, déjelo actuar durante 1 minuto.
7. Llave con agua de la llave y deje secar las láminas a temperatura ambiente.
8. Examine la preparación con lente seco de 40X y de 100X para aceite de inmersión.
Los ooquistes de Cryptosporidium colorean de fucsia y contrastan con el fondo azul. La mayoría presentan
gránulos negros prominentes en su interior. Las levaduras se diferencian por su tono rosado pálido y opaco,
carecen de gránulos y tienen tamaño muy variable.
DEMOSTRACIONES DE AMEBAS
Objetivos:
CILIADOS
Preguntas
Cuales características permiten diferenciar los géneros de amibas que parasitan al hombre?
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Realice un cuadro comparando las amebas : E. histolytica, Iodamoeba butschlii , E. coli, E. nana en cuanto a las estructuras diferenciales
(nucleos, cariosoma, cromatina, presencia de vacuolas, barras cromatoidales etc.) de quistes y trofozoitos.
Objetivos:
DEMOSTRACIONES
7.1 Leishmania sp
corte de bazo en el que se ven amastigotas.
7.3 Lutzomya
vector de Leishmania.
Preguntas
Objetivos:
1. Aprender los fundamentos del examen directo, el montaje correcto y los tipos de soluciones que debe utilizar.
2. Llevar a cabo procedimientos por concentración por flotación con sulfato de zinc.
Para la práctica el estudiante deberá conocer previamente los fundamentos teóricos de los procedimientos a
realizar.
Preguntas.
1. Reconocer las características de algunos digeneos y céstodos parásitos del hombre o de animales que
pueden infectar a los humanos mediante preparaciones permanentes de adultos y huevos.
DEMOSTRACIONES
Describa las características morfológicas de cada uno de los estadios del ciclo de vida de los tremátodos
Objetivos:
1. Aprender a distinguir los diferentes Céstodos que parasitan al hombre, tanto en su estadío adulto como en
el estadio larval.
DEMOSTRACIONES ADULTOS
10.14 D. caninum
Los huevos indiviudalmente tiene morfología igual a los de T. solium y T. saginata y se agrupan en acumulos de 6-
15 dentro de una cápsula ovigera, forma en la cual pueden ser eliminados en las materias fecales.
Preguntas
11.3 T. trichiura
Huevos sin embrionar, salen al exterior con las materias fecales, son muy característicos y fáciles de identificar, de
color café, membrana y tapones mucoides en los extremos. La cavidad ovular muestra una masa granulosa.
Objetivos
Objetivos
DEMOSTRACIONES ADULTOS
DEMOSTRACIONES DE LARVAS
http://www.telemicroscopia.ehas.org/intestinales-test-de-graham.html
http://ocw.um.es/cc.-de-la-salud/parasitologia-veterinaria-i-nematodos/practicas-1/manual-de-
tecnicas
Objetivo:
DEMOSTRACIONES
14.5 O. volvulus:
hembra adulta en el nódulo, observe las microfilarias que hay dentro del útero y las libres en el tejido conectivo del
nódulo.
Se toman dos o cuatro gotas de sangre, se hace un rectángulo de uno por dos centímetros, se deja secar a
temperatura ambiente aproximadamente por dos días. Deshemoglobinizar y fijar
EXTENDIDO DELGADO
Poner una gota de sangre en una lámina y hacer el extendido como en hematología, dejar a temperatura
ambiente y fijar.
Poner la lámina en solución salina fisiológica durante cuatro minutos enjuagar con agua destilada y dejar secar a
temperatura ambiente.
Después que los extendidos se han secado, meterlos en metanol absoluto durante dos a tres minutos y dejar
secar.
COLORACIÓN DE GIEMSA
Extendidos delgados
a. Fije la película en metanol absoluto aproximadamente por 30 segundos bien sea por inmersión de la lámina o
por goteo del fijador sobre la muestra.
b. Deje secar a temperatura ambiente.
c. Tiña los extendidos durante 20 minutos en una dilución de Giemsa al 1:20 o por 45 minutos en una dilución de
1:50 del colorante.
d. Lave la lámina con agua buferada neutra o con agua de grifo.
e. Deje secar la muestra a temperatura ambiente.
Extendidos gruesos
a. Deje secar la lamina a temperatura ambiente por varias horas o durante la noche. La muestra no requiere
fijación.
b. Tiña la lámina por 45 minutos con solución de Giemsa a una dilución de 1:50.
c. Lave la lámina en agua buferada neutra o con agua de grifo por 5 minutos.
d. Deje secar a temperatura ambiente.
1. Recolección de Muestra
Jorgensen JH, Karon KC, Funke G, Pfaller MA, Landry ML, Ritcher SS, Warnock DW. Manual of clinical
microbiology.11th edition. Washington, D.C.: ASM Press. 2015
Bruce- Chwatt,L.J. Esential Malariology. First edition.William Heinemann Medical books Ltd. London. 1980
World Health Organization. Basic malaria microscopy. Part 1. Geneva 1991.