1. Gomari, H., Forouzandeh Moghadam, M., & Soleimani, M. (2018).

Target Cancer Therapy

Using Engineered Exosome as natural Drug Delivery Vehicle. Oncotragets And Therapy,
5753-5262.
2. Nicolás Caicedo 201820789
Nicolás Folleco 201712997
Fredy Contreras 201912079
3. Antecedente y propósito

Los exosomas son pequeñas vesículas de 30 a 100 nm secretadas por varios tipos de células.
Son liberados por la mayoría de los tipos de células, lo que indica su importante papel en los
procesos fisiológicos y patológicos, incluidas las vías de señalización, la comunicación célula a
célula, la progresión tumoral y la transferencia de moléculas. Como nanovesículas naturales,
los exosomas pueden ser un buen candidato para la administración de fármacos debido a la
baja inmunogenicidad y la capacidad de penetrar en los tejidos e incluso cruzar la barrera
hematoencefálica. En un esfuerzo por mejorar la eficiencia de los exosomas para el suministro
de fármacos dirigidos con un efecto mínimo en las células normales, expresamos los ligandos
contra las células HER2 +.

4. la pregunta que abordaron los investigadores gira en torno a que tan alta es la eficiencia de
los exosomas (vesículas extracelulares) al trasportar un medicamentos contra un oncogen del
cáncer de mama.

5.

• Cultivo celular:

o el experimento utilizo células de riñón embrionario humano, las cuales fueron cultivados
en la solución de proteínas denominada Dulbecco’s Modified Eagle´s Medium.
Adicionalmente la solución tiene incluido 10% de suero fetal de bovino y 1% de penicilina.
Encubadas a 37 grados Celsius con 5% de dióxido de carbono y en un espacio húmedo.

o También se cultivaron células madre mesenquimales cultivadas en α-MEM, con 10% de

suero fetal de bovino, 1% de penicilina y 2 mM L-glutamina. Encucabadas a 37 grados Celsius
con 5% de dióxido de carbono y en un espacio húmedo.

• Caracterización de células madre mesenquimales:

o La expresión de los marcadores celulares CD105, CD90 y la ausencia de CD45, CD31,

CD11b fue analizada mediante el uso de citometría de flujo.

• Producción de lentvirus:

o Líneas de células HEK293T fueron cultivas en un medio que presentaba el virus. Después
del periodo de incubación el flotante presente en la cultura fue recolectado. Adicionalmente el
medio del cultivo fue puesto en una centrifugadora y el sedimento celular descartado. El
flotante recolectado también fue centrifugado, para remover partículas celulares, luego el
flotante fue filtrado por fluoruro de polivinilideno y centrifugado nuevamente. Finalmente se
midió la cantidad de el virus por célula.
• Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real

o El ARN de las celulas MSC fue sintetizado mediante el uso del RNeasy mini kit.
Posteriormente la amplificación PCR fue realizada mediante DARPin.

• Transducción de células madre mesenquimales

o Las células madre mesenquimales fueron sembradas con partículas virales con MOI de 100
y protamina de sulfato. El proceso fue repetido 3 veces.

• Aislamiento de exosomas

o Para la extracción las células fueron cultivadas para alcanzar 80% de confluencia, luego el
flotante fue recolectado y procesado por el sistema de guiado celular denominado exosom
isolation kit. Principalmente el sistema de guida celular utiliza los procesos de centrifugado y
filtrado para separar los exosomas.

• Caracterización de exomas

o Inicialmente los exomas fueron distribuidos con respecto a el tamaño y el potencial Z. La

solución fue insertada en un Zetasizer y los resultados fueron analizados con el software del
producto.

o Carga DOX: los exosomas fueron cargados con DOX mediante el uso de cultivos celulares
ccon presencia de la substancia. Los exosomas fueron filtrados por un filtro de 100kDa, para
remover todo DOX no incorporado.

o Marcado de exosomas y ensayo de captación celular: los exosomas fueron marcados

mediante el uso de una membrana lipídica de color verde.

o Tratamiento celular y citotoxicidad: la efectiviadad de los exosomas fue evaluada

mediante el estándar de MTT

• Análisis de estadísticas

 Los datos fueron analizados mediante el uso de Student’s t-test y los resultados menores
de 0.05 fueron considerados significativos.

6. Resultados generales

Los exosomas dirigidos fueron preferentemente captados por células HER2 +. Por lo tanto, los
exosomas no dirigidos mostraron una menor unión a las células HER2 + en comparación con
sus contrapartes objetivo. Se realizó un ensayo de MTT para analizar el efecto citotóxico de
exo-DOX (exosoma encapsulado con doxorrubicina). Se comparó la eficacia de la
administración de exo-DOX y DOX libre (doxorubicina) con diferentes concentraciones a la
línea celular BT-474, y no se observó una diferencia significativa.

7. la pregunta planteada fue resuelta en su totalidad, ya que dieron una conclusión positiva al
planteamiento de funcionalidad de los exosomas, además de esto durante la investigación
surgieron preguntas acerca de la funcioanlidad de otras vesículas extracelulares para este fin.
8. los resultados implican que los exosomas específicos son mejorados por las células HER2 +

en relación con las células HER2 y tiene el potencial de ser utilizado como un sistema eficiente
de administración de medicamentos.

9. ¿De acuerdo?

Si, los exosomas (dirigidos específicos) demostraron tener un potencial enorme como
fármacos contra el gen HER2

10.

Hay que tener en cuenta que el estudio crea una puerta a nuevas investigaciones para
encontrar nuevas formas de utilizar nanovesiculas en la implementación de medicamentos
que aceleren el proceso de lucha contra este tipo de cancer, y abiertamente a otros tipos de
esta enfermedad.

11.

• En el cultivo de lentvirus se evidencia el uso de células para incubar el virus. Esto nos
muestra que los virus no son organismos independientes y requieren de un huéspedes para
reproducirse. En la clase exploramos la estructura de un virus y cómo se comporta.

• Los conceptos de transducción celular explorados en clase, son usados en el experimento

con las células madre mesenquimales

12. ¿Qué características principales describen al organismo modelo empleado en el artículo?

¿Por qué son relevantes para la investigación? ¿Propondrían el uso de otro modelo?

Los exosomas son pequeñas vesículas de 30 a 100 nm secretadas por varios tipos de células.
Son liberados por la mayoría de los tipos de células, su capacidad en términos de transporte
facilita la investigación, por otra parte dada la “facilidad” de controlarlas son los mejores
mecanismos en cuanto a la lucha contra el cáncer de mama, por otro lado se podría pensar en
la aplicación dirigida de encimas que corrijan el oncogen HER2, pero el avance en en los
exosomas es bastante apreciable

13.

• El articulo no aborto como los exosomas se comportarían en organismo complejo, el

experimento no determino si los exosomas tratados pueden afectar a otras células las cuales
no son el objetivo inicial. Aunque no es simple determinar esta información en una etapa más
avanzada se pueden realizar estudios médicos.

• La investigación no aborta el estrés mecánico que sufrirán los exosomas al viajar por las
vías sanguíneas. Para determinar cómo se comportarían los exososmas en estas condiciones
se pueden realizar pruebas de las cuales emulen las fuerzas que se someterá un exosoma en
un cuerpo humano.
• La investigación también se puede expandir haciendo pruebas con diferentes tipos de
células cancerígenas.