Métodos utilizados para el conteo y análisis microbiológico.

Objetivo General: Realizar un análisis microbiológico de una muestra de agua y evaluar los
resultados

Específicos:

Desarrollar el análisis de muestras de agua por medio de diferentes métodos de análisis

microbiológico.

Identificar si la muestra de agua analizada por medio de los parámetros evaluados podría ser ata
para consumo humano

NÚMERO MÁS PROBABLE

Con el fin de dar reconocimiento a la posible cantidad de microorganismos coliformes termo

tolerantes o fecales, de 1 muestra de agua de la llave (de los baños de laboratorios) se implementó
el método de conteo del número más probable tal y como se muestra en seguida:

 Se hicieron diluciones de la muestra de agua, inicialmente se tomaron 10ml de la misma,

midiéndola por medio de una probeta y se vertió sobre un recipiente que contenía 90ml
de agua peptonada, obteniendo así, una solución 10-1.
 Posteriormente, y con ayuda de una micropipeta se tomó 1ml de la muestra y se depositó
sobre un tubo de ensayo que contenía 9ml de agua peptonada, obteniendo la solución del
orden 10-2.
 El proceso descrito anterior mente se repitió dos veces, tomando de la muestra
inmediatamente anterior diluida, hasta llegar a la dilución del orden 10-4.
 Con las soluciones establecidas, se descarta la primera de estas.
 Se marcaron 3 tubos que contenían caldo verde brillante con el orden de la solución 10-2,
10-3, y 10-4, realizando su respectivo duplicado.
 Se verificó que los tubos se encontraran en ausencia de CO2, para evitar lecturas erróneas
después de bajar las condiciones microbianas.
 Por medio de la micropipeta, se tomó 1000microl de cada solución, y se transportó hasta
cada tubo de ensayo, durante la siembra se tuvo precaución del orden de las soluciones
con el fin de tomar de forma adecuada la muestra.
 Se encubó, y después del tiempo determinado se tomó la respectiva lectura.
 Se realizó un repique de los tubos clasificados como positivos en caldo verde brillante, con
el fin de dar inicio a la fase confirmativa del proceso.

RECUENTO EN PLACA

El recuento en placa se desarrolló con las mismas disoluciones mencionadas anteriormente, 10 -2,
10-3, y 10-4, para este caso se tomó 0,1microl encima de cada uno de los agares, se debe tener en
cuenta que se rastrilló lo suficiente con el fin de homogenizar la muestra a lo largo de la totalidad
de la superficie de la caja de Petri.
RESULTADOS

NMP

Para la lectura de los resultados se tuvo presente las características de clasificar un tubo como
negativo o positivo, siendo el primero un tubo con turbidez y producción de CO2 encapsulado
dentro de la campana de Durham, obteniendo así

Tabla 1, Resultados NMP, Muestra Agua Potable

Inicial Replica
10-2 0 0
10-3 0 0
10-4 0 0
Fuente: Autor

Tabla 2, Resultados NMP, Muestra Agua de Río

Inicial Replica
10-2 2 2
10-3 2 2
10-4 2 2
Fuente: Autor

Tabla 3, Resultados NMP, Muestra Agua de Río (2)

Inicial Replica
10-2 2 2
10-3 2 2
10-4 2 2
Fuente: Autor

PLATE COUNT

Para el caso del conteo referente al recuento en placa, se tuvo presente que el método
únicamente tiene en cuenta las muestras que contienen entre 30 a 300 colonias sobre la superficie
de su agar, las demás se clasifican como incontables, además de esto se consideran de la misma
forma las muestras que adquirieron un crecimiento masivo imposible de medir, obteniendo de tal
forma:

Tabla 4, Resultados recuento en placa

10-2 Incontable Incontable

10-3 Incontable
10-4 Incontable
Después de realizar los respectivos cálculos se obtiene

10-2 Incontable
10-3
10-4

Ejemplo de cálculo
𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
𝑥=
𝐷𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
100
𝑥=
10−3
𝑥 = 100 ∗ 103 UFC

Finalmente se debe tener en cuenta el volumen sobre el cual se determinaron los datos, por esto
se expresa sobre 100 ml el valor final.

Análisis de resultados:

Frente a los resultados obtenidos se reconoce que el procedimiento realizado carece de una
buena práctica puesto que al observar. Frente a los resultados esperados quería observarse una
menor cantidad de presencia de microorganismos en menor concentración pero se observó
totalmente lo contrarió con lo cual podría decirse que existieron falencias en el desarrollo de la
misma en cuestión; esto pudo deberse a que las puntas utilizadas en las pipetas estuvieran
contaminadas y trasladar una mayor concentración a las muestras que se suponía no debían
tenerlas, además el no agitar la muestra previamente de agregar la muestra son factores que sin
duda pudieron afectar la práctica.

Frente si el agua es o no apta para consumo y pese a que los resultados pueden ser cuestionados
por el mal desarrollo de la práctica nos atrevemos a pensar que existen gran cantidad de
microorganismos distribuidas en bastantes colonias con lo cual sería necesario un análisis más
detallado que indique que tipo de microorganismo es, y cuál es el grado de implicación en la salud
humana, la razón que en el agua de grifo pueda existir tal cantidad de colonias puede deberse a
que las tuberías funcionan como reactores y a lo largo de estas se crean biopeliculas que inciden
en las propiedades físico-químicas del agua, en cuestión alteran las características del agua lo cual
podría lograr que esta no sea apta para consumo.