Experimentos

«Ser de La Católica es ser de Calidad Excelente» 4° Año de Secundaria
Normas generales de uso del laboratorio

Para el desarrollo de las prácticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que
deben ser observadas con toda escrupulosidad.
1. Antes de realizar una práctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo,
fundamento y técnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se
conozcan.
2. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar
cada práctica se procederá a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado.
3. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material.
4. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se
necesita y de los posibles riesgos de su manipulación.
5. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el
profesor.
6. No tacar con las manos y menos con la boca los productos químicos.
7. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse
con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos.
8. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los
mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará al baño María, nunca
directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las
llaves de paso al apagar la llama.
9. Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos, álcalis, etc.) deberá hacerse con cuidado para evitar
que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se verterán bruscamente en los tubos de ensayo, sino que
se dejarán resbalar suavemente por su pared.
10. Cuando se quiera diluir un ácido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: ácido
sobre agua.
11. Cuando se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de forma que la etiqueta
quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda
identificar el contenido del frasco.
12. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se
disponga en el Centro.
13. Las pipetas se cogerán de forma que sea el dedo índice el que tape su extremo superior para regular la
caída de líquido.
14. Al enrasar un líquido con una determinada división de escala graduada debe evitarse el error de paralaje
levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal.
15. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos debe evitarse la ebullición
violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo se acercará a la llama
inclinado y procurando que ésta actúe sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe que se
inicia la ebullición rápida, se retirará, acercándolo nuevamente a los pocos segundos y retirándolo otra
vez al producirse una nueva ebullición, realizando así un calentamiento intermitente. En cualquier caso,
se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona.
16. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de haberlos calentado con el
fin de evitar roturas.
17. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen.
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CIENCIA, TECNOLOGÍA Y AMBIENTE 130 Biología
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El Microscopio óptico compuesto
PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO
 Sistema óptico
o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
 Sistema mecánico
o SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
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o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular,
…..
o REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico
que consigue el enfoque correcto.
MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.

Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas
condiciones.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos
(10x) si la preparación es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico.
Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con
mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió
por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y
por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan
las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación
que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.
6. Empleo del objetivo de inmersión:
. Bajar totalmente la platina.
a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el
de x40.
c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
f. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo
de accidente es muy grande.
g. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a
usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea
enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
h. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el
objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la
preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición
de observación.
133
i. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para
evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un
papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo
con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier
caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a
secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o
xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en
exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo
agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo
con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al
acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
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Preparación de colorantes
1. Acido-Alcohol: (decolorante para tinción Ziehl-Neelsen)

o Ácido clorhídrico concentrado ..........................................................3 ml
o Etanol 95% ....................................................................................97 ml
2. Azul de metileno: Colorante de contraste para tinción de flagelos.
o Azul de metileno................................................................................1 g
o Agua destilada...............................................................................100 ml
3. Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples.
o Solución de hidróxido potásico al 1%.................................................1 ml
o Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%...............................30 ml
o Agua destilada...............................................................................100 ml
4. Colorante para esporas:
o Solución acuosa saturada de verde malaquita
5. Colorante para flagelos de Leifson:
o Solución A
 Fucsina básica .........................................................................1,2 g
 Etanol 95%.............................................................................100 ml
o Solución B
 Ácido tánico................................................................................3 g
 Agua destilada.........................................................................100 ml
o Solución C
 Cloruro sódico..........................................................................1,5 g
 Agua destilada.........................................................................100 ml
Para preparar la solución de uso, se mezclan cantidades iguales de las soluciones
A, B y C y se guarda en frasco cerrado herméticamente en la nevera donde es
estable durante varias semanas.
6. Cristal violeta: Para tinción Gram y tinción simple.
o Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0,5 g
o Agua destilada.................................................................................100 ml
7. Eosina: Para observación de células sanguíneas.
o Eosina...............................................................................................0,3 g
o Ácido acético glacial......................................................................0,025 ml
o Agua destilada...................................................................................100 ml
8. Fucsina diluida: Para tinción Gram y tinción simple.
o Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen......................................................10 ml
9. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tinción ácido-alcohol resistente.
o Fucsina básica......................................................................................1 g
o Etanol 95%........................................................................................10 ml
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o Fenol 5% en solución acuosa............................................................100 ml

10. Hematoxilina: Para observación de células sanguíneas.
o Hematoxilina.........................................................................................2 g
o Agua destilada......................................................................................1 l
11. Lactofenol: Para preparaciones microscópicas en fresco de mohos.
o Ácido láctico.....................................................................................100 ml
o Fenol................................................................................................100 g
o Glicerol.............................................................................................200 ml
o Agua.................................................................................................100 ml
12. Lactofenol al Azul Algodón: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos.
o Solución de azul algodón
 Sol. saturada de azul algodón (azul anilina soluble)......................10 ml
 Glicerol.....................................................................................10 ml
 Agua.........................................................................................80 ml
Mezclar esta solución con lactofenol a partes iguales
13. Lugol: Solución de yodo para tinción Gram.
o Yodo...................................................................................................1 g
o Yoduro potásico..................................................................................2 g
14. Orceína A: Tinción de cromosomas.
o Orceína................................................................................................2 g
o Ácido acético.....................................................................................45,8 ml
o Ácido clorhídrico 1 mol/l......................................................................8,3 ml
o Agua..................................................................................................45,8 ml
15. Orceína B: Tinción de cromosomas.
o Orceína................................................................................................2 g
o Ácido acético.....................................................................................55 ml
o Agua..................................................................................................55 ml
16. Safranina: Colorante de contraste para tinción Gram (preferible a la fucsina) y esporas.
o Safranina.........................................................................................0,25 g
o Agua destilada..................................................................................100 m
17. Sudán III: Tinción específica de grasas.
o Alcohol etílico...................................................................................100 ml
o Sudán III...................................................................................hasta saturación
18. Verde de metilo acético: Igual composición que la eosina (num. 7)
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Observación de epidermis de cebolla

MATERIAL
 Microscopio  Pinzas
 Portaobjetos  Escalpelo
 Cubreobjetos  Verde de metilo acético o azul de metileno
 Cubeta  Cuentagotas
 Agujas enmangadas  Cebolla
TÉCNICA
1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que está adherida
por su cara inferior cóncava.
2. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. Pon el porta sobre la
cubeta de tinción para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de
epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas.
3. Escurrir el agua, añadir una gotas de verde de metilo acético (o azul de metileno) sobre la
membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. ¡No debe secarse la epidermis por
falta de colorante o por evaporación del mismo!
4. Con el cuentagotas bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante.
5. Colocar sobre la preparación un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al
microscopio.
6. Observa la preparación a distintos aumentos, empezando por el más bajo. Identifica las distintas
células del tejido epidérmico y las de las hojas del bulbo de cebolla.
RESULTADOS
El resultado de esta práctica debe ser semejante a lo que muestran las siguientes fotos obtenidas con
microscopio óptico:
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Observación de epidermis de puerro

MATERIAL
 Microscopio  Agujas enmangadas

 Portaobjetos  Pinzas
 Cubreobjetos  Escalpelo
 Cuentagotas con agua  Un puerro
TÉCNICA
1. Retira una parte pequeña de la epidermis de la hoja de puerro y llévala sobre un porta en el que
habrás colocado dos o tres gotas de agua. Ten la precaución de que sea una capa incolora y de
que esté perfectamente extendida.
2. Pon el cubre y examina la preparación al microscopio.
3. Identifica en tu preparación la estructura de las células que aparecen en el esquema.
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Disección de un pez
MATERIAL
 Tijeras  Pez óseo (trucha)

 Escalpelo  Aguja enmangada
 Cubeta de disección  Pinzas
TÉCNICA
1. Introduce el pez en la cubeta de disección y obsérvalo detenidamente tratando de reconocer las

partes más importantes de su anatomía externa. Realiza un dibujo en el apartado de
observaciones.
2. Corta el opérculo y observa en el interior las branquias.
3. Haz un corte rectangular en un lado; empieza cortando la aleta pectoral . Desde el arranque de
dicha aleta y siguiendo una línea recta, corta hasta la altura del ano (situado delante de la la aleta
anal). Realiza ahora un corte vertical hasta llegar al ano. Corta después desde el ano
paralelamente al primer corte hasta llegar a la altura de la base de la aleta pectoral. Termina
realizando un corte vertical. Retira el trozo de musculatura y quedarán a la vista las vísceras del
pez. Realiza un segundo dibujo.
139
Observación de células sanguíneas

MATERIALES
 Microscopio  Frasco lavador
 Portaobjetos  Alcohol absoluto
 Mechero de alcohol  Hematoxilina
 Lanceta estéril  Eosina
 Cubeta de tinción
TÉCNICA
1. Con la lanceta estéril realizar una punción en un pulgar.

2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos.
3. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de
manera que se pueda obtener una fina película de sangre.
4. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y
dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparación.
5. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecación
del colorante agregando más líquido.
6. Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto.
7. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.
8. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero.
9. Observar al microscopio.
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Estudio de la flor
MATERIAL
 Flores  Pegamento
 Pinzas  Papel absorbente
 Tijeras  Prensa
 Cartulina
TÉCNICA
1. Escoge flores dialipétalas (pétalos separados). No cojas flores del tipo de la margarita ya que son
inflorescencias, es decir, están constituidas por un gran número de flores.
2. Coge la flor y desgaja cuidadosamente los sépalos, colocándolos sobre una cartulina de manera
que formen un círculo y se hallen en una posición igual a la que tenían en la flor.
3. Haz lo mismo con los pétalos, que colocarás en la misma cartulina, pero en un círculo interior al
anterior.
4. Corta los estambres y sitúalos en un tercer círculo interior.
5. Por último, pon en el centro los pistilos.
6. Coloca sobre el conjunto una hoja porosa (puede utilizarse papel de periódico) y prénsalo. Una
vez que estén secos estos componentes florales, pégalos en la cartulina indicando nombre y
características de cada una de las partes de esta flor.
141
Reconocimiento de lípidos
MATERIALES
 Tubos de ensayo
 Solución de NaOH al 20%
 Gradilla
 Solución de Sudán III
 Varillas de vidrio
 Tinta china roja
 Mechero
 Eter, cloroformo o acetona
 Vasos de precipitados
 Aceite de oliva
 Pipetas
1. SAPONIFICACIÓN
FUNDAMENTO
Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásico descomponiéndose en los dos
elementos que las integran: glicerina y ácidos grasos. Éstos se combinan con los iones sodio o potasio
del hidróxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sódicas o potásicas de los ácidos
grasos. En los seres vivos, la hidrólisis de los triglicéridos se realiza mediante la acción de enzimas
específicos (lipasas) que dan lugar a la formación de ácidos grasos y glicerina.
TÉCNICA
. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
. Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30 minutos.
. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solución
de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semisólida que es el jabón formado y
una superior lipídica de aceite inalterado.
2. TINCIÓN
FUNDAMENTO
Los lípidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudán III.
TÉCNICA
1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite.

2. Añadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solución alcohólica de Sudán III.
3. Al otro tubo añadir 4-5 gotas de tinta roja.
4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
142
5. Observar los resultados: en el tubo con Sudán III todo el aceite tiene que aparecer teñido,
mientras que en el tubo con tinta, ésta se irá al fondo y el aceite no estará teñido.
3. SOLUBILIDAD
FUNDAMENTO
Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequeñísimas
gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por
reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sitúa sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter, cloroformo, acetona,
benceno, etc.
TÉCNICA
1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.

2. Añadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de éter u otro disolvente orgánico,
3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
4. Observar los resultados: Se verá cómo el aceite se ha disuelto en el éter y, en cambio no lo hace
en el agua y el aceite subirá debido a su menor densidad.
CUESTIONES
1. ¿Qué son los jabones?

2. ¿Cómo se pueden obtener los jabones?
3. ¿Por qué en la saponificación la glicerina aparece en la fase acuosa?
4. ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas?
5. Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudán III y aceite-tinta y explica a qué se debe la
diferencia entre ambos resultados.
6. ¿Qué ocurre con la emulsión de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo?¿Y con la
de benceno y aceite?¿A qué se deben las diferencias observadas entre ambas emulsiones?
143
Observación de células de tejido adiposo
MATERIAL
 Microscopio  Cubeta de tinción

 Porta y cubreobjetos  Tocino u otra grasa animal
 Bisturí o escalpelo  Formol
 Frasco lavador  Sudán III
TÉCNICA
1. Con ayuda de un bisturí, cortar una finísima capa de grasa, colocarla en un porta y cubrirla con
unas gotas de formol. Dejar actuar 4 minutos.
2. Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudán III. Dejar actuar unos 5 minutos.
3. Volver a lavar la preparación con agua, cubrirla con un cubreobjetos y observar al microscopio.
144
145

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Normas generales de uso del laboratorio

El Microscopio óptico compuesto

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.

1. Acido-Alcohol: (decolorante para tinción Ziehl-Neelsen)

o Fenol 5% en solución acuosa............................................................100 ml

Observación de epidermis de cebolla

Observación de epidermis de puerro

 Microscopio  Agujas enmangadas

 Tijeras  Pez óseo (trucha)

1. Introduce el pez en la cubeta de disección y obsérvalo detenidamente tratando de reconocer las

Observación de células sanguíneas

1. Con la lanceta estéril realizar una punción en un pulgar.

1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite.

1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.

1. ¿Qué son los jabones?

Observación de células de tejido adiposo

 Microscopio  Cubeta de tinción

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