TESIS Planta de La Vida PDF

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTOBAL
DE HUAMANGA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL DE B|OLOGiA
: 4~\\\\\ 031\
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D . .127 035;-
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Capacidad anti Candida albicans de los extractos de
hojas de Synadenium grantii Hook 034|echero
africano 035.
Ayacucho, 2012.
TESIS PARA OBTENER TiTULO PROFESIONAL DE
BIOLOGO CON MENCION EN LA ESPECIALIDAD DE
M|CROB|OLOGiA
PRESENTADO POR:
Bach. MELGAR RUIZ, PAUL NICEAS
Ayacucho - Pen 031:
2014
75513
3672
/7e/
ACTA DE SUSTENTACION DE TESIS
R.D.N° 088-2014-UNSCH-FCB 024D
BACH. PAUL NICEAS MELGAR RUIZ
En la ciudad de Ayacucho a los ocho dias de| mes de agosto del dos mil catorce,
siendo Ias cuatro y quince de |a tarde, reunidos en el auditorio de los laboratorios
de Ia Facultad de Ciencias Bioiogicas de la Universidad Nacional San Cristobal
de Huamanga, bajo la presencia del Dr. Tomas Castro Carranza y como
miembros del jurado cali}401cador

Ios se}401ores
docentes el Mg. Serapio Romero
Gavilén, Blga. Laura Aucasime Medina, Blga. Edna Leon Palomino y ei Mg.
Victor Luis Cardenas Lopez, quien también actoa como secretario (e) docente en
merito a la R.D.N° 088-2014 024UNSCH-FCB-D

para recepcionar la sustentacion de
la tesis tituladaz Capacidad anti Candidad albicans de| extracto de hojas de
Synadenium granti Hook 034lechero

africano 035.
Ayacucho 2012. Presentado por ei 030
bachiller en Ciencias Biologicas Sr. Paul Niceas Melgar Ruiz quien pretende
optar el titulo profesional de Biologo con mencion en la especialidad de
Microbiologia. El presidente del jurado cali}401cador

solicito al secretario docente
dar lectura a la documentacion que sustenta el presente acto académico, acto
seguido el presidente indico al sustentante que cuenta con el tiempo de cuarenta
y cinco minutos tal como se}401ala

el reglamento de la Universidad, concluida Ia
exposicion de| trabajo de investigacion el presidente invito a los miembros del
jurado a pedir aclaraciones , ampiiaciones e interrogantes que crean 1
conveniente, concluida esta etapa el presidente de| jurado invito al sustentante y
al publico asistente abandonar momenténeamente las instalaciones de|
auditorium, para que los miembros de| jurado cali}401cador

puedan deliberar y
cali}401car
la sustentacion y defensa de la investigacion arribéndose a los
siguientes resultados:
MIEMBRO JURADO EXPOSICION RPTA PREGUNTAS PROMEDIO
Dr. Tomas Castro Carranza 16 16 16
Mg. Serapio Romero Gavilén 16 15 16
Blga. Laura Aucasime Medina 16 15 16
Blga. Edna Leon Palomino 18 18 18
Mg. Victor L. Cardenas Lopez 16 16 16
Luego de concluida Ia etapa de cali}401cacion

el sustentante obtuvo Ia cali}401cacion
promedio de DIECISEIS de la cual dan Fe los miembros del jurado calificador,

estando sus }401rmas
al pie de la presente acta, }401nalizado
el acto de sustentacion
siendo las cinco y cuarenta y cinco de la tarde , concluyéndose el presente acto .
académico.
B'rI'r'6MIx A;'T? cAER_A§iIC ii?sT'éET2X£iB"RE)"nnE?zE8}l1/Ti2\E'
P[s}401iente
Miembro Miembro
_--- 024--E3-ASIME
MEDINA BLGA. EDNA LEO; EALOMINO
Miembro Miembro
;Vl 024G_.VICT
R LU CA DENAS LOPEZ
Miembro Secretario (E)
DEDICATORIA
A mis queridos padres por su apoyo
incondicional durante mi formacién
profesional.
ii
AGRADECIMIENTO
A la Universidad Nacional de San Cristébal de Huamanga, en cuyas aulas adquiri
los conocimientos que permitieron mi formacién profesional.
A la Facuttad de Ciencias Biolégicas, a la Escuela de Formacién Profesional de
Biologia y a toda la familia biolégica en especial al Area Académica de
Microbiologia. quienes me brindaron sus sabios conocimientos.
A la Blga. Edna Leon Palomino responsable del laboratorio de Bromatologia y
Nutricién de la Escuela de Formacién Profesional de Biologia por el
asesoramiento, apoyo y facilidades brindadas en la realizacién de la presente
investigacién.
iii
INDICE GENERAL
Pégina
DEDICATORIA ii
AGRADECIMIENTO iii
iNDicE GENERAL iv
iNDicE DE TABLAS vi
INDICE DE FIGURAS vii
INDICE DE ANEXOS viii
RESUMEN xi
I. INTRODUCCION 1
ll. MARCO TEORICO 3
2.1. Anteoedentes 3
2.2. Estudios fannacolégicos de Synadenium grantii Hook 4
2.3. Genero candida 6
2.3.1. Patogenia 7
2.3.2. Manifestaciones clinicas 9
2.3.3. Etiologia de Candida albicans 9
2.3.4. Tratamiento 11
2.4. Mecanismos de accién de los antifiingicos 12
2.4.1. Accién del antifiiingico sobre la membrana celular de| hongo 12
2.4.2. Antif}401ngicos
que actuan sobre la pared celular del hongo 13
2.4.3. Antifiingicos que act}401an

sobre el ncicleo de la célula de| hongo 14
2.4.4. Agentes misceléneos 14
2.5. Plantas medicinales 14
2.5.1. lmportancia de las plantas medicinales 14
2.5.2. Synadenium grantii Hook 034lechero

africano 035 15
HI. MATERIALES Y METODOS 19
3.1. Lugar de ejecucién 19
3.2. Muestran biolégica 19
3.3. Recoleccién de la muestra biolégica 19
3.4. Cepa . 20
3.5. Férmaco de referencia 20
3.6. Dise}401o
metodolégico 20
3.6.1. Preparacién de la muestra biolégica 20
3.6.2. Obtencién de extracto acuoso 20
iv
3.6.3. Obtencién de extracto etanélico 20
3.6.4. Identi}401cacién
de los metabolites secundarios 21
3.6.5. Determinacién de la actividad anti Candida albicans 21
3.6.6. Dise}401o
experimental 22
3.6.7. Determinacién de la concentracién minima inhibitoria (CMI) 22
3.6.8. Determinacién de la concentracién fungicida minima (CMF) 23
3.6.9. Lectura de los resultados 23
3.6.10. Anélisis estadistico 23
IV. RESULTADOS 24
v. DISCUSION 30
VI. CONCLUSIONES 34
VII. RECOMENDACIONES 35
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 36
ANEXOS 38
v
iNDlCE DE TABLAS
Pégina
Tabla 1. Férmacos antif}401ngioos

usados en las candidiasis cuténeo 11
mucosas.
Tabla 2. Concentracién minima inhibitoria y concentracién minima 29
fungicida de los extractos etanélico y acuoso de las hojas de
Synadenium grantii Hook 034lechero

africano 035,
frente a
Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
vi
INDICE DE FIGURAS
Pagina
Figura 1. Promedio de los halos de inhibicién por efecto del extracto 25
acuoso de las hojas de Synadenium grantii Hook "Iechero
africano 035.
frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho.
2014.
Figura 2. Porcentaje de inhilxicién por efecto del extracto acuoso de las 26
hojas de Synadenium grantii Hook 034Iechero

africano", frente
a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho ,2014.
Figura 3. Porcentaje de inhibicién por efecto de| extracto etanélico de 27
las hojas de Synadenium grantii Hook 034lechero

africano",
frente a Candida albicans ATCC 10231 .Ayacucho, 2014.
Figura 4. Promedio de halos de inhibicién por efecto del extracto 28
etanélico de las hojas de Synadenium grantii Hook 034lechero
africano 035,
frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho,
2014.
vii
iNoIcE DE ANEXOS
Pégina
Anexo 1. Metabolites secundarios presentes en el extracto etanolico 39
y acuoso de las hojas de Synadenium grantii Hook 034lechero
africano". Ayacucho, 2013.
Anexo 2. Proceso de recoleccién de hojas de Synadenium grantii 40
Hook "Iechero africano". Ayacucho, 2012.
Anexo 3. Proceso de secado de las hojas de Synadeniumx grantii 41
Hook "lechero africano". Ayacucho, 2012.
Anexo 4. Proceso de molienda y tamizado de hojas de Synadenium 42
grantii Hook "|echero africano". Ayacucho, 2012.
Anexo 5. Tubos de la Escala de Mc Farland, Ayacucho, 2013. 43
Anexo 6. Preparacién de placas con agar Mueller Hinton. Ayacucho, 44
2013.
Anexo 7. Cepa Llofilizada de Candida albicans ATCC 10231. 45
Ayacucho, 2013.
Anexo 8. Concentracién Minima lnhibitoria (CMI) del extracto acuoso 46
y etanélico. Ayacucho, 2013.
Anexo 9. Preparacién de los extractos etanélico y acuoso". Ayacucho, 47
2013.
Anexo1o_ Halos de inhibicién producidos por el extracto acuoso a 48
concentraciones de 10 mg/ml, 5 mg/ml y 1 mg/ml, de las
hojas de Synadenium grantii Hook "lechero africano".
Ayacucho, 2013.
Anexo 11, Halos de inhibicién producidos por el control positive 49
"Ketoconazol" y control negativo "agua destilada".
Ayacucho, 2013.
Anexo12_ Halos de inhibicién proclucidos por el extracto etanélico a 50
concentraciones de 10 mg/ml, 5 mg/ml y 1 mg/ml de las
hojas de Synadenium grantii Hook "lechero africano".
Ayacucho, 2013.
Anexo 13, Concentracién fungicida minima (CMF) de los extractos de 51
las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero africano".
Ayacucho, 2013.
viii
Anexo 14. Estudio }402toquimico
de los extractos de las hojas de 52
Synadenium grantii Hook "|echero africano". Ayacucho,
2013.
Anexo 15. Caracteristicas organolépticas de los extractos de las hojas 53
de Synadenium grantii Hook "lechero africano". Ayacucho,
2013
Anexo 16 Diémetro de los halos de inhibicion de los extracto etanolico

030 54
de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero africano",
frente a Candida albicans ATCC 10231 .Ayacucho, 2014.
Anexo 17_ Diémetro de los halos de inhibicion de los extracto acuoso 55
de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero africano",
frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
Anexo 18. Dates descriptivos de los halos de inhibicion producidos por 56
Ios extractos acuosos de las hojas de Synadenium grantii
Hook "lechero africano" frente a Candida albicans ATCC
10231. Ayacucho, 2014.
Anexo 19. Dates descriptivos de los halos de inhibicion producidos por 57
los extractos etanolicos de las hojas de Synadenium grantii
Hook "|echero africano" frente a Candida albicans ATCC
10231 . Ayacucho, 2014.
Anexo 20. Dates descriptivos del porcentaje de inhibicion producido 58
por los extractos acuosos de las hojas de Synadenium
grantii Hook "lechero africano" frente a Candida albicans
ATCC 10231. Ayacucho, 2014 030
Anexo 21. Dates descriptivos de| porcentaje de inhibicién producido 59
por los extractos etanolicos de las hojas de Synadenium
grantii Hook "lechero africano" frente a Candida albicans
ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
Anexo 22. Analisis de varianza para el numero de halos de lnhibiclon 60
producidos por los extraclos acuosos de las hojas de
Synadenium grantii Hook "lechero africano" frente a
/\neX° 23- Analisis de varianza para el numero de halos de inhibicion 51
producidos por los extractos etanélicos de las hojas de
ix
Synadenium grantii Hook "Iechero africano" frente a
Anexo 24, Anélisis de varianza para el numero de porcentajes de 62
inhibicién producidos por los extractos acuosos de las hojas
de Synadenium grantii Hook "|echero africano" frente a
Anexo 25_ Anélisis de varianza para el numero de poroentajes de 63
inhibicién producidos por los extractos etanélicos de las
hojas de Synadenium grantii Hook "Iechero africano" frente
a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
Anexo 26, Prueba de comparaciones m}401ltiples

de Tukey de los halos 64
de inhibicion producidos por los extractos acuosos de las
hojas de Synadenium grantii Hook "lechero africano" frente
Anexo 27_ Prueba de comparaciones m}402ltiples

de Tukey de los halos 65
de inhibicion producidos por los extractos etanolicos de las
hojas de Synadenium grantii Hook "|echero africano" frente
Anexo 28. Prueba de comparaciones multiples de Tukey de los halos 66
de los porcentajes de inhibicién producidos por los extractos
acuosos de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero
africano" frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho,
2014 030
Anexo 29, Prueba de comparaciones mulnltiples de Tukey de los halos 67
de los porcentajes de inhibicién producidos por los extractos
etanélicos de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero
africano" frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho,
2014.
Anexo 30, Protocolo de la determinacién de la concentracién minima 68
inhibitoria (CMI) y de la concentracién minima fungicida
(CMF). Ayacucho, 2014.
Anexo 31. Certificado de identificacién taxonémica de Synadenium 69
grantii Hook "lechero africano". Ayacucho, 2012.
. Anexo 32. Matriz de consistencia 70
_ x
RESUMEN
En nuestro pais muchas especies vegetales nativas e introducidas son empleadas
empiricamente en el tratamiento de diferentes enfermedades, sin embargo, Ia
veracidad de dicho efecto terapéutico no se ha demostrado experimentalmente
aim, como por ejemplo el caso de Synadenium grantii Hook. Con el objetivo de
evaluar el efecto anti Candida albicans de los extractos acuoso y etanélico a las
concentraciones de 10 mg/ml, 5 mg/ml y 1 mg/ml de las hojas de Synadenium
grantii Hook "Iechero africano" se realizo el presente trabajo de investigacién en
los laboratorios de Bromatologia y Nutricién y laboratorio de Microbiologia de la
Escuela de Formacién Profesional de Biologia. El tipo de investigacion fue
experimental y la evaluacién de la actividad anti Candida albicans se realizé por
la técnica de difusién en disco, se oolocaron discos de papel filtro embebidos en
los extractos de la planta, sobre placas Petri conteniendo agar Mueller Hinton
sembrado con Candida albicans ATCC 10231, para Iuego observar Ia formacion
de los halos de inhibicién. Se encontré que los extractos etanélico y acuoso a la
concentracién de 10 mg/ml presentaron halos de inhibicién de 23 mm y 21 mm
respectivamente, el de 5 mg/ml con 17 mm y 15 mm y el 1 mg/ml con 12 mm y
8mm, (p<0,05). Concluyendo que el extracto etanélico de 10 mg/ml es el que mas
se acerca al control positivo Keioconazol que presento un halo de 26 mm de
diémeiro. La CMI de| extracto acuoso y elanélico de las hojas de Synadenium
grantii Hook "|echero africano" a una concentracién de 10 mg/ml fueron 0,156
mg/ml y 0,078 mg/ml respectivamente, y la CMF fue de 0.313 mg/ml y 0,156
mg/ml. Los metabolitos secundarios identi}401cados

en los extractos (Tabla 3),
coinciden con otras investigaciones realizadas en plantas de utiiidad empirica por
su efecto antimicético, dentro de estos metabolites podemos seiialar como los
posibles responsables a los flavonoides y/o alcaloides, como también a la accién
sinérgica de los metabolites secundarios de dicha planta.
Palabras clave:
Candida albicans, Synadenium grantii, actividad antif}402ngica.
xi
I. INTRODUCCION
Se ha informado de casos de candidiasis en todas panes del mundo, pero el hongo
puede encontrarse con tal frecuencia en individuos sanos, y en tal variedad de
formas clinicas que es imposible obtener datos exactos respecto a la distribucién
geogré}401ca
de la enfermedad; pueden aislarse especies de Candida tan
frecuentemente en las materias fecales, vagina y faringe de individuos de
apariencia sana que el tratamiento resulta a menudo dificil. También, como
invasores secundarios durante el tratamiento con antibiéticos de amplio espectro,
hormonas suprarrenales y drogas citotéxicas, Ias especies de Candida crean
graves problemas en el tratamiento y cuidado del paciente con enfermedad
primaria. 030
Desde Ia antigiiedad el hombre para tratar sus dolencias, usé Ias plantas
aplicéndolos de manera directa, sin embargo, con el descubrimiento de los
medicamentos sintétioos estas costumbres se fueron dejando de Iado. Con el
tiempo, por los m}401ltiples

efectos secundarios de los medicamentos sintéticos se
esté volviendo al uso de las planta medicinales?
En nuestro pais muchas especies vegetales nativas e introducidas son emp!eadas
empiricamente en el tratamiento de diferentes enfermedades, sin embargo, Ia
veracidad de dicho efecto terapéutico no se ha demostrado experimentalmente
1
aim, como por ejemplo el caso de Synadenium grantii, cuyas sinonimias boténicas
son Synadenium umbe/Iatum Pax y Euphorbia umbellata, nombres con los que
existen antecedentes que re}401eren

su empleo dentro de la medicina folklbrica de
sus lugares de origen. La presente investigacién estuvo orientado a evaluar
experimentalmente el efecto anti Candida albicans de| extracto etanélico y acuoso
de las hojas de Synadenium grantii 034|echero

africano" cuyos objetivos fueron:
Objetivo general
- Demostrar Ia capacidad anti Candida albicans del extracto etanélico y
acuoso de hojas de Synadenium grant1 030iHook 034Iechero

africano".
Objetivos especi}402cos
- Determinar Ia concentracién minima inhibitoria de los extractos etanblico y
acuoso de Synadenium grantii Hook 034lechero

africano". Frente a Candida
albicans.
o Determinar Ia concentracién minima fungicida de los extractos etanélico y
acuoso de Synadenium grantii Hook 034lechero

africano". Frente a Candida
albicans.
2
ll. MARCO TEORICO
2.1. Antecedentes
Durante muchos siglos, la gente ha usado plantas medicinales para el tratamiento
de diversas enfermedades. La literature nos indica que numerosas plantas han
sido consideradas como efectivas y no téxicas. Ellas poseen un gran potencial
pero han sido exploradas sélo parcialmente por métodos modernos. En algunos
casos, ciertos principios activos han sido aislados aunque éstos necesitan superar
pruebas de toxicidad aguda y crénica en animales antes de pasar a estudios
clinicos en humanos?
Entre Ios trabajos realizados en la Universidad Nacional de San Cristobal de
Huamanga, en la Facultad de Ciencias Biolégicas Escuela de Formacién
Profesional de Biologia, Farmacia y Bioquimica, temas relacionados con efecto
antif}402ngico
y trabajos realizados con Synadenieum granti Hook encontramos.
Alvares se}401ala
030 que Synadenium carinatum Boiis (Euforbiaceae), posee un gran
potencial farmacolégico, por el contenido de los metabolites secundarios
' careciendo estudios para el aislamiento e identi}401cacién

de compuestos de interés.
En el ensayo de citotoxicidad revela que el Iétex de| vegetal es potencialmente
téxico en concentraciones altas, oausando da}401os

oelulares menos severos e
impredecibles.
3
Huaraca5 demostré el efecto hipoglucemiante de| extracto hidroalcohélico de las
hojas de Synadenium granti Hook "|echero africano" sobre la hiperglucemia en
ratas Wistar. El extracto hidroalcohélico de las hojas de Synadenium grantii
034lechero
africano a
035
la dosis de 400 mg/kg presenté mejor efecto hipoglucemiante.
Atribuyé este efecto a los metabolites como los posibles responsables del efecto
hipoglucemiante a los triterpenoides, }402avonoides,

taninos, catequinas sustancias
fenélicos y alcaloides.
2.2. Estudios farmacolégicos de Synadenium Grantii Hook
La citotoxicidad, asi como la actividad antiparasitaria del extracto cloroférmico de
Synadenium grantii Hook, se realizé y resulté ser activa. También se evaluaron los
efectos depresores sobre el sistema nervioso central (SNC) del extracto etanélico
de las hojas de Synadenium umbellatum (SEE) y sus fracciones de hexano (FH),
cloroformo (CF) y metanol/agua (FM). En varias pruebas se utilizaron ratones
machos albinos (Mus musculus), entre ellos el sue}401o

inducido por barbittlricos,
campo abierto y la prueba de rota-rod. El SEE ha sido probado en dosis de 25, 50
y 100 mg/kg, se ensayé FH a una dosis de 10 mg/kg, la dosis CF de 20 mg/kg y
la dosis de FM 25 mg/kg. La SEE y las fracciones de HF y CF, pero no la FM,
muestran unos posibles efectos depresivos sobre el SNC, mientras que si fueron
capaces de aumentar el tiempo de reposo y reducir el n}402mero

de bolos fecales en
campo abierto, ademés de potenciar el sue}401o

inclucldo por barbituricos. En la
prueba de la rota-rod se observé que el SEE y las fraociones fueron incapaces de
causar ataxia motora o la relajacién muscular. Por lo tanto, se concluye que el
extracto etanolico y las fracciones de la FC y FH de Syandenium umbellatum Pax.
Pueden tener un efecto depresor sobre el SNC.°
Estudiaron la actividad antiulcerosa del latex de Synadenium grantii. En este
trabajo re}401eren
que Synadenium grantii Hook f. Euphorbiaceae, es conocida
4
popularmente como Ieitosinha o Jana}402ba.
El létex diluido (18 gotas/I de agua) se
utiliza com}402nmente
en el sur de Brasil para ei tratamiento de trastornos géstricos.7
Estudiaron Ia eritrodermia secundaria producida por plantas productoras de iétex
Synadenium grantii. Se presenté el caso de una ni}401a

de cuatro a}401os
de edad que
manipuié e ingirié pane de una planta de la familia de las euforbiéceas
Synadenium grantii. 034
Purificaron y caracterizaron una giicoproteina de| létex (LGP) de Synadenium
grantii por la combinacién de calor y precipitacién cromatogré}401ca

de permeacién
de gel. LGP es una proteina estable ai calor incluso a 80 °C mostré una (mica
banda fuerte tanto en SDS-PAGE (dodecil sulfato de sodio 024poliacrilamida
electroforesis en gel). asi como en nativo (écido) PAGE. LGP es una proteina
monomérica que aparece como Cinica banda en condiciones reductoras. La
purificacién y caracterizacién de una glicoproteina de Iétex de Synadenium grantii
se presenta con actividad Iitica de }401brinégeno

humano (genotipo).9
investigaron Ia actividad angiogénica de| iétex de Synadenium umbellatum Pax,
conocida popularmente como "pegamento nota" es una planta medicinal que
crece en regiones tropicales. El Iétex de esta planta se ha utilizada para tratar
varias enfermedades tales como la diabetes, lepra, tripanomiasis, Ieucemia y
diversos tumores malignos. En este estudio, se evalué Ia actividad angiogénica
del iétex de Synasenum umbellatum mediante pruebas de la membrana
corioaiantoica (CAM) de huevos embrionados de polio. Los resultados mostraron
un aumento significativo del sistema vascular (p<0,05) en comparacién con ei
control negativo (H20). El anélisis histolégico esta de acuerdo con los resultados
obtenidos. En conclusién, los datos indican que bajo Ias condiciones
experimentales de este estudio, el latex de Synadenium umbellatum presenté
efecto angiogénico. 030°
5
El létex presenta, por norma general, un pH précticamente neutro que oscila entre
7,0 y 72 aunque al entrar en contacto con el aire se vuelve écido. Transcurridas
entre doce y veinticuatro horas desde su extraccién, el pH desciende a 5,0
sobreviniéndose Ia coagulacién de la sustancia cuando se sima con un pH igual o
inferior a 4,2. 034
2.3. Genero Candida
Las lesiones producidas por candida eran conocidas en la antiguedad,
descubriéndose el hongo en 1839 por Lagenbek. Dos a}401os

mas tarde Berg
demostré que era Ia causa de aftas bucales del recién nacido. En 1843 Robin Ie
dio el nombre de O/dium albicans (levadura en forma de huevo). En 1923 Berkhont
propuso el nombre de}401nitivo

a la especie Candida albicans termino que sustituyo
a |os numerosos propuestos con anterioridad. Finalmente Castellani en 1927
describié las caracteristicas de la candidiasis broncopulmonar e incluyo Ias
levaduras entre los hongos. El género Candida pertenece a la divisién
Deuteromicetes o Fungi imperfecti (hongos imperfectos) clase Blastomicitidae
familia Cryptococaceae. Se incluye el grupo de las levaduras, formas fangicas
unicelulares que se multiplican por gemacién. Se conocen mas de 150 especies
pero soio tienen importancia como patégenos oponunistas para el hombre C.
albicans, C. guillermondii, C.krusei, C.parapsiIosis, C. estellatoidea, C.tropicaIis,
Gpseudoiropicalis, C.Iucitaneae y C. rugosa. Siendo la primera la que se aisla con
mayor frecuencia. 035
En |as diferentes especies predomina Ia forma unicelular traténdose de células
pequefias (3-5um) y paredes delgadas. La especie C. albicans presenta células
de morfologia oval, usualmente acompa}401adas

de estructuras tubulares
(seudohifas) con estrechamiento en los tabiques de los que salen ramificaciones. 034
La especie de Candida son patégenos oportunistas humanos o animales en los
cuales viven en estado saprofitico. La cavidad bucal y el resto de| tracto
i 6
gastrointestinal son territorios preferentes en donde Candida albicans se
encuentra en el 20 o 100 por ciento de las personas y en proporcién menor entre
5 y el 10 por ciento. C.Krusei, C. parapsiloisis y C. Tnopicalis. El tracto genital
femenino es otro Iugar de frecuente asentamiento, 10 a 20 por ciento de las
mujeres y hasta un 80 por ciento en las embarazadas. Un hecho importante es la
préctica ausencia de estos microorganismos en la piel normal, a excepcién de
porcentajes que no Ilegan al cinco por ciento de C. Krusei y C. parapsiloisis. Por
lo que respecta Candida albicans se ha encontrado en el intestino de palomas,
vacas y cerdos, habiéndose aislado también en el suelo y alimentos, posiblemente
contaminados a partir de las heces de estos animales. El origen de las infecciones
es en la mayor parte de los casos, de origen endégeno y e! punto de partida de|
hongo, Ia mayoria de las veces es el tracto gastrointestinal. Un tratamiento
enérgico con antibiéticos, por ejemplo conlieva en ocasiones Ia destruccién de la
microbiota comensal, por lo que Candida puede multiplicarse intensamente en
este nicho ecoiégico, con la cual puede producirse una diseminacién de mayor o
menor intensidad a otros territories orgénicos normalmente exentos, diseminacién
que de no ser controlada por los mecanismos defensivos de| huésped, puede
originar una infeccién clinica. Aunque el aire parece que nojuega un papel alguno
en la transmisién, no se puede descartar que la infeccién pueda adquirirse
directamente por contacto interhumano o a través de fémites contaminados, en
este caso Ia piel agrietada o macerada constituye Ia puena de entrada de|
microorganismo. 034
2.3.1. Patogenia
La especie C. albicans, Ia més frecuente en patogenia humana, puede infectar
cualquier tejido aunque Ia forma més comdn de candidiasis es la infeccién
super}401ciai
de la piel y mucosas. En los tejidos afectados el hongo se detecta en
forma Ievaduriforme y micelio. El carécter invasivo de este iiitimo viene dado por
7
Ia mayor facilidad de las hifas de penetrar en los tejidos y su mayor resistencia a
la fagocitosis. Al igual que en las infecciones bacterianas, el fenémeno de la
adherencia, fase previa a la colonizacién e invasién, parece de suma imponancia,
habiéndose demostrado la capacidad de adherencia de C. albicans a las células
epiteliales de la boca y de la vagina, a las células endoteiiales, a la fibroneciina,
coégulos sanguineos y otras estructuras orgénicas. La adherencia parece estar
relacionada direciamente con la formacién dei tubo germinal. puesio que las
blastosporas muestran una escasa adherencia a los tejidos, sin embargo Ia
formacién de| tubo germinal en las blastosporas de un notable

se acompa}401an
incremento de su capacidad de adhesién a las células de los tejidos colonizadosfz
Una vez que el microorganismo invade Ios tejidos o peneira en el torrente
circulatorio, los polinucieares, monociios, macréfagos y eosino}401los

actuan como
mecanismo de defensa. Los polimorfos nucieares pueden Iesionar Ias pseudohifas
y fagocitar las blastosporas, asi como Ios monocitos. Ambos tipos de células
constituyen un importante mecanismo de destruccién intraceluiar de| hongo a
través de la mieloperoxidasa, el peréxido de hidrogeno y el anién superoxido. 030
Los mecanismos inmunolégicos que intervienen en las infecciones por Candida
son parcialmente oonocidos gracias al estudio de pacientes con de}401ciencias
inmunes y candidiasis contaminante. Por lo que se re}401ere

a la respuesta inmune
de base humoral, la lgG y otros componentes de| suero ejercen una accién
opsonizante (marcado para eliminar) sobre C. albicans y algunos pacientes con
candidiasis diseminada presentan altos iitulos de anticuerpos especi}401cos,

aunque
el posible papel protector de estos continua sin ser aclarado. Las proteinas séricas
fijadoras de hierro inhiben el crecimiento del microorganismo ya que este metal es
un imponante factor de crecimiento de| hongo. Ademés, existen diferentes
sustancias humorales que presentan un efecto inhibidor de su crecimiento, asi
8
como anticuerpos aglutinantes de las células de C. albicans. El papel de todas
estas sustancias se encuentra a}401n

por dilucidar. 035
Los factores pre disponentes més importantes para la infeccién por hongos
oportunistas estén relacionadas la implantacién de prétesis, sobre todo vélvulas
cardiacas, las intervenciones quir}402rgicas

abdominales y las quemaduras graves.
Se ha descrito también la presentacién de candidiasis en diversos estados que
cursan la mayor parte de ellos con alguna alteracién de los mecanismos naturales
de defensa, entre ellos la mal nutrlcién intensa, el slndrome de mala absorcién,
las dlscrasias sanguineas, agammaglobulinemias, timoma, hipoparatiroidismo,
hipotiroidismo e hipoadrenalismo. 035
2.3.2. Manifestaciones clinicas
Las especies pertenecientes al género Candida pueden originar una gran variedad
de cuadros clinicos como resultados de las complejas interacciones entre los
microorganismos y el huésped sensible a la infeocién. Las infecciones por C.
albicans se puede dividir en tres grupos, el primero la localizacién es
exclusivamente cuténeo mucosa. El segundo esté constituldo por la candidiasis
sistémica en la que las diversas situaciones favorecedoras ya comentadas y la
depresién de los mecanismos defensivos del huésped oonducen a la
disemlnacién de la infeccién con afectacién de diversas viseras (candidiasis
profunda), muchas veces de evolucién fatal. El lercer grupo comprende a los
pacientes con candidiasis mucocutanea crénlca. 035
2.3.3. Etiologla de Candida albicans
Suele presentarse como una célula oval Ievaduriforme de dos a cuatro micras, con
sin embargo, en tejidos infectados también se han identificado

paredes }401nas;
formas }401lamentosas
de longitud variable, con extremos redondos de tres a cinco
micras de diémetro y seudohifas, que son células alargadas de levadura que
permanecen unidas entre si. Las levaduras o blastosporas son microorganismos
9
eucariéticos, Ias cuales se reproduoen asexualmente por un proceso especi}401co
de division celular conocido como gemacion. Este proceso de division implica Ia
produccién de nuevo material celular proveniente de la super}401cie

de la
blastospora. Cuando el brote o yema ha crecido y se encuentra en su tama}401o
éptimo, se suscita la divisién celular y se forma un tabique o septo entre las dos
células. La fonna }401iamentosa

del hongo (hifa), es una estructura microsoépica
tubular, Ia cual contiene mmtiples unidades celulares divididas por septos y puede
surgir a partir de blastosporas 0 de hifas existentes. Esta crece continuamente por
extension apical. La apariencia microscépica de todas las especies de Candida es
similar; todas las levaduras son Gram positivas, pero en algunas ocasiones Ia
forma de las blastosporas puede variar de ovoide a elongada o esférica.
Microscépicamente C. albicans presenta dimor}401smo,ei cual es una
transformacién de la forma ovoide de las blastosporas (levaduras) gemantes a
hifas. 034
La oomposicién quimica de C. albicans esté representada por 20 a 40% de
proteinas y 30 a 50% de polisacéridos, mientras que la proporcién de lipidos es
variable. La fraccién Iipidica va a depender de la cepa, edad del cultivo,
condiciones ambientales y de| origen de la fuente de carbono. La pared celular de
C. albicans esta compuesta principalmente por los polisacéridos Manano, Glucéno
y Quitina. Aunque Ia sintesis de los componentes de la pared celular esté
dinémicamente in}402uenciada
por las condiciones de crecimiento y por los estadios
metabélicos. El polisacérido manéno representa aproximadamente entre 15,2% y
22.9% de| peso seco y poco mas de 40% de los polisacéridos de la pared celular
de| hongo. El D-Glucén rs-1-3 y el D-Glucén I5-1-6 constituyen entre 47% y 60%
del peso seco de la pared celular. Otros componentes han sido reportados, tales
como proteinas en cantidades que osciian entre 6% y 25%, lipidos entre 1% y 7%
y Quitina entre 0.6% y 9% del peso de la pared celular. 035
10
2.3.4. Tratamiento
Las candidiasis limitadas a piel o mucosa suelen responder favorablemente a la
instauracién de una terapéutica antifungica tépica. La micosis profunda necesita
tratamiento especi}401co
con antibiéticos antif}402ngicos
sistémicos, dada la gravedad
de estas infecciones. Sin embargo, en ocasiones su administracién se encuentra
Iimitada por los efectos téxioos secundarios a que pueden dar Iugar, dado que las
células f}401ngicas
son eucariotas al igual que las humanas, por lo cual los
fenémenos de toxicidad son previsibles en mayor o menor grado. sobre los
factores predisponentes favorables a la presentacién de las formas graves de
candidiasis es di}401cil
influir favorablemente, hecho importante al objeto de no
propiciar la diseminacién de| hongo y su looalizacién posterior en érganos vitales.
Salvo en contadas siluaciones, como el control riguroso de un paciente dlabético
0 el uso correcto de un antimicrobiana. 035
Tabla 1. Férmacos antif}402ngicos

usados en las candidiasis cutaneo mucosas.
Cuténea Nislatina, Clotrimazol, Econazol, Miconazol,

ketoconazol (Tépica)
Oniquia y paroniquia Clotrimazol (Tépica)
Muguet Nistalina, Fluconazol (oral)
Esofagitis Nistatina, }402uconazol

(oral) anfotericina
B(lntravenosa)
Vulvovaginitis Nislatina. Clotrimazol (tépica) Fluconazol,

ltraconazol(oral)
Candidiasis mucocutanea Fluconazol, ketoconazol (oral) Anfolericina B

crénica (intravenosa)
En el tratamiento de la candidiasis sislémica se maneja la anfotericina B. por via
endovenosa, sole 0 combinada con }402ucitosina

oral o bien }402uconazol
en
monoterapia, oral o intravenosos. Todo ellos beben ser administrados durante un
11
periodo de tiempo largo, generalmente no inferior a las seis semanas. La aparicion
del fenémeno de la resistencia a los anti fcmgicos hace necesario el estudio de la
sensibilidad in Vitro, previamente al tratamiento. El inoonveniente es que los
mélodos de estudio no estén perfectamente estandarizados, pues se encuentran
sujetos a una serie de parémetros (medio de cultivo. pH, inoculo, temperatura,
tiempo de incubacion) que pueden proporcionar resultados erroneos. 035
2.4. Mecanismos de accion de los antif}402ngicos
La gran similitud ente las células mamiferas y f}402ngicas

resulta un problema a la
hora de dise}401ar
la molécula antifflngica, pues esta debe ser selective de la célula
patogena y no de la célula humana sana. Los agentes antif}401ngicos

oomtiinmente
son utilizados ante infecciones de las mucosas de las cuales una de cuatro eslén
relacionadas con hongos patégenos}401s
2.4.1. Accion del antifdngico sobre la membrana celular del hongo
La membrana celular de la célula humana asi como la de los hongos, desempe}401a
una importante funcion en la division celular y en el metabolismo. Las complejas
particulas lipidicas llamadas esterolatos, son aproximadamente el 25% de la
membrana celular. Sin embargo, ei contenido del esterol de la célula f}401ngica

y
mamifera es diferente. En las células de los mamiferos el colesterol es el esterol
que predomina y en las células f}401ngicas

el primario es el ergosterol. La diferencia
del contenido de esteroles ha sido explolada como blanco de aocion en los
medicamentos antiffmgioos. Denlro de ellos se tiene a los polimeros, azoles y
alilaminasfs
a. Polieno
Los medicamentos que se encuentran en este grupo se unen al ergosterol
presente en la membrana celular fungica, donde se forman poros que alteran la
permeabilidad de la membrana lo que pennite una pérdida de proteinas, gl}402cidos
y caliones monovalentes y divalentes, causas de la muerte celular. 034
12
b. Azoles
Estos inhiben a la citocromo P-450-3-A de la célula ffmgica, a través de la
inactivacién de la enzima C-14-alfa-dimetilasa, con Io cual se interrumpe Ia
sintesis del ergosterol en la membrana celular, debido a la falta de ergosterol se
comienzan a acumular esteroles téxicos intermedios, aumenta Ia permeabilidad
de la membrana y se interrumpe el crecimiento del hongo. 035
c. Alilaminas
Trabajan de forma similar a los azoles, conceptualmente ellas inhiben la sintesis
de| ergosterol. sin embargo, este grupo acme en un paso temprano de la sintesis
del ergosterol.
Las alilaminas inhiben a la enzima escualeno epoxidasa, de esta forma disminuye
Ia concentracién de ergosterol, aumentan Ios niveles de escualeno, aumenta la
permeabilidad de la membrana celular y disminuye el crecimiento de| hongo. 035
2.4.2. Antifdngicos que act}401an

sobre la pared celular del hongo
Lipopeptidos. La pared celular de| hongo es fundamental en su viabilidad y
patogenicidad. Esta sirve como cubiena protectora, le provee morfologia celular,
facilita intercambia de iones, Ia }401ltracién

de proteinas y participa en el metabolismo
y catabolismo de nutrientes complejos, la ausencia de pared celular es otro de los
blancos de accién en la terapia antiffmgica.
La estructura de la pared celular de los hongos esta compuesta

031 de un complejo
proteico y poiisacérido cuya composicién varia en dependencia de la especie de
hongo. La distribucién de las proteinas y carbohidratos en la matriz esta en
relacién con la funcién de la pared celular y los procesos de osmosis y lisis, Ios
antifungicos inhiben Ia sintesis de los glucanos a través de la inactivacién de la
enzima 1,3 - beta- glucano-sintetaza. La falta de glucanos en la pared celular la
vuelve débil e incapaz de soportar el estrés osmético, por lo que el hongo sufre
la muerte. 034
13
2.4.3. Antifimgicos que act}402an
sobre el n}402cleo
de la célula del hongo
Antimetabolitos. Un clésico antimetabolito es la fluocitosina o 5 024fIuorocitosina.
Este férmaco es transportado por la citosina permeasa en el citoplasma de la cella
f}401ngica,
donde se convierte en 5- fluorouracil (5-fu) por la citosina diaminasa. El
5-fu es fosforilado e incorporado dentro del ARN convirtiéndose en el
dexosinucleotido, el cual inhibe a la timidilato sintetasa y de esta forma impide la
sintesis de proteinas de la célula. También inhibe la sintesis de la proteina fllngica,
reemplazando el uracil con 5-fu en el ARN fL':ngico.'5
2.4.4. Agentes misceléneos
En esta clase se encuentra el griseofluvin, el cual inhibe Ia mitosis celular, al
destruir el huso mitético, necesario para efectuar la divisién celular. 035
2.5. Plantas medicinales
Las plantas medicinales son aquellas que elaboran unos productos Ilamados
principios activos, que son sustancias que ejercen una accién farmacolégica
bene}401ciosa
o perjudicial para el organismo vivo. Su use data desde Ia més remota
antigiledad, de acuerdo a diversos testimonios histéricos pertenecientes a
distintas civilizaciones y culturas que han ido sucediendo en nuestro planeta,
padeciendo aun de un estudio cienti}401co. 030
2.5.1. Importancia de las plantas medicinales
El Peru, pais con abundancia de recursos vegetales cuenta con gran variedad de
especies, de las cuales Ias plantas medicinales constituyen en gran porcentaje,
siendo asi una fuente inagotable de investigacién, nuestro pais posee grandes y
variados recursos vegetales que presentan gran interés para todos los medics
cientificos del mundo, esto debido a su posicién geogré}401ca,

a su compleja
geografia, a la gran variedad de climas y de sue|os. Ia

035
actividad antif}401ngica
de
las plantas ha sido muy estudiada por la resistencia de las micosis a los distintos
tratamientos, despenando el interés de varios cienti}401cos?
14
2.5.2. Synadenium grantii Hook 034lechero
africano 035
Comentario hlstérico
La planta conocida como lechero africano, planta de la vida, planta divina oriunda
de Sudéfrica fue descubierto por el cientifico noneamericano Grant Hook.
Posteriormente viajeros lo introdujeron en el sur de América, llegando a Brasil,
Iuego a Pero por el rio Amazonas durante el siglo XX; conociéndose entonces
como la planta que cura el céncer, por oriundos de algunos pueblos. En Ias
investigaciones se descubrié que la planta poseia un oompuesto denominado
Phorbol, cuyos esteres tienen la capacidad de actuar en tumores neoplésicos,
impidiendo la proliferacién de células cancerigenas y regenerando tejidos
destruidos por el céncer.3
Clasi}401cacién
taxon6mica(segL'1n el sistema de clasificacién de Cronquist A.
1988)
Division : Magnoliophyta
clase : Magnoliopsida
Orden : Euphorbiales
Familia : Euphorbiaceae
Género : Synadenium
Especie : Synadenium grantii Hook.
Nombre vulgar : "lechero africano"
Fuente: Certificado de| Herbarium Huamanguensis, UNSCH, 2012.
Habitat y adaptabilidad climé}401ca
La planta es de clima tropical donde su desarrollo es a plenitud, siempre que
cuente con abundante sol y terrenos drenados; en climas templados también
desarrolla bien, sélo que se observa un poco de retraso en su crecimiento, no es
de climas frios, puesto que el abundante Iéiex que contiene, se congela y no hay
circulacién normal, estancéndose su crecimiento?
15
Nombres vemaculares
Lechero africano, planta de la vida, planta milagrosa, planta de sanacién, planta
divina?
Descripcién botanica
Es un arbusto suculento que puede alcanzar los cinco metros de altura, con hojas
ovaladas, peciolos conos y }402ores

rojo oscuras. Cuando Ias ramas y corteza se
quitan, Ia planta Iibera un létex blanco que es altamente irritante.°
Tama}401o
de la planta. En Africa su crecimiento méximo promedio es de 4,50 m
de aitura, en Peru se experimenté un crecimiento de 4,00 m de altura. a los ocho
a}401os,
tiene abundante follaje con abundantes ramas que abarca una
circunferencia de hasta 2,5 m de diémetro se observé también que en terrenos
arcillosos alcanza una altura mayorf 031
Tallo. La planta de la vida o lechero africano, es un arbusto o arbolito monoico
con el tallo cilindrico, verde inerme en sue|os con abundante nutrientes cuando Ia
planta es tierna, con marca en las hojas, tornéndose le}401oso

con el tiempo, oon
abundante Iétex, coneza griséoea escamosa en planta adulta y en plantas tiernas
Ia corteza es verde en suelos ricos y purpurea en suelos pobres, tiene abundante
ramas que brotan desde la altura de las primeras hojas?
Hojas. Las hojas son eliptica de 5 cm a 17 cm de largo y de 2 cm de ancho, Iiza.
alterna con base atenuada, margen entero, oolor verde en el haz y a veces
purpareas en el envés, de textura gruesa peciolo de unos 5 mm a 8 mm de largo
contiene también létex se mantienen verdes y no se desprenden fécilmente,
cuando el arbolito es robusto y esté en sue|os ricos y amarillento en sue|os
pobres?
La }402or.
Segan el sistema de rami}401cacién
la inflorescencia es de tipo cimosa,
segon su ubicacién es axilar de 5 a 10 cm de largo, sobre pedanculos de 3 a 5 om
de longitud, seg}402n
el namero de }402ores
pluriforas, el involucro de 5 mm a 6 mm de
16 WW "'
034 035
EQASEBBM 034E034nmm}402
§ 030gB|.|0T5°5
diémetro de color rojo oscuro. Las }402ores
carecen de pélalo sépalo a los que se le
denomina (aclamideas), el pistilo posee un estilo muy reducido el cual se
encuentra rodeada de cinco grupos de estambres; el ovario de la }402or

es de tipo
trilocular pubescente; fruto trilobado de unos 8 mm a 10 mm de largo conteniendo
semillas de 2,5 mm de largo. Adema's una de las caracteristicas més importantes
de la in}402orescencia
es que el 99,9 % de las plantas en cultivos expansivos, tienen
flor en poca cantidad mientras que un 0,1% Ia floracién es total cubriéndose todo
el érbol de }402or
sin la presencia de una sola hoja, eslo ocurre a la edad de dos a}401os
aproximadamente? 030
Raiz. Las raices de la planta son rami}401cadas

no cuenta con raiz principal, Ios pelos
absorbentes son abundantes en cada ramificacién o raiz secundaria, en terrenos
ricos en nutrientes?
Composicién quimica
Se aislaron cuatro antocianinas, cianidina 3-O-(2"-(5"'-(Ep-cumaroil)-beta-
apiofuranosil)-beta-xilopiranésido)-5-O-beta-gIucopiranésido. cianidina 3-O-(2 "-
(5"'-(Ep-cumaroi|)-beta-apiofuranosy|)-beta-xilopiranésido), cianidina 3-O-(2"- (5"'-
(E-écido cafeico)-beta-apiofuranosyl)-beta-xilopiranésido) y cianidina 3-O-(2" -(5"'-
(E-feroil)-beta-apiofuranosil)-beta-xilopiranésido) a partir del lélex de las hojas del
arbuslo africano, (Synadenium grantii Hook, Euphorbiaceae) junto con la conocida
cianidina 3-0-beta-xilopiranésido-5-O-beta-gluoopiranésido y cianidina 3 024O-bela-
xilésido. Los cuatro pigmentos anleriores son las primeras antocianinas
reportadas que contienen el 030monosacérido

apiosa, y las tres subunidades 5" 030-
cinamoilo -2"-(beta-apiosiI)-beta-xilésido no han sido previamente informados
para cualquier compuesto lo mismo para Synadenium grantii Hook. 030
En otro estudio enoontraron que el létex de Synadenium grantii Hook. f.
(Euphorbiaceae) produjo una irritacién de la piel y el nuevo, 12-O-tig|oil-4-
desoxiforbol-13-isobutirato (I). La identidad de| alcohol primario diterpeno y las
17
posiciones relativas de los grupos esteri}401cantes
se establecieron por anélisis
espectral y experimentos que conducen a la hidrélisis y acetilacién de| compuesto
(I) (1) es el primer derivado de forbol de| género Synadenium en ser informado.
Aislaron dos nuevos forbol-ésteres de tipo diterpeno a partir de| extracto de
, cloroformo de las hojas de Synadenium grantii Hook. Y lo identificaron como
3,4,12,13-tetraacetilforbol-20-fenilacetato y 4 - desoxiforbol-12, 13 - ditiglato para
los que se adoptaron Ios nombres triviales Synagrantol A y B, respectivamente.
Por otra parte, dos triterpenos conocidos fueron aislados. 035
La cromatografia de gases-espectrometria de masas (GC-MS) demostré la
presencia de esteres del diterpeno tigliano en el létex, identi}401cados

como 12-
desoxiforbol-13 - (2-metilpropionate) y forbol 12,1320 024

triacetato. 035
18
III. MATERIALES Y METODOS
3.1. Lugar de ejecucién
El presente trabajo se realizé en los laboratories de Bromatologia y Nutricién, y
Microbiologia de la Facultad de Ciencias Biolégicas de la Universidad Nacional
San Cristobal de Huamanga.
El trabajo de investigacién se realizé durante los meses de noviembre del 2012
febrero del 2013.
3.2. Muestra biolégica
Hojas de Synadenium grantii Hook 034|echero

africano" muestreo por conveniencia.
3.3. Recoleccién de Muestra biolégica
La cantidad de la muestra fue de 3 kg de hojas Synadenium grantii Hook 034lechero
africano" recolectadas en la ciudad de Ayacucho, en horas de la ma}401ana,

entre
las 6 a 7 AM; antes que los rayos solares iluminen Ia planta, se introdujeron en
bolsas de papel para evitar su transpiracién durante su traslado, se escogieron Ias
hojas de buen estado, Iibre de polvo, tierra y partes de la planta que no
utilizados. 035
Una parte de la muestra, especi}401camente

una rama con hojas e in}402orescencia
sirvié para la identificacién botanica, realizada en el Herbarium Huamangensis de
la Facultad de Ciencias Biolégicas de la Universidad Nacional de San Cristobal de
Huamanga por la Biologa Laura Aucasime Medina.
19
3.4. Cepa
Candida albicans ATCC 10231, proporcionada por el Area Académica de
Microbiologia de la Escuela de Formacién Profesional de Biologia de la Facultad
de Ciencias Biolégicas de la Universidad Nacional San Cristébal de Huamanga.
3.5. Férmaco de referencia
Ketoconazol. Tabletas de 200 mg. (Fuente. Laboratorio Farmindustria).
3.6. Dise}402o
metodolégico
3.6.1. Preparacibn de la muestra biologica
Molienda
Las hojas fueron sometidas a molienda en mortero de porcelana, Iuego se
tamizaron con malla de 3 mm, de diémetro obteniéndose par}401culas

no mayores
de 3 mm.
3.6.2. Obtencién de extracto acuoso
Se pesé 10 g de hojas de Synadenium grantii Hook pulverizadas y se a}401adié

a
100 ml de agua destilada hirviendo obteniéndose un extracto por infusién de 10
mg/ml de la cual se obtuvo Ias concentraciones de 5 mg/ml y 1 mg/ml.
3.6.3. Obtencién de extracto etanélico
Las hojas pulverizadas de Synadenium grantii Hook 034lechero

africano" fueron
sometidas a la extraccién utilizando etanol, se macero durante cinco dias, en
frascos de color émbar oon agitaciones permanentes, seguidamente se }401ltré

y
Iuego se concentré en ba}401o

maria, procediendo a secar en estufa a no més de
50C hasta obtener un extracio semisélido de color marrén verduzco en su forma

034,
més estable.
Se pesé 100 mg de| extracto etanélico obtenido, Iuego se diluyé en 10 ml de agua
destilada estéril. siendo esta Ia solucién madre de 10 mg/ml de la cual se extrajo
1 ml con una pipeta para venerlo en tubo conteniendo una determinada cantidad
de agua destilada estéril, para asi obtener concentraciones de 5 mg/ml y 1 mg/ml.
20
3.6.4. Identi}401cacion
de los metabolitos secundarios
Las reacciones de identificacién de los diferentes metabolitos secundarios
presentes en los extractos etanélico y acuoso de las hojas de Synadenium grantii
Hook 034lechero
africano se
035realizaron siguiendo Ios procedimientos propuestos por
Miranda y Cuellar? 030

el cual se realizé en el laboratorio de Farmacia y
Bioquimica.
3.6.5. Determinacion de la actividad anti Candida albicans
Preparacion del inoculo I
1. Se iomé la cepa de Candida albicans con el asa de siembra.
2. Luego se resuspendié en un tubo de vidrio con solucion salina fisiolégica
0,85%.
3. Se homogenizé y ajusto a la turbidez de 0,5 en la escala de McFarIand que
equivale a 15 x 103 UFC).
4. Se realizé este paso visualmente, teniendo en cuenta la luz adecuada.
comparando asi el inoculo con el esténdar de 0.5 de McFarland contra un
fondo blanco, el cual se usé inmediatamente? 030
Determinacion de halo de inhibicion
Método de difusién en disco
1. Se preparé placas Petri con agar Mueller Hinton.
2. Se sembré con la ayuda de un hisopo estéril embebido en el inoculo.
dejéndose secar en la estufa por un espacio de 5 minutos para que se
absorba la humedad.
3. Se incorporaron discos de papel filtro especial de 5 mm de diémetro
embebidos en los extractos acuoso y etanélico de las hojas de Synadenium
grantii Hook.
4. Se incubaron a 37°C para asi observar la formacién de halos de inhibicién
a las 48 horas y determinar Ia actividad antimicética. 035
21
Utiiizacién de controles
Control negativo
Se utilizé como control negativo aI agua destilada.
Control positivo
Se utilizé como control positivo aI Ketoconazol (antifungico).
3.6.6. Dise}401o
experimental
Para eI presente trabajo, se formé ocho grupos de cinco repeticiones.
Grupo I 2 Control Negativo con agua destilada.
Grupo II : Control positivo con Ketoconazol.
Grupo III : Administrado con extracto acuoso a 10 mg/ml de concentracién.
Grupo IV : Administrado con extracto acuoso a 5 mg/ml de conoentracién.
Grupo V :AdminisIrado con extracto acuoso a 1 mg/ml de conoentracién.
Grupo VI :Administrado con extracto etanolico a 10 mg/ml de concentracién.
Grupo VII : Administrado con extracto etanélico a 5 mg/ml de concentracién.
Grupo VIII : Administrado con extracto etanélico a 1 mg/ml de conoentracién.
3.6.7. Determinacién de la concentracion minima inhibitoria (CMI)
EI cultivo de Candida albicans ATCC 10231 fue ajustado al esténdar de 0.5 de la
escala de McFarland. Para hallar Ia CMI se prepararon quince Iubos previamente
esierilizados y rotulados de| numero uno al quince. A continuacién se detallaz
1. A partir de| tubo numero uno hasta el tubo quince se agregé 1 ml del caldo
nutritivo.
2. Posteriormente se agregé 1 ml de extracto a! tube numero uno a partir de|
cual se traspasé al tubo numero dos y asi suoesivamente hasta el tubo
numero catorce de este se extrajo 1 ml y se descarté.
3. El tubo numero quince no recibié extracto siendo este eI control.
4. Luego se agregé 1 mI de| in6cuIo de Candida albicans ATCC 10231 a todos
los tubos y se Ilevé a incubacién a 37°C por 24 horas. 035
22
3.6.8. Determinacion de la concentracion fungicida minima (CMF)
Para la determinacion de la conoentracién minima fungicida (CMF) se procedio a
partir de la concentracién minima inhibitoria (CMI), reallzéndose de la siguiente
manera:
1. Se observé la turbidez de los tubos para la determinacion de la CMI a
simple vista.
2. Se procedio a sembrar oon la ayuda del asa de Kolle, Ios caldos de los
tubos no turbios en las placas con Agar Saboraud.
3. Posleriormente se incubo a 37°C por 24 horas. 034
3.6.9. Lectura de los resultados
Los resultados para el ensayo de 034Test

difusién en disco 035,
se reportaron en funcion
al diémetro del halo que se forma por accién de los extractos representado en
milimetros. El diémetro del halo se medio en cuatro direcciones. tomando como
resultado el promedio de estas mediciones.
Para el célculo de porcentaje de inhibicion se uso la siguiente formula. Tomando
como patron al antif}402ngico

keloconazol.
% de inhibicién = x100
Drametro de halo control
3.6.10. Anélisis estadistico
Los dalos obtenidos en el presente trabajo de investigacién se evaluaron
estadisticamente por el dise}401o

complelamente aleatorizado (ANVA) y
comparaciones m}401ltiples
de Tukey con un nivel de significancia de 0,05 para esta
se uso el Software SPSS 15,0? 030
23
IV. RESULTADOS
24
WIO
E 2190 030
030E 031 E]
-E
2
E
E I030
L:
Q
%030 B ,
2, mm 21,20
° 024 030
= 030
15,40
El
om , 024 7 I 024 V
K 254 030°°°"81°1
Extracto acaoso Extracto acuoso Extracto acuoso
300 mg/ml 10 wmgrml 5 mglmt 1 mglml
TRATAMIENTOS
ANVA p<o,o5
Figura 1. Promedio de los halos de inhibicién por efecto del extracto acuoso de Ias
hojas de Synadenium grantii Hook 034lechero
afn 031cano
frente
035,
a Candida albicans
25
mam 03
6090
6 sum El W
8
G3
2 1
; as 30,11 9
4090
% 03 9357,29 1
20130 8
%30,75
uno
Exgmcto acuoso Extmcto acuoso Extracto acuoso

to mglml 5 mglml mstiml
030
TRATAMIENTOS
ANVA p<0,05
Figura 2. Porcentaje de inhibicién por efecto de| extracto acuoso de las hojas de
africano", frente a Candida albicans ATCC
10231. Ayacucho, 2014.
26
10103
ao,cu '
5 sum 1-
§ z 2 %
Q 5 1. 030 I
32 030 031/r.-88,40
: L.
aJ,m .'i _ H A _
3 .%65,31 »
mm f" 031 A_ -» :\ B
5' 024 H A 030/038,40
olm .1-.,.'__x.. 030.:.....;

_.A,,,.i ' _ W
Extracto etanélico Extracto etandlico Extfacto eumsxico

10 rnglml 5 mglml 1 mglml
TRATAMIENTOS
ANVA p<0,05
Figura 3. Porcentaje de inhibicién por efecto de| extracto etanélico de las hojas de
Synadenium grantii Hook "|echero africano", frente a Candida albicans ATCC
10231. Ayacucho, 2014.
27
30130
E zone B
E
030Q
U ,
g E
5 a
3
9
§ tom
E1 030.
10,4-3 L
0110
Extracto etanélioo Extrncto etanélico Extracto ctanélico Ketoconnzol
1 msum! 5 mgtmn 1o mgrmx zoo mglml
TRATAMIENTOS
ANVA p<0,05
Figura 4. Promedio de halos de inhibicién por efecto de| extracto etanélico de las
hojas de Synadenium grantii Hook 034lechero
africano", frente a Candida albicans
28
Tabla 2. Concentracién minima inhibitoria y concentracién minima fungicida de los
extractos etanéiico y acuoso de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero
africano", frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
Tubes Extra(1rt': 030t;I

'a: 030<|:;1oso Tubos Extra¢(:'t'¢')gIIE::;16Iuco
1 5 1 5
2 2,5 031 2 2,5

3 1,25 3 1,25
4 0,625 4 0,625
5 0,313 s(CMF) 5 0,313

6 0,156 R(CMI) 6 0,156 S(CMF)
7 0,078 7 0,078 R(CMI)
8 0,039 8 0,039
9 0,02 9 0,02
10 0,01 10 0,01
11 0,005 11 0,005
12 0,0024 12 0,0024
13 0,0012 13 0,0012
14 0,0006 14 0,0006
8: Sensible
R: Resistente
29
v. DISCUSION
El uso de las plantas tradicionales en nuestro pais en su gran mayoria es empirico,
por lo que existen vacios en la veracidad de sus efectos terapéulicos, con este
trabajo se pretende dar valor y veracidad a los efectos antimicéticos que posee
los extractos de las hojas del Synadenium grantii Hook "|echero africano" los
metabolitos secundarios identi}401cados

en los extractos coinciden las encontradas
en otras investigaciones realizadas en plantas de utilidad empirica por su efecto
antimicético, dentro de estos metabolites podemos se}401alar

como los posibles
responsables a los flavonoides y/o alcaloides, como también a la accién sinérgica
de los metabolitos secundarios de dicha planta, en él estudié fitoquimico que se
realizé se determiné la presencia de fenoles, cardenolidos, flavonoides,
esteroides, saponinas, catequinas, Iactonas, aminoacidos, alcaloides y resinas, de
las cuales en mayor concentracién Ios flavonoides y alcaloides.
Las caracteristicas organolépticas de los extractos acuoso y etanélico de las hojas
de Synadenium grantii Hook "lechero africano" es de oolor caramelo, de olor y
sabor suigeneris.
Seg}402nBidart. 030°
muchas especies de plantas han sido utilizadas
etnofarmacologicamente para tratar enfermedades micoticas donde cada vez
mas, la gente recurre a terapias complementarias y alternativas para poder
solucionar problemas de salud, pues Ios obstéculos que enfrentan Ias familias de
30
bajos recursos impiden que tengan acceso a productos farmaoéuticos y servicios
sanitarios.
Las medias de los halos de inhibicién producidos por el extracto acuoso a
diferentes concentraciones de las hojas de Syandenium grantii Hook "|echero
africano" muestran que el de 1 mg/ml genero 8 mm de halo, el 5 mg/ml (15 mm) y
el de 10 mg/ml (21 mm) son menores al Ketoconazol (26 mm).
Las medias de los halos de inhibicién producidos por el extracto etanélico a
diferentes concentraciones de las hojas de Syandenium grantii Hook "lechero
africano" muestran que el de 1 mg/ml genero 10 mm de halo, el 5 mg/ml (17 mm)
y el de 10 mg/ml (23 mm) son menores al Ketoconazol (26 mm), siendo
estadisticamente significativo (p<0,05).
El extracto acuoso de Syandenium grantii Hook "lechero africano" a una
concentracién de 1 mgl ml presenta una media de halo de inhibicién de 8,4 1 0,55
mm, el de 5 mg/ml una media de 15,4 1 0.55 mm, y el de 10 mg/ml genero una
media de 16,6 3: 0,45 mm, tal como muestra el anélisis de comparaciones m}402ltiples
de Tukey (Anexo 22) y en los datos descriptivos (Anexo 14).
El extracto etanéiico de Syandenium grantii Hook "|echero africano" a una
concentracién de 1 mgl ml presenta una media de halo de inhibicién de 10,4 1
0,55 mm, el de 5 mg/ml una media de 16,6 1 0,55 mm, y el de 10 mg/ml genero
una media de 23 :t 0,45 mm, tal como muestra el anélisis de comparaciones
mciltiples de Tukey (Anexo 23) y en los datos descriptivos (Anexo 15).
Los porcentajes de inhibicion producidos por el extracto acuoso a diferentes
concentraciones de las hojas de Syandenium grantii Hook "lechero africano"
muestran que el de 1 mglmltubo un porcentaje de 30,76%, el de 5 mg/ml (57,69%)
y el de 10 mg/ml (80,76%) siendo esta }402itima

concentracién la que mas se acerca
al control positivo que fue el antifuingico Ketooonazol.
31
Los poroentajes de inhibicion producidos por el extracto etanélico a diferentes
concentraciones de las hojas de Syandenium grantii Hook "lechero africano"
correspondientes a las concentraciones 1 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, respecto al
Ketoconazol, fueron el 38,46%, 65.38% y 88.46% respectivamente. Siendo
estadisticamente significativo (p<0,05).
En el anélisis de comparaciones mtiltiples de Tukey (Anexo 22) y datos
descriptivos (Anexo16), la media de| porcentaje de inhibicion producida por el
extracto acuoso de Syandenium grantii Hook "|echero africano" fueron para a una
concentracién de 1 mg/ml presenta un porcentaje de inhibicién de 30,75 :1: 0,23%,
el de 5 mg/ml un porcentaje de 57,30 1 0,39% , y el de 10 mg/ml genero un
porcentaje de 80,11 1 0,63%, determinando asi que a mayor concentracion el
porcentaje de inhibicién es mayor.
El extracto etanélico de Syandenium grantii Hook "|echero africano" a una
concentracién de 1 mg/ml presenta porcentaje de inhibicion de 38,40 1 0,10 %,
el de 5 mg/ml un porcentaje de 65,31 :1: 0,12%, y el de 10 mg/ml genero un
porcentaje de 88,39 :1: 0,11%, tal como muestra el anélisis de comparaciones
m}401ltiples
de Tukey (Anexo 23) y en los datos descriptivos (Anexo 17).
La oonoentracién minima inhibitoria (CMI) y concentracién minima fungicida
(CMF) son datos de laboratorio muy importantes que en la actualidad no se toma
mucho en cuenta, esto genera el uso indiscriminado de los antifungicos y
medicamentos, propiciando la aparicién de resistencia de los microorganismos
que inutilizan a medicamentos valiosos, y que por otras causas como la falta de
regulacién en su compra y venta, Ia automedicacion y la ignorancia, favorece Ia
aparicién de cepas de microorganismos resistentes. Gracias al uso de| CMI y la
CMF se puede dar mayor valor a los medicamentos, tanto en su dosificacién y
costo bene}401cio
para el paciente.
32
En la Tabla 2, se determiné de la concentracién minima inhibitoria (CMI) de los
extractos acuoso y etanélioo de las hojas de Synadenium grantii Hook 034Iechero
africano". utilizando Ia concentracién de 10 mg/ml tanto para el extracto acuoso y
etanélico, a esta concentracién los extractos generaron mayor inhibicién
acercéndose més al control positivo 034Ketoconazo|

esto 034,
se realizé con la }401nalidad
de determinar Ia concentracién minima de| extracto (antif}401ngico)

que se requiere
para inhibir el crecimiento de Candida albicans ATCC 10231, el cual resulté para
el extracto acuoso de 0,156 mg/ml, y para el extracto etanélico de 0,078 mg/ml.
De igual modo se determiné Ia conoentracién minima fungicida (CMF) el cual nos
perrnite determinar la cantidad minima del extracto (acuoso, etanélico) que se
requiere para matar a Candida albicans ATCC 10231 in vitro, los cuales resultaron
de la siguiente manera para el extracto acuoso Ia CMF fue de 0,313 mg/ml y el
extracto etanélico Ia CMF fue 0,156 mg/ml.
33
VI. CONCLUSIONES
- El extracto acuoso y etanélico de las hojas Synadenium grantii Hook
"|echero africano" a la concentracion de 10 mg/ml presentaron mayor
actividad anti Candida albicans con 21 y 23 mm de diémetro
respectivamente, respecto a las demés concentraciones, con halos de
inhibicién de 15 y 17 mm para el extracto de 5 mg/ml y para el extracto de
1 mg/ml generaron halos de 8 y 10 mm; el control positivo Ketoconazol que
generé un halo de 26 mm, siendo estadisticamente significativo (p <0,05).
a La conoentracién minima inhibitoria, frente a Candida albicans ATCC
10231, producido por el extracto acuoso y etanélico de las hojas
Synadenium grantii Hook "|echero africano" fue de 0,156 y 0,078 mg/ml,
respectivamente.
- La conoentracién minima fungicida, frente a Candida albicans ATCC
10231, producido por el extracto acuoso y etanélioo de las hojas
Synadenium grantii Hook "lechero africano" fue de 0,313 y 0,156 mg/ml,
respectivamente.
34
VII. RECOMENDACIONES
- Teniendo en cuenta los resultados obtenidos, se recomienda realizar
estudios, asi como separar Ios metabolites secundarios de los extractos y
de esta forma verificar Ios responsables de dicha actividad farmacolégica.
- Proseguir con el estudio de| Synadenium grantii Hook "lechero africano"
con la }401nalidad
de determinar si tiene efecto en otras especies de hongos,
como también otras propiedades medicinales.
o Inoentivar el estudio de plantas usadas en medicina tradicional, sobre todo
en relacién a propiedades antimicéticas.
0 Realizar estudios de toxicidad de los metabolitos secundarios encontrados
en la planta de Synadenium grantii Hook "|echero africano" oon el objeto
de poder realizar pruebas pre clinioas y clinicas.
35
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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37
ANEXOS
38
Anexo 1
Tabla 3. Metabolites secundarios presentes en el extracto etanélico y acuoso de

las hojas de Synadenium grantii Hook 034lechero
africano 035.
Ayacucho, 2013.
METABOLITOS
ENSAYOS EXTRACTO EXTRACTO
SECUNDARIOS Acuoso ETANOLICO OBSERVACION
Fenoles y/o Coloracién Marrén

taninos gz}401jg +++ +++ Oscuro
Lactonas y/o Formacién de
Cumarinas Baljet H +++ Precipitado
Coloracién Rojo
. Rosado
F'a"° 035°" 031eS

Shinoda 035W 031 Formacién de dos
fases
. Formacién de
Sapomnas Espuma +++ _ Espuma
. Coloracién Azul
A'"'"a5 Ninhidrina 030 +++ Violéceo
. Formacién de
Resma Resina H +++ Precipitado
Formacién de
Dragendorff + +++ Preci .
pnado
Alcaloides
F " d
Mayer - ++ S£; 0353§§?;;i
Leyenda:
(-) : Ausente
(+) : Escaso
(++) 2 Buena
(+++) : Excelente
39
Anexo2
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Figura 5. Proceso de recoleccién de hojas de Synadenium grantii Hook "lechero

africano". Ayacucho. 2012.
40 .
Anexo3
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Ii 030.
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Figure 6. Proceso de secado de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero

41
Anexo 4
.. 031>_ 030??
I: 030
V _> . «g . V .} 3
V , . r 030I
V
V _ r 024
9 '5'? 031
030*'
' =' 031 030r
F:-< 0302«=
§:'= 030 030 .
Figura 7. Proceso de molienda y tamizado de hojas de Synadenium grantii Hook

"lechero africano". Ayacucho, 2012.
42
Anexos
. _ V - I . ifaran 030
' 030 1 030 L 030 . . _ 030 V

, 030 030 . .
.-44 . A * 024 V , , . 034'

u 030 - 030 < i 030 J , 0301 ;
L .
c 4 ' 030
,, a »- ,1 . = ta»-.2:
> 030 - :.{ 030.§é;.
W ' ;h_}{,__j,,:- a < D I 030: u_ !
I E I L,
Figura 8. Tubos dela Escala de Mc Farland. Ayacucho,2013.
43
Anexo 6
T 32% V ?-u- 024 02

030 030 V.
g 030-;§.
. 030
' ~ 4, 030
if I 030I
030-Q 7"
A4 }401g} -___
\
\ I
; ;031' '
, '1 I}
\
030 V.»
Figura 9. Preparacién de placas con agar Mueller Hinton. Ayacucho, 2013.
44
Anexo 7
030 it -
., = 030F
'. \ 3..
. ) §.
_*¢ mm
CEPAS ATCC DE Candida albicans 10231
V? % . '<
.K } _ , )3 :. ggi
' 030 mi
Figura 10. Cepa Iiofilizada de Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2013.
45
Anexos
030 .
\ V > 1
v%a
7 I
kqg \ 030
: 024 V
C 030 . 7 030 I t 034
F 030Y'7'D
\r"rn &( 030I'r\<n
I( 034\TT\
_k . \§_ . ..
030 ' 030. 030W

t__ '~ 024«»-' _ "4
A : A . ' _
E.\TRACTO ETAj\ 031(5LIC. 030O
Figura 1 1. Concentracién Minima Inhibitoria (CMI) del extracto acuoso y etanélico 030
Ayacucho. 2013.
46
Anexo9
u ,3. I
' 5 #31 J
~ 4 ..
030/I 030 "1 1'. V-I;

_ L 030 1 V - ; ;
' H s 4.
[ .-at
030
5 030 )
"7:
030
V ,3
« 030:
I
030
030
I
1
% .. }402 13- ~ 030
'2 030
-~ ~ 4.!
' ' i " ,. ' . I _ >
Figura 12. Preparacién de los extractos etanélico y acuoso. Ayacucho, 2013.
47
Anexo 10
\ /
.\ \ \ 030\
,~: llL\'.'.I 030.l<A\<;I ;\«;uu;1>.$«;;v

030:I 030() .1. mgr:--I I > 030
> _
Figura 13. Halos de inhibicién producidos por el extracto acuoso a

concentraciones de 10 mg/ml. 5 mg/ml y 1 mg/ml, de las hojas de Synadenium
grantii Hook "|echero africano". Ayacucho, 2013.
48
Anexo 11
CONTROL POSITIVO 034KETOCONAZOL"
.C{'-*. 030,§§ ,
ggy -.
:* R
5 _ 7
J , . .v .
. War \)¢r 030
%
( 030().\"l'R()L
.\ 031|« 030.(§.\'|'l\
030-\(£l"\
030()
{ V 2
Figura 14. Halos de inhibicién producidos por el control positivo "Ketoconazoi" y

control negativo "agua destilada". Ayacucho, 2013.
49
1 8 0 8 78
Anexo 12
Extracto etanélico 10 mg/ml
o elanélico 5 mg/ml
Extracto etanélico 1 mgl I
030
| » H W 031
1*»-v.:.
Figura 15. Halos de inhibicién producidos por el extracto etanélico a

concentraciones de 10 mg/ml, 5 mg/ml y 1 mg/ml de las hojas de Synadenium
grantii Hook "fechero africano". Ayacucho, 2013.
so A
Anexo 13
CENTRACION MiNlMA FUNGICIDA

CMF
1 5 030!
'1. A \
H " 030 "L ___.... 030
Figura 16. Concentracién fungicida minima (CMF) de los extractos de las hojas
de Synadenium grantii Hook "|echero africano". Ayacucho, 2013.
51
Anexo 14
\ K 030 030
/ ( , /
/-\ \ J 030
J
4: 034 R % 034**~-*-
*- "V T ~
.. x3e __ -fuqt}402can-1 ,:,,,,, M. St
034030
035
030V 031
030F é}402b-_'§:$
031 ft K V E. \"g' 034 024"
V an : 035 030 034 034" 03

%i"§£E 0303u 0317u 030i'si'i:"7f??'§F?;i}401i'l'!
*7 031;.;.»
03 .2
031"I
030 . .;.4;»;'.~' xv..." .V - ,-}402faanm
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030
. .22; 030_ ,
I 4§.7_..>z~S 030-I0301035""
030. -V _ , ;- sags 030:-.: Hii}402ma
0301- ta ' 14 "H 03
5.. » . 030 V .5 ' 034&... 030,.1'¥..a.,-\~K 03
'
1 V ;':i*:_; 030 ..;$°a55"s1:§- In 030 _
MA A >v' ~ ~
tr: ;:.: :22 030
030 ;rc.-ma I .
A -V -mm 030u 024.~
Figura 17. Estudio }401toquimico

de los extractos de las hojas de Synadenium grantii
Hook "lechero africano". Ayacucho, 2013.
52
Anexo 15
Tabla 4. Caracteristicas organolépticas de los extractos de las hojas de

Synadenium grantii Hook 030"lechero
Synadenium grantii Hook "lechero africano"
Aspecto: Liquido y Viscoso
Color: Caramelo
Olor: Caracteristico
Sabor: Caracteristico (acido)
53
Anexo 16
Table 5. Diémetro de los halos de inhibicién de los extracto etanélico de las hojas
de Synadenium grantii Hook "Iechero africano", frente a Candida albicans ATCC
10231. Ayacucho, 2014.
DIAMETROS DE HALOS DEL EXTRACTO ETANOLICO
Numero control (+)(mm)

PLACA 10 mg /ml (mm) 5 mg/ml(mm) 1 mg/ml(mm) KETOCONAZOL
1 24 24 22 23 23 18 16 17 17 17 10 9 10 10 10 25 26 25 26 26
2 23 22 23 23 23 16 18 18 17 17 11 11 9 10 10 26 25 26 26 26
3 23 22 23 23 23 15 15 17 16 16 10 9 12 10 10 27 26 27 27 27
4 24 23 24 22 23 16 16 15 15 16 11 10 12 10 11 26 26 26 27 26
5 23 23 22 23 23 17 17 16 16 17 10 11 10 11 11 27 27 25 26 26
Media 23 17 10 26
54
Anexo 17
Tabla 6 Diémetro
030 de los halos de inhibicién de los extracto acuoso de las hojas
de Synadenium grantii Hook "|echero africano", frente a Candida albicans ATCC
10231. Ayacucho, 2014.
DIAMETROS DE HALOS DEL ExTRACro Acuoso
NUMERO control (+)mm

PLACA KETOCONAZOL 10 mg/ml(mm) 5 mg/ml (mm) 1 mg/ml(mm)
1 25262526262120212121141515141588898
2 26252626262321212222151615141598989
3 2726Z727272221202121161715161688888
4 26262627262120222021171614151699899
5 27272526262119202221161415141588898
Media 26 21 15 8
55
Anexo 18
Tabla 7. Datos descriptivos de los halos de inhibicién producidos por los extractos
acuosos de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero africano" frente a
lntervalo de con}401anza
Eara la media al 95%
Desviacién Limite Limite

Tratamientos N Media tigica inferior sugerior Minimo Méximo
Control positivo
"kgggconazo| 5 26,2000 ,44721 25,6447 26,7553 26,00 27,00
Extracto acuoso
10mg/m] 5 21,2000 ,44721 20,5447 21,7553 21,00 22,00
_,'f""a° 030°
a° 035° 5 030°
15,4000 ,5-1772 14,7199 16,0801 15,00 16,00
mg/ml
E"" 030°
034°
030°035°
5 3,4000
030° ,54772 7,7199 9,0801 8,00 9,00
1 mglml
Total 20 17,3000 6,82565 14,6055 20,9945 8,00 27,00
56
. Anexo 19 I
Tabla 8. Dates descriptivos de los halos de inhibicién producidos por los extractos
etanélicos de las hojas de Synadenium grantii Hook "|echero africano" frente a
lntervalo de con}401anza
Eara Ia media all 95%

Tratamientos N Media tigica inferior sueerior Minimo Méximo
Control positivo
v-kmoconazol 5 26,2000 ,44721 25,6447 26,7553 26,00 27,00
Extracto
etanélico 10 mg 5 232000 ,44721 22,6447 23,7553 23,00 24,00

/ml
Extracto
etanélico 5 5 16,6000 ,54772 15,9199 17,2801 16,00 17,00
mglml
Extracts
etanélico 1 5 10,4000 ,54772 9,7199 11,0801 1000 11,00
mg/ml
Total 20 19,1000 628197 16,1599 22,0401 10,00 27,00
57
Anexo 20
Tabla 9. Dates descriptivos del porcentaje de inhibicién producido por los

extractos acuosos de las hojas de Synadenium grantii Hook "|echero africano"
frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho. 2014.
Intervalo de con}401anza
Eara Ia media al 95%

Tratamientos N Media tigica inferior sugerior Minimo Maximo
Extracto acuoso
10mg,,,,, 5 30,1077 ,62559 79.3309 80,8845 79,40 50,77
030°"°
5 57,2869
030° ,3a712 50,5052 57.7676 56,90 57.69
'15 031;1';f:1
a°"°030f 030°
5 30,7477 .2815 30,4644 31,0310 30,50 31.10
Total 15 56.0474 20.88219 44.4883 67.6116 30.50 80.77
58
Anexo 21
Tabla 10. Dates descriptivos de| porcentaje de inhibicién producido por los
extractos etanélicos de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero africano"
frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
Intervalo de con}401anza
Esra Ia media al 95%

Tratamientos N Media tigica inferior sueerior Minimo Méximo
Extracto
etan6|ico10 5 88.3969 A1326 86,2563 88,5376 66,20 88,46
mg/ml
Extramo
etané|ico5 5 65,3108 ,12339 65,1576 65,4640 65,10 65,38
mg/ml
Extracio
etan6|ico1 5 38,4009 ,o633o 38,2975 38,5044 38,30 38,46
mg/ml
Total 15 64,0362 21,14799 52,3245 75,7476 33,30 88,46
59
Anexo 22
Tabla 11. Anélisis de varianza para el numero de halos de inhibicién producidos

por los extractos acuosos de las hojas de Synadenium grantii Hook "|echero
africano" frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
Suma de Media
cuadrados 9| cuadrética F Sig.
Inter-grupos 881.200 3 293,733 1174.933 ,ooo

Infra-grupos 4.000 16 250
Toial 335,200 19
60
Anexo 23
Table 12. Anélisis de varianza para el numero de halos de inhibicién producidos

por los extractos etanélicos de las hojas de Synadenium grantii Hook "lechero
Suma de Media
cuadrados gl cuadrética F Sig.
Inter-grupos 745.800 3 248,600 994,400 ,ooo

Intra-grupos 4,000 16 ,25o
Total 749,800 19
61
Anexo 24
Tabla 13. Anélisis de varianza para el numero de poroentajes de inhibicién

producidos por los extractos acuosos de las hojas de Synadenium grantii Hook
"|echero africano" frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
' Suma de Media

Inter-grupos 6102,5346 2 3051273 15429222 ,ooo

Infra-grupos 2,373 12 .193
Toial 6104320 14
62
Anexo 25
Tabla 14. Anélisis de varianza para el numero de porcentajes de inhibicién

producidos por los extractos etanélicos de las hojas de Synadenium grantii Hook
030"lechero
Suma de Media
'" 030e"'9""°° 6261,184

030 2 3130,5912 2683945: ,ooo
lntra-grupos ,14o 12 ,o12
Total 6261.324 14
63
Anexo 26
Tabla 15. Prueba de comparaciones multiples de Tukey de los halos de inhibicién

producidos por los extractos acuosos de las hojas de Synadenium grantii Hook
"lechero africano" frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
Subcon'unto gara alfa = ,05
Tratamientos N 1 2 3 4
Extracio acuoso 1 mg/ml 5 3,4000
Extracto acuoso 5 mg/ml 5 154000

Extracto acuoso 10 mg/ml
5 21 ,2000
Control positivo
"ketoconazol 5 262000
Sig. 1,000 1,000 1,000 1,000

Se muestran Ias medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a Usa el tama}401o
muestral de la media arménica = 5,000.
64
Anexo 27
Tabla 16. Prueba de comparaciones multiples de Tukey de los halos de inhibicion

producidos por los extractos etanélicos de las hojas de Synadenium grantii Hook
"lechero africano" frente a Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho, 2014.
Subconjunto gara alfa = ,05
Tratamiemos N 1 2 3 4
Extracto etanélico
1 mg/m] 5 10,4000
Extracto etanélico
5 mg, 034 5 16,6000
Extracto etanolioo
10 mg /ml 5 23,2000
Control positive
"ketoconazol 5 26-2000
Sig. 1,000 1,000 1,000 1,000

Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a Usa el tama}401o
mueslral de la media annénica = 5,000.
65
Anexo 28
Tabla 17. Prueba de comparaciones m}402ltiples

de Tukey de los halos de los
porcentajes de inhibicién producidos por los extractos acuosos de las hojas de
Synadenium grantii Hook "lechero africano" frente a Candida albicans ATCC
10231. Ayacucho, 2014.
Subcon 030unto
Eara alfa = ,05
Tratamientos N 1 2 3
Extracto acuoso 1 mg/ml 5 3o_7477
Extracto acuoso 5 mg/ml 5 572559
Extracto acuoso 10 mg/ml

5 30,1077
Sig. 1,000 1,000 1,000

Se muestran las medias para los grupos en los subconjunios homogéneos.
a Usa el tama}401o
muestra! de la media annénica = 5,000.
66
Anexo 29
Tabla 18. Prueba de comparaciones multiples de Tukey de los halos de los

porcentajes de inhibicion producidos por los extractos etanolicos de las hojas de
Synadenium grantii Hook "|echero africano" frente a Candida albicans ATCC
10231. Ayacucho, 2014.
Subcon 030unto
Eara alfa = ,05
Tratamientos N 1 2 3
Extracio etanélico
1 mg,,,,, 5 38,4009
Extracto etanélico
5 mg, 034 5 65,3108
Extracio etanélico
10 mg/m[ 5 88,3969
Sis. 1,000 1,000 1.000

Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a Usa el tama}401o
muestra! de la media armonica = 5,000.
67
Anexo 30
Figura 18. Protocolo de la determinacién de la conoentracién minima inhibitoria

(CMI) y de la conoentracién minima fungicida (CMF). Ayacucho, 2014.
$=.......o.........m.,.u........
é
1 2,,':"_,.; 030:, 030;"..':°_.";':""°
u u u u u u u m u u u u -1 In 034HEW 035
I
Eshndunzu
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°-5""-"-"°
254?;"§".2:.
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030°: 030.'l 030c'. 0303 030."
3.01 ml segbenluvnn
enugursnboutlud
.f
I
Q Q O Euubon-'/corvesoenda
nl|CMF
68
Anexo 31
Figura 19. Certificado de identificacién taxonémica de Synadenium grantii Hook
"Iechero africano". Ayacucho. 2012.
EL JEFE DEL HERBARIUM HUAMANGENSIS DE LA FACULTAD DE

CIENCIAS BIOLOGICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN
CRISTOBAL DE HUAMANGA
C E R T I F l C A
Que, el Bach. en Biologia, Sr. Padl Niceas, MELGAR RUIZ, ha solicitado la
identi}401cacién
de una muestra vegetal para trabajo de tesis.
Dicha muestra ha sido estudiada y determinada segun el sistema de Clasificacién
de Cronquist. A. 1968. y es como sigue:
DIVISION ; MAGNOLIOPHYTA
CLASE : MAGNOLIOPSIDA
SUB CLASE : ROSIDAE
ORDEN : EUPHORBIALES
FAMILIA : EUPHORBIACEAE
GENERO : Synadenium
ESPECIE : Synadenium grantii Hook.
N.V. : 034érbol
de la vida 035
Se expide la ceni}401cacién
correspondiente a solicitud de la interesada
para los }401nes

que estime conveniente.
Ayacucho, 14 de Diciembre del 2012
Q_m;_.-..-1:
69
O
9 3
38
lgg
§
oh
3 Q
Q14: \
035 V
§ 030\
%8Q,Q.<uQ034w 030§ 1)
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Q 0 §§§S%§&a%§§m \
§ §
Q 9 §m 0 §s®%°E§§s%§S§$§
w b L0 m . E3 w
. HQ $Q3bm 034§§°Q
§°Q§°Q
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3
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3% §§ 034%§
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030*m 034S
- - - podemos se}401alar
como los posibles responsables
Capacldad ant Candlda
030 a los }402avonoides
y/o alcaloides, como también a
albicans del extracto de la accion sinérgica de los metabolitos
_ ' secundarios de dicha planta.
hojas de Synadenium ,.,,,,,,,, cm,

grant Hook
035 034lechero Candida albicans, Synadenium grantii, actividad
africano 035
Ayacucho a" 034}401'"gi°" 030
21 2 031 SUMMARY
_ I _ ' ' In our country many native and introduced plant
I Melg R
035034
Paul030Z
Nweasl
P310m||'|0, 031
Edna 1313 Lem
034 030 species are
different used empirically
diseases, in the
however, the treatment
veracity of
of this
Area de Microbiologia 030:
Facultad de Ciencias thera eutic effect has not yet been demonstrated
Bio1.f,gjca5_ 9
experimentally, such as the case of Synadenium
RESUMEN grantii Hook In order to evaluate the anti
En nuestro pais muchas especies vegetales Canwda albnrns 5 :3 /lml 1 mg / ml effemff
nativas e introducidas son empleadas aquwuti t. an fetlgno fxz}401as

dml t C
empiricamente
enfermedades, en
sin elembargo,
tratamiento de diferentes
la veracidad de come" Fons
Synadenmm 0 .. Hook
gram" mg" . 031adairy.
n . Eaves
the
dicho efecto terapéutioo no se ha demostrado present nisearch was conflilcted mlaboratones of

experimentalmente aun, como por ejemplo el F°.°d S.°'e"°e and Nlmmon and laboratory of
caso dc Synadenium gmnm. Hook. con el Microbiology, Vocational School of Biology.
objetivo de evaluar el efecto anti Candida 3;]h°ret§ez,r 030:: 0311l:i 030:'j: 0301se; 030b9°"m°nm'angfevaiu
albicans de los extractos acuoso y etanolico alas .e an r I a mans was pe orme y e

concentracionesde10mg/ml,5mg/mly1mg/ml disk dlffusmn method 031
embedded }401lter
papel 030
de las hojas de Synadenium grantii Hook discs were 030?1 m
034.°e
the plan.
030i extracts
030 on pet 034
"lechero africano" se realizé el presente trabajo pli: 030eSC°°:;.::mlgb
.Muell:{[(}:IClmlo:23a1gaI Zeiged
de investigacion en los laboratories de 034E 030Th
f a ram
031 f. h.b.t. h }401nk
en
Bromatologia y Nutiicion y laboratorio de 0 serve e ormalono m l 034on
805' was
Microbiologia de la Escuela de Fomacién found thatthe ethanol and aqueous extracts to a
Profesional de Biologia. El tipo de investigacion .c(;l".:e.t!itrat 030(1 10

031,';3°f
mdgz/1m] showedfollles}402ff
fue experimental y la evaluacion de la actividad 15" 1 I/1° 030;

0 .th Elm an d {gm respedc live y 031/
mi
anti Candida albicans se realizé por la técnica de t "5 m"I 030nd 8m"] 030";
034:0
05; 034?
:11, £3
034that
di}401ision
en disco, se colocaron discos de papel ti 030:
th 1 tr ct his m /nil
030 is the closgest to
}402ltro
embebidos en los extractos de la planta, thee oair}401l
exc Zn 030:
Ketofon ole resented a
sobre placas Petri conteniendo agar Mueller haiopoglzléemg 1.: diameter a,zI.he ISHC of the
Hinton sembrado con Candida albicans ATCC a U60 5 and ethanonc emlact of leaves of
10231, para luego observar la formacién de los Sqnadlexmum gran".1. Hook "Amen dairy" to 3
halos deinliibicion. Se encontro quelos extractos cgncemra}401on

of 10 mg I ml were 0 156 mg / ml
etariolico y acuoso a la concentracion de 10 and 0 078 mg/mhespec}401vely and the CPMW 034
mg/ml presentaron halos de inhibicion de 23 mm 0313' mg / ml and 0,156 mg ml Identi}401ed
in
fmzni :::_:e;t;Ya]m:1;t/iiflcgf 51;
030 030 the extracts, secondary metabolites match those
(p<0,05). Concluyendo que el extracto etanolico {W23 m 01: i}401westtl}401trionls

035 "&.pI:I&/s.t:Ii:p;::$
de K.) mg/ml es el que més Se acerca 3" comm 030 ii1S:tabi)1lei::s sxliieiijoétlel tlhe Sdssiablzcresdonsible to
Posmvo Kemmnazoi
mm dc diémetro La. que presemé
030CMI un halo
del extracto dc 26
acuoso y. }402avonoidsand / of
synergistic action orthe
alkaloids as metabolite
secondary well as the
of
etanélico de las hojas de Synadenium grantii the lam
Hook "lechero africano" a una ooncentracién de P
10 mg/ml fueron 0,156 mg/ml y 0,078 mg/ml _
respectivamente, y la CMF fue de 0,3 I 3 mg/ml y Key words 030
0156 l. L b l 030 d ' . . . .. . .

i( 030ienti}401C 030:dg(/)ISn
en looss ren);i'£;c 030t)olst°ScoiSr 0301ac 030:>i:l'enaIiia C"T"?"
031sf fzlblcam
031 031
Synademum gmnm 031
activity
ericontradas en otras investigaciones realizadas am}401mglca 030
en plantas de utilidad emplrica por su efecto
antimicotico, dentro de estos metabolites

INTRODUCCION la Fawltad de Ciencias Biolégicas de la
Se ha informada de casos de candidiasis en todas Universidad Nacional San Cristébal de
partes del mundo, pero el hongo puede Huamanga.
encontrarse con tal frecuencia en individuos Eltrabajo deinvestigacién se realizé durantelos
sanos, y en tal variedad de formas clinicas que es meses de noviembre del 2012 febrero del 2013.
imposible obtener dates exactos respecto a la Muestra biolégica
distribuciéngeogré}401ca
dela enfermedad;pueden Hojas de Synadenium grantii Hook 034lechero
ajslarse especies de Candida tan frecuentemente africano muestreo
035 por conveniencia 030
en las materias fecales, vagina y faringe de Recoleccién de Muestra biolégica
individuos de apariencia Sana que el tratamiento La cantidad de la muestra fue de 3 kg de hojas
resulta a menudo di}401cil.
También, como Synadenium grantii Hook 034lechero
africano 035
invasores secundarios durante el tratamiento con recolectadas en la ciudad de Ayacucho, en horas
antibiéticos de amplio espectro, honnonas de la ma}401ana,
entre las 6 a 7 AM; antes que los
suprarrenales y drogas citotbxicas, las especies rayos solares iluminen la pianta, se introdujeron
de Candida crean graves problemas en el en bolsas de papel para evitar su transpiracién
tratamiento y cuidado del paciente con durante su traslado, se escogieron las hojas de
enfermedad primaria. 030 buen estado, Iibre de polvo, tierra y panes de la
Desde Ia antigiiedad el hombre paxa tratar sus planta que no utilizados?
dolencias,usé las plantas aplicéndolos de manera Una parte de la muestra, especi}401camente
una
directa, sin embargo, con el descubrimiemo de rama con hojas e in}402orescencia
sirvié para la
los medicamentos sintéticos estas costumbres se identi}401caciénboténica, realizada en el
}401Jeron
dejando de Iado. Con el tiempo, por los Herbarium Huamangensis de la Facultad de
muiltiples efectos secundarios de los Ciencias Biolégicas de la Universidad Nacional
medicamentos siméticos se esté volviendo al uso de San Cristébal de Huamanga por la Biéloga
de las planta medicinales. 031 Laura Aucasime Medina.
En nuestro pais muchas especies vegetales Cepa
nativas e introducidas son empleadas Candida albicans ATCC 10231, proporcionada
empiricamente en el tratamiento de diferentes por el Area Académica de Microbiologia de la
enfermedades, sin embargo, la veracidad de Escuela de Formacién Profesional de Biologia
dicho efecto terapéutico no se ha demostrado de la Facultad de Ciencias Biolégicas de la
experimentalmente aim, como por ejemplo el Universidad Nacional San Cristéba] de
caso de Synadenium grantii, cuyas sinonimias Huamanga.
boténicas son Synadenium umbellatum Pax y F}401rmaco
dc referencia
Euphorbia umbellala, nombres con los que Ketoconazol, Tabletas de 200 mg. (Fuente.
existen antecedentes que re}401eren
su empleo Laboratorio Farmindustria),
dentro de la medicina folklérica de sus lugares de Diseiio metodoldgico
origen. La presente investigacién estuvo Preparacién de la muestra biolégica
orientado a evaluar experimentalmente e1 efecto Molienda
anti Candida albicans del extracto etanélico y Las hojas }401leron
sometidas a molienda en
acuoso de las hojas de Synadenium grantii monero de porcelana, Iuego se tamizaron con
034lechero
a}401'icano
cuyos
035objetivos }401zeron: malla de 3 mm, de diémetro obteniéndose
Objetivo general particulas no mayores de 3 mm.
0 Demostra: la capacidad anti Candida albicans Obtencién de extracto acuoso

del extracto etanélioo y acuoso de hojas de Se pesé 10 g de hojas de Synadenium grantii
africano 035_ Hook pulverizadas y se a}401adié
a 100 ml de agua
objetivos especi}401cos destilada hirviendo obteniéndose. un extracto por
. Dem-mjnar 13 Concentmcjén minima in}401xsién
de 10 mg/ml de la cual se obtuvo las
inhibitoria de los extractos etanélico y acuoso C0I10eI1U3Ci°n< 030«S
de 5 mg/ml Y 1 mg/m1~
de Synadenium grantii Hook 034lechero Obtencién de extracto etanélico
africano 035.
Frente acandida albicans. L65 h0j2lS pulverigadas de Synadeniurrf grantii
- Determinar la concentracién minima fungicida, H°°k 0341°°h°T°_ 030*}401"1°3

f 034er°
034°"
Somwdas
034 3 13
d,, 105 extractos etanélico y acuoso de extraccién utihzando etanol, se macefo durante
a}401icano 035. ci 034°°dias: 5" f 03135°"5
dc 901° 031
ambar °° 034
Frente a Candida a1b;cans_ agitaciones permanentes, seguIda,mente se lfxltré
MATERIALES y M]jT0D0S y Iuego se ooncentré en ka}401o
mana, procedlendo
Lugar dc ejecucién a secar en estufg a np mas de 500 031,
hasta obtener
El presente trabajo se realizé en los laboratories "3 emwo 5°m15é1'd° dc 501° mamm
030 V° 031d 034z°°
de Bromatologia y Nutricién, y Microbiologia de en 5 forma
034 034'35
establa
Se peso 100 mg del extracto etanolico obtenido, Grupol : Control Negative con agua
Iuego se diluyo en 10 ml de agua destilada destilada,
estéril, siendo esta la solucion madre de 10 Grupo II : Control positivo con
mg/ml de la cual se extrajo 1 ml con una pipeta Ketoconazol.
para verterlo en tubo conteniendo una Grupo Ill : Administrado con extracto
determinada cantidad de agua destilada estéril, acuoso a lo mg/ml de concentracion.
pah asi obtener concentraciones de 5 mg/ml y 1 Grupo IV : Administrado con extracto
mg/ml. acuoso a 5 mg/ml de ooncentracion.

Identi}401cacién
de los metabolites secundarios Grupo V : Administrado con extracto
Las reacciones de identi}401cacién
de los diferentes acuoso a 1 mg/ml de concentracion.
metabolitos secundarios presentes en los Grupo VI : Administrado eon extracto
extractos etanolico y acuoso de las hojas de etanolico a 10 mg/ml de concentracion.

africano 035
se Grupo VII : Administrado con extracto
realizaron siguiendo los procedimientos etanolico a 5 mg/ml de conoentracion.
propuestos por Miranda y Cuellar, el
030cual se GrupoVIl1 : Administrado con extracto
realizo en el laboratorio de Farmacia y etanolico a 1 mg/ml de concentracién.
Bioquimica. Dctcrminacién de la concentracién minima

Determinacion de la actividad anti Candida inl1ibitoria(CMI)
albicans El cultivo de Candida albicans ATCC 10231 fue
Preparacién delinoculo ajustado a.l esténdar de 0,5 de la escala de

1. Se tomo la cepa de Candida albicans con el McFarland. Para hallar la CMI se prepararon
asa de siembra. quince tubos previamente esterilizados y
2. Luego se resuspendio en un tubo de vidrio rotulados del n}401mero

uno al quince. A
con solucion salina }401siolégica
0,85%. continuacién se detalla:
3. Se homogenizo y ajusto a la turbidez de 0,5 1. A partir del tubo numero uno hasta el tubo
en la escala de McFarland que equivale a 15 quince se agrego 1 ml del caldo nutritivo.

x 10 UFC).
034 2. Posteriormente se agrego 1 ml de extracto al
4. Se realizo este paso visualmente, teniendo en tubo mimero uno a partir del cual se traspasé
cuenta la luz adecuada, comparando asi el al tubo n}401mero
dosyasi sucesivamente hasta
inoculo con el estandar de 0,5 de McFarland el tubo mimero catorce de este se extrajo l ml
contra un fondo blanco, el cual se uso y se descarto.
inmediatamente. 030 3. El tubo miimero quince no recibir 031)

extracto
Delerminacién dc halo de inhibicién siendo este el control.
Método de difusibn en disco 4. Luego se agrego 1 ml del inoculo de Candida
1. Se preparo placas Petri oon agar Mueller albicans ATCC 1023] atodos lostubosy se
Hinton. llevé a incubacion a 37°C por 24 horas. 030
2. Se sembr-:3 con la ayuda de un hisopo estéril Determinacién de la concentrncién fungicida
embebido en el inoculo, dejéndose secar en la minima (CMF)
estufa por un espacio de 5 minutos para que Para la determinacion de la concentracion
se absorba la humedad. minima fungicida (CMF) se procedio a partir dc
3. Se incorporaron discos de papel filtro la concentracion minima inhibitoria (CMI),
especial de 5 mm de diametro embebidos en realizandose de la siguiente manera:
los extracto: acuoso y etanolico de las hojas 1. Se observo la turbidez de los tubos para la
de Synadenium grantii Hook. determinacion de la CM.I a simple vista.
4. Se incubaron a 37°C para asi observar la 2. Se procedioasembrar con la ayuda del asa de
formacién de halos de inhibicion a las 48 Kolle, los caldos de los tubos no turbios en
horas y determinar la actividad antimicotica. 031 las placas con Agar Saboraud.
Utilizacién de controles 3. Posteriormente se incubo a 37°C por 24
Control negativo horas. 030
Se utilizo como control negative al agua Lectura de los resultados
destilada. Los resultados para el ensayo de 034Test
difusion
Control positivo en disco 035,
se reportaron en funcion al diametro
Se utilizo como control positivo al Ketooonazol del halo que se forma por accion de los extractos
(anti}401mgico) representado en milimetms. El diémetro del halo
Dise}402o
experimental se medio en cuatro dirccciones, tomando como
Para el presente trabajo, se formo ocho grupos de resultado el promedio de estas mediciones.
cinco repeticiones.
Para el callculo de porcentaje de inhibicién se uso Figura 2. Porcentaje de inhibicibn por efecto del
la siguiente formula. Tomando como patron al extracto acuoso de las hojas de Synadenium
antif}401ngico
ketooonazol. grantii Hook 034lechero
a}401"icano }401ente
035, a
Dl}402mmrodehaln
deinhihidbndela muesrm Candida albicans ATCC 10231 030
Ayacucho 031
as de mhnmacn = 024 100 2014.
Anélisis estadistico M,
Los datos obtenidos en el presente trabajo de
investigacion se evaluaron estadisticamente por \
e1 dise}401o
oompletamente aleatorizado (ANVA) y m
comparaciones m}401ltiples
de Tukey con un nivel
de signi}402cancia
de 0,05 para este se uso el 5
Software SPSS 15,07 030E
an
n \
RESULTADOS § L .9 '
nun ' V 3 V.
,,
g 5 -' om .
__ _ LIIIICIDEHMID Ixuuztneunslm E}401yg}401}401k
E "' ._ V wwml sw-mm um:
§ , . 8 mnmurnnos
g x i ANVA p<o,o5
E _, am 3 Figura 3. Porcentaje de inhibicion por efecto del
3 , . . .
3 _ . v > extracto etanolxoo de las h0]3§ dc Synadenzum
§ ' 035
I I grantii Hook 034lechero
afncano 035,
}401ente
a
" g Candida albicans ATCC 10231. Ayacucho,
2014.
1 IF
' mama Eatnuoxunnn =..,.......... s............,

run-ml mnynu smgcm «awn
WIATAIKIEUFTOS
ANVA p<0,05 __ _;»._~,-':;A'.:;

Figura 1. Promedio de los halos de inhibicién por .5. ""' A 031 9
efecto del extracto acuoso de las hojas de 55
africano 035, § 3
frente a Candida albicans ATCC 10231. g
Ayacucho, 2014. 3 an V
3
M "I .,_m.»f;;v;
.....,........... u..........-.=.;....1.....s... ..........
lmv}402}402 030MIMI Ilmmm IWMVNI
TRATAIIVEIWOS
3 030W 3 ANV A p<0,05

g Figura 4. Promedio de halos de inhibicién por
i 035 Q efecio del extracto etanélioo de las hojas de
a}401icano",
}401'entea Candida albicans ATCC 10231.
,.,. V 030 F] Ayacucho, 2014.
Tabla 1. Concentracién minima inhibitoria y
ooncentracién minima fungicida de los extractos
nu etanélico y acuoso de las hojas de Synadenium
034 031.'T 030 034".":;...«'
034.m" 031f°034"""
"'7
031°034"r»s«»"'r"' grantii Hook 034lechero
a}4011'cano frente
035, a
" 030 034' 034"""°5 Candida albicam ATCC 1023]. Ayacucho,
ANVA p<0,05 2014
concentraciones de las hojas de Syandenium
031 024
grantii Hook "lechero africano"
024j:' muestran que el
Tubos Extrncto acuoso Tub 034Em}402im de 1 mg/ml genero 8 mm de halo, el 5 mg/ml (15
("'y"") (mg/my) mm) y el de 10 mg/ml (21 mm) son menores al
035'l 034"5 034""""'l:5
Ketoconazol
024"""""
(26 mm). 034
Las medias de los halos de inhibicion producidos
2 2'5 2 2 0315 por el extracto etanolico a diferentes
3 1'25 3 L25 concentraciones de las hojas de Syandenium
4 (L625 4 0'6 035 grantii Hook "lechero africano" muestran que el
5 0313 034CM
5 035
0313 de 1 mg/ml genero 10 mm de halo, el 5 mg/ml
5 M56 034CM5 035
030M56 034CM 035(17 m) y el de 10 mg/ml (23 mm) son menores
7 0978 7 0-073 R(CMI) alKetoconazol(26 mm), siendo estadisticamente
a 0,039 3 0,039 signi}401cativo
(p<0,05).
9 Om 9 o 031°2 El extracto acuoso de Syandenium grantii Hook

lo °*°l 1° om "lechero a}401icano"
a una oonoentracién de 1 mgl
11 0,005 n 0,005 ml presenta una media de halo de inhibicion de
11 0:001 030 11 03024 8,4 :1: 0,55 m, el de 5 mg/ml una media de 15,4
13 0-0012 13 0.0012 :1: 0,55 m, y el de 10 mg/ml genero una media
14 0.0006 14 0.0006 de 16,6 2%: 0,45 mm, tal como muestra el anélisis
S: Sensible de compaxaciones multiples de Tukey.
R:Resistente I El extracto etanélico de Syandenium grantii
DISCUSION Hook "lechero a}401icano"
a una concentracién de
El uso delas plantas tradicionales en nuestro pais 1 mgl ml presenta una media de halo de
en su gran mayoria es empirico, por lo que inhibicién de 10,4: 0,55 mm, el de5mg/mluna
existen vacios en la veracidad de sus efectos media de 16,6 i 0,55 mm, y el de 10 mg/ml
terapéuticos, con este trabajo se pretende dar genero una media de 23 i 0,45 mm. tal como
valor y veracidad a los efectos antimiooticos que muestra el analisis de comparaciones miiltiples
posee los extractos de las hojas del Synadenium de Tukey.
grantii Hook "lechero africano" los metabolitos Los porcentajes de inhibicion producidos por el
secundarios identi}401cadosen los extractos extracto acuoso a diferentes concentraciones de
coinciden las encontradas en otras las hojas de Syandenium grantii Hook "lechero
investigaciones realizadas en plantas de utilidad africano" muestran que el de 1 mg/ml tubo un
empirica por su efecto amimicético, dentro de porcentaje de 30,76%, el de 5 myml (57,69%)y
estos metabolitos podemos se}401alar
como los el de 10 mg/ml (80,76%) siendo esta iiltima
posibles responsables a los flavonoides y/o conoentracién la que mas se acerca al control
alcaloides, como también a la accion sinérgica positivo que fue el anti}401ingico
Ketoconazol.
de los metabolites secundarios de dicha planta, Los poroentajes de inhibicién producidos por el
en él estudio }401toquimico
que se realizo se extracto etanolioo 2 diferentes concentraciones
detemiiné la presencia de fenoles, cardenolidos, de las hojas de Syandenium grantii Hook

flavonoides, esteroides, saponinas, catequinas, "lechero africano" correspondientes a las
lactonas, aminoécidos, alcaloides y resinas, de concentraciones 1 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml,
las cuales en mayor concentracién los respecto al Ketoconazol, }4011eron
el 38,46%,
flavonoides y alcaloides. 65,38"/o y 88,46% respectivamente. Siendo
Las caxacteristicas organolépticas de los estadisticamente significativo (p<0,05).
extractos acuoso y etanélico de las hojas de En el anélisis de comparaciones miiltiples de
5)/nadenium grantii Hook "lechero a}401icano"

es Tukey. La media del porcentaje de inhibieion
de color caramelo, de olor y sabor suigeneris. producida por el extracto acuoso de Syandenium
Segiin Bidart. muchas

030 especies de plantas han grantii Hook "lechero africano" }401ieron
para a
sido utilizadas etnofarmaoologicamente para una concentracion de 1 mg/ml presenta un
tratar enfermedades micoticas donde cada vez porcentaje de inhibicion de 30,75 i0,23%,el de
mas, la gente recurre a terapias complementarias 5 mg/ml un porcentaje de 57,30 3: 0,39%, y el
y altemalivas para poder solucionar problemas de 10 mg/ml genero un porcentaje de 80,11 i
de salud, pues los obstaculos que en}401entan
las 0,63%, determinando asi que a mayor
familias de bajos recursos impiden que tengan concentracion el porcentaje de inhibicion es
acceso a productos farmacéuticos y servicios mayor.
sanitarios. El extracto etanélico de Syandenium grantii
Las medias de los halos de inhibicién producidos Hook "lechero africano" a una concentracion de
por el extracto acuoso a diferentes 1 mg/ml presenta porcentaje de inhibicién de
38,40 1: 0,10 %, el de 5 myml un porcentaje de Synadenium grantii Hook "lechero africano"
65,31 1 0,12%, y el de 10 mg/ml genero un fue de 0,156 y 0,078 mg/ml, respectivamente.

porcentaje de 88,39 zt 0,11%, tal como muestra 0 La concentracion minima fungicida, frente a
el anélisis de comparaciones mullltiples de Tukey. Candida albicans ATCC 10231, producido por
La concentracién minima inhibitoria (CMI) y el extracto acuoso y etanélioo de las hojas

concentracion minima fungicida (CMF) son Synadenium grantii Hook "lechero africano"
datos de laboratorio muy importantes que en la fue de 0,313 y 0,156 mg/ml, respectivamente.
actualidad no se toma mucho en cuenta, esto RECOMENDACIONES
89" 034-T3
31 U50 1 034 030115°1 de
0311m1
105 31111551181505
034a 0301° I Teniendo en cuenta los resultados obtenidos, se
y medicimlentos, pfopiciando la apaficié}402
(16 recomienda realizar estudios, asi como separar
resistencia delos microorganismos queinutilizan 105 metabomos secundarios de 105 extmctos y
3 m 254C11C}401m°}4021°5
Va11°5°5, Y que P01" 01135 0311535 de esta forma veri}401car
los responsables de
como la falta de regulacion en su oompra y venta, dicha actividad farmacolégica
la automedicacion y la ignorancia, favorece la . Proseguir con 51 estudio (191 Synadenium
3135171916 034
(15 05935 (19 m1°1 031°°T8a"15m°5 grantii Hook "lechero a}401'icano"
con la
16515160193 GT30135 311150 1191 CMI Y 13 CMF 53 }401nalidad
de determina: si tiene efecto en otras
puede dar mayor valor a los medicamentos, tanto espgcies de hongos 031
como también otras
en su dosi}401cacién
y costo bene}401cio
para el propiedades medicinales,
P3°19'119- -Incentivar el estudio de plantas usadas en

E11 1a T313121 1, 59 detemli}402é
113 13 003993113016 034 medicina tradicional, sobre todo en relacion a
minima inhibitoria (CMI) de los extractos propiedades antimicéticas 030
034"050
3 031
eta 0301°11°°
de 135 h°1as de SWf 034de 035i"mokealizar estudios cle toxicidad de los
grantii Hook 034lechero
africano 035.
Utihzando la metabolites secundarios encontrados en 13
concentracién de 10 mg/ml tanto para el extracto planta de Synaden,-,,,,, gm,,,,-,- Hook nlechem
acuoso y etanélico, a esta concentracion los a}401icanoel
can 61 objeto de poder realizar
extractos generaron mayor inhlbicion pruebas pre c}401nicas
y cunicas.
acercéndose més al control positivo REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
"K°1°°° 034az°1">
951° 5° 1931115 9°" 13 }401nalidad 1. Fitrzpatrlck R, Dermatologia en Medicina
de determina: la concentracién minima del General 030
V01 4_ 7m: ed 031
Buenos Aires _
eX1 0351°1°
(3 0341111"1g1°°)
9113 59 1""1 0341°r°
para Argentina: Médica Panamericana; 2010.
1111111111 03151 °1c°1m1°m° de C 034"d1d
" 035
035 0311" 2. 035
Font 0355
Quer P. Plantas Medicinalesr Barcelona
ATCC 10231, el cual resulté para el extracto _ESpa}401a:
Lab0r.S 030A;
2009 030
3011050 dc (1156 mg/ml» Y Pam 91 extmcm 3. Katzung,B.Farmacologiabésicosyclinicos.

etanolico de 0,078 mg/ml. De igual modo se mm ed 031MéXico:Manua1Modemo;
2007_
detennino la concentracién minima }401mgicida 4_ Miranda M Cueuar A_ Mama} de Précticas
(CMF) el cual nos permite determinar la cantidad de Laboratorio; Farmacognosia y productos
minima del extracto (acuoso, etanélico) que se Namm1eS_lnstitutodepm-maciayA1imemos_
requiere para mate: a Candida albicans ATCC Universidad La Habana _ Cuba; 2000 030
10231 in vitro, los cuales resultaron de la 5 030
Mmeno S_Efecto am-l}401mgiw
de extract de
034
siguiente manera para el extracto acuoso la CMF Lane 030,
,,,-dem,-,,a L 031
vvgobemadoravv, sobre
1119 11° 0:313 1113/1111 Y 61 °X1m°t° °ta 034611°°

13 030 cultivos invitro de Aspergillus }402avus
y
CMF }401le 0.155 mg/m1~ Penicillium sp, 2011. [Tesis pregrado].
CONCLUSIONES Santiago 024Chile: Intercambio cienti}401co;
0 El extracto acuoso y etanélico de las hojas 2010,
SY"ad9"1 034
8m"}4011
031"
H001 "1eC1'1°1
030 031°
" 03011 0301 0301¢-"1110"
3 6. Palomino M, Uribe C. Determinacion de la
la concentracién de 10 mg/ml presemaron actividad antimicrobiana in Vim, de 105
mayor actividad anti Candida albicans con 21 e,m-36105 etan(',1;co e hid,-o31¢oho]jc0 de 135
y 23 mm de diémetro respectivamente, respecto semillas dc Carma papaya
a las demés concentraciones, con halos de L 030"papaya"_[Tesis
p;eg,ado]_1ca - Peru,
11111117191 034
(19 15 Y 17 1111 034
Pam e1eXt1 0313dc03031°
5 Universidad Nacional San Luis Gonzaga;
mg/ml y para el extracto de 1 mg/ml generaron 2007,
halos do 8 y 10 mm; 61 control positivo 7. NormanH, Nie c, Hadlai H, Dale H, Bent.

Ketoconazol que genero un halo de 26 mm, Spsg 15 031
or para windows, 10" 034!
ed,
siendo estadisticamente signi}401cativo(p Chicago; Mjcrogg}401;
2009,
<o,o5 .
0 La cozxcentracion minima inhibitoria, frente a 3- B1113 034 1-1° a_ 0341_18Y 034°
10 11 034eVd9 030:
034
Candida albicans ATCC 1023l,producido por ant_r}401'mg1o_os
y antlvlraloo V01 Z 2 611
el extracto acuoso y etanolico de las hojas 13111163 C11119}402}401;2004-

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTOBAL

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL DE B|OLOGiA

034 035 035

hojas de Synadenium grantii Hook 034|echero

TESIS PARA OBTENER TiTULO PROFESIONAL DE

BIOLOGO CON MENCION EN LA ESPECIALIDAD DE

Bach. MELGAR RUIZ, PAUL NICEAS

Ayacucho - Pen 031:

ACTA DE SUSTENTACION DE TESIS

R.D.N° 088-2014-UNSCH-FCB 024D

BACH. PAUL NICEAS MELGAR RUIZ

siendo Ias cuatro y quince de |a tarde, reunidos en el auditorio de los laboratorios

de Ia Facultad de Ciencias Bioiogicas de la Universidad Nacional San Cristobal

de Huamanga, bajo la presencia del Dr. Tomas Castro Carranza y como

miembros del jurado cali}401cador

merito a la R.D.N° 088-2014 024UNSCH-FCB-D

la tesis tituladaz Capacidad anti Candidad albicans de| extracto de hojas de

Synadenium granti Hook 034lechero

optar el titulo profesional de Biologo con mencion en la especialidad de

Microbiologia. El presidente del jurado cali}401cador

dar lectura a la documentacion que sustenta el presente acto académico, acto

seguido el presidente indico al sustentante que cuenta con el tiempo de cuarenta

y cinco minutos tal como se}401ala

exposicion de| trabajo de investigacion el presidente invito a los miembros del

jurado a pedir aclaraciones , ampiiaciones e interrogantes que crean 1

conveniente, concluida esta etapa el presidente de| jurado invito al sustentante y

al publico asistente abandonar momenténeamente las instalaciones de|

auditorium, para que los miembros de| jurado cali}401cador

MIEMBRO JURADO EXPOSICION RPTA PREGUNTAS PROMEDIO

Dr. Tomas Castro Carranza 16 16 16

Mg. Serapio Romero Gavilén 16 15 16

Blga. Laura Aucasime Medina 16 15 16

Blga. Edna Leon Palomino 18 18 18

Mg. Victor L. Cardenas Lopez 16 16 16

Luego de concluida Ia etapa de cali}401cacion

promedio de DIECISEIS de la cual dan Fe los miembros del jurado calificador,

siendo las cinco y cuarenta y cinco de la tarde , concluyéndose el presente acto .

A mis queridos padres por su apoyo

incondicional durante mi formacién

A la Universidad Nacional de San Cristébal de Huamanga, en cuyas aulas adquiri

los conocimientos que permitieron mi formacién profesional.

A la Facuttad de Ciencias Biolégicas, a la Escuela de Formacién Profesional de

Biologia y a toda la familia biolégica en especial al Area Académica de

Microbiologia. quienes me brindaron sus sabios conocimientos.

A la Blga. Edna Leon Palomino responsable del laboratorio de Bromatologia y

Nutricién de la Escuela de Formacién Profesional de Biologia por el

asesoramiento, apoyo y facilidades brindadas en la realizacién de la presente

INDICE DE FIGURAS vii

INDICE DE ANEXOS viii

ll. MARCO TEORICO 3

2.2. Estudios fannacolégicos de Synadenium grantii Hook 4

2.3. Genero candida 6

2.3.2. Manifestaciones clinicas 9

2.3.3. Etiologia de Candida albicans 9

2.4. Mecanismos de accién de los antifiingicos 12

2.4.1. Accién del antifiiingico sobre la membrana celular de| hongo 12

2.4.3. Antifiingicos que act}401an

2.4.4. Agentes misceléneos 14

2.5. Plantas medicinales 14

2.5.1. lmportancia de las plantas medicinales 14

2.5.2. Synadenium grantii Hook 034lechero

HI. MATERIALES Y METODOS 19