IMMUNOQUICK® Contact MALARIA +4

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Ref: 0525_K25

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M INSTRUCCIONES DE USO

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13- BIBLIOGRAFÍA

1. Howard, R.J. et al. 1986: Secretion off has Malarial Histidein-rich Protein (PF HRP II) from Plasmodium
falciparum-infected Erythrocytes. J. Biol concealment 103,1269-1277.
2. Rock, E.P. et al. 1987: Comparative Analysis off the plasmodium falciparum Histidine-Rich Proteins HPR-I
HPR-II and HPR-III in Malaria Parasitic off Various Origin. Parasitol, 95,209-227.
3. Parra, Mr. E. et al. 1991: Identification off Plasmodium falciparum Histidine-Rich Protein 2 in the Plasma
off Humans with Malaria, J. Covering joint. Microbial. 29,1629-1634.
4. Rodriguez-LED Valle, Mr. Et al. 1991: Detection off Antigens and Antibodies in the Urine off Humans with
Plasmodium falciparum Malaria J. Microbial Covering joint, 29 1236-1242.

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M A
Índice de Símbolos

Atención, ver instrucciones de

Test por kit Fabricante
uso

Solo para uso diagnostico In

Caducidad Un solo uso
Vitro

Conservar entre 2-8°C No. de lote REF Código de Producto

Version 01 – Actualiz. en
2010/02/03

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 IMMUNOQUICK® Contact Malaria +4
Test Rápido para la detección de Plasmodium falciparum y otras 3 especies
(Plasmodium malaria, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale )en Sangre

Ref. N°: 0525_K25

Uso exclusivo In Vitro

1- OBJETIVO

IMMUNOQUICK® Contact MALARIA +4 es un test Inmunoensayo Rápido cualitativo en sándwich, auto-

realizable, en sangre total para la detección de Proteína-2 especifica de P.falciparum rica en histidina) (specific
histidine rich protein-2) (Pf HRP-2) y pan malaria especifica pLDH. El test puede ser usado para la detección
específica de P. falciparum y la diferenciación de otras especies de malaria así como para el seguimiento de
terapias frente a la malaria.

2- PRINCIPIO

IMMUNOQUICK® Contact MALARIA +4 emplea el principio de la inmunocromatografía. Cuando la

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muestra fluye a través de la membrana ensamblada en la tira, una vez que esta ha sido embebida en el

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buffer de limpieza, el Conjugado coloreado con oro coloidal anti-HRP-2 y el conjugado anti-pLDH

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formará complejo Ag/Ac presente en la Muestra hemolizada, dichos complejos avanzaran a través de la
membrana donde serán inmovilizados por anticuerpos monoclonales anti Pf. HRP-2 y/o anti- pan specific

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pLDH fijado en una región específica de la membrana originando la formación de una banda coloreada
roja/púrpura la cual confirmará el resultado positivo del ensayo.

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La ausencia de una banda coloreada en la región indicará un resultado negativo para el correspondiente

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antígeno. El conjugado no ligado al complejo continua su avance a lo largo de la membrana de celulosa y
será posteriormente inmovilizada en la región “control” formando complejo con anticuerpos anti-

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anticuerpos de ratón allí fijados formando una banda rosa/púrpura. Esta banda control validará la eficacia
del test.

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3-LIMITES DEL TEST

1. Como cualquier test de diagnóstico, el resultado del test deberá siempre correlacionado con los hallazgos
clínicos.
2. Los resultados del test serán interpretados dentro del contexto epidemiológico, clínico y terapéutico.
Cuando esto así lo indique deberá de considerarse el uso de técnicas parasicológicas de referencia (examen
microscopio de gota gruesa y preparaciones de sangre).
3. Cualquier modificación del procedimiento arriba indicado y/o uso de otros reactivos podrían invalidar los
resultados obtenidos.
4. Las tiras y buffer de diferentes lotes no deberán de ser usados o mezclados.
5. En caso de infección debida a P.falciparum, o infección mixta, la banda correspondiente a Pan-Malaria
podría mostrase también como positiva por esa razón la diferenciación de infecciones por P. malaria, P.ovale
or P.vivax no puede ser realizada.
6. Si durante la monitorización de una terapia, Si la reacción del test persiste POSITIVA con la misma
intensidad después de 5 – 10 días posterior al tratamiento, deberá de considerarse la posibilidad de haber
encontrado una cepa resistente al tratamiento.
7. Normalmente la banda PAN se vuelve Negativa tras un tratamiento satisfactorio frente a la malaria. Sin
embargo, dado que la duración y la medicación usada afecta a la eliminación de parásitos, el test debería de
ser repetido 5 -10 días después del inicio del tratamiento.
8. En la infección de malaria por P. falciparum ,el HRP-2 NO es secretado durante el estadío gametogomia,
de ahí que en ocasiones, en “Portadores Sanos” la banda de HRP-2 puede no estar presente.
9. En Niveles de HRP-2 persistente, pasados 15 días al tratamiento de infecciones P. falciparum malaria, La
Banda PAN podrá ser usada como monitorización satisfactoria del tratamiento.

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10. En pocos casos, donde la banda HRP-2 es Positiva y la banda PAN malaria Negativa podrá indicar un
caso de Post-tratamiento de malaria, Sin embargo este mismo patrón podrá aparecer también en pocos casos
de malaria No tratadas . Para estos casos se aconseja repetir el ensayo después de 2 días .
11.En algunas infecciones, especialmente causadas por Plasmodium ovale la banda pan LDH puede
desaparecer.

4- MATERIAL SUMINISTRADO

1) 25 Cassettes individuales empaquetados en sobres de aluminio conteniendo bolsas con desecante.

2) 1 Frasco gotero conteniendo buffer hemolizante
3) 1 Instrucciones de uso

Representación esquemática
del Dispositivo
5- MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO

Cronometro avisador
Pipetas de laboratorio (opcional)
Lancetas estériles (opcional)
Gasas desinfectantes (opcional)

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6- TOMA Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA

A
Zona Abierta

L
- Podrá utilizarse sangre capilar o venosa, limpiar la piel con una
solución desinfectante y esperar hasta que la zona se haya secado. Pocillo

R
- En caso de obtención de sangre venosa, podrán usarse tubos con
heparina, oxalato ó EDTA como anticoagulante ya que estos no

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interfieren en el test.

T
- En caso de no poder realizar el test inmediatamente, almacenar
la sangre un máximo de 72 horas a 2-8°C.

A
7- PRECAUCIONES

M
- Test para diagnóstico in vitro únicamente. No usar después de la fecha de Expiración
- No beber, comer o fumar, durante la manipulación de las muestras y la ejecución del test.
- No pipetear con la boca.
- Las muestras de sangre deberán de ser consideradas como material potencialmente infeccioso. Cuando se
realice el test tomar todas las precauciones durante la manipulación a fin de evitar infecciones. Todos los
elementos del test y las muestras deberán de ser desechados de acuerdo a la normativa destinada a
materiales potencialmente infecciosos.
- Utilizar gafas protectoras y guantes durante la realización del test.
- Lavarse las manos tras la realización del test.
- No intercambiar reactivos de diferentes lotes.

8- PROCEDIMIENTO COMPLEMENTARIO DE CONTROL DE CALIDAD

Las buenas practicas del laboratorio recomiendan el uso de controles positivos y negativos para comprobar la
correcta operatividad del test . Estos controles podrá ser suministrados separadamente.

9- ALMACENAJE Y ESTABILIDAD

El test puede ser almacenado a temperatura ambiente o refrigerado (2-30°C). Las tiras son estables hasta la
fecha de expiración indicado en la etiqueta El vial debe de almacenarse solo NO CONGELAR No utilizar
pasado la fecha de expiración.

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10- PROCEDIMIENTO

1. Dejar a temperatura ambiente los componentes del kit. En caso de almacenaje a 2-8ºC, dejar atemperar al
menos 30 minutos.
2. Abrir el sobre de aluminio y extraer el cassette.
3. Toma de Muestra:

a) Procedimiento para Sangre Capilar

1. Seleccionar la zona de punción (normalmente 3º-4º dedo). Limpiar la zona con una
solución desinfectante y esperar a su secado (Fig. 1).
2. Pinchar el dedo con una lanceta estéril y masajear en orden a obtener una gota de tamaño
medio (15-20 µl).
3. Poner en contacto el borde de la tira con la gota de sangre, la gota deberá de situarse en el
centro sobre la almohadilla de la zona abierta (15-20 µl aproximadamente) hasta cubrir las
2/3 partes de la almohadilla de color rojo (Fig. 2).

b) Procedimiento para Sangre Venosa.

Cuando usemos sangre venosa, situar el cassette sobre una superficie plana, agitar el tubo hasta
homogeneizar y tomar 15 µl de sangre con una pipeta de laboratorio. Dispensar la gota de sangre sobre el
centro de la almohadilla absorbente de la zona abierta (Fig. 3).

B
4. Poner el cassette sobre una superficie plana y añadir 4 gotas de Buffer hemolizante sobre el pocillo. Leer
los resultados después de 20 minutos a partir de la adicción del buffer. No leer ni interpretar los resultados

A
pasado 20 minutos. No prestar atención a la aparición de alguna banda pasados 20 minutos.

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5. Después de la lectura, eliminar el dispositivo IMMUNOQUICK Contact Malaria +4 de acuerdo con los

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procedimientos reservados al desecho de material potencialmente infeccioso.

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11- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

A
Una correcta lectura requiere:

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- Una mínima agudeza visual
- Correcta condiciones de iluminación

POSITIVO PARA: Plasmodium falciparum y/o infección mixta

Presencia de 3 Bandas distintas.

Una banda púrpura deberá de aparecer a nivel de la ZONA CONTROL y dos bandas púrpura a nivel de la ZONA
HRP II y pan LDH.
El resultado deberá considerarse positivo, incluso si la intensidad de la banda púrpura para pf es muy débil. Una
banda Test coloreada podrá aparecer antes de 20 minutos en caso de muestras fuertemente positivas.
Nota: En caso de muestras fuertemente positivas, la intensidad de la línea control podrá mostrarse muy
débil.

POSITIVO PARA OTRAS ESPECIES (diferente de Plasmodium falciparum) :

Presencia de 2 Bandas distintas.

Una banda púrpura deberá de aparecer a nivel de la ZONA CONTROL y unas bandas púrpura a nivel de la ZONA
pan LDH.

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NEGATIVO:
Solamente una Banda aparecerá a nivel de la ZONA CONTROL

No aparecerá NINGUNA Banda a nivel HRP II y pan LDH.

INVALIDO:
Ausencia de Banda púrpura en la ZONA CONTROL.

B
El procedimiento no se ha seguido correctamente o el test estaba deteriorado. No interpretar el test y

A
repetir de nuevo con un nuevo test.

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12- CARACTERISTICAS DEL TEST

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Una evaluación hospitalaria ha sido realizada comparando este test frente a examen microscópico de gota
gruesa con tinción Giemsa y Diff-quick S emplearon muestras sanguíneas según normas de la OMS ( frotis con

T
concentraciones sanguíneas 40.000 RBC y 1000 respectivamente) Los resultados son resumidos en la

A
siguientes tablas:
Línea HRPII

M
Examen Microscópico
IQ Contact Malaria+4
Positivos Negativos Total
Positivos 47 0 47
HRPII Negativos 2* 50 52
Total 49 50 99

Performances HRPII
Especificidad 100,0%
Sensibilidad 95,9%
VPP 100,0%
VNP 96,2%
* Dos falsos negativos correspondieron a una muy baja parasitémia (de 8 y 10 parásitos/ µL
respectivamente).
Linea pan LDH
Examen Microscópico
IQ Contact Malaria+4
Positivos Negativos Total
Positivos 51 1 52
LDH Negativos 12 35 47
Total 63 36 99

Performances LDH
Especificidad 97,2%
Sensibilidad 81,0%
VPP 98,1%
VNP 74,5%
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Han sido consideradas muestras positivas , aquellas parasitemias comprendidas entre 8 parásitos/µl hasta
2160000 parásitos/µl.
Procedimiento para Sangre Capilar Procedimiento para sangre
venosa

Fig.3: Colocar el dispositivo

Fig.1: Limpiar la zona y Fig.2: Pinchar con una lanceta estéril, Masajear
sobre una superficie plana.
esperar su secado el dedo hasta obtener una gota media de
Mezclar bien el tubo de la
sangre . Poner la gota de sangre en contacto
muestra antes de tomar 15 µl
con el borde de la tira. Situar la gota en el
de sangre con una pipeta de

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centro de la zona abierta del absorbente
laboratorio. Dispensar la
sangre sobre el centro del

A
absorbente de la zona
abierta.

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T E
M A

Fig.4: Colocar el dispositivo sobre una superficie plana y

añadir 4 gotas de hemolizante en el pocillo. Leer los
resultados después de 20 minutos a la adicción del
buffer.

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