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Cromatografia
Cromatografia
Fase móvil: Solvente que mueve los solutos a través de la fase estacionaria.
Sistemas Cromatográficos:
Sistemas móviles:
Sistemas estacionarios:
Tipos de fases:
Móviles Estacionarias Cromatografía contracorriente
Gas Sólidas (polímero que absorbe) G.S.C.
He, H, N, CO, Ar Líquido a la temperatura de trabajo G.L.C.
Cromatografía supercrítica
Líquido Sólido H.P.L.C.
(Acetonitrilo, tetrahidrofurano, H.P.T.P.L.C.
acetato de nitrilo, etc.) L.C.
Líquido Estado micelar Electroforesis capilar
Un extremo por donde se introduce la muestra (gaseosa, solución, sólida) con una jeringa, y en el caso de
G.L.C. se llama septa.
Otro extremo en donde se sitúa el detector, el que ve lo que pasa por el. Es específico para cada técnica.
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TºA debe permitir volatilizar la muestra a un estado gaseoso, temperatura superior al punto de ebullición de la
muestra.
TºB, en la columna debe existir una temperatura tal que la muestra se mantenga volátil.
La esfera (n) viaja a través del sistema gracias a que existe una fase móvil que la lleva al detector. Esta tiene
una solubilización puntual en cada elemento, puntual de la columna.
Cuando una sustancia no tiene ninguna retención en la fase estacionaria, el tiempo que pasa o
transcurre cuando ella es detectada se llama tiempo muerto (t0). Pasa y escurre, es el mínimo tiempo
que demora la sustancia del punto A al C.
Toda sustancia que interacciona con la fase estacionaria se demora un tiempo determinado, tiempo de
retención (tR).
Siempre tR > t0
tR depende de las condiciones de Tº, P, calidad química y propiedades de la molécula analito. Este
constituye un parámetro identificador hasta cierto punto y se puede investigar.
En G.L.C. lo mejor para evaluar t0 es el CH4, y el H.P.L.C. se usa NaNO3
Tiempo corregido: Parámetro que describe mejor la interacción con la fase estacionaria. Significa el tiempo
que la sustancia permanece en la fase estacionaria. Corresponde a:
tR` = tR – tO
Velocidad lineal:
Velocidad lineal promedio de las moléculas de la V0 = L donde: L = largo de la columna
fase móvil: tO
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Velocidad lineal promedio de la migración del V=L donde: L = largo de la columna
soluto: tR
Los dos volúmenes se pueden estimar por un método para el cual se prepara la columna.
La capacidad es un parámetro experimental importante que se emplea ampliamente para describir las
velocidades de migración de solutos en columnas. Para un soluto la capacidad se define como:
k`= tR – tO = tR`
tO tO
Para G.L.C. la columna es de sílice con un polímero externo, la fase estacionaria se ubica como un film
(película) alrededor del tubo.
KL se puede calcular experimentalmente, a partir de los datos de la columna. Por lo tanto, se puede
utilizar para evaluar parámetros termodinámicos del sistema.
Cuando el factor de capacidad es mucho menor que la unidad tiene lugar la elusión tan rápidamente que
la determinación de los tiempos de retención es difícil.
Cuando el factor el factor de capacidad quizás sea mayor que 20 a 30, los tiempos de elusión se
convierten en excepcionalmente largos.
Idealmente las separaciones deben realizarse bajo condiciones en las cuales los factores de capacidad
para los solutos de una mezcla estén entre 1 y 5.
Cuando se tiene dos sustancias se debe cuantificar la relación entre las sustancias.
Se produce una dispersión de forma gaussiana.
Cuando se tienen dos sustancias cercanas, cuantificar la posición se hace mediante una variable
denominada selectividad.
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La selectividad para dos analitos en una columna proporciona una medida de que tan bien la columna
separa a los dos.
Selectividad:
RS = 2[(tR)B – (tR)A]
WA + WB
MODELO:
Lo más probable es que las partículas estén en una esfera gaseosa por la menor energía.
Si la estructura química de A es parecida a la fase estacionaria, puede interaccionar con la fase
estacionaria, solo si KLA 0.
Mayor velocidad de la partícula en fase gas que en fase estacionaria.
Como las partículas de gas en la fase estacionaria se mueven mas lento que en la fase móvil, se genera
una dispersión molecular interna (pelota Rugby).
Línea base: Cuando el detector no indica partículas.
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La varianza del peak indica dispersión de la molécula.
La teoría de la velocidad de la cromatografía describe las formas y anchuras de los picos de elusión en términos
cuantitativos basados en un mecanismo aleatorio para la migración de moléculas a través de la columna.
La eficiencia de una columna cromatográfica se refiere a la magnitud del ensanchamiento de la banda que
ocurre cuando un compuesto pasa a través de la columna.
La eficiencia de las columnas cromatográficas se incrementa a medida que se hace mayor el número de
platos y a medida que la altura del plato se hace menor.
A menor varianza, menor dispersión y mayor eficiencia.
Altura de plato:
Debido a que las bandas cromatográficas son gaussianas y debido a que la eficiencia de una columna se refleja
en la anchura de los picos cromatográficos, la varianza por unidad de longitud de columna se utiliza como una
medida de la eficiencia de la columna.
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Numero de platos:
N = 16 (tR)2
W2
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Se pueden obtener distintos valores de N, ajustando la velocidad lineal, con lo que se fabrica un grafico
de vO v/s H (obtenible a partir de N y L) y se busca el mínimo d la función.
Obtenemos H mínimo y su respectiva velocidad óptima.
Si no se logra captar la máxima eficiencia se debe probar con otra fase estacionaria.
Para pick delgados se ocupa N 2, pero se debe estar en el punto crítico. Es decir, el análisis con N 2 es más lento
(<vo), pero H es más pequeño.
Con He se puede trabajar en un rango mayor de velocidades, y con H 2 es mas rápido ya que el mínimo se
produce a mayor velocidad lineal. Con He y H 2 como gas en la fase móvil se puede trabajar en un rango más
amplio.
Ecuación Original:
H = A + B + C vO
vO
Se usaba cuando la columna esta rellena con partículas (sílice en general) y en cada superficie estaba el film de
la fase estacionaria (sobre las partículas).
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Ecuación Modificada:
H = A + B + (CL + CM) vO
vO
Parámetros:
B = difusión longitudinal.
CL = 2 k`df2 = KCL … Este término es válido solo cuando df es muy pequeño (df 0)
3 (1+k`) DS Cuando df es grande el factor 2/3 aumenta KCL
KCL depende de la unión de las partículas unas con otras. Se modifica df.
Cuando las partículas se unen hay un cambio en el grosor y pasa a ser una
constante (CL = KCL)
Se dice que es función de: CM = f (K*dp/DM), donde dp es función del diámetro de la columna (dc).
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CM = (1+6k`+11k`2)
96(1+k`)2 (dc2/DM)
Resolución de columnas
El usuario debe optimizar el proceso cromatográfico de manera que la resolución sea mayor a 1,5.
La resolución RS de una columna proporciona una medición cuantitativa de su capacidad para separar
dos analitos.
La resolución debe ser de tal forma que si se tienen dos sustancias se puedan separar
La resolución en general es una función de (selectividad), k`(capacidad) y N (número de platos
teóricos.
N = 16 RS2 ()2 (1+k`B)2 Con esta ecuación se puede calcular el número de platos teóricos necesarios para
llevar a cabo una resolución dada.
(-1)2 (k`B)2
El tiempo de retención de B (tRB) necesario para fluir dos especies A y B con una resolución R S esta dado por:
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Parámetros de retención.
VR` = tR` fc = VR – VO
VN = VR j = (VJ – VO) j
La Tº de trabajo debe ser mayor a la temperatura de ebullición de la muestra para que este en estado gaseoso.
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Vg = (273 R) / PM i Pi donde: PM = peso molecular
i = coeficiente de actividad del soluto en fase estacionaria a dilución infinita
(Rango 0.3 – 5.0)
Pi = presión de vapor de saturación del soluto puro a la Tº de trabajo
Obtención de Vg:
Vg
K = Vg
L = Fo [T C - O][1] [Po – PW]
[273] [Po] [tR – tO] donde: W = peso de fase estacionaria de la columna
[Tº] [W]
273.2 [760] [Pi + Po]
Vg es un elemento de criterio para análisis cualitativos
Si se tiene un Vg experimental igual a teórico entonces hay probabilidad que se trate de la sustancia en
cuestión.
Sin embargo todo análisis cualitativo es mas complicado, ya que involucra dos alternativas si o no.
La energía libre molar de Gibbs parcial de un soluto a dilución infinita en la fase estacionaria puede ser
calculada:
∆G = -RTC ln (KL)
El grado de ensanchamiento de la banda depende del tiempo que la fase móvil esta en contacto con la
fase estacionaria.
La eficiencia de la columna depende de la velocidad de flujo de la fase móvil.
Tanto para G.L.C. como H.P.L.C. las alturas mínimas (eficiencia máxima) ocurren a velocidades de flujo
relativamente bajas.
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Otras variables que afectan la eficiencia de la columna son:
H es mayor (menor eficiencia) a medida que las columnas están rellenas, disminuyendo H (mayor eficiencia) a
medida que se tienen partículas más pequeñas.
Se puede incrementar la eficiencia de la columna si se disminuye el tamaño de partícula del empaque de la
columna empleando capas más delgadas de la película inmovilizada (en donde la fase estacionaria es un
líquido adsorbido sobre un sólido).
Para compensar la perdida de eficiencia se puede tener:
Partículas grandes columna grande
Partículas pequeñas columna pequeña
Diámetro de la columna
Para aprovechar el efecto del diámetro de la columna se han utilizado columnas cada vez más estrechas. A
menor diámetro aumenta la eficiencia.
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