Extracción de ADN.

Buffer de extracción

EDTA: El EDTA Es un agente quelante de iones metálicos como Mg++. Las ADNsas, siendo enzimas;
Requieren iones metálicos para funcionar. Al agregar EDTA, reducirá su disponibilidad, inutilizando
estas enzimas. Como resultado, su ADN será más seguro. INACTIVA LAS ADNasas

CTAB: detergente que actúa formando micelas con los componentes lipídico de las membranas
celulares (también puede utilizarse SDS). Las moléculas lipídicas están formadas por extremos
hidrófilos «cabezas», y extremos hidrófobos, «colas». El CTAB provoca la lisis de la membrana. Como
la composición de los lípidos y del detergente es similar, el componente CTAB del tampón de
extracción captura los lípidos que integran la membrana celular y nuclear. CAPTURA LOS LIPIDOS
DE MEMBRANA.

TRIS HCl: (Hidroximetil amino metano). Es un tampón biológico, cuya función es mantener el pH de
la solución constante (pH 7.0 pH 8.0).

NaCl: Una vez que el ADN se ha removido del núcleo de una célula y se ha mezclado con agua, la
introducción de iones de sodio crea una atracción temporal entre el sodio y y los PO3+ (grupos
fosfato). Una vez que el ADN se separa del agua y se une firmemente al sodio, se precipitará fuera
de la solución donde se puede concentrar para la purificación o visualizarlo enrollando suavemente
alrededor de una varilla de vidrio lisa. SE UNE AL ADN PARA PRECIPITARLO

Proteinasa K: tiene la función de degradar las proteínas y/o enzimas incluidas las enzimas capaces
de degradar el ADN que queremos obtener.

Cloroformo-Alcohol isoamilico (24:1):

Cloroformo: permite la separación de 2 fases; el ADN queda en la fase acuosa y en la fase orgánica
quedan las proteínas y otros contaminantes. El fenol es el principal químico que puede
desnaturalizar la proteína, pero el cloroformo también ayuda a eso y los disuelve en la fase orgánica,
lejos de la fase acuosa. Además, el cloroformo es un líquido denso (más que el fenol) y, por lo tanto,
se mezcla con el fenol, aumenta la densidad y, por lo tanto, ayuda a una separación más clara de las
dos fases. SEPARA EN FASE ACUOSA (ADN ) Y ORGANICA (OTROS).

El Alcohol Isoamilico actua como antioxidante. Reduce o imposibilita la formación de interfases

durante la extracción de ADN. El alcohol isoamílico se usa para evitar la formación de espuma debido
a la centrifugación. Está en baja cantidad en comparación con el fenol y el cloroformo, y es opcional.
EVITA LA FORMACION DE ESPUMA DEBIDO A CENTRIFUGACIÓN.

Isopropanol: Estabiliza el DNA e inicia la precipitación, igualmente produce deshidratación de los

ácidos nucleicos. A veces es agregado en frio, ya que disminuye su proceso de volatilización y actúa
de forma más eficiente. INICIA PRECIPITACIÓN DEL PELLET.

Etanol 70%: Después de obtener el pellet este se lava con etanol al 70% para eliminar (o idealmente
toda) la sal del sedimento. Si se usara agua como lavado, el ADN se disolvería nuevamente y si se
usara etanol al 100%, la sal no se lavaría porque las sales de sodio son poco solubles en etanol.
ELIMINA LA SAL DEL PELLET

Agua miliq: