DISEO Y VALIDACIN DE UN PROTOTIPO DE RESPIROMETRO PARA MEDIDA DE CO2 EN SUELOS CONTAMINADOS DESIGN AND VALIDATION OF A PROTOTYPE RESPIROMETER

Oscar Daro Guarn Villamizar Claudia Viviana Navas

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Jorge Andrs Ardila Jaime3

Qumico, Magister en Consultora y Gestin Medioambiental, Investigador de los grupos: ciencias qumicas y tecnologas sostenibles- QUIMISOST y grupo ambiental de investigacin aplicada GAIA. Universidad de SantanderUDES- , Bucaramanga, Colombia.
2 1

Estudiante Ingeniera Ambiental. Joven Investigadora Grupo Ambiental de Investigacin Aplicada GAIA. Universidad de Santander- UDES- , Bucaramanga, Colombia.
3

Ingeniero Qumico, Universidad Industrial De Santander

RESUMEN Esta investigacin est enmarcada como la primer etapa de un proyecto aprobado y en curso de la facultad de ciencias exactas fsicas y naturales en la Universidad de Santander (UDES) llamado Diseo y construccin de un prototipo de respirometro multiparametrico sistematizado la cual pretende ser una herramienta pionera en la universidad para afianzar conocimientos tericos y prcticos en cuanto a la respirometria, llevarlos a la prctica y mostrar su aplicabilidad mediante modelos experimentales que permitan observar la eficiencia y proximidad en la medicin de sus parmetros. Se desarroll, valor y optimiz un prototipo en vidrio nico en la UDES basado en cinco respirometros modificados de Bartha y cinco de Warburg [8]. Se realizaron ensayos usando 100 gramos de suelo contaminado con gasolina corriente y se validaron usando muestras ambientales de suelos contaminados con pesticidas, para este estudio, el diseo experimental se apoya en el programa Stat Graphics Centurion versin XVI.I este modelo de prototipo basa su confiabilidad en la reproducibilidad de los datos obtenidos. Palabras clave: respirometro, prototipo, Warburg, Bartha.

ABSTRACT This research is framed as the first stage of a project approved and in progress of the faculty of natural and physical sciences at the University of Santander (UDES) called "Design and construction of a prototype multiparameter respirometer systematic" which purports to be a pioneering tool in college to consolidate knowledge and skills regarding the respirometry, put them into practice and show its applicability using experimental models that allow us to observe the efficiency and proximity to the measurement of its parameters. Developed, evaluated and optimized a single glass prototype based on the five respirometers UDES of Bartha and five Warburg (bibliograf.) tests were using 100 grams of soil contaminated with fuel flow and validated using environmental samples from contaminated soils pesticides, to study the experimental design is based on the Centurion program Stat Graphics version XVI.I this prototype model reliability based on the reproducibility of the data. Words key: respirometric, prototype, Warburg, Bartha.

1.

INTRODUCCION

La Respirometra es una tcnica basada en la medicin del consumo de oxgeno por parte de microorganismos que trabajan sobre un sustrato orgnico, el cual es degradado y oxidado a CO2. Este mtodo mide el consumo de oxgeno ms o menos continuamente en el tiempo y es til para: evaluar biodegradacin de sustancias qumicas especficas; tratabilidad de residuos orgnicos industriales; el efecto de cantidades conocidas de compuestos txicos en la reaccin de consumo de oxgeno en una muestra de agua residual o de sustancias qumicas orgnicas; la concentracin medible a la cual un contaminante o un agua residual inhibe la degradacin biolgica; el efecto en las ratas de oxidacin de varios tratamientos tales como desinfeccin, adicin de nutrientes, y ajuste de pH; los requerimientos de oxgeno para completar la oxidacin de materia oxidable biolgicamente; la necesidad de usar cepas adaptadas en otras mediciones bioqumicas de consumo de oxgeno, tales como la prueba de dilucin de la demanda bioqumica de oxgeno (DBO); y la estabilidad de los lodos [14]. Los datos respiromtricos se usan como comparacin directa entre el consumo de oxgeno de dos muestras de ensayo o entre una muestra y un control. Debido a las diferencias entre los usos, cultivos de cepas, aplicaciones de resultados y entre instrumentos, no se puede definir un procedimiento sencillo para pruebas respiromtricas que aplique para todos los casos. La diversidad de mtodos existente, sumada a las diferentes formas de expresar los resultados obtenidos y a las diferentes interpretaciones de lo que es biolgicamente estable se genera confusin en su uso. Partiendo de esta base, el objetivo de este trabajo es hacer un prototipo y discusin de las diferentes tcnicas que han sido propuestas por diferentes autores basados en los ndices respiromtricos. A nivel regional existe inters por parte del sector industrial en incorporar prcticas que estn de acuerdo con las polticas Nacionales y mundiales en cuanto a la mejora del medio ambiente, especficamente el inters radica en el tratamiento de residuos slidos que dejan estas grandes industrias. Un posible candidato que cumple con estas condiciones es el compostaje, el cual hace posible la revalorizacin de estos desechos hacindoles reutilizables no slo por la industria que los genera sino tambin pueden ser tiles a nivel agricola.

Para llegar a un nivel en que se pueda garantizar el xito de este tipo de procedimientos, es necesario hacer una cuantificacin de los parmetros que intervienen en el proceso de compostaje y no solamente es suficiente la cuantificacin, es necesario ir ms all. En el proceso de compostaje intervienen varios parmetros fsicos, qumicos y biolgicos, que constantemente se deben evaluar para hacer una toma de decisiones apropiada, entonces es indispensable contar con dispositivos que se puedan direccionar a travs de un PC, para as poder monitorear estos parmetros y as hacer eficiente el proceso.

Por tal razn en esta investigacin en la culminacin de todas sus etapas se propone contruir un prototipo de respirometro multiparmetrico sistematizado, que permita medir simultnemaente ndices respirometricos tales como oxgeno consumido, dixido de carbono emitido, pH, temperatura y humedad en un compostaje de prueba.

1.1 Orgenes de la respirometria Desde principios de los aos de 1900s se han utilizado varios mtodos para determinar el ndice de respiracin de bacterias para evaluar la capacidad de una poblacin bacteriana de remover sustancias de las aguas residuales (tratabilidad, o biodegradabilidad) y para determinar el efecto de las sustancias en las bacterias (inhibicin o toxicidad). La tentativa ms antigua que utiliza la absorcin directa para medir la demanda del oxgeno de las aguas residuales fue hecha por Adney en 1890 [18]. Adney y Sierp desarrollaron un tipo de aparato manomtrico en el cual se determinaba el ndice de la absorcin del oxgeno en agua contaminada. A una presin constante, la disminucin del volumen, debido a la absorcin del oxgeno fue determinada por la distancia que una columna de agua sube por un tubo vertical graduado, en forma de "u" que conectaba dos recipientes, uno llenado parcialmente de la muestra, y el otro que contena un volumen igual de agua. El aparato entero fue colocado a una temperatura constante en un bao de agua, y agitado peridicamente para mantener un exceso del oxgeno disuelto en la muestra. Aunque Adney encontr que este mtodo era exacto, concluy que no era conveniente para el trabajo rutinario. En un principio la aplicacin de la respirometra se centr totalmente en la determinacin de la demanda bioqumica de oxgeno del agua residual. A partir de mediados de los aos ochenta, el uso de respirometras se ha incrementado en la determinacin de las caractersticas biocinticas de los procesos biolgicos, de forma que actualmente se considera como la fuente de informacin ms importante en los procesos de depuracin de fangos activados [14].

1.2 Qu es un Respirmetro? Un respirmetro es un instrumento que consiste en un pequeo reactor biolgico que sirve para medir velocidades de respiracin aerobia de una poblacin microbiana en unas determinadas condiciones. El respirmetro determina la cantidad de oxgeno consumida por unidad de tiempo y de volumen. Algunos autores consideran al respirmetro como un sensor, ya que consiste en una unidad fsica con una entrada de muestra externa y una salida de resultados (OUR u otros parmetros) obtenida despus de un procedimiento interno [17]. Por otra parte, y debido a su condicin de reactor biolgico, los resultados son extremadamente dependientes de las condiciones de trabajo, por tanto, puede existir una variabilidad en la salida. Esta variabilidad cuestiona el hecho de que se considere al respirmetro un reactor y obliga a que los resultados de las respirometras se acompaen de las condiciones de operacin tales como: Estado de la biomasa (concentracin, pH, T, DQO, Edad, etc) Tipo de sustrato utilizado. Temporalidad de la medida de oxgeno (puntual, continua).

La IWA (International Water Association) propuso una clasificacin de los respirmetros en funcin de tres parmetros bsicos designados por las siguientes letras:

La primera letra indica dnde se realiza la medida de oxgeno: G, si es en la fase gas; L, si es en la fase lquida. La segunda letra indica de qu forma entra el gas en el respirmetro: F, si es continuo (Flowing); S si permanece esttico (Static) G / LF / F / La tercera letra indica la manera que tiene la fase lquida de entrar al respirmetro:F, si es continuo (Flowing); S si permanece esttico (Static)

1.3 Tipos de respirometros 1.3.1 Respirmetro continuo: continuo o discontinuo hace alusin al modo de aporte del gas. Es un respirmetro continuo, cmo el que se muestra en la figura 1, el aire circula de manera continua en el recipiente donde se lleva a cabo la determinacin. Se mide caudal y concentracin de oxgeno en el aire a la entrada y a la salida de forma permanente, para as poder determinar por diferencia el consumo instantneo de oxgeno. A partir de la curva de consumos instantneos de oxgeno frente a tiempo se podrn obtener por derivacin las velocidades instantneas de consumo de oxgeno. Se trata claramente de un respirmetro GFS, donde la medida se realiza en fase gas, existe un flujo continuo de gas y el medio lquido permanece esttico en el interior del reactor biolgico donde se lleva a cabo la determinacin respiromtrica. [6] Existe una variante de este respirmetro en el que la muestra a analizar se encuentra en fase slida. Se utiliza habitualmente para determinar la estabilidad del compost. Aunque se siga tratando de un respirmetro GHS, ahora la fase lquida no aparece como tal para la determinacin del balance de oxgeno. La ecuacin de balance de oxgeno se simplifica bastante y slo se ha de tener en cuenta la ecuacin del balance de oxgeno para la fase de gas.

Figura 1. Esquema de un respirmetro con aporte contino de aire. Fuente [6].

1.3.2 Respirmetro discontinuo (Batch): El aporte de oxgeno depende de dos valores de consigna, un mximo y un mnimo de concentracin de oxgeno dentro del recipiente donde se lleva a cabo la respirometra. Se inyecta aire hasta alcanzar el valor mximo de concentracin de oxgeno establecido. Una vez alcanzado se deja inyectar oxgeno y se espera a que los microorganismos lo consuman, hasta llegar, esta vez a la consigna mnima y se volver a airear. Se mide el tiempo que emplean los microorganismos en consumir el oxgeno, con lo que se obtiene la velocidad instantnea de consumo de oxgeno. Este proceso se repite cclicamente. En cada ciclo este respirmetro funciona como un GSS, si la medida de la concentracin de oxgeno se hace en el gas, o un LSS, si la concentracin de oxigeno se realiza en el medio lquido.

1.3.3 Respirmetro manomtrico o de Warburg: El oxgeno utilizado se mide con respecto al tiempo anotando la disminucin de presin en el recipiente donde se est realizando la respirometra, que tiene volumen constante, es hermtico y se ha de mantener a una temperatura constante. En el recipiente se introduce la muestra a analizar dejando una cmara de aire y adems, se ha de colocar un vaso con una solucin de hidrxido potsico (o sdico) para que absorba el anhdrido carbnico producido (Figura 2) de tal forma que la disminucin de la presin sea una medida del oxgeno consumido. Este es otro ejemplo de respirmetro GSS, en el que la medida de la concentracin de oxgeno se realiza de manera indirecta y tanto la muestra lquida como el gas permanecen de manera esttica en el interior del recipiente, sin que exista renovacin alguna de ambos durante la determinacin respiromtricas.

Figura 2. Esquema de un respirmetro Warburg. Fuente [14].

1.3.4 Respirmetro volumtrico: De forma anloga al respirmetro de Wargurg, el oxgeno consumido se mide en funcin de la disminucin de volumen que se produzca en el recipiente adecuado que mantenga la presin y la temperatura constantes. Tambin se trata, al igual que el de Warburg, de un respirmetro GSS en que slo cambia la tecnologa empleada para medir la concentracin de oxgeno.

1.3.5 Respirmetro electroltico: Est formado por el recipiente donde se lleva a cabo la respiracin dotado en su interior de un absorbedor de CO2 (recipiente con sosa), una clula electroltica y un manmetro, todos interconectados (Figura 3). A medida que los microorganismos consumen el oxgeno para la oxidacin de la materia orgnica, se produce una disminucin de presin en el sistema, que es registrada por el manmetro. ste, a su vez, a travs de un sistema de control, activar la clula electroltica en funcin de dicha disminucin de presin, tratando as de mantener la presin constante. La cantidad de oxgeno liberado en la electrlisis es proporcional a la cantidad de energa elctrica que ha sido necesaria suministrar. Registrando esta energa se puede inferir directamente el consumo de oxgeno. Este sistema nos proporciona un registro y ajuste automtico y semicontinuo de los cambios de presin que ocurren dentro del vaso de reaccin a causa del consumo de oxgeno por los microorganismos.

Figura 3. Esquema de un respirmetro Electroltico. Fuente: [15].

El respirmetro electroltico proporciona una medida directa y continua del consumo de oxgeno en muestras de efluentes hdricos, aguas residuales, suelos contaminados, disoluciones de compuestos qumicos, etc.

1.3.6 Respirmetro de Bartha: La evolucin de CO2 es usada como un indicador de la actividad microbiana y descomposicin relativa del contaminante. A tal fin se utilizan equipos segn lo descripto por Pramer y Bartha (1965) [20]. Estos equipos estn constituidos por un Erlenmeyer, el cual tiene adosado un tubo lateral. El erlenmeyer contiene el suelo que esta siendo evaluado, y el tubo lateral NaOH 0,097 N donde es retenido el CO 2 liberado por el metabolismo de los microorganismos presentes. Ambos recipientes deben permanecer cerrados mediante tapones de goma. El tapn correspondiente al Erlenmeyer, esta atravesado con una jeringa para inyeccin de agua , y un filtro de aire que permite el libre intercambio gaseoso reteniendo el CO2 del aire que ingresa en el sistema (ver figura 4). El tapn el tubo lateral, est atravesado tambin, por una jeringa para inyeccin de NaOH.

Figura 4. Respirometro tipo Bartha. Fuente: autores.

2. 2.1 DISEO DEL PROTOTIPO

METODOLOGIA

El prototipo que existe en la universidad se ha construido en vidrio resistente al calor y consta de un erlenmeyer de 13,5 cm de alto por 8cm de ancho adosado a una probeta de 22,2 cm de alto por 2,7cm de ancho por medio de un tubo circular de dimetro 1,5cm y de largo 5cm, los corchos de trabajo son siliconados se usan dos uno que va con el erlenmeyer cuyas medidas son 2,3 cm de alto, dimetro externo y dimetro interno 2,3cm para la probeta un corcho cuyas medidas son 2,3 cm de dimetro interno; 2,3 cm de alto y 3,2 cm de dimetro externo, el corcho para el erlenmeyer tiene un orificio de 1cm en el cual va un filtro de aire estilo pipeta de 20cm de largo con dimetro interno de 5mm y externo de 9mm. El prototipo posee capacidad para trabajar con muestras solidas de 100gramos y lquidas hasta de 150mL. Los prototipos construidos se muestran a continuacin:

Figura 5. Diseos respirometro de Warburg modificado. Fuente: autores.

Figura 6. Diseos respirometro de Bartha modificado. Fuente: autores.

Fueron realizados 10 respirometros: 5 de Bartha y 5 Warburg modificados usando el mismo principio de la tcnica de cada autor con diferentes diseos para escoger los mejores de cada tipo y luego validarlos mediante muestras aplicadas al rea de ambiental, como se muestra continuacin es de aclarar que el anlisis inicial se da por comparacin y reproducibilidad.

3.

PARTE EXPERIMENTAL

Para la escoger el mejor respirometro modificado de Warburg y Bartha las muestras fueron trabajadas por triplicado as: T = 25 C MUESTRA 1 MUESTRA 2 MUESTRA 3 MUESTRA 4 MUESTRA 5 100g de suelo + 5g de glucosa+1000ppm gasolina corriente 100g de suelo + 5g de glucosa+2000ppm gasolina corriente 100g de suelo + 5g de glucosa+3000ppm gasolina corriente 100g de suelo + 5g de glucosa+4000ppm gasolina corriente 100g de suelo + 5g de glucosa+5000ppm gasolina corriente

En todos los experimentos se usaron 100 gramos de suelo y se determin el CO2 para todos los respirometros; los resultados que se muestran en este articulo son un promedio de los anlisis realizados; para el filtro de aire presente en algunos modelos se usaron dos perlas de soda caustica (NaOH) y algodn en los extremos. El anlisis de las muestras se hizo cada 18 horas, y en algunos prototipos se us el azul de metileno para registrar el desplazamiento del mismo con el tiempo. Se usaron siempre 30mL de hodroxido de sodio (NaOH Como agente secuestrante) para luego transferirlo a un beaker de 250mL y complementar con la adicin de 30mL de cloruro de Bario al 1% para posteriormente aforar a 100mL. La titulacin se hizo con cido clorhidrico (HCl), en el clculo de dixido de carbono se uso la siguiente frmula: mg de CO2 producido= ((mililitro de hidroxido x Normalidad del hidroxido) - (mililitro de cido x normalidad del cido)) x 22. (Ecuacin 1) Fuente: [11].

3.1

Anlisis estadstico de los Respirometros

3.1.1 Warburg 3.1.1.1 Hiptesis: La concentracin del contaminante no representa una variacin significativa en la Produccin de CO 2, medida de la actividad microbiana. No hay diferencia significativa en las medidas que Proporciona cada uno de los respirometros.

Tabla 1. Diseo estadstico respirometro de warburg Conc. Contaminante [ppm] 1000 1000 1000 2000 2000 2000 3000 3000 3000 4000 mg CO2 Respirometro 1 mg CO2 Respirometro 2 mg CO2 Respirometro 3 mg CO2 Respirometro 4 mg CO2 Respirometro 5

15,66 14,76 14,74 12,67 3,78 3,01 3,11 3,78 2,90 3,36

15,85 15,53 18,64 17,62 4,51 3,87 3,96 3,56 2,41 2,99

18,4 12,11 11,9 11,9 3,86 3,75 3,68 2,4 2,11 2,46

19,72 13,63 11,86 11,75 3,09 2,98 2,15 2,77 1,65 2,17

24,43 12,03 11,63 12,59 4,23 5,85 3,78 3,56 3,98 4,15

4000 4000 5000

3,16 2,58 2,98

2,92 1,54 1,44

1,56 1,36 1,67

1,24 0,79 0,11

3,12 2,52 2,95

Tabla 2. Resultados p-value para el respirmetro de warburg

Respirometro 1 2 Respirometro de Warburg 3

F-Ratio 457.699 212,21 7961,28

P-Value 0,9989 0,7853 0,969666

4 5

36,91 457,70

0,243112 0,9989

3.1.2 RESPIROMETRO DE BARTHA. ANALISIS ESTADISTICO. Comprobamos la repetividad de los IR para una misma muestra cada 18 horas. Cada se analiz muestra por triplicado. Ac se muestra un promedio de las mediciones. MUESTRA 1 MUESTRA 2 MUESTRA 3 MUESTRA 4 MUESTRA 5 100g de suelo + 5g de glucosa+50000ppm gasolina corriente 100g de suelo + 5g de glucosa+40000ppm gasolina corriente 100g de suelo + 5g de glucosa+30000ppm gasolina corriente 100g de suelo + 5g de glucosa+20000ppm gasolina corriente 100g de suelo + 5g de glucosa+10000ppm gasolina corriente T = 25 C

3.1.2.1 Hiptesis: La concentracin del contaminante no representa una variacin significativa en la Produccin de CO 2, medida de la actividad microbiana. No hay diferencia significativa en las medidas que Proporciona cada uno de los respirometros.

Tabla 3 Diseo estadstico respirometro de Bartha

Con. Contaminante ppm 10000 10000 10000 20000 20000 20000 30000 30000 30000 40000 40000 40000 50000 50000 50000
Fuente: Autores.

mg CO2 Respirometro 1 37,86 38,01 37,01 28,65 24,83 25,64 24,83 28,65 27,37 24,92 24,83 22,83 22,74 12,82 22,74

mg CO2 Respirometro 2 36,73 35,63 35,57 25,43 23,76 24,01 24,72 25,84 26,23 25,43 26,79 21,55 20,54 26,23 18,93

mg CO2 Respirometro 3 36,82 36.025 35,88 26,95 25,93 24,83 26,95 24,87 21,76 21,76 25,83 22,55 22,76 19,03 18,67

mg CO2 Respirometro 4 38,88 37,99 38,67 29,11 29,17 28,73 27,62 27,67 27,62 25,91 25,63 25,73 22,04 22,96 12,87

mg CO2 Respirometro 5 41,64 39,91 39,62 30,87 30,87 31,73 27,01 27,73 27,21 26,89 25,63 26,42 23,99 23,01 24,45

Tabla 4 Resultados p-value para el respirmetro de Bartha

Respirometro 1 Respirometro de Bartha 2 3 4 5

Fuente: Autores.

F-Ratio 19,59 162,43 58,31 23,09 245,73

P-Value 0,522338 0,662929 0,869941 0,354382 0,893081

3.2 Validacin de los Respirometros Los respirmetros se validaron con pruebas ambientales de suelos contaminados usando el herbicida round up, de igual manera se hicieron diseos estadsticos para los 10 prototipos realizados.

Tabla 5 Obtencin de CO2 en muestras de suelo con el cambio de Herbicida, pH y sacarosa para el mejor respirometro de Warburg

HERBICIDA mL 0,01 0,06 0,06 0,06 0,01 0,01 0,10 0,10 0,10 0,06 0,06 0,10 0,01 0,06 0,01 0,10 0,10 0,01 0,06 0,01 0,06 0,01 0,06 0,1 0,1 0,01 0,10

SACAROSA gr 8 8 6 4 4 6 6 4 8 8 6 6 8 4 4 4 8 6 8 8 6 6 4 8 4 4 6

CO2 mg/kg 245,0 253,8 253,3 251,9 244,2 244,7 219,3 222,9 219,9 253,8 253,3 219,3 245,0 251,9 244,2 222,9 219,9 244,7 253,8 245,0 253,3 244,7 251,9 219,9 222,9 244,2 219,3

pH ADIMENSIONAL 5,6 5,8 5,7 5,8 5,5 5,6 5,1 5,0 5,1 5,8 5,7 5,1 5,6 5,8 5,5 5 5,1 5,6 5,8 5,6 5,7 5,6 5,8 5,1 5,0 5,5 5,1

Tabla 6 Obtencin de CO2 en muestras de suelo con el cambio de Herbicida, pH y sacarosa para el mejor respirometro de Bartha

HERBICIDA mL 0,01 0,055 0,055 0,055 0,01 0,01 0,10 0,10 0,10 0,055 0,055 0,10 0,01 0,055 0,01 0,10 0,10 0,01 0,055 0,01 0,055 0,01 0,055 0,10 0,10 0,01 0,10

SACAROSA gr 8 8 6 4 4 6 6 4 8 8 6 6 8 4 4 4 8 6 8 8 6 6 4 8 4 4 6

CO2 mg/kg 251,1 248,5 247,3 246,9 250,8 251,0 242,7 242,8 243,1 248,5 247,3 242,7 251,1 246,9 250,8 242,8 243,1 251,0 248,5 251,1 247,3 251,0 246,9 243,1 242,8 250,8 242,7

pH ADIMENSIONAL 5,6 5,8 5,7 5,8 5,5 5,6 5,1 5,0 5,1 5,8 5,7 5,1 5,6 5,8 5,5 5,0 5,1 5,6 5,8 5,6 5,7 5,6 5,8 5,1 5,0 5,5 5,1

4.

ANLISIS DE RESULTADOS

4.1 Anlisis para validacin de los prototipos Para los datos registrados en el laboratorio se utiliz un paquete estadstico para as realizar una aproximacin del modelo matemtico ms adecuado para obtener la funcin que represente la dependencia de produccin de

CO2 con la concentracin del contaminante (gasolina o round up) con su respectivo error respecto a los lmites superiores e inferiores de la funcin. Se realizaron comparaciones para la varianza de los datos obtenidos en la produccin de mg de CO2 en cada uno de los respirometros 1,2,3,4,5, tanto para el respirmetro Bartha como el Warburg el anlisis de la varianza en todas las mediciones de un respirmetro con respecto al otro report un P-value mucho mayor a 0,05 demostrando que el tipo de respirmetro ya sea 1,2,3,4,5 no marcan una diferencia el uno respecto del otro en las mediciones de CO2. Con respecto a la concentracin del contaminante en ambos casos se encontr un valor del P value menor a 0,05 Considerando que tomamos el 5% de error como porcentaje atribuido al azar, esto demuestra una relacin estadsticamente significativa entre la concentracin del contaminante y la produccin de CO2. Se encontr un polinomio de grado 2 con un Porcentaje de exactitud del 98,6 %para el respirometro Warburg. Polinomio: mg CO2 Respirometro 5 = 13,1607-0,0105928*Conc Contaminante + 0,00000255857*Conc Contaminante^2 (Ecuacin 2)

Plot of Fitted Model 25

mg CO2 Respirometro 5

20 15 10 5 0 0 1 2 3 4 5 (X 1000,0) Conc Contaminante

Figura 7 Modelo Aproximado de la Funcin de la Actividad microbiana con Respecto a la Concentracin del contaminante para el respirmetro Warburg. Nota: La lnea azul representa la funcin que describe al Polinomio.

Tabla 7. Error de los datos registrados por el polinomio warburg

Standard Parametro CONSTANTE Conc Contaminante Conc Contaminante^2 Estimado 13,1607 -0,0105928 0,00000255857 Error 1,27718 0,000973295 1,59151E-7 Lmite Inferior 10,3779 -0,0127134 0,00000221181 Limite Superior 15,9434 -0,00847213 0,00000290533

Nota: 95,0% de confianza en los intervalos. Fuente: Autores.

Y se obtuvo un polinomio de grado 2 para el de Bartha con un Porcentaje de exactitud de 96%: mg CO2 Respirometro 5 = 26,42-0,00304462*Conc Contaminante + 0,00000114071*Conc Contaminante^2 (Ecuacin 3)

Plot of Fitted Model 16

mg CO2 Respirometro 1

12

0 0 1 2 3 4 5 (X 1000,0) Conc Contaminante

Figura 8 Modelo Aproximado de la Funcin de la Actividad microbiana con Respecto a la Concentracin del contaminante. Fuente: Autores.

Tabla 8. Error de los datos registrados por el polinomio Bartha Standard Parametro CONSTANTE Conc Contaminante Conc Contaminante^2 Estimado 26,42 -0,00304462 0,00000114071 Error 1,57332 0,00119897 1,96053E-7 Lmite Inferior 22,992 -0,00565696 7,13551E-7 Limite Superior 29,848 -0,000432276 0,00000156788

Nota: La lnea azul representa la funcin que describe al Polinomio. 95,0% de confianza en los intervalos. Fuente: Autores.

4.2 Anlisis para validacin de los mejores prototipos con muestras Ambientales Para el anlisis se usaron muestras de suelo contaminadas con round up, se utiliz como nutriente sacarosa y variacin del pH para determinar su influencia de cada uno respecto a la produccin de CO2, es de anotar que como son ms de dos variables no fue posible su anlisis con el paquete estadstico usado anteriormente, se hizo necesario la relacin matemtica de cada variable a travs de derivadas parciales e integracin mltiple, para lograr este objetivo se utiliz programacin en el mtico Mat Lab. Todos los anlisis matemticos se corroboran realizando la grfica del valor observado versus valor predicho en el modelo con resultados confiables para aceptacin d elos modelos mostrados a continuacin.
4.1.1 Anlisis respirometro de Bartha 1 Se obtuvo la siguiente funcin: f(x,y) = p00 + p10*x + p01*y + p20*x^2 + p11*x*y + p02*y^2 (Ecuacin 4) R-cuadrado: 0.9865 R-cuadrado-Ajustado: 0.9832

Figura 9 Modelo Aproximado de la Funcin de la medida de CO2 respecto al cambio de Herbicida y pH. Donde X= HERBICIDA Y=PH.

4.1.2 Anlisis respirmetro de Bartha 2 f(x,y) = p00 + p10*x + p01*y + p20*x^2 + p11*x*y + p02*y^2 (Ecuacin 5) R-cuadrado: 0.9841 R-cuadrado Ajustado: 0.9803

Figura 10 Modelo Aproximado de la Funcin de la medida de CO2 respecto al cambio de Sacarosa y pH. Donde

X=pH Y=sacarosa

4.1.3 Anlisis respirmetro de Warburg 1

f(x,y) = p00 + p10*x + p01*y + p20*x^2 + p11*x*y + p02*y^2 R-cuadrado: 0.9988 R-cuadrado- Ajustado: 0.9985
(Ecuacin 6)

Figura 11 Modelo Aproximado de la Funcin de la medida de CO2 respecto al cambio de Herbicida y pH del respirmetro de Warburg. Donde X= HERBICIDA Y=pH

4.1.4 Anlisis Respirometro de Warburg 2 f(x,y) = p00 + p10*x + p01*y + p20*x^2 + p11*x*y + p02*y^2 R-Cuadrado: 0.9836 Ajuste de Rcuadrado: 0.9797
(Ecuacin 7)

Figura 12 Modelo Aproximado de la Funcin de la medida de CO2 respecto al cambio de sacarosa y pH del respirmetro de Warburg. Donde X=PH Y= SACAROSA

5.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Para todos los respirometros Warburg del 1 al 5, el P-Value es menor que 0,05 demostrando que si influye notablemente la concentracin del contaminante en la produccin de CO 2, luego, rechazamos nuestra hiptesis inicial. - La concentracin del contaminante si representa una variacin significativa en la Produccin de CO2, medida de la actividad microbiana. Ningn Respirometro muestra desviaciones estndar significativas en las mediciones de los diferentes niveles de Contaminante para todos el P-Value es mayor de 0,05. Luego, Aprobamos nuestra Hiptesis inicial. - No hay diferencia significativa en las medidas que Proporciona cada uno de los respirometros. Nota: Aunque escogera el respirometro 5 o 1 cualquiera de los dos como el mejor respirometro warburg, los cambios en precisin no sern realmente significativos con respecto a los Otros repirometros 2,3,4. Para todos los respirometros Bartha del 1 al 5, el P-Value es menor que 0,05 demostrando que si influye notablemente la concentracin del contaminante en la produccin de CO 2, luego, rechazamos nuestra hiptesis inicial. La concentracin del contaminante si representa una variacin significativa en la Produccin de CO2, medida de la actividad microbiana. Ningn Respirometro muestra desviaciones estndar significativas en las mediciones de los diferentes niveles de Contaminante para todos el P-Value es mayor de 0,05. Luego, Aprobamos nuestra Hiptesis inicial. No hay diferencia significativa en las medidas que Proporciona cada uno de los respirometros. Nota: Aunque escogera el respirometro 5, como el mejor respirometro Bartha, los cambios en precisin no sern realmente significativos con respecto a los Otros respirometros 1,2,3,4.

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