Del DNA a las proteínas II: Cómo

leen las células el genoma

Del RNA a la proteína: Traducción

Control de la expresión génica
 molécula
de DNA
TRADUCCIÓN:
Gen 2 Síntesis de una
Gen 1
Proteína a partir
Gen 3
de la Secuencia
de un RNA
Mensajero
templado
de DNA
Cada aminoácido
Transcripción es especificado
por una
“palabra” de 3
bases
Traducción nitrogenadas o
CODÓN
 El Código Genético Es Universal: un codón en un
SEGUNDA BASE
organismo especifica el mismo
aminoácido en cualquier otro

No es ambiguo: cada codón

codifica para un sólo aminoácido
Es Degenerado: un
PRIMERA BASE (extremo 5’)

aminoácido puede ser codificado

TERCERA BASE (extremo 3’)

por más de un codón. La
variabilidad suele estar en la tercera
base del codón.

Los codones especiales son:

AUG à codón de inicio y
metionina
UAA/UGA/UAG à codones de
término
(codones sin sentido)
Marcos de Lectura
 Marcos de Lectura Abiertos:
Poseen un codón de inicio (AUG), seguido de un número
mínimo de codones “normales”, terminando en un codón de
término (UAA, UGA o UAG)
Ejemplo:

Suponiendo que la siguiente secuencia corresponde a un

mRNA completo, ¿de cuantos aminoácidos constará la
proteína resultante de su traducción?

5’ CAGUCAUGCCAGUCGGAUAGACGUAGAUGAUCC 3’

Met Pro Val Gly Stop

4 aminoácidos No codifica para

aminoácidos
 Traducción

El mRNA es traducido en el
ribosoma a proteína. Cuando
el ribosoma se une al sitio de
inicio en el mRNA, comienza a
tRNA con leerlo, 3 nucleótidos a la vez
aminoácido (codones).
unido

El ribosoma no adiciona
aminoácidos libres, sino que
los aá se encuentran unidos a
un RNA especial llamado
RNA de Transferencia
(tRNA), que posee una
región complementaria al
codón, llamada anticodón.
Comparación entre Ribosomas de Eucariontes y Procariontes

Subunidad Subunidad Subunidad

mayor menor menor
Subunidad
mayor

RIBOSOMA PROCARIÓTICO RIBOSOMA EUCARIÓTICO

Los componentes de los ribosomas se designan por su valor “S”, que define la
velocidad de sedimentación en una ultracentrífuga.
 RNA de Transferencia (tRNA)
Sitio de Sitio de
unión de unión de
aminoácidos aminoácidos

Enlaces de
hidrógeno

La estructura de “trébol” del tRNA. Hay al menos un tRNA para cada aminoácido. En todos los
tRNA, el aá se encuentra unido a la A de la secuencia CCA del extremo 3’. Un tRNA con un
aminoácido unido se llama aminoacil-tRNA. La aminoacil tRNA sintetasa adjunta un
aminoácido específico a un tRNA específico.
 Formación de un Enlace Peptídico

peptidil-tRNA unido al
extremo carboxilo- aminoacil-
terminal tRNA
de la cadena molécula de
polipeptídica tRNA liberada
creciente de su unión
al polipéptido
nueva molécula de
peptidil-tRNA unida al
extremo carboxilo-
Incorporación de un aminoácido a una proteína. Una terminal de
cadena polipeptídica crece por la adición secuencial de la cadena polipeptídica
creciente
aminoácidos a su extremo carboxilo-terminal.
 Etapas de la Traducción
Iniciación Elongación Terminación

el ribosoma se une al la cadena polipeptídica es elongada por la cuando aparece un

codón de inicio del mRNA sucesiva adición de aminoácidos codón de término, el
polipéptido es liberado y
el ribosoma se disocia
 Iniciación de la Traducción
Existe un tRNA iniciador especial que tiene
unida una metionina.
tRNA de inicio
El ribosoma se ensambla en el sitio de
inicio con la ayuda de factores de
iniciación

Hay 3 sitios en el ribosoma que unen

aminoacil-tRNAs:
A = acepta un nuevo tRNA
subunidad menor
sitio de unión de mRNA P = aquí se forma un enlace
peptídico
E = sitio de salida para tRNAs
“vacíos”
subunidad mayor

Sitio P (unión de
peptidil-tRNA) Sitio A (unión de
Sitio E
(salida de aminoacil-tRNA)
tRNA vacío)
Subunidad Mayor
Sitio de
unión de Subunidad Menor
mRNA
Reconocimiento del Codón de Inicio en Procariontes y Eucariontes
Secuencia de Shine-Dalgarno

desplazamiento (scanning)
de la subunidad menor del
ribosoma

En procariontes, el ribosoma reconoce la secuencia de Shine-Delgarno que precede al codón de

inicio y es complementaria al extremo 3 del rRNA 16S de la subunidad menor del ribosoma.
Los ribosomas de eucariontes reconocen los caps de 7-methylguanosine y luego recorren el
mRNA buscando el primer AUG de inicio. En procariontes, el aminoácido de iniciación es
siempre formil-metionina (fMet).
Iniciación de la Traducción
en EUCARIONTES

Los factores de iniciación eIF-3,

eIF-1, y eIF-1A se unen a la
subunidad ribosomal 40S. El
metionil-tRNA de inicio es
reclutado por eIF-2/GTP y el
mRNA es reclutado por eIF-4E
(que se une al cap), eIF-4G (que
se une a eIF-4E en el cap y a PABP
en la cola de poliA), eIF-4A, y eIF-
4B. El ribosoma luego recorre el
mRNA hasta encontrar el primer
codón AUG. Este scanning
depende de la energía de la
hidrólisis del ATP. Al llegar al AUG
de inicio, eIF-5 gatilla la hidrólisis
del GTP unido a eIF-2/GDP y otros
factores de iniciación. LA
subunidad ribosomal 60S luego se
incorpora al complejo.
Iniciación de la
Traducción en
PROCARIONTES

Los factores de iniciación IF-1,

IF-2 e IF-3 se unen a la
subunidad 30S, seguido de la
unión del mRNA y el N-
formylmethionyl (fMet) tRNA de
inicio, el cual es reconocido por
IF-2/GTP. IF-3 es liberado y la
subunidad 50S se une al
complejo, gatillando la hidrólisis
de GTP, seguido de la liberación
de IF-1 e IF-2/GDP.
 Elongación: Un Ciclo de Traducción
Extremo amino-terminal
del polipéptido
Ribosoma listo para el
siguiente aminoacil-tRNA
Translocación: El tRNA en
el sitio A es translocado al
sitio P, llevando consigo el
mRNA. Mientras tanto, el
tRNA en el sitio P se va al
sitio E, siendo liberado
finalmente del ribosoma. El
mRNA ha cambiado su
posición en el ribosoma en
un codón.
Reconocimiento del codón:
Un aminoacil-tRNA
entrante se une al codón
en el sitio A
Formación del enlace
peptídico: El ribosoma
cataliza la formación de un
enlace peptídico entre el aá
nuevo y el extremo carboxilo-
terminal del polipéptido
creciente.
 Terminación de la Traducción

polipéptido
Factor de liberación libre

codón de término
(UAA, UAG, UGA)

La unión de un factor de liberación a un codón de término pone fin a la traducción. El

polipéptido es liberado y el ribosoma se disocia en sus dos subunidades.

El factor de liberación es una proteína. Los codones de término no codifican para aminoácidos.
 Polirribosomas
Una molécula de mRNA
puede ser traducida
simultáneamente por una
serie de ribosomas, tanto
unidos a membranas
como en forma libre. Estas
estructuras se llaman
polirribosomas o
polisomas. Ocurren tanto
en eucariontes como en
procariontes.
La Transcripción
y la Traducción
están Acopladas
en Procariontes
En los eucariontes, la
envoltura nuclear
mantiene la transcripción
separada de la traducción.
Pero en procariontes, el
mRNA es accesible a los
ribosomas mientras se va
sintetizando. Por lo tanto,
los ribosomas
comenzarán a sintetizar
un polipéptido en el
extremo 5’ de una
molécula naciente de
mRNA y seguirán su
síntesis detrás de la RNA
polimerasa, a medida que
ésta completa la cadena
de mRNA.
El origen de la Vida: La hipótesis del Mundo RNA

Almacenamiento de
información genética
No hace nada más

ü Almacenamiento de
información genética
ü Catálisis

Varias funciones
(estructural, transporte,
señalización, catálisis).
NO tienen capacidad de
almacenar información
 MUNDO
RNA

presente

Formación Primeras Primeros

del células mamíferos
sistema con DNA
solar
El RNA es capaz de formar estructura secundaria y terciaria

Estructura
Secundaria

Estructura
Terciaria
 El RNA Tiene
actividad catalítica
(RIBOZIMAS)
Debido a la complejidad de los nucleótidos, se cree
que el RNA fue precedido de moléculas más simples,
pero que almacenaban igualmente información.

Estos pre-RNAs evolucionaron a RNA

(ribonucleótidos)

Los RNAs evolucionaron a RNAs que tenían la

capacidad de sintetizar proteínas, ya que las
proteínas son funcionalmente más versátiles que el
RNA.

El RNA fue reemplazado por DNA como

almacenamiento de información genética, por su
mayor estabilidad química.
 Clase 7:
Control de la Expresión
Pre-transcripcional
(epigenético): Génica:
•Arquitectura de la cromatina
•Modificaciones químicas de
bases y/o histonas
mRNA inactivo
Control
degradación
de RNA
Transcrito
de RNA mRNA

Control Control
transcripcional procesamiento Control Control Control
de RNA transporte y traducción actividad
localización de proteína
de RNA
Transcripcional:
•Factores de
transcripción
•Proteínas/secuencia Post-transcripcional: Traduccional:
génicas activadoras y •Splicing •Proteínas Post-traduccional:
represoras •Exportación/localización en regulatorias •Localización
•Atenuación el citoplasma •microRNAs •Oligomerización
•Vida media de mRNA •Modificaciones
químicas
•Vida media
Figure 7-5 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
 Control de la Transcripción en Procariontes:
Operones

OPERÓN:
•Un grupo de genes bacterianos transcritos a partir de un mismo promotor. Cada gen
codifica una enzima diferente que forma parte de una Vía Enzimática.
•Dentro del promotor está el operador, una secuencia que regula la expresión de los
genes del operón
•Se transcriben como una sola molécula de mRNA (Transcrito Policistrónico), lo cual
permite coordinar su regulación.

Figure 7-34 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 Encendido y Apagado de los Genes del Operón Triptófano (trp)

promotor
inicio de transcripción

operador

represor inactivo
RNA polimerasa

triptófano represor activo

GENES ENCENDIDOS GENES APAGADOS

Cuando el nivel intracelular de triptófano (trp) es bajo, la RNA polimerasa se une al promotor y
transcribe los cinco genes del operón trp. Cuando el nivel de trp es alto, el represor de triptófano
es activado para unirse al operador, donde bloquea la unión de la RNA polimerasa al promotor.

Figure 7-35 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 La Regulación del Operón de
Triptófano Ocurre por 2 Mecanismos:
Represión
Atenuación
atenuador

Bajos niveles de Trp

mRNA completo

Altos niveles de Trp

mRNA atenuado
 Mecanismo de Atenuación Transcripcional
Altos niveles
de Trp

Bajos niveles
de Trp

El mRNA trp se traduce mientras aún está siendo transcrito. A altos niveles de Trp, el ribosoma traduce justo
detrás de la RNA pol. Las regiones 3 y 4 forman una horquilla que provoca el final de la Transcripción. A bajos
niveles de Trp, el ribosoma se detiene en la región 1, que contiene 2 codones adyacentes de Trp. Esto permite
la formación de una horquilla entre las regiones 2 y 3, evitando la horquilla entre 3 y 4, lo que permite que la
transcripción del operón prosiga más allá de la secuencia atenuadora.
 Mecanismos de Control de Expresión de Genes en Procariontes

REGULACIÓN NEGATIVA (REPRESIÓN) REGULACIÓN POSITIVA (ACTIVACIÓN)

el represor unido previene la transcripción el activador unido promueve la transcripción

proteína proteína RNA polimerasa

represora activadora
unida unida
GEN APAGADO GEN ENCENDIDO
EL LIGANDO
SE UNE PARA
REMOVER LA
PROTEÍNA
REGULATORIA
DEL DNA
LA ADICIÓN DE LIGANDO
ENCIENDE LA EXPRESIÓN LA ADICIÓN DE LIGANDO
DEL GEN REMOVIENDO LA APAGA LA EXPRESIÓN
PROTEÍNA REPRESORA DEL GEN REMOVIENDO LA
PROTEÍNA ACTIVADORA

EL LIGANDO GEN APAGADO GEN ENCENDIDO

SE UNE PARA
PERMITIR LA
UNIÓN DE LA
PROTEÍNA
REGULATORIA
AL DNA LA REMOCIÓN DEL LIGANDO represor inactivo
ENCIENDE LA EXPRESIÓN
DEL GEN REMOVIENDO LA
LA REMOCIÓN DEL LIGANDO
PROTEÍNA REPRESORA
APAGA LA EXPRESIÓN
DEL GEN REMOVIENDO LA
PROTEÍNA ACTIVADORA
 El Operón lac

Gen
Promotor Operador Gen Z Gen Y Gen A
Regulador

Enzimas de metabolización
de lactosa

Represor lac
 Sin Lactosa La RNA polimerasa no se puede
unir, la transcripción se bloquea

represor unido al
operador El Operón lac:
Transcripción inducida
por la remoción de un
represor
represor activo

Con Lactosa
La lactosa induce transcripción inductor
uniéndose al represor, el cual (lactosa)
no se puede unir al operador
inductor
RNA polimerasa se une unido al
represor

Transcripción
procede

mRNA Transcrito
 Baja Glucosa El Operón lac:
cAMP
complejo Transcripción activada
CAP-cAMP por la unión de CAP al
(activador) promotor

CAP
La RNA polimerasa se une al
complejo del promotor

Transcripción
procede CAP = catabolite activator
protein

Permite a las bacterias

utilizar otras fuentes de
mRNA
carbono cuando la glucosa
transcrito
es escasa.

Alta Glucosa âGlucosa è ácAMP

Los genes no son
transcritos
La RNA polimerasa
no se puede unir
SITIO DE INICIO DE TRANSCRIPCIÓN
UNIÓN DE
PROMOTOR
Control Dual
CAP
del Operón lac

OPERÓN APAGADO
porque no se une CAP

OPERÓN APAGADO
porque no se une CAP
y se une el represor lac

OPERÓN APAGADO
porque se une el represor lac

OPERÓN ENCENDIDO
 Control Transcripcional en Eucariontes:
Diferencias con Procariontes
• RNA polimerasas de eucariontes requieren de factores generales de transcripción,
que se ensamblan en el promotor antes del inicio de transcripción. Este proceso de
ensamblaje puede ser regulada por diferentes factores. En procariontes, la RNA
polimerasa puede iniciar la transcripción por sí sola.

• La mayoría de las proteínas regulatorias de eucariontes actúan a distancia, es

decir, uniéndose al DNA miles de nucleótidos río arriba del gen cuya expresión
regulan. Por esto, un promotor es susceptible de ser regulado por una gran
cantidad de elementos regulatorios esparcidos por el cromosoma. Estas son las
secuencias enhancer (exacerbadoras o incrementadoras). Este fenómeno también
ocurre en procariontes, pero constituye una excepción.

ESTRUCTURA DE UN GEN DE EUCARIONTE

secuencias regulatorias promotor región transcrita

DNA espaciador
 La Región de Control de la Expresión de un Típico Gen Eucarionte

Región de control de expresión del gen X

El Promotor es la secuencia donde se unen los factores generales de transcripción y la RNA

polimerasa.
En la secuencias regulatorias se unen proteínas regulatorias de expresión génica, cuya
presencia afecta el nivel de iniciación de la transcripción. Estas secuencias pueden estar
ubicadas adyacentes al promotor, muy lejos río arriba, dentro de intrones o río debajo de la
secuencia codificante del gen.
Los factores generales de transcripción son similares para todos los genes transcritos por la
RNA polimerasa II, mientras que las proteínas regulatorias y sus sitios de unión son
diferentes para cada gen.
 Factores Generales
de Transcripción

Ensamblaje de los factores generales de

transcripción requeridos para la iniciación
de transcripción por la RNA polimerasa II.
Primero TFIID se une a la caja TATA (~-
25 en eucariontes). TFIIB se une a este
complejo, seguido por la RNA
polimerasa II, escoltada por TFIIF.
Luego TFIIE y TFIIH se ensamblan
sobre el complejo. En presencia de ATP,
TFIIH fosforila a la RNA polimerasa II, lo
cual libera a la polimerasa de este
complejo, para que pueda iniciar la
síntesis de RNA. Las otras dos RNA
polimerasas, I y III, requieren de otros
factores generales de transcripción y no
dependen de una caja TATA.
Enhancers: Activación Génica a Distancia
Los factores generales de transcripción y la RNA
polimerasa no se ensamblan eficientemente por sí
solos en el promotor. Es necesaria la unión de una
proteína regulatoria a un incrementador, a una
distancia de hasta decenas de miles de pares de
nucleótidos del inicio de transcripción
Activación Génica en Procariontes y Eucariontes
 Muchas Proteínas Activadoras de Transcripción
Aceleran el Ensamblaje de los Factores Generales de Transcripción

La mayoría de las proteínas activadoras poseen un dominio de unión al DNA y otro

que se une a la maquinaria de transcripción y acelera la velocidad de iniciación de
transcripción (dominio de activación).

Ejemplo: La proteína GAL4, unida

al DNA río arriba del gen, facilita la
unión de TFIID al complejo de
factores generales de
transcripción. Las proteínas
activadores de transcripción
incrementan la tasa de
transcripción típicamente en hasta
1000 veces.
 Secuencias Regulatorias en un Gen Eucariótico Típico

Los factores generales de transcripción y la RNA polimerasa II se ensamblan sobre el promotor. La característica
más importante de los promotores de los genes transcritos por la RNA polimerasa II es la presencia de la Caja
TATA, que actúa como punto de inicio del ensamblaje de los factores generales de transcripción. El punto en que
la RNA polimerasa II inicia la transcripción se encuentra generalmente 25 pares de nucleótidos en dirección 3’ de
la caja TATA. Las secuencias regulatorias génicas actúan como lugares de unión de las proteínas regulatorias cuya
presencia en el DNA afecta la velocidad a la que se trasncriben los genes.
Modo de Acción de las Proteínas Represoras de Genes de Eucariontes

proteínas activadoras y
represoras compiten
Unión competitiva por la unión a la misma
al DNA secuencia regulatoria

el represor se une al
dominio de activación
enmascaramiento
del activador, evitando
de la superficie la unión de la última a
de activación la maquinaria de
transcripción

el represor actúa
sobre una etapa
temprana del
ensamblaje de los
interacción directa factores generales de
con factores generales transcripción,
de transcripción bloqueando la
continuación del
ensamblaje
 Control Post-traduccional:
La actividad de las proteínas regulatorias de expresión
génica es regulada mediante diferentes mecanismos
UNIÓN DE
SÍNTESIS DE UNIÓN DE FOSFORILACIÓN SEGUNDA
PROTEÍNAS LIGANDO DE PROTEÍNAS SUBUNIDAD

INACTIVA Subunidad de activación

Subunidad de unión al DNA

ACTIVA

DESENMASCARA- ESTIMULACIÓN DE LIBERACIÓN DESDE LA

MIENTO ENTRADA AL NÚCLEO MEMBRANA
INACTIVA inhibidor Proteína
inhibitoria

ACTIVA