UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

DETERMINACION DE LA CALIDAD DEL AGUA POR SU CONTENIDO

BACTERIAL (RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTROFICAS)

LABORATORIO N° 3 DEL CURSO MICROBIOLOGÍA – SA323K

GUILLEN MANCHA, WILLIAM

DOCENTE: ING. JORGE GILBERTO TELLO CEBREROS

Lima – Perú
2018
UNIVERSIDAD NACIONAL DE I N G E N I E RIA
Facultad de Ingeniería Ambiental

INDICE

RESUMEN................................................................................................................ 4
SUMARY .................................................................................................................. 4
I. INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 5
II. OBJETIVO ......................................................................................................... 6
III. MARCO TEÓRICO ........................................................................................ 6
1. Conceptos Previos: ........................................................................................ 6
IV. RESULTADOS ............................................................................................... 9
V. DISCUSION DE RESULTADOS ...................................................................... 10
VI. CONCLUSIONES: ....................................................................................... 10
VII. RECOMENDACIONES: ............................................................................... 11
VIII. CUESTIONARIO .......................................................................................... 11
IX. FUENTES DE INFORMACIÓN: ................................................................... 13
X. ANEXOS: ........................................................................................................ 13
XI. APENDICE................................................................................................... 14
1. DIAGRAMA DE FLUJO ................................................................................ 14
2. PROCEDIMIENTO ....................................................................................... 14

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INDICE DE ILUSTRACIONES
Ilustración 1.Imagen recuento de bacterias heterotróficas. ..................................... 13
Ilustración 2.Fotografías, tubos con agar nutritivo y placas petride grupos 1,3,5..... 13

INDICE DE TABLAS
Tabla 1.Recuento de bacterias de muestra utilizadas en los grupos 1, 3, y 5. .......... 9
Tabla 2.Datos muestra utilizadas lugar, día, hora, temperatura de los grupos 1, 3, y
5. .............................................................................................................................. 9
Tabla 3. Comparacion de los límites máximos permisibles UFC/mL ....................... 11

INDICE DE FIGURAS

Figura 1. Procedimiento determinación de colonias. ................................................. 8

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RESUMEN
El presente trabajo hace un recuento de microorganismos, que se basa en que cada
uno desarrollará una colonia visible. Dentro de estos microorganismos resaltaremos
a las bacterias heterótrofas que abundan en el ambiente, especialmente en el agua,
incluyendo agua tratada y del grifo, debido a su capacidad de adaptarse a un entorno
desnutrido de sistemas de agua, las bacterias heterótrofas son capaces de vivir más
tiempo que otros microorganismos en agua.
Las muestras de agua son extraídas de la UNI de las facultades FIA(grifo) , FIC(grifo)
y del estanque de la facultad de arquitectura.Se sabe que cada colonia observada se
formó a partir de por lo menos un microorganismo,esta es una condición necesaria y
suficiente,entonces la colonia es considera una unidad formadora de colonia (UFC) a
los efectos de los cálculos; obteniéndose en el baño FIA(grifo) 680 UFC/mL, en el
baño FIC(grifo) 458 UFC/mL y en el estanque de la facultad de arquitectura se obtuvo
740 UFC/mL,al ser comparados con el límite máximo permisible de bacterias
heterotróficas según norma es de 500 UFC/mL, las aptas para consumo humano son
de la FIC(grifo).

SUMARY
The present work makes a count of microorganisms, which is based on that each one
will develop a visible colony. Within these microorganisms we will highlight the
heterotrophic bacteria that abound in the environment, especially in water, including
treated and tap water, due to their ability to adapt to a malnourished environment of
water systems, heterotrophic bacteria are able to live longer. time than other
microorganisms in water.
The water samples are taken from the UNI of the FIA faculties (faucet), FIC (faucet)
and the pond of the faculty of architecture. It is known that each observed colony was
formed from at least one microorganism, this is a necessary and sufficient condition,
then the colony is considered a colony forming unit (CFU) for the purposes of the
calculations; obtaining in the FIA bath (tap) 680 CFU / mL, in the FIC (tap) bath 458
CFU / mL and in the pond of the faculty of architecture, 740 CFU / mL was obtained,
when compared with the maximum permissible limit of bacteria heterotrophic
according to the norm is 500 CFU / mL, those suitable for human consumption are
from the FIC (tap).

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I. INTRODUCCIÓN
La determinación de calidad de agua por su contenido bacterial permite ver la
cantidad de microorganismos (bacterias) es decir forman células viables que pueden
formar colonias, este número de células o bacterias viables por muestra se expresa
en Unidades formadoras de colonias(UFC) y que al sobrepasar los límites máximos
permisibles, estos se vuelven indicadores de contaminación lo cual pone en
manifiesto que el agua, ha sido contaminada y su posible transmisión de
enfermedades causadas por microorganismos.
La calidad del agua se define como el conjunto de caracteres físicos químicos y
biológicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea
segura para el fin destinado (DGCOH, 1982).Para que el agua sea de calidad potable
debe de reunir ciertos factores:
 Físicos. Color, olor, sabor, temperatura, conductividad específica, sólidos, pH.
 Químicos. Alcalinidad, metales, nutrimentos, sulfatos, OD (Oxígeno Disuelto),
DBO(Demanda Bioquímica de Oxígeno).
 Biológicos. El método microbiológico para detectar la presencia de
microorganismos coliformes en el agua contempla tres fases: Prueba
Presuntiva, Prueba Confirmativa, Prueba Completa.
Por lo que se analizara la calidad de las muestras de las facultades de la
FIC,FIA(grifos) y Arquitectura (estanque),y poner en práctica lo aprendido.

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II. OBJETIVO
- Conocer el número de microorganismos (bacterias heterotróficas) y determinar
la calidad del agua por su contenido bacterial de los baños (grifos) FIC,FIA y
del estanque de la facultad de arquitectura de la Universidad Nacional de
Ingeniería .

III. MARCO TEÓRICO

1. Conceptos Previos:
Bacterias heterótrofas: Las bacterias heterotróficas (heterótrofas) se definen como
aquellas bacterias que usan compuestos del carbono orgánico como fuente de
energía y el carbono para su crecimiento, en contraposición con las bacterias
autotróficas que utilizan los compuestos inorgánicos como fuente de energía y el C02,
como fuente de carbono. Esta definición de bacteria heterótrofa es amplia e incluye
tanto a las bacterias saprofíticas como a las patógenas. Por lo tanto, tanto las
bacterias que causan como las que no causan enfermedades son heterótrofas.Estas
habitan en las aguas de bajos nutrientes, por ende se encuentran en mayor cantidad
en las agua de los grifos.
Factores que inciden en la flora bacteriana
• La acidez disminuye el contenido de microorganismos.
• La materia orgánica lo aumenta.
• Mucho oxígeno disuelto disminuye los microorganismos anaerobios.
• Las sales, si son abundantes, producen que el agua sea casi estéril.
• Si existe poca cantidad de sales se estimula el desarrollo bacteriano.
• La filtración disminuye el número de microorganismos.
• La temperatura puede aumentar o disminuir el contenido bacteriano.
• La turbidez hace que el contenido bacteriano pueda aumentar, ya que los rayos
U.V. no manifiestan su acción.
• Los protozoos fagocitan bacterias y así disminuyen el número de estas.
CONTEO BACTERIANO
Tipos de conteo bacteriano
a) Conteo en caja de petri
b) Conteo por filtración
c) Método del número más probable (NMP)
d) Determinación directa por microscopio
e) Método de turbidez

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f) Determinación del peso seco en las células

a) Conteo en caja de petri
Método más usado para contar bacterias. Se prepara un caldo de cultivo, el cual
posteriormente se vierte en las placas de petri. Dependiendo del tipo de sembrado,
puede que la muestra se encuentre incorporada en el agar (Pour method) o puede
que la muestra se disperse sobre el agar gelificado (Spread method). Es de suponerse
que cada célula o grupo de células presentes en la muestra se reproducirá en sus
múltiples alrededores para producir "colonias de células" separadas en el agar. Cada
colonia es llamada unidad formadora de colonias (UFC). Es importante considerar un
número limitado de colonias pues de no ser así, éstas pueden sobrepoblarse y
dificultar el conteo de las mismas (rango sugerido 30-300 colonias). El conteo se
facilita utilizando un contador de colonias. Este método es deseable porque arroja el
total de células viables (sólo células vivas); en contraste con el conteo microscópico
y el conteo de peso seco. Una desventaja radica en el tiempo que requiere para
producir las colonias, ya que se necesitan como mínimo 24 a 48 horas.
TIPOS DE CRECIMIENTO:
CRECIMIENTO INDIVIDUAL: La bacteria alcanza un tamaño y un peso fijo.
Constituye el paso previo a la división celular.
CRECIMIENTO POBLACIONAL: Es el incremento en el número de células como
consecuencia del crecimiento y división celular.
Conteo de células viables:
 Es aquella capaz de dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo.
 Se basa en que cada colonia surge de una simple celula.
 Cada colonia contiene una sola especie bacteriana.
 El número de bacterias viables por muestra se expresa en Unidades Formadoras
de colonias(UFC)
UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC)
Representa cada colonia contada y su número total representa el número total de
bacterias viables en la muestra.
La técnica se basa en contar las “unidades formadoras de colonias” o UFC presentes
en un gramo o mililitro de muestra. Se considera que cada colonia que desarrolla en
el medio de cultivo de elección después de un cierto tiempo de incubación a la
temperatura adecuada, proviene de un microorganismo o de un agregado de ellos,

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de la muestra bajo estudio; ese microorganismo o microorganismos son capaces de

formar la colonia, es decir una UFC. Para que las colonias puedan contarse de
manera confiable, se hacen las diluciones decimales necesarias de la muestra, antes
de ponerla en el medio de cultivo

𝑈𝐹𝐶 𝑈𝐹𝐶 𝑁𝑢𝑒𝑚𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎 𝑋 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 ∗

𝑜 =
𝑚𝐿 𝑔 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑠𝑒𝑚𝑏𝑟𝑎𝑑𝑎

*Factor de dilución: inversa de la dilución.

Cuando el número de bacterias desarrolladas por placa esté entre 30 y 300, reportar
como recuento total de bacterias viables.

Figura 1. Procedimiento determinación de colonias.

Fuente: Izurieta Cergneus, Natalia.Laboratorio.Recuento de Bacterias. Recuperado de:
https://es.scribd.com/doc/98460071/Formula-Para-Conteo(extraido 15-04-2018).

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2. RESULTADOS
Datos del Grupo 01:
Tabla 1.Recuento de bacterias de muestra utilizadas en los grupos 1, 3, y 5.

GRUPO Dilución UFC/ml OBSERVACION(rango de

10−1 10−2 sensibilidad 30-300 colonias)
1ml

Se consideran la placa de dilución

N° 1 10−1 que está dentro del rango .(68*
16 68 24 680 101 =680
Baño FIA (*) UFC/mL)
(grifo)

Todas las diluciones están dentro del

rango entonces se
N° 3 promedian(116+800=916/2=458
116 80 41 458 UFC/mL
Baño FIC
(grifo)

Las diluciones que están dentro del

N° 5 rango son de 1mL y 10−1 ,se obtiene
740 UFC/mL.
Estanque de 521 74 8 740
UFC/ml
Arquitectura

Nota. Fuente: Grupo 01,03, y 05.

(*)observación dato no esperado.

Tabla 2.Datos muestra utilizadas lugar, día, hora, temperatura de los grupos 1, 3, y 5.

GRUPO N° 1 GRUPO N° 3 GRUPO N° 5

Muestra: Baño FIA(grifo) Muestra: Baño FIC(grifo) Muestra: Estanque Arquitectura

Día:10/04/18 Día:10/04/18 Día:10/04/18
Hora:12:32pm Hora:12:45pm Hora:12:55pm
Temperatura:22 °C Temperatura:22 °C Temperatura:24 °C

Nota. Fuente: Grupo 01,03, y 05.

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3. DISCUSION DE RESULTADOS

 En la placa de dilución 1mL se observa en la muestra del grupo 1(baño FIA-

grifo),tiene 16 colonias, en el grupo 3( FIC-grifo), de 116colonias y en el grupo
5(estanque de arquitectura) de 521 colonias. Observándose que hay en mayor
cantidad en el estanque de arquitectura. El recuento del grupo 1(baño FIA-grifo)
es un dato no esperado puesto que la muestra es agua es de un grifo, y en la
placa de dilución de 1mL hay una mayor concentración de bacterias
heterotróficas. Si lo comparamos con la muestra FIC(grifo),es mucho menor la
cantidad.
 En la placa de dilución 10−1 se observa en la muestra FIA 68 colonias ,mientras que en
FIC 80 colonias y en el estanque arquitectura 74 colonias, siendo el mayor el de la FIC.
 Para la placa de dilución 10−2 muestra FIA hay 24 colonias por lo que no se considera
para la UFC ,mientras que en FIC 41 colonias y en el estanque arquitectura 8 colonias no
se considera para las UFC, siendo el mayor el de la FIC.

4. CONCLUSIONES:
Grupo N° 1(Baño FIA-grifo)
 Se observa que en la placa de dilución de 1mL hay 16 colonias(dato no esperado),
mientras que en las de 10−1 y 10−2 hay 68 y 24 colonias respectivamente. Resultando
680 UFC/mL, considerando a las que estén dentro del rango(30-300)
Grupo N° 3(Baño FIC-grifo)
 De acuerdo al conteo, todas las placas con sus respectivas diluciones se observa
están dentro del rango de conteo de colonias, se promedia resultando 458
UFC/mL. Siendo apto para consumo humano por ser menor a 500 UFC/mL

GRUPO N° 5(Estanque de arquitectura)

 Se observa en la placa de dilución 1mL 521 colonias en total, mientras que en la placa
de dilución de 10−1 notamos que hay 74 colonias y en la placa de dilución 10−2 se
observa 8 colonias el cual no está dentro del rango por tanto no se considera para su
calculo.se promedia y se obtiene.740 UFC/mL. Siendo no apto para consumo humano
por ser mayor a 500 UFC/mL.

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5. RECOMENDACIONES:
 Para el Grupo 1(Baño FIA-grifo), se recomienda volver hacer el recuento de
bacterias heterotróficas para la placa de dilución 1mL puesto que el número de
colonias es inferior a las demás placas, esto se debe a que no se transfirió bien la
muestra a la placa Petri.
 Concentrarse al momento de conteo de colonias, evitar la fatiga ocular que puede
causar imprecisiones.
 Tener una correcta manipulación de los instrumentos y revisar la norma de
calidad de agua para uso y consumo humano.

6. CUESTIONARIO
Determinación de la Calidad del Agua por su Contenido Bacterial (recuento
de bacterias heterotróficas)
1. Comparar los límites de UFC/ml de la norma de calidad de agua para uso y
consumo humano; y de la norma sobre el agua embotellada.

Tabla 3. COMPARACION DE LOS LÍMITES MÁXIMOS PERMISIBLES UFC/mL

NORMA DE CALIDAD DE AGUA PARA NORMA SOBRE EL AGUA

USO Y CONSUMO HUMANO EMBOTELLADA(Asociación Internacional
del agua Embotellada(IBWA))
Bacterias Coliformes Totales. Bacterias Coliformes Totales.
0 (*)UFC/100 mL a 35ºC 0 UFC/100 mL

E. Coli E. Coli
0 (*)UFC/100 mL a 44,5ºC 0 UFC/100 mL

Bactérias Coliformes Termotolerantes o Bactérias Coliformes Fecales.

Fecales. 0 UFC/100 mL
0 (*)UFC/100 mL a 44,5ºC
Bacterias Heterotróficas aerobias y
Bacterias Heterotróficas mesofilas
500 UFC/mL a 35ºC 500 UFC/mL

Vírus Vírus
0 UFC / mL 0 UFC / mL

UFC = Unidad formadora de colonias

(*)En caso de analizar por la técnica del NMP por tubos múltiples = < 1,8 /100 ml

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2. Definir agua potable, agua contaminada.

AGUA POTABLE: Es el agua que se ha sometido a diversos procesos que la purifican

y le quitan las sustancias que pueden ser perjudiciales para nuestra salud,
manteniéndola dentro delos límites permisibles para su consumo. Por definición, el
agua potable es el agua apta para el consumo humano. Esto significa que puede
beberse sin riesgos, porque no produce problemas de salud. El agua para ser potable
tiene que cumplir con una serie de requisitos; no debe contener sustancias nocivas
para la salud, es decir, carecer de contaminantes biológicos (microbios y/o gérmenes
patógenos), químicos tóxicos (orgánicos e inorgánicos) y radiactivos y debe poseer
una proporción determinada de gases y de sales inorgánicas disueltas(según la
OMS).

AGUA CONTAMINADA: Es cualquier cambio químico, físico o biológico en la calidad

del agua que no está dentro de los límites permisibles, por lo tanto tiene un efecto
dañino en cualquier ser vivo que consuma esta agua. Cuando los seres humanos
beben el agua contaminada tienen a menudo problemas de salud.

3. Explicar la importancia de la determinación del recuento de bacterias

heterotróficas en el agua.

Se sabe que las bacterias heterótrofas abundan en el ambiente, especialmente en el

agua, incluyendo agua tratada y del grifo. Debido a su capacidad de adaptarse a un
entorno desnutrido de sistemas de agua, las bacterias heterótrofas son capaces de
vivir más tiempo que otros microorganismos en agua. Por ello es importante su
recuento para ver su grado de concentración de unidades formadoras de
colonia(UFC) y compararlos con los límites máximos permisibles de parámetros
microbiológicos, y poder predecir si es apta para su consumo. Y así determinar la
calidad de agua por su contenido bacterial.

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7. FUENTES DE INFORMACIÓN:
M.J.PELCZAR Jr. Y R.D.REID.MICROBIOLOGíA Editorial Mc.Graw-Hill Book
Co.Inc.New York 4ta.Edic.1984. (pág. 102-113).

Ministerio de Salud. Dirección General de Salud Ambiental. Reglamento de la Calidad

del Agua para Consumo Humano. Editorial J.B. GRAFIC E.I.R.L.1era.Edic.2011(pág.
28-39).

Izurieta Cergneus, Natalia.Laboratorio.Recuento de Bacterias. Recuperado de:

https://es.scribd.com/doc/98460071/Formula-Para-Conteo(extraido 15-04-2018).

Cristóbal Chaidez Quiroz.El Agua Embotellada y calidad bacteriológica.Octubre

2002(pág. 38-39)

8. ANEXOS:

Ilustración 1.Imagen recuento de bacterias heterotróficas.

Fuente: Grupo1.

Ilustración 2.Fotografías, tubos con agar nutritivo y placas petride grupos 1,3,5.
Fuente: Propio

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9. APENDICE
1. DIAGRAMA DE FLUJO

Muestra 99mL de agua de

de agua dilución estéril

1mL
0.1 mL
1mL

G-1 G-1 G-1 PLACAS PETRI

ESTERILES
1mL 𝟏𝟎−𝟏 𝟏𝟎−𝟐

TUBO
CONTENIENDO
AGAR NUTRITIVO
FUNDIDO A 45 ºC

Invertir las placas e incubarlos a 35 ºC por 48 horas

Fuente propia

2. PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO: DETERMINACION DE LA CALIDAD DEL AGUA POR SU
CONTENIDO BACTERIAL (RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTROFICAS)

1) Recibir en el laboratorio, las muestras enumeradas o etiquetadas.

2) Revisar que el volumen de dilución de un tubo, contengan 99mL de agua de
dilución estéril.

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3) Preparar diluciones decimales 1,10−1 , 10−2 . a partir de la muestra líquida directa.

Para ello transferir por medio de una pipeta estéril 1 ml de la muestra líquida, al
tubo con 99mL de diluyente estéril (dilución 10¯²), agitar suavemente.
4) Identificar placas 3 Petri estériles con lápiz azu, en las que se incubarán. Colocar
clave, número de la muestra y dilución a cada una de ellas.
5) Sembrar 1 mL de la muestra directa y 0,1 mL de la muestra directa,en 2 placas
Petri estériles respectivamente(dilución 1 y 10−1). A continuación diluir 10¯²,
tomando 1 mL de la muestra directa y transferirlo a 99 mL de diluyente estéril y
sembrar de esta dilución 1 mL en otra placa estéril (dilución 10−2 ).
6) Verter en cada placa Petri aproximadamente 15 mL de agar nutritivo previamente
fundido y mantenido en baño de agua a 45 ºC.
7) Mezclar el inóculo con el medio fundido, inclinando y girando las placas. La forma
adecuada de llevar a cabo esta operación sería la siguiente:Mover la placa con
movimientos de vaivén 5 veces en una dirección, hacerla girar 5 veces en el
sentido de las agujas del reloj.
8) Una vez solidificado el agar, invertir las placas rápidamente para prevenir el
crecimiento de colonias invasivas por acumulación de humedad. Incubar a
temperatura de 35°C durante 48 horas.

LECTURA
1) Luego de cumplir el período de incubación, realizar la lectura de las placas
2) Realizar el recuento con un contador de colonias.
3) Examinar las muestras dudosas con mayor aumento para distinguir las colonias
de materias extrañas.
4) Anotar la dilución usada y el número de colonias contadas en cada placa.
RECUENTO DE COLONIAS Y REGISTRO
Para el cálculo de recuento de colonias en placa se realiza de acuerdo al siguiente
esquema:
1) Placas normales (30 - 300 colonias):
2) Seleccionar las placas libres de crecimiento invasivo.
3) Contar todas las colonias incluyendo aquellas de tamaño muy pequeño.
4) Anotar por dilución, el número de colonias contadas en cada placa.

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