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Guía de estudio elaborada por: Lic. T.M. MARCELO CORNEJO ALANIZ
NUCLEO
El nucleo esta delimitado por una envoltura nuclear formada por dos
membranas concéntricas, las cuales estan perforadas a intervalos por poros
nucleares ( Núcleoporinas) estas forman el complejo Núcleoporinas, a trevés de
los cuales se produce el transporte activo de determinadas moléculas entre el
núcleo y el citoplasma. La envoltura nuclear está conectada directamente con la
membrana del retículo endoplásmico y se mantiene por redes de filamentos
intermedios una llamada lámina nuclear, la cual recubre la membrana nuclear
interna , mientras que la otra se encuentra organizada de forma menos regular
rodea la membrana nuclear externa.
Una molecula de ADN es un polimero lineal largo y no ramificado, que
contiene millones de nucleotidos organizados siguiendo una serie de secuencias
pero no al azar, y la información genetica de una celula esta contenida en el orden
lineal de los nucleotidos ( codones, donde cada uno especifica un aminoácido).
Cada molecula de ADN se empaqueta en un cromosoma y el total de la
información genética conetida en los cromosomas de un organismo constituye su
genoma; el ADN se pliega formando una estructura compacta y ordenada (el
cromosoma). Los cromosomas de una célula cambian su estructura y actividad en
función de la fase del ciclo celular: mitosis, o fase M, se encuentran muy
condensados y son transcripcionalmente inactivos; en la otra fase, mucho mas
larga, del ciclo celular, es decir, la interfase están menos condensados y son
activos dirigiendo continuamnete la síntesis de RNA.
El núcleo controla las actividades de las otras partes de la célula porque
dispone de la información necesaria para su funcionamiento que se encuentra
codificada en las cromosomas. Cada vez que la célula se divide esta información
debe ser duplicada y colocada en la nueva célula. El núcleo es típico delas células
eucariotas ademas en las células procarióticas solo es unnucleoide; tiene forma
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generalmente esférica , puede ser lenticular o elipsoide en algunos casos
lobuladoen , su tamaño generalmente esta entre 5-25 µm, conmicroscopio óptico.
El núcleo celular contiene la información denominada ADN, contiene la cromatina
y los genes.
Las membranas delimitan un espacio de 10 a 50 nm, el espacio o cisterna
perinuclear. La membrana externa en contacto con el citoplasma tiene ribosomas
adheridos, que sintetizan las proteínas que se vuelcan al espacio perinuclear. El
espacio perinuclear se continua con el REG. La membrana interna posee
proteínas integrales que le son propias, que se unen a la lámina nuclear y a los
cromosomas.
La lámina nuclear, capa fibrosa de 10 a 15 nm en la que apoya la
membrana interna, está formada por proteínas del tipo de los filamentos
intermedios, polímeros de lamina o laminina nuclear. Ellas se unen a las proteínas
integrales de membrana. La fosforilación de las laminas provoca el desensamble
de la lámina nuclear causando la ruptura de la envoltura al inicio de la división
celular. La lámina nuclear confiere estabilidad mecánica a la envoltura nuclear.
Además, al interactuar con la cromatina participa en la determinación de la
organización tridimensional del núcleo interfásico.
Si bien la formación de la lámina no se requiere durante los pasos iniciales,
la organización de la envoltura es indispensable para el crecimiento posterior y el
mantenimiento de su integridad. Las laminas se incorporan luego que la cisterna
perinuclear rodea al ADN y se inicia el transporte entre el núcleo y el citoplasma.
La envoltura nuclear es un derivado del sistema de endomembranas,
siendo esto evidente al inicio de la división celular, cuando la envoltura se
desorganiza y pasa a formar parte del sistema de cisternas y vesículas del retículo
endoplásmico.
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CÓDIGO GENÉTICO
El código genético puede explicarse como un diccionario molecular. A través
de él se relacionan los ácidos nucleicos con las proteínas traducidas a partir de
ellos, las cuales tienen la responsabilidad de lo que se ha dado en llamar la
expresión génica. Para comprender esto, es necesario conocer las estructuras
moleculares de los protagonistas, Las proteínas están constituidas por una cadena
de unidades más pequeñas llamadas aminoácidos, que se unen como los
eslabones de una cadena. Las 80.000 o más proteínas que necesita sintetizar el
ser humano son todas diferentes entre sí ya que desempeñan diferentes
funciones. El largo de la cadena de aminoácidos es variable, como también es
diferente la secuencia en que se ordenan los diferentes aminoácidos en ella. Es
así como cada proteína es diferente a otra y ella es codificada por un gen
específico para cada una.
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Para comprender qué es la síntesis de proteínas, es necesario conocer las
estructuras moleculares de los protagonistas: ácidos nucleicos y proteínas. Ambos
son polímeros macromoleculares, grandes moléculas constituidas por la unión de
otras moléculas más pequeñas, los monómeros. Los monómeros de los ácidos
nucleicos son los nucleótidos y los de las proteinas son los aminoácidos. Todo
comienza con la brillante tarea científica de descubrir la estructura del ADN y
saber cómo este se duplica o reproduce. Luego se descubre que el ADN es el
responsable de la transmisión de la información genética, por lo tanto debe ser
capaz no solo de reproducirse, con lo cual se consigue conservar esta información
de padres a hijos, sino que también debe contar con un mecanismo para
transmitirla.
El ADN es un ácido nucleico formado por nucleótidos. Cada nucleótido
consta de tres elementos:
A. Un azúcar: desoxirribosa en este caso (en el caso de ARN o ácido
ribonucleico, el azúcar que lo forma es una ribosa)
B. Un grupo fosfato.
C. una base nitrogenada
Las bases nitrogenadas que constituyen parte del ADN son: adenina (A),
guanina (G), citosina (C) y timina (T). Estas forman puentes de hidrógeno entre
ellas, respetando una estricta complementariedad: A sólo se aparea con T (y
viceversa) mediante dos puentes de hidrógeno, y G sólo con C (y viceversa)
mediante 3 puentes de hidrógeno.
El código genético es, entonces, la clave para la traducción de la información o
mensaje genético contenido en los genes y que se ha de traspasar a las proteínas,
y está contenida dentro de la cadena de ADN formado por la combinación de esas
cuatro bases nitrogenadas: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T). Así,
se comprueba que el código genético establece la relación existente entre las
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cuatro bases nitrogenadas, presentes en los nucleótidos que constitutyen los
ácidos nucleicos, y los veinte aminoácidos en que se basan las proteínas.
Código organizado en tripletes o codones:
La información genética almacenada en el ADN se trascribe en el ARNm a
partir de las cuatro letras, que corresponden a las bases nitrogenadas, pero aquí
en el ARNm se agrupan de tres en tres. Cada grupo de tres de estas bases
nitrogenadas ahora incorporadas en el ARNm se llama triplete o codón y está
encargado de codificar un aminoácido específico.
Los exones: son las regiones de un gen que no son separadas durante el
proceso de splicing y, por tanto, se mantienen en el ARN mensajero maduro. En
los genes que codifican una proteína, son los exones los que contienen la
información para producir la proteína codificada en el gen. En estos casos, cada
exón codifica una porción específica de la proteína completa, de manera que el
conjunto de exones forma la región codificante del gen. En eucariotas los exones
de un gen están separados por regiones largas de ADN (llamadas intrones) que
no codifican.
Intrón: Un intrón es cada uno de los fragmentos de ADN que no son capaces
de expresarse bajo la forma de una proteína.Es una secuencia no codificadora de
ADN que separa a dos exones. El intrón inicialmente se transcribe en la molécula
de ARN mensajero pero después es eliminado durante el proceso de maduración
del ARN.
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CARACTERÍSTICAS DEL ADN
El ADN lo encontramos como: Eucromatina, ADN menos compacta contiene
genes frecuentemente expresado y heterocromatina es la forma más compacta, y
contiene ADN que se compacta y que setranscribe de forma infrecuente. Lo que a
su vez se reconoce dentro de éstas últimas:
La heterocromatina facultativa, que consiste en genes que están
organizados como heterocromatina sólo en ciertos estadios del desarrollo.
La heterocromatina constitutiva, que consiste en componentes
estructurales del cromosoma como los telómeros los centrómeros.
Telomeros: Son regiones de ADN no codificante, altamente repetitivas, cuya
función principal es la estabilidad estructural de los cromosomas en las células
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eucariotas, la división celular y el tiempo de vida de las estirpes celulares.
Centromero: Es la zona por la que el cromosoma interacciona con las fibras del
huso acromático desde profase hasta anafase, tanto en mitosis como en meiosis,
y es responsable de realizar y regular los movimientos cromosómicos que tienen
lugar durante estas fases. Además, el centrómero contribuye a la nucleación de la
cohesión de las cromátidas hermanas. En la estructura del centrómero intervienen
tanto el ADN centromérico como proteínas centroméricas.
CROMATINA
El ADN es el principal componente genético de la célula y el que lleva la
información codificada de una célula a otra y de un organismo a otro. En las
células eucariotas el ADN no se encuentra suelto sino unido a proteínas
específicas llamadas histonas con las que forma una compleja estructura
denominada cromatina (también se encuentran otros tipos de proteínas
cromosómicas no específicas y pequeñas cantidades de ARN). Las histonas son
cinco proteínas diferentes básicas, de carga positiva, esta propiedad hace que se
unan fuertemente al ADN que es ácido, de carga negativa. La cromatina se
presenta como una fibra de 10 nm como primer grado de organización (aunque no
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es muy probable que podamos observarla en este estado, no en forma natural al
menos).
El plegado de ADN es importante en las células eucarióticas por dos
motivos: en primer lugar es esencial para disponer las grandes moléculas de ADN
en forma ordenada dentro del núcleo celular. En segundo lugar la manera en que
se pliega una región del genoma de una célula en particular determina la actividad
de los genes de esta región y es aquí donde las histonas cumplen un papel
primordial.
Las histonas pueden ser agrupadas en dos:
Histonas nucleosómicas H2A, H2B, H3, H4 que son las responsables del
plegado del ADN en los nucleosomas.
Histonas H1 responsables del plegado de los nucleosomas en la fibra
cromatínica de 30 nm.
Si se estirara la doble hélice de ADN de cada cromosoma humano este
mediría aproximadamente 5 cm. Las histonas son las responsables de
empaquetar esta larga molécula de ADN dentro de un núcleo de unos pocos
micrones de diámetro. Existen diversos grados de empaquetamiento y la unidad
fundamental es el nucleosoma. Él confiere a la cromatina su aspecto de cuentas
ensartadas, cada cuenta nucleosómica posee un conjunto de 8 moléculas de
histonas, 2 copias de cada una de las cuatro histonas nucleosómicas. Estas
moléculas forman un núcleo proteico alrededor del cual se enrolla el fragmento de
ADN de doble hebra. Cada cuenta esta separada de la siguiente por una región de
ADN espaciador que junto con la cuenta nucleosómica constituye un nucleosoma
completo.
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El sistema de cuentas debe condensarse aún más para esto los nucleosomas
se empaquetan entre sí, esta forma básica de empaquetamiento recibe el nombre
de fibra cromatínica de 30 nm. De este empaquetamiento es responsable la
histona 1. El empaquetamiento continúa aún más, cuando se observa la
estructura de ciertos cromosomas esto aparecen organizados en una serie de
dominios estructurales en forma de bucle la hipótesis que se sostiene en este
sentido es que las zonas de bucles de cromatina se establecen y mantienen por
acción de ciertas proteínas
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MECANISMO DE DUPLICACIÓN DEL ADN
EN PROCARIONTES:
Hay que recordar que el ADN es cerrado y circular y ocurre en tres etapas:
1ª etapa: desenrrollamiento y apertura de la doble hélice en el punto ori-c.
Intervienen un grupo de enzimas y proteínas, cuyo conjunto se denomina replisoma.
A. Primero: intervienen las helicasas que facilitan en desenrrollamiento
B. Segundo: actúan las girasas y topoisomerasas que eliminan la tensión
generada por la torsión en el desenrrollamiento.
C. Tercero: actúan las proteínas SSBP que se unen a las hebras molde para que
no vuelva a enrollarse.
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2ª etapa: síntesis de dos nuevas hebras de ADN.
A. Actúan las ADN polimerasas para sintetizar las nuevas hebras en sentido
5´-3´, ya que la lectura se hace en el sentido 3´-5´.
B. Intervienen las ADN polimerasa I y III, que se encargan de la replicación y
corrección de errores. La que lleva la mayor parte del trabajo es la ADN
polimerasa III
C. Actuá la ADN polimerasa II, corrigiendo daños causados por agentes
físicos.
D. La cadena 3´-5´ es leída por la ADN polimerasa III sin ningún tipo de
problemas ( cadena conductora). En cambio, la cadena 5´-3´ no puede ser
leída directamente, esto se soluciona leyendo pequeños fragmentos (
fragmentos de Okazaki ) que crecen en el sentido 5´-3´, los cuales se
unirán mas tarde. Esta es la hebra retardada, llamada de esta forma porque
su síntesis es más lenta.
La ADN polimerasa III es incapaz de iniciar la síntesis por sí sola, para esto
necesita un cebador (ARN) que es sintetizado por una ARN polimerasa
(=primasa). Este cebador es eliminado posteriormente.
3ª etapa: corrección de errores.
La enzima principal es la ADN polimerasa III, que corrige todos los errores
cometidos en la replicación o duplicación. Intervienen otros enzimas como:
A. Endonucleasas que cortan el segmento erróneo.
B. ADN polimerasas I que rellenan correctamente el hueco.
C. ADN ligasas que unen los extremos corregidos
EN EUCARIOTAS
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Es similar a la de los procariontes, es decir, semiconservativa y bidireccional.
Existe una hebra conductora y una hebra retardada con fragmentos de Okazaki.
Se inicia en la burbujas de replicación (puede haber unas 100 a la vez).
Intervienen enzimas similares a los que actúan en las células procariontes y otros
enzimas que han de duplicar las histonas que forman parte de los nucleosomas.
Los nucleosomas viejos permanecen en la hebra conductora.
MECANISMO DE TRANSCRIPCIÓN DEL ADN
EN PROCARIONTES.
A. Iniciación: la ARN polimerasa se une a un cofactor sigma.gif (49 bytes)
que permite su unión a una región del ADN llamada promotor, la cual posee
una secuenciaa TATAAT ó TTGACA.
B. Elongación: la ARN polimerasa recorre la hebra de ADN hacia su extremo
5´ sintetizando una hebra de ARNm en dirección 5´-3´.
C. Finalización: presenta dos variantes. En una interviene un cofactor "p" y en
otra no interviene dicho cofactor. El proceso fiinaliza al llegar a una
secuencia rica en G y C (zona llamada operador). El ADN vuelve a su forma
normal y el ARNm queda libre.
D. Maduración: si lo que se forma es un ARNm no hay maduración, pero si se
trata de un ARNt o ARNr hay procesos de corte y empalme.
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EN EUCARIONTES:
Existen tres tipos de ARN polimerasa I, II y III.
Los genes están fragmentados en zonas sin sentido o intrones y zonas con
sentido o exones. Antes ha de madurar y eliminar los intrones.
Desempaquetamiento de las histonas.
En la trascripción de eucariontes se distinguen las siguientes fases:
A. Iniciación: la ARN polimerasa II se une a una zona del ADN llamada
promotor (posee secuencias CAAT y TATA).
B. Elongación: la síntesis continua en sentido 5´-3´. Al poco se añade una
caperuza (metil-guanosín trifosfato) al extremo 5´.
C. Finalización: parece que está relacionado con la secuencia TTATTT.
Ahora interviene un poli-A polimerasa que añade una cola de poli-A al pre-
ARNm (ARNhn).
D. Maduración: se produce en el núcleo y la hace un enzima llamada RNPpn,
que elimina los nuevos intrones (I) formados.
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E. Posteriormente las ARN ligasas empalman los exones (E) y forman el
ARNm.
Diferencias entre procariotas y eucariotas
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MECANISMO DE TRADUCCIONDEL (SÍNTESIS DE PROTEÍNAS) ADN
Tiene lugar en los ribosomas, de una forma muy similar en procariontes y
eucariontes.
Comprende las siguientes etapas:
A. Iniciación:
a) Comienza por el triplete iniciador del ARNm (AUG), que está
próximo a la caperuza 5'. Este triplete va precedido de la secuencia
AGGAGG (secuencia de Shine-Dalgarno ) que es la zona de unión
con el ribosoma.
b) Se forma el complejo de iniciación con los factores de iniciación (FI)
y la energía suministrada por el GTP, la subunidad menor del
ribosoma reconoce la caperuza y se une al ARNm en la zona
proxima al triplete o codón iniciador. Esta caperuza aporta el ARNt
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iniciador que a su vez aporta el aminoácido metionina. Este ARNt
contiene un triplete complementario al AUG, es decir el UAC,
llamado anticodón (la proteína sintetizada contiene en su extremo el
aminoácido metionina)
c) Una vez encajado el ARNt-metionina, se liberan los FI y dejan paso
a la subunidad mayor del ribosoma, formandose así el ribosoma
completo y funcional. En él hay dos sitios claves:
Sitio P (sitio peptidil) ocupado por el ARNt-metionina
Sitio A (sitio aminoacil) que está libre para recibir un segundo
ARNt (sólo el que su anticodón coincida con el del codón del
ARNm) cargado con un nuevo aminoácido.
B. Elongación: de la cadena peptídica: es un proceso catalizado por el
enzima peptidil transferasa, el cual, mediante enlaces peptídicos va
uniendo aminoácidos a la cadena peptídica. Cada vez que llega un
aminoácido ocurre un proceso cíclico de elongacion.
C. Fin de la síntesis de la cadena peptídica: ocurre cuando aparece uno de
los codones de terminación ( UAA,UAG,UGA ). En este momento un factor
proteico de terminación (RF) se une al codón de terminación e impide que
algún ARNt con otro aminoácido (ARNt-aminoacil) se aloje en el sitio A. En
este momento se produce la hidrólisis de la cadena peptídica y se separan
las dos subunidades del ribosoma.
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