NEMATODO DEL NODULO DE LA RAIZ

“MELOIDOGYNE INCOGNITA”
I. INTRODUCCION

Meloidogyne incognita es un nematodo, un tipo de parásito, de la familia heteroderidae.

Es un importante parásito de plantas clasificado en parasitología como un nemátodo de
nudo de raíz, ya que prefiere atacar la raíz de la planta huésped. Cuando M. incognita
ataca las raíces de las plantas, establece una zona de alimentación, donde deforma las
células normales de las raíces normales generando células gigantes.

Los nematodos fitoparásitos constituyen organismos causantes de plagas de los agro

ecosistemas y se considera que ejercen una importante influencia en su estructura y
estabilidad. Estos causan daño al alimentarse directamente de las plantas o pueden actuar
indirectamente como vectores de virus.

Dentro de este orden, los fitonematodos del género Meloidogyne son responsables de
grandes pérdidas en cultivos de importancia económica. M. incognita habita en climas
tropicales y es posiblemente el parásito más dañino de los cultivos en el mundo. Este
fitonematodo posee una amplia gama de hospedantes y provoca daños en cultivos, tales
como tomate, papa, algodón, pimiento, chia, etc.

Las plantas infestadas muestran un desarrollo aberrado del sistema radical caracterizado
por la formación de agallas. Las agallas pueden medir desde 1 o 2 milímetros de diámetro
en las raíces pequeñas y hasta 1 cm o más en las raíces grandes. Las raíces altamente
infestadas son mucho más cortas que las sanas, tienen menos raíces laterales y pelos
radicales. En cuanto al sistema aéreo, los síntomas de una planta infestada por
Meloidogyne son similares a los que presenta una planta con otro tipo de daño en las
raíces. Estos pueden ser: inhibición de la brotación, disminución del crecimiento y
deficiencias nutricionales que se manifiestan como clorosis del follaje, ya que los
nematodos interfieren la producción y translocación de substancias provenientes de las
raíces, como las hormonas giberelinas y citoquininas, y también de substancias que
regulan la fotosíntesis.
II. OBJETIVOS

OBJETIVOS PRINCIPALES
• Demostrar la presencia de nematodos Meloidogyne incognita en leguminosa y
capsicum.

OBJETIVOS SECUNDARIOS
• Realizando una prueba de patogenicidad en nematodos, determinar si la
enfermedad de Meloidogyne incógnita está presente en los cultivos de leguminosa y
capsicum.

III. REVISION DE LITERATURA

Meloidogyne incognita
Es la principal especie de nemátodo en el cultivo de Capsicum baccatum (aji Amarillo) y
Lablab purpureus (frijol zarandaja).Son conocidos como los formadores de nódulos de la
raíz; se encuentran en todo el mundo, pero con mayor frecuencia y abundancia en regiones
con clima cálido e inviernos cortos y moderados.

Meloidogyne incognita es un nematodo parásito de plantas, que mide entre 0,5 y 6,5 mm.
Su cuerpo está cubierto por una cutícula que puede ser lisa o marcada. Se conoce
vulgarmente como gusano redondo, debido a la forma de su cuerpo en un corte
transversal. Tiene sistema digestivo, reproductivo, nervioso y excretor.

Debajo de la cutícula se encuentra la hipodermis (una capa de piel que se forma a partir
de la cutícula) y una capa muscular que le permite realizar el movimiento ondulatorio
típico de los nematodos. Según su hábito de vida, puede clasificarse como un
endoparásito. Penetra, se alimenta, madura y deposita sus huevos dentro de las raíces de
las plantas o junto a estas. Una vez dentro de la raíz, comienza a inyectar sustancias
tóxicas que provocan un crecimiento anormal de los tejidos de la planta y provoca la
generación de agallas. Su ciclo de vida dura entre 27 y 40 días. Comienza con un huevo
que se transforma en juvenil y, luego de penetrar en la raíz de la planta, pasa a ser adulto
y se diferencia sexualmente. Afecta las raíces de muchas especies de plantas de
importancia agrícola.
Clasificación Taxonómica

Reino :Animalia
Phylum :Nematoda
Clase :Secernentea
Sub Clase :Tylenchia
Orden :Tylenchia
Familia :Heterodidae
Género :Meloidogyne
Especie :M. incognita

CARACTERÍSTICAS DE LOS NEMATODOS:

• Pertenecen al reino animal.

• La mayoría de las especies viven libremente en aguas saladas o dulces o en el

suelo alimentándose de plantas y animales microscópicos. Sin embargo, se sabe que
varios centenares de sus especies se alimentan de plantas vivas en las que producen una
gran variedad de enfermedades.

• Son organismos pequeños de 300 a 1000 um, por lo que no es posible observarlos
a simple vista, pero si con facilidad en el microscopio.
• La fuente de inóculo: El huevo de nematodo y luego, el estado que emerge del
huevo es el infectivo, este atraído hacia las raíces por ciertos factores químicos asociados
con el crecimiento de la raíz, en particular el CO2 y algunos aminoácidos.

• La distribución de los nematodos en el suelo es irregular formando agregados o

focos y su principal mecanismo de dispersión es mediante el movimiento de tierra,
maquinaria, herramientas o material vegetal infectado aunque también se pueden
desplazar por su propio movimiento.

• Por lo general sobreviven como huevos envueltos en una matriz gelatinosa y

pueden encontrarse en el suelo, en las raíces o en los residuos de estas.

• La temperatura, humedad y aireación del suelo afectan a la supervivencia y al

movimiento de los nemátodos en el suelo. Los nemátodos se encuentran con mayor
abundancia entre los 0 y 15 cm de profundidad, aunque cabe mencionar que su
distribución en los suelos cultivados es irregular y es mayor en torno a las raíces de las
plantas susceptibles, a las que en ocasiones siguen hasta profundidades considerables (de
30 a 150 cm o más).

NEMÁTODO CULTIVO RESISTENCIA/SUSCEPTIBILIDAD

Meloidogyne incognita capsicum Susceptible

Meloidogyne exigua Tomate Susceptible

Meloidogyne exigua Chile Susceptible

Meloidogyne floridensis Tomate Susceptible a medianamente resistente

Meloidogyne Susceptible
graminicola Cebolla

Meloidogyne
graminicola Arroz Susceptible a medianamente resistente

Meloidogyne Susceptible
graminícola Frijol

Meloidogyne Medianamente resistente

graminícola Tomate

Meloidogyne hapla Cebolla Susceptible

MORFOLOGÍA Y ANATOMÍA DEL NEMATODO
Los nematodos son organismos pluricelulares que miden generalmente menos de 2 mm
de largo. A pesar de su pequeño tamaño, su organización es bastante compleja. Poseen
todos los órganos y sistemas de órganos encontrados en los animales superiores, excepto
sistema circulatorio y respiratorio, los cuales no están definidos. La mayor parte de estos
organismos son generalmente alargados y cilíndricos. Se plantea que en el caso de las
hembras adultas de algunas especies fitoparásitas, cambian su forma cilíndrica por la de
saco, riñón u otras mostrando así un dimorfismo sexual entre la hembra y el macho,
aunque en otros casos el macho es quien presenta diferencias menos marcadas.

En su mayoría, se reproducen de forma bisexual. Algunas especies presentan

reproducción partenogenética. El ciclo de vida es simple y directo y se divide en seis
estadios: huevo, cuatro estados larvarios y el adulto.

Su sistema de alimentación consta de: boca, esófago e intestino. La boca en la mayor

parte de estos organismos esta provista de un estilete. Dicha estructura está provista de
un conducto interior y una musculatura que permite que el órgano sea retráctil y se pueda
introducir en la raíz y los tejidos de la planta para su alimentación.
Ciclo de la enfermedad
“Meloidogyne incognita”

1.- Inoculación:
El contacto del nematodo con el hospedante se da mediante la humedad del suelo.

2.- Penetración:
Los juveniles pueden entrar a casi cualquier parte de un vegetal que se encuentre en
contacto con el suelo húmedo y en las cuales puedan hacerlo, aunque su estilete no es
muy poderoso. Es limitada su capacidad para penetrar en los tejidos de las plantas.
Muchas de ellas entran en los extremos de las raicillas, o cerca de los extremos de éstas.
Son parásitos sedentarios y, una vez que se alojan dentro de los tejidos de la planta, no se
mueven, ni cambian de posición. El segundo estadio juvenil infectiva comúnmente
penetran las raíces por detrás de la punta de ellas y se abre paso a través de las células
hasta que llegan a la parte trasera de la zona de crecimiento. Ahí se establece
permanentemente y coloca su cabeza en pleuroma. En las raíces maduras la cabeza del
nematodo a menudo se sitúa en el periciclo.

3.- Infección:
Algunas células sufren daños conforme avanzan los juveniles y en caso de que varios
juveniles penetren en ellas; las células que se encuentren en la punta de la raíz dejan de
dividirse y el crecimiento de la raíz se detiene. Por otra parte; las células corticales que se
encuentran cerca del punto de infección comienzan a crecer; en ocasiones como lo hacen
las células del periciclo y de los endodermos que se sitúan cerca de la trayectoria de los
juveniles.

4.- Establecimiento o invasión:

Dos días después de que los juveniles se han establecido; algunas de las células en torno
a su cabeza comienzan a crecer; sus núcleos se dividen pero sus paredes celulares no se
depositan. Las paredes que se encuentran en algunas de las células se degradan y
desaparecen y los contenidos protoplásmicos de varias de ellas forman células gigantes.
El alargamiento y la coalescencia de las células continua dentro de dos a tres semanas y
las células gigantes invaden irregularmente a los tejidos vecinos.

5.- Crecimiento y reproducción:

Con frecuencia; cada agalla contiene de 3-6 células gigantes; las cuales pueden formarse
tanto en la corteza como en el estilete. Parece ser que el alargamiento de las células se
debe a las sustancias que contiene la saliva que el nematodo secreta en las células gigantes
cuando se alimenta. Las células gigantes degeneran si los nematodos dejan de alimentarse
o mueren. Cuando dichas células se forman en el estilete se desarrollan elementos
dilemáticos irregulares o su desarrollo se interrumpen; los elementos xilema ticos ya
formados pueden constreñirse debido al presión mecánica que ejerce las células en
proceso de alargamiento.

En las primeras etapas de desarrollo de las agallas; las células corticales aumentan en
tamaño pero, durante las últimas etapas se dividen con rapidez. La hinchazón de la raíz
se debe también a la hipertrofia e hiperplasia que sufren las células del parénquima
vascular, periciclo y endodermos que se encuentra en torno a las células gigantes y al
alargamiento del nematodo. Conforme crecen las hembras y se forman los ovisacos;
ejercen una presión hacia afuera, rompen la corteza y pueden quedar expuestos sobre la
superficie de la raíz o quedar totalmente cubiertos, dependiendo esto de la posición que
tenga en el nematodo en relación a la superficie de la raíz.

6.- Diseminación y sobrevivencia:

En la mayor parte de los casos, los nódulos radiculares se propagan por las actividades
humanas. Estas se manifiestan en muchas formas; las siguientes son unas cuantas de las
más importantes:
• En la siembra de materiales infestados, como tubérculos, bulbos, bulbillos, rizomas, etc.
Las masas de huevos tienden a encajarse profundamente en las estructuras de esta clase
y no es probable que se mueran por el curado, secado y almacenamiento.

• En las raíces de los trasplantes de todas clases; las plantas de los almácigos, o los árboles,
arbustos y plantas ornamentales que se han infestado en los viveros.

• En la tierra de los campos infestados que se transporta en los implementos de labranza,

en las patas de los animales y por otros medios.

En el agua de riego, que puede ser un medio importante de diseminación, si el sistema se

encuentra dispuesto de modo que el agua escurra de un lote a otro, o de que se regrese de
los campos a los canales principales
CICLO DE VIDA DE MELOIDOGYNE INCOGNITA
El ciclo de vida de estos nematodos dura aproximadamente 30 días a
temperaturas altas de 27 ºC y en caso de Tº más altas o más bajas tarda más tiempo.

Presentan cuatro estados juveniles , el primero de ellos se desarrolla dentro del huevo.
Después de mudar, el segundo estado sale del huevo y nada activamente hasta encontrar
una raíz, utilizando sus últimas reservas de grasa porque no es capaz de alimentarse. Es
por tanto el estado infectivo y el único que podemos matar.

Dispone de un estilete con el que perfora la raíz, abriéndose paso hasta encontrar un sitio
adecuado cercano a los haces vasculares, donde tendrán lugar el resto de las mudas. Es
entonces cuando el nematodo produce las típicas agallas, induciendo con su saliva el
crecimiento desmesurado de las células de la raíz próximas a su cabeza, que alcanzan
tamaños gigantescos (una agalla está formada solo por 4 o 5 células) y “roban” los
nutrientes a las células cercanas. El nematodo comenzará entonces a alimentarse de estas
células gigantes hasta llegar a la edad adulta, sin necesidad de moverse.

Estadios juveniles
1er estadio juvenil:
El nematodo nodulador de la raíz se desarrolla dentro del huevo y después sufre la 1ª
muda.
 Región cefálica en un J2

Meloidogyne incognita

2do estadio juvenil:

es la etapa de penetración en caso de que el hospedante se encuentre alrededor, la larva
penetra la raíz, se vuelve sedentaria y aumenta de grosor tomando la forma de una
salchicha, y luego sufre la 2ª muda.

3er estadio juvenil:

es parecida a la 2ª etapa .

4to estadio juvenil:

Se distingue el macho de la hembra, el macho tiene aspecto vermiforme, sale de la raíz y
vive libremente en el suelo. La hembra tiene forma de pera, y forma huevos al ser o no
ser fecundada.

• El número de nódulos de la raíz se encuentra entre las 5 a 25 cm de profundidad debajo

de la superficie.

• Cuando los huevecillos se inoculan, la 2ª etapa juvenil puede migrar al interior de las
agallas hacia las plantas adyacentes de la raíz y producen nuevas infecciones en la misma
raíz, o salen de la raíz a otra raíz de la misma planta o de otras plantas.
➢ CICLO DE VIDA DE MELOIDOGYNE INCOGNITA

ALIMENTACIÓN
Los Juveniles 2 son atraídos a las raíces en la zona de elongación, así como a las zonas
de emergencia de raíces laterales. Son atraídos por el CO2 y aparentemente por algunos
aminoácidos. Los J2 penetran en la zona de elongación de forma mecánica, ayudándose
con su estilete, y probablemente también con soporte químico basado en las enzimas
celulasa y pectinasa. Estos se 21 mueven entre las células corticales hacia el ápice de la
raíz para luego situarse en los conductos vasculares de la zona de diferenciación celular.
Los J2 penetran las células con el estilete e inician la formación de una célula gigante en
el tejido vascular. Los J2 tienen unas prominentes glándulas subventrales fácilmente
observables que desaparecen cuando se vuelven adultos; se presume que estas glándulas
secretan las enzimas que producen el crecimiento excesivo de las células gigantes (Ferris,
1999).

Hembra de Meloidogyne
alimentándose de una
célula cortical
DAÑO PRINCIPAL
Estos dañan a las plantas al debilitar las puntas de la raíz y al inhibir su desarrollo o
estimular una formación excesiva, pero principalmente al inducir la formación de
hinchamientos en las raíces, las cuales no sólo privan a las plantas de sus nutrientes sino
también deforman y disminuyen el valor comercial del producto final.

Cuando las plantas susceptibles son infectadas en la etapa de plántula, las pérdidas son
considerables y pueden dar lugar a la destrucción total del cultivo.

SÍNTOMAS
Los síntomas en la parte aérea son similares a los que producen otras enfermedades de la
raíz o factores del medio ambiente, ya que disminuyen el volumen de agua disponible
para la planta. Las plantas infectadas muestran un desarrollo deficiente y una menor
cantidad de hojas pequeñas, de color verde pálido o amarillento que tienden a marchitarse
cuando el clima es cálido. Además de un enanismo en algunos casos.

Las inflorescencias y frutos no se forman o se atrofian y son de baja calidad. Las plantas
afectadas a menudo sobreviven durante el transcurso de la estación de crecimiento y rara
vez son destruidas prematuramente por la enfermedad.

Los síntomas más característicos de la enfermedad son los que aparecen sobre los órganos
subterráneos de las plantas. Las raíces infectadas se hinchan en la zona de invasión y
desarrollan las agallas típicas del nódulo de la raíz, las cuales tienen un diámetro dos o
tres veces mayor al de las raíces sanas.
IV. EJECUCION DEL PROCESO
1.- PROCESO DE EXTRACCION E INOCULACIÓN A RAICES DE
LEGUMINOSAS Y CAPSICUM
MATERIALES:
MATERIALES PRIMARIOS

• Planta de leguminosa cuyas raíces con nódulos, con posible presencia de Meloidogyne
incognita.

• Tierra agrícola, extraido a nivel de rizosfera con posible presencia de nematodo

Meloidogyne incognita.
MATERIALES SECUNDARIOS

• Colador.
• Tamiz (320 , 200 y 500 MHS).
• Rociador- pizeta.
• Placa lectora de nematodos.
• 3 gramos de raiz y 100 gr de suelo.
• Bandejas.
• Deposito para recolectar la solución.

METODOLOGIAS
VENTAJAS:

- Fácil extracción de los huevos de nematodos

- Aprendemos a diferenciar los huevos de nematodos
- Se obtiene un buen inoculo libre de impurezas
- Obtenemos datos representativos de huevos por un cierta cantidad de raíces
- El conteo de huevos se hace el mismo día
DESVENTAJAS:

- Es un proceso un poco más amplio

- Se requiere mucho más tiempo
EJECUCIÓN
Ubicación de los huevos en la raíz del hospedante.
1.- Sacar aproximadamente dos muestras de los diferentes cultivos que vamos a estudiar.
2.- Las raíces con nódulos se va limpiar de la tierra y se van a picar.
3.- Pesar 3 gramos de raíces picadas
4.- en una botella preparar una solución de lejía comercial al 1 %
5.- colocar las raíces picadas en una botella junto con la solución
6.- agitar por tres minutos sin parar
7.- luego pasar la solución por tamices de 200 y 500 MHS
8.- se coloca la muestra en un envase, se mide el volumen de la solución

9.- luego se homogeniza la muestra y se toma 1 ml y colocamos en una placa, llevo al

estereoscopio y cuento línea por línea cuantos huevitos hay, se repite este proceso por lo
menos tres veces.
obtuvimos un volumen total de 50 ml.

De la cual racionamos para inocular 8 plantones de las cuales 4 son leguminosas y 4 son
capsicum. Entonces dividiendo el volumen total entre el número de plantones obtenemos:
45 ml/ 8 plantón= 6.25 ml/plantón
10.- Finalmente pasamos a inocular los 8 plantones con la solución en cantidades iguales.
2.-PROCESO DE EXAMINACION Y EXTRACCION DE
NEMATODOS EN CULTIVOS INOCULADOS
Después de un mes pasamos a examinar y extraer los huevos, juveniles de la planta
inoculada. De la cual para obtener los datos aplicamos los siguientes métodos:

METODO 01: EXTRACCION DE HUEVOS A PARTIR DE RAIZ

CON NODULOS
Aplicamos el mismo procedimiento que la extracción de huevos para la inoculación
Obteniendo como resultado:

Cultivo N° 01 número de huevos en capsicum

M1- 1ml = 01huevos

M2- 1ml= 04 huevos
M3 -1ml= 03 huevos
Ῡ = 3 huevos
Volumen total = 14 ml
Numero de huevos total
X = 3 huevos * 14 ml
X= 42 huevos en 3 gr de raíz.

Cultivo N° 02 número de huevos en leguminosa

M1- 1ml = 02 huevos
M2- 1ml= 04 huevos
M3 -1ml= 03 huevos
Ῡ = 3 huevos
Volumen total = 17 ml
Numero de huevos total
X = 3 huevos * 17 ml
X= 51 huevos en 3 gr de raíz

METODO 02: ESTRACCION DE JUVENILES Y ADULTOS A

PARTIR DE SUELO

“Método de la Bandejita”
Este método (y sus variantes) también es conocido como la técnica de Baermann
modificada, el método del cuenco o el método de la bandeja de Whitehead.

VENTAJAS:

• No se necesita equipo especial

• Es fácil de adaptar a circunstancias básicas utilizando el material disponible localmente
• Extrae una amplia variedad de nematodos móviles
• Es una técnica simple.
DESVENTAJAS:

• Los nematodos de gran tamaño y aquellos que tienen movimiento lento no se extraen
bien.

• Las extracciones a veces pueden estar bastante sucias (especialmente si el contenido en

arcilla del suelo es alto) lo cual dificulta el recuento de los nematodos.

• La proporción de nematodos que se extraen puede variar dependiendo de la temperatura

ambiente dando lugar a posibles variaciones en los resultados entre las muestras
extraídas en diferentes momentos o épocas del año.
• Se tarda 3 o 4 días en conseguir la máxima recuperación de los nematodos.

METODOLOGÍA:
Ubicación de los nematodos.
Hembras Rizosfera (raíces)
Machos se encuentran en el suelo

EJECUCION:
✓ Sacar aproximadamente 2 muestras de los plantones inoculados

✓ Tomar 100 gramos de suelo con un vaso medidor.

✓ Colocar los 100cc en un tamiz 320 MHS.

✓ Recuperar la tierra almacenada en el tamiz de 320 MHS con ayuda de una piceta
con agua y coloca. Sobre un aro que tiene una red plástica, sobre el cual se coloca una
hoja de papel toalla, con las puntas dobladas.
✓ Colocar el aro en una bandeja, colocar en el aro el suelo rescato con ayuda de la
piceta y cubrirlo con agua por un costado de la muestra hasta que como una laguna
cubriendo el suelo.

Cuantificación de juveniles:
✓ La solución obtenida se vierte en una probeta y se lleva a un volumen conocido,
agregar agua hasta alcanzar una medida.

✓ Homogenizar la solución, se toma 1ml de la solución y se coloca en el centro de

una placa lectora de nematodo, llevar al estereoscopio y contabilizar cuantas especies de
nematodos se encuentran y que cantidad luego de ellos se repite 2 veces más por cada
bandeja elaborada.
✓ Luego se obtiene la población total promediando las 3 lecturas y multiplicando
por el volumen total la solución el resultado se expresa:

Juveniles /100 cc de suelo

(LECTURA A 48 HORAS)

CULTIVO Capsicum
Total de nematodos
Primera lectura 18 Meloidogyne incognita.
Segunda lectura 27 Meloidogyne incognita.
Tercera lectura 27 Meloidogyne incognita.

Promedio = 18 + 27 + 27/3 = 24 juveniles

24 juveniles de M.i - 1ml
X juveniles de M.i - 40 ml

X= 960 Juveniles de Meloidogyne incognita / 100 cc de suelo.

CULTIVO Leguminosa
Total de nematodos
Primera lectura 53 Meloidogyne incognita.
Segunda lectura 22 Meloidogyne incognita.
Tercera lectura 46 Meloidogyne incognita.

Promedio = 53 + 22 + 46 /3 = 40 juveniles
40 juveniles de M.i - 1ml
X juveniles de M.i - 40 ml

X= 1600 Juveniles de Meloidogyne incognita / 100 cc de suelo.

V. CONCLUSIONES

• Se hizo una lectura por cada cultivo

✓ 1er cultivo capsicum se obtuvo 960 Juveniles de Meloidogyne / 100 cc de suelo

✓ 2da: cultivo leguminoso se obtuvo 1600 Juveniles de Meloidogyne / 100 cc de

suelo

• Se demostró que efectivamente el nematodo nodulador (meloidogyne incognita),

afecta a las plantas Capsicum baccatum (aji Amarillo) y Lablab purpureus (frijol
zarandaja), en su ciclo normal, temperatuas y riegos normales en la costa.
Se observó en Capsicum baccatum y Lablab purpureus los siguientes síntomas:

✓ Amarillamiento

✓ nodulaciones