División de Ciencias

Naturales y Exactas
Laboratorio de fisicoquímica en farmacia y biología

Dra. Ma. Dolores Herrera Palacios

Práctica No. 15: Actividad enzimática.

Equipo:

26 de noviembre del 2018

Objetivo

Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:

 1

1. Observar la actividad de la enzima catalasa.

2. Comparar la actividad de la catalasa de tejidos de organismos vivos, con un

catalizador no proteico.

3. Examinar los factores que afectan la actividad enzimática.

Introducción

Materiales

 8 tubos de ensaye de 13 x 100 mm

 2

 1 agitador de vidrio
 2 pipetas graduadas de 5 mL
 1 vaso de precipitados de 150 mL
 1 gradilla metálica
 1 parrilla de calentamiento con agitación

Sustancias

 Peróxido de hidrógeno al 3 %
 Ácido clorhídrico 0.1 M
 Hidróxido de sodio 0.1 M
 Cianuro de potasio 0.1 M

Procedimiento

En los siguientes experimentos mide la velocidad de reacción de acuerdo a la

siguiente escala: 0 = no hay reacción; 1 = lenta; 2 = moderada; 3 = rápida; 4 =
muy rápida.

 PARTE A. Comparación de la actividad de la catalasa y el dióxido de

manganeso

1. Coloca en 4 tubos de ensaye 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 %.

2. Agrega a cada tubo las siguientes sustancias:

Tubo Agregar

1 Un poco de arena fina

2 Un poco de MnO2

3 Una porción de papa cruda

4 Una porción de hígado

 3

3. Registra la velocidad de reacción en cada tubo y compara los resultados

obtenidos.

 PARTE B. Efecto del pH sobre la actividad enzimática

1. Coloca una pequeña cantidad de papa fresca en 3 tubos de ensaye. Usa el

agitador y un poco de arena fina para triturar la papa.

2. Agrega 1 mL de agua destilada al primer tubo, 1 mL de HCl 0.1 M al segundo y

1 mL de NaOH 0.1 M al tercer tubo. Registra el pH de cada tubo.

3. Adiciona a cada tubo 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 % y registra los

resultados al cabo de 5 minutos.

 PARTE C. Efecto de la temperatura

1. Coloca una pequeña cantidad de papa en un tubo de ensaye y tritura con arena,
Pon el tubo en un baño de agua hirviendo durante 5 minutos.

2. Añade 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 %. Observa y registra los resultados.

3. Repite lo anterior pero a temperatura ambiente.

4. Coloca en dos tubos de ensaye 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 %. Coloca

uno de los tubos en un baño de agua a 37°C y el otro tubo en un baño de agua
helada, durante 5 minutos. Agregar una pequeña cantidad de papa triturada a
cada tubo. Compara las velocidades de reacción.

 PARTE D. Efecto de un inhibidor

1. Coloca una pequeña cantidad de papa en un tubo de ensaye y tritura con arena,
agrega 3 gotas de KCN 0.1 M. Mezcla bien el contenido del tubo.

2. Añade 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 % al tubo y registra los resultados.

Observaciones
 4

1. Se debe agregar cuidadosamente el peróxido de hidrógeno al 3%, ya que si

se añade bruscamente se puede derramar la muestra contenida en el tubo
de ensaye.
2. A la arena fina, sólo se debe añadir en caso de que la papa no esté bien
triturada.

Anotación de las observaciones y resultados del experimento y su discusión

1. Elabora una tabla con los resultados obtenidos.

Observaciones y resultados de Parte A: comparación de la actividad de la

catalasa y el dióxido de manganeso.

Tubo Observación Velocidad

1 Apareció un leve burbujeo 1

en la superficie del tubo
Arana fina

2 Hubo efervescencia de 3
color negro
Oxido de manganeso

3 Presencia de 2
efervescencia blanca
Papa cruda

4 De inmediato comenzó la 4
formación de espuma
Hígado
blanca

Observaciones y resultados de Parte B: efecto del pH sobre la enzima.

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Tubo pH Observación Velocidad Observación Velocidad

antes de agregar al agregar después de después de
H2O2 H2O2 5min de 5 min de
agregar H2O2 agregar
H2O2

1 6 Presencia de 2 Se observó aún 3

efervescencia más
Papa + arena
blanca (reacción efervescencia
+ 1mL de
muy lenta)
agua destilada

2 0 No se observaron 0 Se observó muy 1

cambios poca
Papa + arena
efervescencia
+ 1mL de HCl
blanca
0.1M al 3%

3 14 No se observaron 0 E observo algo 2

cambios de efervecencia
Papa + arena
balnaca
+ 1mL de
NaOH 0.1M al
3%

Observaciones y resultados de Parte C: efecto de la temperatura

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Tubo Observación Velocidad

1 No hubo cambio alguno 0

Papa + arena + H2O2

(caliente)

2 Se percibió la formación 4
de efervescencia blanca
Papa + arena + H2O2 (a
casi al instante.
temperatura ambiente)

3 La reacción fue casi al 3

instante muy rápidamente
H2O2 (caliente) + papa
se comenzó a formar la
efervescencia.

4 La reacción fue más lenta 2

que en caliente.
H2O2 (helado) + papa

Observaciones y resultados de Parte D: efecto del inhibidor.

Tubo Observación Velocidad

1 La actividad de enzima se 0
inhibió por completo por lo
Papa + arena + 3gotas
tanto no hubo presencia
KCN 0.1M + 1mL de
de efervescencia.
H2O2

2. Basado en tus anotaciones sobre la velocidad de las reacciones de los

experimentos anteriores, elabora un gráfico de barras.
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Velocidad de actividad enzimatica

4.5
4 higado, 4
velocidad de reaccion 3.5
oxido de
3
manganeso, 3
2.5
2 papa cruda, 2
1.5
1 arena fina, 1
0.5
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
Tubo

Como se puede persivir en la grafica, el higado fue el que presento una mayor
velocidad de reaccion, mostrando mas produccion de burbujeo, mientras que la
arena fina fue la que casi no tenia reaccion con el peroxido.asi entonces se puede
decir que el higado es que contenia mas enzima, por tanto hubo mas actividad
enzimatica.
 8

Intervención del pH en la actividad enzimática al

agregar H2O2
4

velocidad de actividad
3

Papa + arena + 1mL

2
de agua destilada
velocidad
1
Papa + arena + 1mL
Papa + arena + 1mL
de NaOH 0.1M al
0 de HCl 0.1M al 3%
3%
0 5 10 15
pH de solucion

Como se puede observar al momento de agregar el peróxido, solo hubo reacción

apreciable en el tubo que contenía papa+arena+1ml de agua destilada, el cual
tenía un pH de 6. Sin embargo en los otros dos tubos, que contenían acido he
hidróxido no se percibió actividad enzimática, esto se debe a que el pH óptimo de
la actividad del peróxido es de 6.

Intervención del pH en la actividad enzimática

despues de agregar H2O2
4
velocidad de actividad

Papa + arena + 1mL

3
de agua destilada
Papa + arena + 1mL
de NaOH 0.1M al
2
3%
Papa + arena + 1mL velocidad
1 de HCl 0.1M al 3%

0
0 5 10 15
pH de solucion

Como se observa en esta grafica, despues de dejar pasar 5 minutos de agregar el

peroxido a los tubos, se comenzo a ver la presencia de actividad en el tubo que
contenia acido he hidroxido, sin embrago la actividad del tubo que contenia agua
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destilada (pH=6) seguía teniendo la velocidad mayor de reacción, por lo tanto se

puede decir que la enzima si tiene su actividad máxima a un pH casi neutro.

Intervención de la temperatura en la actividad

enzimática
5
Velocidad de actividad

4 ambiente, 4

2 velocidad

0 caliente, 0
0 1 2 3
Temperatura

Como se puede obsrvar en esta grafica, la actividad enzimatica si se ve afectada

por la temperatura, y en este caso se logra ver que a temperaturas ,muy altas no
hay actividad, sin embargo la temperatura ambiente es la optima para la actividad
del la enzima.

Eston se debe a que a altas temperaturas la enzima puede descomponerse ya

que se logran romper algunos de los emlaces peptídicos de la proteína, haciendo
que se desnaturalice y por tanto ya no tenga actividad enzimatica.
 10

Inhibicion de la actividad enzimática

4

3
velocidad de actividad

1
papa + arena
+3gotas de KCN +
1mL de H2O2
0
0 1 2
Tubo

En este caso observamos que el KCN efectivamente si sirve como un inhibidor de

la actividad enzimatica de nuestra encima, ya que no hubo presencia de reaccion
alguna. Esto lo logramos verificar al momento de no observar cambio alguno en la
reacción.

3. ¿Puede el peróxido de hidrógeno ser descompuesto por otros

catalizadores diferentes de los que se encuentran en los tejidos vivos?
Explica.

A pesar de que el peróxido de hidrógeno es relativamente estable a temperatura

ambiente, numerosas sustancias actúan como catalizadores de su
descomposición, entre otras: metales de transición, álcalis, y óxidos metálicos. La
luz del día también favorece la descomposición del peróxido de hidrógeno, por lo
que debe conservarse en envases opacos.
 11

4. Describe el efecto del tamaño de partícula, de la temperatura, el pH y del

inhibidor sobre la velocidad de reacción de la enzima.

 Efecto del pH sobre la actividad enzimática

Los enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2;
tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos. Según el pH
del medio, estos grupos pueden tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra.

Como la conformación de las proteínas depende, en parte, de sus cargas

eléctricas, habrá un pH en el cual la conformación será la más adecuada para la
actividad catalítica. Este es el llamado pH óptimo.

La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones
de pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar
drásticamente su actividad.

Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la

arginasa lo tiene a pH 10. Como ligeros cambios del pH pueden provocar la
desnaturalización de la proteína, los seres vivos han desarrollado sistemas más o
menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores
fisiológicos.

 Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática

En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas: por
cada 10ºC de incremento, la velocidad de reacción se duplica. Las reacciones
catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser proteínas, a
partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La
temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura
óptima.

Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reacción debido a

la temperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida a la
desnaturalización térmica, y la actividad enzimática decrece rápidamente hasta
anularse.
 12

A mayor temperatura, mayor velocidad de reacción. La temperatura representa

uno de los tipos de energía presente en la reacción. El sentido del flujo de energía
entre los miembros de la reacción, determina si esta es exotérmica o endotérmica.

 Efecto de los inhibidores sobre la actividad enzimática

Ciertas moléculas pueden inhibir la acción catalítica de un enzima: son los
inhibidores. Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo
por semejanza estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o bien
alteran la conformación espacial del enzima, impidiendo su unión al sustrato
(inhibidor no competitivo).

 Efecto del tamaño de partícula: Superficie de contacto:

A mayor superficie de contacto, mayor velocidad de reacción. La superficie de
contacto determina el número de átomos y moléculas disponibles para la reacción.
A mayor tamaño de partícula, menor superficie de contacto para la misma
cantidad de materia.

Conclusiones

Se cumplió el objetivo de la práctica al comparar la actividad de la enzima catalasa

en diferentes muestras observando su velocidad de reacción, donde logramos ver
que en un tejido vivo la actividad enzimática de la catalasa es muy rápida; Se
demostró que el pH influye en la actividad enzimática de las proteínas así mismo
se comprobó que el factor temperatura es de gran influencia en la actividad
enzimática ya que se observó mayor velocidad de actividad a temperaturas altas
que en temperatura ambiente o bajas. En la prueba del efecto de inhibidor se
corroboró que al adicionar una especie química con esta función si se evita que la
enzima tenga actividad pues después de agregar el inhibidor y realizar la prueba
ya no se observó reacción como en los casos que no tenían inhibidor.

Referencias
 13

1. Survey of Chemistry, Laboratory Experiments, 7th Edition, A Manual for

Chemistry 104, 5, 6. Department of chemistry, Soyuthern Oregon University,
Ashland, Oregon, USA, 1998, págs. 69-72.