PROTOCOLO F

Detección de lípidos neutros por medio de la técnica de

tinción con Rojo de Nilo

INTRODUCCION
El Rojo de Nilo (9-diethylamino-5H-benzo (alpha) phenoxazine-5-one), es un
colorante liposoluble e intensamente fluorescente en determinadas longitudes de
onda, que permite la detección de lípidos in situ, por medio de técnicas
fluorométricas (Elsey et al., 2007; Chen et al., 2009).

OBJETIVO
Evaluar la acumulación de lípidos neutros (LN), en células previamente inducidas
por medio de privación de nitrógeno.
PROCEDIMIENTO
1) Tomar 1 – 3 mL de cultivo de microalgas.
2) Agregar 5 μM del colorante Rojo de Nilo y un 20% DMSO (permite la
permeabilización de las membranas y paredes celulares)
3) Incubar por 30 minutos en oscuridad.
4) Para una determinación cuantitativa, las células tratadas con Rojo de Nilo utilizar
un espectrofluorómetro (excitar con luz polarizada a 486 nm (Shimadzu, model RF-
540), registra el pico de emisión a 556 nm. Evaluar la acumulación de lípidos en
cultivos analizando el espectro de emisión entre 500 y 700 nm.
5) Para una determinación cualitativa, observar las células en microscopio de
fluorecsencia.

MATERIALES
Colorante Rojo de Nilo
Microscopio de fluorescencia
Espectrofluorometro

BIBLIOGRAFIA
1. Chen, W., Zhang, C., Song, L., Sommerfeld, M., & Hu, Q. (2009). A high throughput Nile red
method for quantitative measurement of neutral lipids in microalgae. Journal of microbiological
methods, 77(1), 41-47.
2. Elsey, D., Jameson, D., Raleigh, B., & Cooney, M. J. (2007). Fluorescent measurement of
microalgal neutral lipids. Journal of microbiological methods, 68(3), 639-642.