UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MÉXICO

Escuela de Ciencias de la Salud

Campus Querétaro
Lic. en Ingeniería Biomédica

BIOLOGÍA MOLECULAR
Práctica 4. TINCIÓN GRAM

Introducción

Para estudiar bacterias es necesario mantenerlas en el laboratorio en cultivos controlados y puros (axénicos).
Los medios de cultivo bacterianos son disoluciones acuosas con nutrientes orgánicos (monosacáridos, ácidos
grasos, aminoácidos, bases nitrogenadas, etc.) e inorgánicos (sales). Los medios de cultivo de bacterias se
preparan en medio líquido en tubos de ensayo o en estado de gel (semisólido) que se obtienen al añadir al
medio una sustancia gelificante como el agar-agar, la cual se obtiene de algas marinas. Los medios de cultivo
semisólidos se preparan en cajas de Petri.

Indicaciones particulares

Leer la práctica con antelación. El alumno deberá investigar los siguientes conceptos y traer ejemplos y
diagramas impresos o en digital de los siguientes conceptos: pared celular de procariotas, diferencia entre
bacterias “Gram positivas” y “Gram negativas”, bacterias α-, β- y γ-hemolíticas. Traer individualmente los
conceptos, ejemplos y diagramas impresos garantiza al alumno su permanencia en el laboratorio y la
posibilidad de hacer la práctica.

Material

• Guantes
• Cubrebocas
• Piseta con alcohol 70%, extrán, benzal
• Piseta con agua destilada
• Mechero Bunsen o Fisher
• 1 asa de platino
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Cristal violeta
• Lugol
• Safranina
• Alcohol-acetona
• Aceite de inmersión
• Papel seda
• Microscopio

Material traído por equipo

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Campus Querétaro
Lic. en Ingeniería Biomédica
• 1 caja de fósforos o encendedor
• 1 marcador o plumón permanente (Sharpie o semejantes)

Procedimiento

1. Coloca y extiende sobre un portaobjetos limpio una muestra bacteriana procedente de un cultivo
2. Fijar la muestra al portaobjetos mediante calor, pasando el portaobjetos muy brevemente sobre la
llama varias veces sin quemarse y sin quemar la muestra.
3. Teñir con el colorante cristal violeta durante un minuto
4. Lavar la muestra con agua corriente
5. Teñir con lugol durante tres minutos
6. Lavar abundantemente con etanol o etanol acidulado
7. Lavar con agua corriente
8. Teñir con safranina durante dos minutos
9. Lavar con agua corriente
10. Secar con un papel absorbente debajo y alrededor de la muestra, sin llevarse la muestra
11. Observar al microscopio con el objetivo 40X
12. Colocar un cubreobjetos sobre la muestra, colocar una gota de aceite de inmersión y observar al
microscopio con el objetivo 100X
13. Realiza esquemas de lo observado

Bibliografía recomendada

Karp G. (2009). Biología celular y molecular. Conceptos y experimentos. 5ta edición. McGraw-Hill.