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Informe Técnicas Histológicas

Práctico n°4: Tincion y Montaje

Integrantes:

Esteban Diaz
Adolfo Ramírez
Gabriel Pizarro

Profesor Christian Verdugo


Introducción

La llamada Técnica histológica engloba los métodos que se realizan para la obtención de
preparaciones histológicas usadas en los estudios de microscopía óptica. Ésta abarca varios
procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar los cortes como se conoce,
montados bajo un cubreobjeto con imágenes de estructuras contrastadas, listos para su
correspondiente estudio.
Los procedimientos de la Técnica Histológica se resumen en las etapas siguientes:
1) Fijación
2) Deshidratación
3) Aclaramiento
4) Inclusión
5) Corte
6) Desparafinización e Hidratación
7) Tinción
8) Deshidratación y Aclaramiento
9) Montaje
Anteriormente realizamos y vimos los resultados del método de Fijación. Sabemos que los tejidos
contienen grandes cantidades de agua, tanto intra como extracelular, ésta debe ser eliminada
para seguir con el proceso, y allí es cuando pasamos al segundo paso del conjunto de técnicas
histológicas, que es la llamada Deshidratación. Luego de que la muestra ha sido fijada se debe
eliminar el fijador y a continuación el agua. Para esto se utiliza una serie gradual de soluciones
acuosas con una concentración de menor a mayor del agente deshidratante, estas soluciones
acuosas se deben mezclar con el agua y tener cierta afinidad con ella. El más común o utilizado es
el alcohol etílico, pero se puede utilizar cualquier reactivo capaz de absorber el agua de los tejidos.
Posterior a esto, se lleva a cabo el aclaramiento, en donde el tejido se debe sumergir en un líquido
que sea miscible tanto en el medio de inclusión como en el medio de deshidratación.
En el siguiente informe práctico se mostrarán con detalles los distintos pasos que se realizaron
para una correcta deshidratación y aclaramiento.
Objetivos

 Comprender de que se compone una batería de tinción


 Desparafinar, teñir y montar las muestras previamente cortadas
 Preparar los componentes de la batería de tinción
 Entender porque es importante cada paso de la batería de tinción
Materiales y métodos

 Preparación de soluciones: Se utilizó como agente deshidratante alcohol a diferentes


concentraciones. Fue necesario preparar Alcohol al 70% , esto se logró realizando los cálculos
previos correspondientes para formar una correcta disolución de alcohol y agua destilada con
las proporciones adecuadas. El alcohol 95%, 100% y xilol no fueron necesarios prepararlos, ya
que fueron utilizados como venían envasados.

- Alcohol 70%

C1xv1 = C2XV2

95 x X = 70 x 1000

X= 737ml

X= 263 ml

 Se preparo hematoxilina de Harris, eosina, alcohol acido y agua amoniacal

Para preparar la hematoxilina se procedió a disolver 3 gramos de hematoxilina en 30 ml de etanol


absoluto en un vaso precipitado de 50ml, esto se calentó suavemente. Por otra parte, en un vaso
precipitado de 1000ml se agrego 60g de alumbre de potasio y se disolvió en 600ml de agua destilada,
esto se realizo en caliente. Luego estas dos soluciones se juntaron y llevadas a ebullición para
posteriormente agregar 1.5g de oxido rojo de mercurio lentamente. Finalmente, se enfrió la solución
final de hematoxilina. se filtró en un matraz de Erlenmeyer y se agregaron 30 ml de ácido acético
glacial.

se prepararon 100 ml de Eosina alcohólica al 1 %, para esto se peso 1 g de eosina fue puesta en
un vaso precipitado, luego se agregaron los 100 ml de alcohol 70%.

La preparación del alcohol acido fue al 1% y se hicieron 900 ml de este, se utilizo alcohol 70% y
acido clorhídrico

C1xV1 = C2xV2

100% x X= 1%x 900 ml

X=900/100 X=9ml
También se preparo el agua amoniacal al 2%, esto se realizo con 14 ml de amoniaco y se relleno
con 686 ml de agua destilada.

C1xV1 = C2xV2

100% x X = 2% x 700ml

X= 2x700/100 X= 14

El proceso de Desparafinación es la primera parte en la batería de tinción lo cual se realiza con xilol,
luego este xilol hay que eliminarlo, por lo que las cubetas que vienen posterior al xilol son los de los
alcoholes descendentes, siguiendo el proceso se hidrata con agua destilada para proceder a teñir
con hematoxilina de Harris preparada anteriormente en el laboratorio, el tiempo en la hematoxilina
fue de 1:30 min ya que se realizó una tinción progresiva, inmediatamente después de la cubeta con
hematoxilina se lava con agua destilada para limpiar excesos y restos de tinción en el portaobjeto.
Después de esto se procede a introducir las muestras en la próxima cubeta que es la de agua
amoniacal en donde los núcleos se tornan de un color mas azulado, también después de esto se lava
en agua destilada para continuar con la tinción de eosina alcohólica en la cual solo sumergimos las
muestras por 5 segundos. Posterior a la eosina se comienza con la deshidratación hasta llegar al xilol
donde se aclaran las muestras y se procede a montar, en donde se cubre la muestra con un cubre
objeto para protegerla.

1ª Cubeta: xilol 1 por 10 min

2ª Cubeta: xilol 2 por 10 min

3ª Cubeta: xilol 3 por 5 min

4ª Cubeta: alcohol 100% por 5 min

5ª Cubeta: alcohol 100% por 5 min

6ª Cubeta: alcohol 100% por 3 min


7ª Cubeta: alcohol 96% por 3 min

8ª Cubeta: alcohol 96% dip

9ª Cubeta: alcohol 70% dip

10ª Cubeta: Agua corriente

11ª Cubeta: hematoxilina de Harris por 1 – 2 min

12ª Cubeta: agua corriente

13ª Cubeta: agua amoniacal hasta azular

14ª Cubeta: agua corriente

15ª Cubeta: eosina por 5 – 10 seg

16ª Cubeta: alcohol 70% dip

17ª Cubeta: alcohol 96% dip

18ª Cubeta: alcohol 100% por 5 min

19ª Cubeta: alcohol 100% por 5 min

20ª Cubeta: xilol 1 por 5 min

20ª Cubeta: xilol 2 por 5 min

20ª Cubeta: xilol 3 cubrir

Observación:
Resultados

Discusión
Conclusión