CRISPR-Cas9 y sus aplicaciones en la edición de genes.

Profesores del curso

 Dra. en C. Teresa Itandehui Martínez-Cuevas

 M. en C. Alberto Antonio-Campos

Descripción del curso

En este curso se expondrán los fundamentos básicos de la ingeniería genética

utilizando el sistema CRISPR-Cas9 y se explorarán algunas de sus aplicaciones
más utilizadas para la edición de genes de interés. El curso es teórico-práctico y
se llevará a cabo en el aula-laboratorio destinada para este fin. Cada tema tendrá
una duración de 4 horas. La primera hora de cada tema corresponde a una sesión
teórica y las tres horas restantes corresponden a una sesión práctica.

Objetivos del curso.

1. Realizar una introducción a los fundamentos generales de la ingeniería

genética utilizando el sistema CRISPR-Cas9 y sus principales aplicaciones.

2. Exponer de forma clara y precisa el funcionamiento y aplicaciones del

sistema CRISPR-Cas9 para la edición de genomas.

3. Desarrollar en los asistentes las habilidades básicas necesarias para

comprender y manejar el sistema CRISPR-Cas9.

4. Aplicar el conocimiento adquirido para resolver un problema concreto que

pueda ser abordado mediante el uso de la ingeniería genética y la
implementación del sistema CRISPR-Cas9.

Este curso quedará abierto a cualquier persona con conocimientos previos de

Biología Molecular Básica, que esté interesada en conocer las herramientas de la
el sistema CRISPR-Cas9 aplicado a diagnóstico, investigación e industria.

Sobre el curso presencial

El curso presencial dura 25 horas y tiene un costo de $6000.00 (seis mil pesos
mexicanos). Se llevará a cabo de manera presencial del 13 al 18 de Agosto del
2018, en dos horarios: de 16:00 a 20:00 hrs de lunes a viernes (sábado por
definir).
.Nuestras instalaciones se encuentran en: Cerro del Agua #274,
Copilco, Coyoacán, CDMX
MAPA: (mapa:https://goo.gl/maps/kC9FFze9AZF2).
 Contenido
Día 1. Introducción a la biología molecular, DNA recombinante y
edición de genomas (CRISPR-Cas9).

Teoría:

1. Introducción general a la biología molecular, edición de genomas utilizando

el sistema CRISPR-Cas9 y algunas de sus principales aplicaciones.

2. Fundamento de los vectores de clonación, expresión y sus aplicaciones en

la ingeniería genética.

3. Fundamentos básicos de la PCR y lisis alcalina.

4. Teoría: Fundamentos básicos de las enzimas de restricción y sus

aplicaciones.

Práctica:Diseño de la secuencia guía (sRNA), diseño de oligonucleótidos

específicos, análisis de la secuencia de interés: con targets y off targets.
Hibridación de la secuencia guía y clonación en el vector pGEM T-Easy.

Día 2. Sub-clonación en el vector de expresión de CAS9.

Práctica: Sub-clonación de la secuencia guía en el vector de expresión de

CAS9. Digestión del DNA plasmídico con BamHI para liberar el inserto,
linearización con BamHI del vector de expresión de Cas9, Geles preparativos de
agarosa, purificación de la secuencia guía y el vector de expresión de CAS9
linearizado, precipitación de la secuencia guía y del vector Cas9, Ligación de la
secuencia guía y el vector de expresión de CAS9.

Día 3. Transformación de bacterias competentes con la secuencia

guía y el vector de expresión de Cas9.

Teoría: Repaso del fundamento para la transformación de bacterias

competentes.

Práctica: Transformación de bacterias DH5a con la reacción de ligación de la

secuencia guía y el vector de expresión de Cas9.
Día 4. PCR de colonia de las bacterias transformadas con el
sistema Cas9.

Teoría: Fundamentos básicos de la secuenciación de DNA.

Práctica: PCR de colonia de las bacterias transformadas con el sistema Cas9.

Análisis de restricción con BamHI para verificar la presencia de la secuencia guía,
Análisis de restricción con EcoRI para verificar la orientación de la secuencia guía.

Día 5. Extracción de DNA de las bacterias transformadas con el

sistema Cas9.

Teoría: Repaso de los fundamentos de extracción de DNA plasmídico.

Práctica: Cultivo de bacterias competentes en medio líquido LB. Extracción de

DNA plasmídico (cloruro de cesio, Maxi kit, Maxi lisis). Secuenciación de DNA.

Día 6. Transfección, Selección y análisis de las células eucariotas

transfectadas con el sistema Cas9.

Teoría: Fundamento de los sistemas de transfección y sus principales

aplicaciones.

Métodos de análisis para verificar la transfección de células

Práctica:
1. Transfección de células eucariotas por electroporación. Cálculo de la
eficiencia de transfección y sobrevivencia.

2. Selección de las células transfectadas mediante el uso de G418. Análisis de

las transfectantes estables utilizando un gen reportero (GFP) y la
microscopía de fluorescencia.
 Inscripción

1. Realiza el pago del monto correspondiente a la modalidad del curso que eliges.
Los datos de la cuenta son los siguientes:

Cuenta Banco Santander: 60-56840412-5

CLABE: 014180605684041259
A nombre de Jorge Angel Marcos Viquez

*Se realizará un descuento a aquellos alumnos que hayan tomado algún curso en CIPCB

2. Envía tu comprobante de pago con tu nombre completo al siguiente correo y

recibirás de vuelta la confirmación de tu inscripción.

olinkhus@gmail.com

Atentamente los organizadores de CIPCB:

Olinka Cortés
olinkhus@gmail.com
044 55 21 75 61 23

Osman Franco
osman@ciencias.unam.mx
0 44 55 31 22 50 19

Jorge Marcos
marcosviquezjorge@ciencias.unam.mx