Biotecnologia

CONCEPTOS Y TECNICAS DE BIOTECNOLOGÍA I
CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Biotecnología
Definición: Uso de organismos vivientes (o materiales de organismos vivientes)
para realizar un proceso definido con aplicación industrial
Objetivos tecnológicos industriales o ambientales
Microbiología aplicada: microorganismos tienen un muy diverso potencial
biosintético y degradativo
Nueva Biotecnología: uso de tecnología de DNA para construir nuevas

cepas.
Microbiología aplicada sin la básica es limitada
El mayor impulso de la microbiología básica es la solución de problemas

aplicados
Colores de la Biotecnología
Roja: Aplicada a medicina e industria farmacéutica
Verde: Aplicada a agricultura
Azul: Biotecnología marina
Blanca: Aplicada a procesos industriales y al ambiente

Historia
• Hombre hizo uso de los microorganismos sin
saber que existían. Prueba-error. Se remonta a
épocas prehistóricas.
• Cerveza, vinagre, vino y pan. Ceveza desde 6000 a.C.

Producción de cerveza en antiguo Egipto data del 1700 a.C.
Vinagre anterior. Vino 2000 a.C. en China y Egipto.
Pan 4000 a.C.
• Agente causal de la fermentación: sentó bases de la microbiología aplicada.

1857-1876 Pasteur. Fermentación proceso biológico
• Fines de siglo XIX procesos abiertos
• Buchner enzimas (1907 premio Nobel). Fermentación podía tener lugar in vitro sin
la presencia de organismos. (Enzima del gr. En zyme significa en levadura)
• Penicilina 1945. Desafío de producción a gran escala
• 1979 Ingeniería genética. Microorganismos recombinantes

1ra Guerra Mundial desarrollo de producción de acetona
Segunda mitad del siglo XX
Grandes cambios relacionados principalmente con el

descubrimiento de los antibióticos.
Productos microbianos impacto en la economía de los países (PBI)
FERMENTACIONES: TERMINOLOGÍA
L. Pasteur la denominó "la vie sans l'air" o "la vida sin aire".
Fermentación en biotecnología

FERMENTACIÓN
Microbiología industrial
Fermentaciones a gran escala: hasta 500.000 litros

Productos de la microbiología
Industrial
Bioconversión
Células Sustrato
Producto
Levadura
(bioconversión
de esteroides)
Cianobacteria Spirulina platensis
Bacterias oxidadoras de metano Productos de las Células
Rhizobium y Bradyrhizobium
Bacterias lácticas
Enzimas Productos
(Glucosa Químicos
Isomerasa) Alcohol (ácido cítrico)
Aditivos
Antibióticos Alimenticios
(Penicilina) (aminoácidos)

Tomado de Bioquímica y Microbiología Industrial 2º de Bioquímica Universidad de Zaragoza
Otros productos Bacterianos
Vitaminas
Esteroles
Aminoácidos
Ácidos orgánicos
Agentes saborizantes o aromatizantes
Enzimas
Productos fermentados/bebidas
Antibióticos
DNA recombinante

Aislamiento de microorganismos
Procedimientos de screening
Mejoramiento de cepas
Producción a pequeña escala
Producción a gran escala. Fermentadores

Metabolismo
Fermentación

Generación de energía
Eucariotas: Respiración aeróbica, fermentaciones alcohólicas y lácticas y
fotosíntesis oxigénica
Procariotas
• Fermentación: Embden-Meyerhof, Entner-Doudoroff y heteroláctica
• Respiración aeróbica y anaeróbica: NO3-; SO4- ; Fumarato
• Litotrofía : Compuestos inorgánicos como fuente de energía ej: H2; SH2
• Fotoheterotrofía: compuestos orgánicos como fuentes de C en la
fotosíntesis.
• Fotosíntesis oxigénica y anoxigénica
• Metanogénesis metabolismo de arqueones, H2 a CH4
• Fotofosforilación no fotosintética . Formación de ATP por incidencia de
la luz en un pigmento (bacteriorodopsina) de membrana.
• Fijación de CO2 por reversión del ciclo TCA y por el camino de
acetilCoA

Rutas para obtener energía
Glucólisis
Fermentación
Ciclo de Krebs
Comp.org. Comp.org. (TCA o del
ácido cítrico)
FERMENTACIÓN ATP
Compuesto orgánico CO2
O2
ATP Cadena respiratoria
Respiración aerobia,
N03-
aerobia facultativa y Ext.
SO42-
anaerobia
RESPIRACIÓN
Int.

Embden Meyerhof Fosforilación a nivel de sustrato

Embden-Meyerhof=Glucólisis

Embden Meyerhoff en diferentes especies
. Fermentación
Homolactica.. Ácido
Lactico.Lactobacillus,
Lactococcus y la
mayoría de los
estreptococos.
Productos derivados
de leche.
. Acido propiónico: poco común. Formación

de propionato es compleja e indirecta e
involucra 5 o 6 reactions. El ácido propionico
se usa para la manufactura de queso suizo, que
se distingue por su sabor a propionato y acetato
y los agujeros provocados por el CO2.
Fermentación con
producción de ácido butírico:
es realizada por clostridia. Por
fermentación de azúcares se
produce ácido butírico y . Butanol-acetone fermentación.
además acético, CO2 e H2 . Descubiertos como productos principales
Pequeñas cantidades de de la fermentación por Clostridium
isopropanol y etanol. acetobutylicum durante la I Guerra
CONCEPTOS 2010-Nancy I. Lópezmundial.
Enterobacterias
Productos Productos neutros o

fuertemente ácidos levemente ácidos
↓ pH < 5 pH > 6

Fermentación
Heteroláctica
Fosfocetolasa
E.M.
Lactobacillus
Leuconostoc
Entner-Doudoroff
Zymomonas
(fermentativo)
Pseudomonas
KDPG aldolasa

Table 1. Oxidative pathways of glycolysis employed by various bacteria.
Embden- Heteroláctica Vía de Entner

Bacteria
Meyerhof la fosfocetolasa Doudoroff
Acetobacter
- + -
aceti
Agrobacterium
- - +
tumefaciens
Azotobacter
- - +
vinelandii
Bacillus subtilis major minor -
Escherichia coli + - -
Lactobacillus
+ - -
acidophilus
Leuconostoc
- + -
mesenteroides
Pseudomonas
- - +
aeruginosa
Vibrio cholerae minor - major
Zymomonas
- - +
mobilis

http://textbookofbacteriology.net
Productos de fermentación
Pathway Key enzyme Ethanol Lactic Acid CO2 ATP
Embden-Meyerhof
fructose 1,6-diP aldolase 2 0 2 2
Saccharomyces
Embden-Meyerhof
fructose 1,6-diP aldolase 0 2 0 2
Lactobacillus
Heterolactic
phosphoketolase 1 1 1 1
Streptococcus
Entner-Doudoroff
KDPG aldolase 2 0 2 1
Zymomonas

Glucólisis y Ciclo de Krebs

BIOTECNOLOGIA MICROBIANA
Tres categorías de productos microbianos de

importancia industrial
• Metabolitos primarios
• Metabolitos secundarios
• Enzimas

Crecimiento bacteriano

Metabolitos primarios
Producidos durante el crecimiento normal del microorganismo, parte
del metabolismo. Pueden ser intermediarios o productos finales de
vías metabólicas esenciales para el crecimiento.
Ej: aa, nucleótidos, azúcares,

productos de fermentación, exoenzimas.
Normalmente se producen en gran

abundancia en la fase logarítmica.
Acetobacter o
Gluconobacter
Ethyl alcohol Acetic acid

Metabolitos secundarios
Son producidos luego del
crecimiento normal del
microorganismo, se acumulan
cuando las condiciones son
desfavorables para el crecimiento.
Compuestos no esenciales para el
crecimiento y su rol en muchos
casos es desconocido. En general,
compuestos de bajo peso
molecular y se acumulan durante
la fase estacionaria.
Ej: antibióticos

Metabolitos Primarios y
Secundarios
Sustrato de Sustrato de Sustrato de
crecimiento crecimiento crecimiento
Metabolito Células Metabolito Células Metabolito

Células Primario Primario
Primario
Las células y el metabolito se producen

Metabolito
más o menos simultáneamente Metabolito
Secundario
Secundario
Después de producidas las células y el Después de producidas las células el

metabolito primario, las células sustrato se convierte en un metabolito
convierten el metabolito primario en uno secundario durante un posterior
secundario crecimiento

Características del metabolismo
primario y secundario
• Metabolismo 1° similar en distintos
microorganismos.
• Metabolitos 2° moléculas orgánicas complejas que
requieren muchos pasos (reacciones enzimáticas)
para su síntesis.
• Moléculas precursoras de metabolitos 2° vienen de
las vías biosintéticas primarias.
• Enzimas de vías del metabolismo 2° reguladas
separadamente de las del metabolismo 1°.
Características de los metabolitos
secundarios
• No son esenciales para el crecimiento o la reproducción
• Formación depende de las condiciones y del medio de
cultivo. Represión frecuente.
• Específicos de un grupo de organismos
• Frecuentemente se producen como un grupo de estructuras
relacionadas
• Es posible incrementar su producción enormemente
(sobreproducción) a diferencia de los primarios
• Producidos durante fase estacionaria
• Son los más importantes desde el punto de vista industrial

Metabolito 1°
Metabolito 2°

BIOTECNOLOGIA MICROBIANA
Tres categorías de productos microbianos de

importancia industrial
• Metabolitos primarios
• Metabolitos secundarios
• Enzimas
Enzimas y extremófilos

Enzimas . Biocatalizadores. Convierten
sustratos en productos sin sufrir
cambio alguno.
. Casi todas las reacciones en

mundo viviente son catalizadas y
controladas por enzimas.
. Especificidad. Cada reacción qca.

catalizada por su propia enzima
. Aumentan velocidad de reacción.

Actúan a T moderada, pH y p
. Capaces de discriminar entre

sustratos similares
. NO SUFREN CAMBIO Y NO
. Catalizan reacciones
SE CONSUMEN EN EL estereoespecíficas.
PROCESO
. BIODEGRADABLES Y NO . Pueden funcionar in vitro
TÓXICAS
EFECTO DEL AMBIENTE SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
. Concentración de sustrato
. pH
.T
óptimo pH
Temperatura

Distribución de enzimas por áreas
AREAS PORCENTAJE Aplicaciones
ESPECÍFICAS
Alimentos 41 Clarificación de vino y jugos,
cervezas, pan y galletas,
edulcorantes,lacteos, suplemento de
alimentos de animales
Detergentes 34 Limpieza de ropa, lentes de contacto
Textiles 11 Desengomado de telas, teminación

jeans
Cueros 3 Ablandamiento
Pasta/papel 1 Blanqueamiento de pulpa de celulosa
Otras aplicaciones 6 Reactivos para análisis,

manipulación genética,
bioconversiones, trastornos
digestivos, inflamaciones,disolventes
de coágulos

Animales, plantas y
microorganismos como fuentes de
enzimas
Animales
Descubrimiento de enzimas digestivas

siglo XIX.
Desarrollo de métodos para obtención de
enzimas de matanza de animales.
Pepsina del estómago de cerdos y

del cuajo del estómago de ganado
bovino
Cócteles de enzimas con tripsina,
quimiotripsina, lipasas y amilasas del
páncreas de cerdo.

Animales, plantas y
microorganismos como fuentes de
enzimas
Vegetales
Fuentes potenciales de enzimas a escala industrial.
Granos, remojar y germinar, malta que contiene
amilasas y proteasas usadas en la producción de
cerveza y la destilación de bebidas alcohólicas.
Siglo XIX, métodos simples para obtención de

grandes cantidades de proteasas de la savia de
plantas tropicales.

Vegetales
Papaina y quimiopapaina del árbol de la
papaya. Similar a la pepsina
Ablandadores de carne, digestión y
limpieza de lentes de contacto.
Ficina de higueras. Enzima proteolítica
Bromelaina del tallo de la planta de la

piña. Enzima proteolítica

Animales, plantas y microorganismos
como fuentes de enzimas
Suministro y concentración de las enzimas
varía con las estaciones del año.
Requerimiento de grandes cantidades de

plantas como material. Procesamiento de
grandes cantidades es un trabajo muy
duro.
Desventajas similares para la obtención a

partir de animales

Animales, plantas y microorganismos como
fuentes de enzimas
X X
Microorganismos
Fácil manejo
Alto rendimiento
Estabilidad

LA MAYORIA DE LAS ENZIMAS DE IMPORTANCIA INDUSTRIAL
PODRIAN PRODUCIRSE A PARTIR DE MICROORGANISMOS
Microorganismos como fuentes de enzimas
Producción de grandes cantidades con bajo

costo
No afectada por las estaciones del año.

Proceso de extracción más simple y menos
contaminante.
Uso de mutantes y procesos de selección que

aumentan la producción. “Enzimas hechas a medida”
a través de ingeniería genética y diseño de
proteínas
1950 gran desarrollo de procesos sumergidos

Microorganismos como fuentes de
enzimas
Enzimas hidrolíticas simples como:

proteasas, amilasas, pectinasas
Degradan polímeros naturales
Enzimas extracelulares
Poco específicas
Fácil extracción. Bajo costo

Selección de organismos productores de enzimas
Empírica
Muestras de las más diversas fuentes
Cultivos de enriquecimiento-aislamiento de microorganismo

Por propiedad intelectual no siempre están caracterizados
taxonómicamente. Patentes para proteger los microorganismos.
Ubicación taxonómica dada a conocer.
Secuencia del 16S rRNA de productores de enzimas.

Secuencia de enzimas (DNA y aa) es lo que se patenta.
Producción de Enzimas: Productores naturales
Otro hospedador: enzimas recombinantes

Gram positivos
Bacillus alta capacidad secretora

Exoenzimas
Streptomyces
glucosa isomerasa citoplasmática
Gram negativos
Pseudomonas lipasas

Enzimas
Clásicamente utilizadas son las hidrolíticas:
• Proteasas
• Amilasas
• Lipasas
• Poco requerimiento de cofactores las hace adecuadas

para múltiples aplicaciones
• Exoenzimas: Son separadas directamente del caldo de
cultivo (durante fermentación) y formuladas en alta
concentración
• Solubles en agua

Enzimas intracelulares
Glucosa oxidasa conservación de carne
Asparraginasa terapia del cáncer
Penicilina acilasa conversión de antibióticos
Glucosa isomerasa jarabe de fructosa

Proteasas-Aplicaciones de las Enzimas
Bacterianas
Enzima Fuente Aplicación industrial Industria
Proteasa Bacterias Eliminación de manchas Limpieza en seco
Bacterias Ablandador de la carne Alimenticia
Bacterias Limpieza de las heridas Medicina
Bacterias Eliminación de revestimientos Textil
Hongos Pan Panadera
Bacterias Detergente doméstico Lavandería

Proteasas-Aplicaciones de las Enzimas Bacterianas
Hidrolizan uniones peptídicas
Subtilisinas. Serina proteasas Bacillus subtilis 1959
Bacillus licheniformis
1969 reacciones alérgicas por jabones en polvo.

Solucionadas posteriormente por encapsulamiento de
enzimas
Búsqueda de enzimas que trabajen a pH alcalinos
Bacillus amyloliquefaciens

Proteasas
Suavizan el cuero
Son altamente efectivas en la producción
de cuero. Después de remover el pelo y
antes de curtir, debe ser suavizado por
un proceso que involucra bacterias que
producen proteasas (“bateado”).
Hornear pan
El gluten se degrada por proteasas obtenidas
de hongos para hacer la masa más fácil de
manejar y aumenta su capacidad para retener
burbujas de aire. Se une parcialmente al agua y
tiene consistencia de gel. Las proteasas
degradan las proteínas pegajosas (gluten) en la
masa.

Amilasas
Degradación del polisacárido almidón.
Almidón (amilosa y amilopectina)
Compuesto de almacenamiento de
energía en plantas (maíz, arroz, papa,
trigo).
Fuente de nutrición muy importante

en animales y humanos (70-80%).
Últimos 20 años las amilasas han Amilosa (α 1,4)
reemplazado la hidrólisis ácida.
a-amilasa de Bacillus: endoamilasas
Bacillus amyloliquefasciens
Amilopectina
CONCEPTOS 2010-Nancy I. López (Ramificado α 1,6 cada 24-30
glucosa)
Amilasa- Aplicaciones de las Enzimas Bacterianas
Amilasa Hongos Pan Panadera
Bacterias Revestimientos amiláceos Papelera
Hongos y Fabricación de jarabe y Alimentaria
Bacterias glucosa
Bacterias Almidonado en frío de la ropa Almidón
Hongos Ayuda digestiva Farmacéutica

Bacterias Eliminación de revestimientos Textil
Bacterias Eliminación de manchas; Lavandería

detergentes
Proceso: Calentamiento previo de gránulos de almidón

Enzimas que toleran ese paso
Bacillus licheniformis
B. stearothermophilus
Buscar combinación de mejores propiedades de cada enzima

Amilasas
Hornear pan
Aceleran la degradación del almidón, y así
aumenta el contenido de azúcar en la masa,
acelerando el proceso de fermentación.
El volumen del pan preparado con enzimas
aumenta.
Producción de Cerveza
Se añaden enzimas, amilasas, glucanasas y
proteasas, de hongos y bacterias. Transforman el
almidón a azúcares que sufren fermentación
alcohólica por levaduras.
Principalmente de hongos pero pueden participar bacterias
Amilasas
Desengomado
Desengomado.
Las amilasas eliminan la goma protectora basada en
almidón, para hacer la tela elástica.
Antes se hacía con amilasas obtenidas de malta o

de páncreas de animales, pero hoy en día se
obtienen de bacterias.
Enzimas resistentes a altas temperaturas

para acelerar el proceso.

Lipasas-Aplicaciones de las Enzimas Bacterianas
Criterios de selección:
• Amplio rango sobre una variedad de grasas y lípidos
• Estabilidad a pH alcalino
• Solubilidad en detergente
• Compatibilidad con las proteasas presentes (no fácilmente degradable)
• Facilidad de producción
Pseudomonas spp.
Pseudomonas alcaligenes 1995
Maquinaria de secreción

Celulasas-Aplicaciones de las Enzimas Bacterianas
Capaces de hidrolizar la unión 1,4 ß-D-glucosídica en celulosa
Endoglucanasas
Exoglucanasas
ß-Glucosidasas
Bacillus subtilis
Thermomonospora fusca
Hemicelulosa
Celulosa
Lignina
Lignocelulosa sustrato de
CONCEPTOS 2010-Nancy I. López interés en biotecnología
Detergentes biológicos
La aplicación más importante de las enzimas
hidrolíticas
Manchas:
- Proteínas difíciles de remover, no se disuelven

fácilmente en agua. A altas temperaturas, se une
fuertemente a las fibras textiles.
-Polvo, hollín, pigmentos y materia orgánica. Las
grasas y las proteínas actúan como pegamento.
Detergentes sueltan la grasa de la tela, las proteínas

permanecen en el material.
Actividad óptima 50-60º C. No necesita hervir.
Proteasas, lipasas, celulasas y amilasas en la
eliminación enzimática de manchas.
Enzimas pancreáticas poco estables y

muy caras.
Producción a gran escala de detergentes
biológicos 1960.
Descubrimiento de la subtilisina de
Bacillus licheniformis.
Activa bajo condiciones alcalinas. Proteasas
actividad óptima durante el proceso de lavado.
Poca especificidad. Omnívoros. Degradan
proteínas en aminoácidos y péptidos de cadena
corta. Las proteínas son desprendidas de las fibras
textiles y eliminadas.


Enzimas Microbianas y sus aplicaciones

Invertasa Hongos Relleno de caramelos Confitería
Glucosa Oxidasa Hongos Eliminación de glucosa y Alimentaria
oxígeno, papeles para pruebas Farmacéutica
de la diabetes
Glucosa Isomerasa Bacterias Jarabe de cereales rico en Bebidas
glucosa refrescantes
Pectinasa Hongos Prensado, clarificación del vino Zumos de frutas
Renina Hongos Coagulación de la leche Quesera
Lactasa Hongos Degradar la lactosa a glucosa y Lechería, alimentos
galactosa
DNA polimerasa Bacterias; Replicación del DNA por PCR Investigación
Archaea biológica y forense.

Pectinasas
Producción de zumo de frutas
Al prensar fruta y vegetales para la
obtención de jugo, las pectinas de alto peso
molecular reducen la producción.
Pectinasas procedentes de cultivos

sumergidos de Aspergillus y Rhizopus.
Se pica la fruta y se añaden pectinasas
para degradar las pectinas de cadena
larga. Se reduce la viscosidad del zumo,
facilitando la filtración y se obtiene
más cantidad. Alimentación de bebés
maceran las fruta y los vegetales para
hacerlos más suaves y fáciles de comer.

Isomerasas-Aplicaciones de las Enzimas Bacterianas
Mayor parte de glucosa obtenida de amilasas convertido en

Jarabe de fructosa
Glucosa isomerasa
Streptomyces rubiginosis
Actinoplanes missourensis
Ampullariella spp.
Enzima no se secreta. Intracelular. Mayor costo de producción
Actinoplanes missourensis
Mutanes con mayor actividad

Transformaciones enzimáticas del almidón
Amilasas y glucoamilasas en industria
alimentaria.
Jarabe de cereales rico en fructosa
Reacción de clarificación: α-amilasa

(almidón acortado) Bacillus
Sacarificación: glucoamilasa (genera

glucosa) Saccharomyces cerevisiae
Isomerización: glucosa isomerasa (glucosa

en fructosa)
Enzimas utilizadas en el procesamiento de alimentos
Industria Enzimas
Cervecera α-amilasa,ß-amilasa, proteasa,

papaina, amiloglucosidasa, xilanasa
Lechera Quimosinas animales/microbianas,
lactasa, lipasa, lisozima
Panadera α-amilasa, proteasa, xilanasa,
fosfolipasa A y D, lipoxigenasa
Procesamiento de frutas y verduras Pectinesterasa, poligalacturanasa,
pectin-liasa, hemicelulasas
Almidón y azúcar α-amilasa,ß-amilasa, glucoamilasa,
xilanasa, pululanasa, isomerasa,
oligoamilasas

Productos Químicos
Penicilin amidasa/Penicilin acilasa: usada para producir
intermediarios para la obtención de penicilinas semisintéticas.
E. coli
Kluyvera citrophila
Alcaligenes faecalis
Pseudomonas

MERCADO
Cantidad de enzimas requerida: bastante pequeña
Procesos automáticos
Enzimas inmovilizadas
Miniaturización del sistema: microchip
Aunque enzima sea esencial cantidad necesaria en mercado

pequeña
Ej: Aditivos en masa 1-2Kg/1000 Kg de sustrato.
Formulaciones líquidas. No purificadas
Diagnóstico µg-mg. Alto grado de pureza.
Dominado por Holanda y Dinamarca.

PRODUCCIÓN DE ENZIMAS
Alto rendimiento
Estabilidad
Independencia de inductores o cofactores
Buena recuperación
Suprimir características
no deseadas
Olor
Color
Metabolitos no deseados

Biorreactores para producción
de enzimas
10-50 m3
30-150 h
Pasos de extracción y purificación

.Importantes en el costo del proceso
.Enzimas microbianas utilizadas en
medicina y alimentación especificaciones
estrictas en cuanto a toxicidad
Bajo potencial alergénico
Libre de microorganismos
. Certificado de material seguro
. Responsabilidad sobre el fabricante
Enzimas Solución
Inmovilizadas
Enzimas en solución
Se emplean grandes volúmenes (ton), deben ser de bajo costo
Su purificación debe ser sencilla o no interferir con el producto
Ventajas:
-pueden seleccionarse de alta o baja especificidad
-generan pocos o ningún producto secundario
-actividad óptima en condiciones de reacción
Desventajas:
-costo generalmente alto
-sustratos poco solubles son difíciles de procesar
-baja estabilidad
-problemas de inhibición
Ventajas:
- se puede reutilizar la enzima
- no requiere proceso de recuperación y separación de la enzima
del producto.
- puede proveer un ambiente más adecuado para la actividad
catalítica de la enzima.
- Gralmente. mayor pureza del producto
-Menores problemas de disposición de efluentes
Desventajas:
- puede haber drenado de la enzima a la solución
- limitaciones significativas por restricciones a la transferencia
de masa
- la actividad y la estabilidad de la enzima se puede reducir
- no se pueden controlar las condiciones en el microambiente que
rodea a la enzima
Facilita reacción enzimática en producción a gran escala
Estabiliza las enzimas evitando desnaturalización
Celulosas modificadas
Pueden recuperarse y reutilizarse Carbón activado
Arcillas minerales
1.Unión: a soporte Óxidos de aluminio
Bolitas de vidrio
Adsorción-enlace iónico-enlace covalente.
2. Polimerización. Con agente polimerizante.

Ej. Glutaraldehido. Mantener actividad de la
enzima.
3. Inclusión enzimática: en membrana

semipermeable. Microcápsulas, geles,
polímeros fibrosos como acetato de celulosa.

L- aminoácidos
Enzimas inmovilizadas Acidos orgánicos
Jarabe de fructosa

Extremófilos y biotecnología
¿Porqué estudiar extremófilos?
• Fisiología adaptada al medio en el que viven. En
biotecnología: rastreo de moléculas con propiedades
inusuales.

Extremófilos
A)Temperatura
- Psicrófilos
- Mesófilos
- Termófilo
- Hipertermófilos
B) Acidez y alcalinidad
– Acidófilos
– Alcalófilos
C) Disponibilidad de agua
- Sal: Halófilos y Halófilos
extremos
- Azúcar: Osmófilos
- Secos: Xerófilos
Relación de la temperatura y
velocidad de crecimiento

Almidón oligosacáridos

Microorganismos termófilos e
hipertermófilos

Microorganismos de hielo del
Antártida
Alga de la nieve
Microfotografía de contraste d fases de
microorganismos fototróficos de la
muestra anterior.
Núcleo de agua de mar (Diatomeas o algas verdes)
permanentemente congelada.
La coloración densa es debida a
microorganismos
Crecimiento de una cianobacteria termófila
en un arroyo caliente en el parque
nacional de Yellowstone

Enzimas termófilas
Catalizan reacciones a temperaturas elevadas
Por ser más estables, vida media de preparaciones más prolongada
DNA polimerasa de Thermus aquaticus (Bacteria – Clase Deinococcus)
.Taq polimerasa PCR Amplificación de secuencias específicas de DNA
. Vent de Thermococcus litoralis (Archaea)
. Pfu DNA polimerasa enzima encontrada en Pyrococcus furiosus
(Archaea).
Stratagene 1991. Termoestabilidad superior comparada con otras
polimerasas
Alta fidelidad. Algo más lenta
Stratagene Pfu Ultra alta fidelidad. Menor tasa de error de cualquier
enzima de PCR (only 1 error per 2.5 million bases)
Usar combinadas
. KOD DNA polymerase from the thermophile Thermococcus
kodakaraensis (Archaea). Alta fidelidad: actividad exonucleasa 3´-5´.
Fragmentos de hasta 6 kb

Microorganismos
Acidófilos y
Alcalófilos

Microorganismos
y Actividad del Agua
• Halófilos: crecen en altas concentraciones
de sal
– Discretos: 1-6% NaCl
– Moderados: 6-15% NaCl
– Extremos: 15-30% NaCl
• Osmófilos: crecen en altas concentraciones

de azúcar
• Xerófilos: crecen en ambientes muy secos


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CONCEPTOS Y TECNICAS DE BIOTECNOLOGÍA I

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Nueva Biotecnología: uso de tecnología de DNA para construir nuevas

Microbiología aplicada sin la básica es limitada

El mayor impulso de la microbiología básica es la solución de problemas

Roja: Aplicada a medicina e industria farmacéutica

Verde: Aplicada a agricultura

Azul: Biotecnología marina

Blanca: Aplicada a procesos industriales y al ambiente

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

• Cerveza, vinagre, vino y pan. Ceveza desde 6000 a.C.

• Agente causal de la fermentación: sentó bases de la microbiología aplicada.

• Fines de siglo XIX procesos abiertos

• Penicilina 1945. Desafío de producción a gran escala

• 1979 Ingeniería genética. Microorganismos recombinantes

Segunda mitad del siglo XX

Grandes cambios relacionados principalmente con el

Productos microbianos impacto en la economía de los países (PBI)

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Producción a pequeña escala

Producción a gran escala. Fermentadores

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

. Acido propiónico: poco común. Formación

Productos Productos neutros o

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Embden- Heteroláctica Vía de Entner

Bacillus subtilis major minor -

Vibrio cholerae minor - major

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Pathway Key enzyme Ethanol Lactic Acid CO2 ATP

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Tres categorías de productos microbianos de

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Ej: aa, nucleótidos, azúcares,

Normalmente se producen en gran

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Metabolito Células Metabolito Células Metabolito

Las células y el metabolito se producen

Después de producidas las células y el Después de producidas las células el

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

Tres categorías de productos microbianos de

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

. Casi todas las reacciones en

. Especificidad. Cada reacción qca.

. Aumentan velocidad de reacción.

. Capaces de discriminar entre

CONCEPTOS 2010-Nancy I. López

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