Instrumentación en espectrofotometria UV­visible.

● Principio   de   los   aparatos:   fuentes,   monocromadores,   recipientes   para   muestras,   celdas   fotoeléctricas, 
amplificadores.
● Espectrofotómetros de haz simple y doble haz.
● Precisión en espectrofotometría. Métodos diferenciales de expansión de la escala.
El científico que requiere de las medidas de absorción en la regiones ultravioleta y visible   disponen de cien o más 
modelos sencillos y baratos (unos cientos de dólares); otros son equipos  complejos cuyo precio asciende y supera los 
30,000   dólares.   Estos   últimos   se   han   desarrollado   para   realizar   tareas   difíciles,   que   requieren   mucho   tiempo,   o 
imposibles de realizar con los equipos mas sencillos.

Componentes   de   los   instrumentos.  Los   instrumentos   están   compuestos   por   algunos   o   todos   los   siguientes 
componentes: (1) fuentes, (2) selectores de longitud de onda, (3) recipientes para la muestra, (4) detectores de radiación 
y (5) procesadores de señal y dispositivos de lectura.
1. Fuentes.  Cuando se trata de medidas de absorción molecular es necesario disponer de una fuente continua 
cuya potencia no cambie bruscamente en un intervalo considerable de longitudes de onda. En este caso las 
fuentes láser no son utilizadas en instrumentos comerciales ya que son costosas.
Lámparas   de   deuterio   e   hidrógeno.  La   excitación   eléctrica   del   deuterio   o   hidrógeno   a   baja   presión 
(aproximadamente 0.2 a 0.5torr) produce un espectro continuo en la región ultravioleta. El mecanismo por el 
cual se produce el espectro continuo requiere la formación inicial de una especie molecular excitada seguida de 
la disociación de la molécula excitada para dar dos especies atómicas más un fotón ultravioleta. Las reacciones 
para el deuterio son
D2  +  Ee  →  D2*  →  D'  +  D''  +  hν
donde Ee es la energía eléctrica absorbida por la molécula y D2* es la molécula de deuterio excitada. La energía 
del proceso global puede representarse mediante la ecuación 
Ee  =  ED2*  = ED'  +  ED''  +  hν
Aquí, ED2* es la energía cuantizada fija de D2* mientras ED' y ED'' son las energías cinéticas de los dos átomos de 
deuterio. La suma de las dos últimas puede variar continuamente desde cero hasta ED2*. Por ello, la energía y la 
frecuencia del fotón también puede variar continuamente. Es decir, cuando las energías cinéticas son pequeñas 
hν  será   grande,   y   viceversa.   La   consecuencia   es   un   verdadero   espectro  continuo   desde   aproximadamente 
160nm hasta el comienzo de la región visible.
Las lámparas más modernas de este tipo contienen deuterio y son de bajo voltaje, en ellas se forma un arco 
entre   un  filamento  caliente   recubierto   de   óxido   y   un  electrodo  metálico.   El   filamento   caliente   suministra 
electrones   para   mantener   una   corriente   continua   cuando   se   aplica   un   potencial   de   aprox.   40V   CD;   para 
intensidades contantes es necesario una fuente de alimentación estabilizada.
Una característica importante de las lámparas de deuterio es que produce una esfera de radiación intensa algo 
mas grande que la del hidrógeno entre los dos electrodos, lo cual intensifica el brillo de tres a cinco veces, esto 
justifica el extenso uso de las lámparas de deuterio. Ambas lámparas producen un espectro continuo útil para la 
región comprendida entre 160 y 360nm. A longitudes de onda más largas (>380nm), las lámparas producen 
líneas de emisión que se superponen sobre el espectro continuo. Estas líneas pueden ser un problema para 
algunas aplicaciones (mediciones en el visible) pero resultan útiles para calibrar los instrumentos.

Lámparas de filamento de wolframio o de filamento incandescente. La fuente más común de radiación visible y del 
infrarrojo (350 a 2,500 nm) es la lámpara de filamento de wolframio. La distribución de energía de esta fuente 
se aproxima a la del cuerpo negro y, por ello, depende de la temperatura. En esas lámparas se   calienta un 
filamento del alambre hasta la incandescencia por medio de corriente eléctrica. El filamento se encuentra en un 
bulbo de vidrio herméticamente sellado al vacío o con gas inerte. Los filamentos generalmente se enrollan para 
aumentar su emisividad, eficacia y luminancia media. Las lámparas incandescentes son unidades robustas, de 
bajo costo y lo suficientemente brillantes para casi todos los trabajos de absorción en las regiones visible y del 
ultravioleta cercano.
Las   lámparas   de   wolframio   y   halógeno   representan   una   clase   especial   de   lámparas   incandescentes   que 
contienen todo añadido a los gases normales de relleno. En la envolvente se utiliza el cuarzo para tolerar las 
altas temperaturas de operación de la lámpara (2850 K). El yodo se combina químicamente en las paredes del 
 bulbo con el wolframio sublimado desde el filamento. El diyoduro de wolframio (WI2) resultante regresa al 
filamento caliente, en donde se descompone redepositando wolframio elemental. El ciclo es continuamente 
repetido manteniendo limpio el bulbo. Estas lámparas conservan más del 90% de su luz inicial a lo largo de su 
vida útil. La lámpara de wolframio emite mucha de su energía en el infrarrojo cercano, con un máximo en 
1000nm, y cae rápidamente en la región ultravioleta a 1/100 de ese valor a 300nm. Sólo 15% de la energía 
radiante cae en la región visible. A menudo se inserta un filtro endotérmico o un espejo dicroico frío entre la 
lámpara y el portamuestra para eliminar la radiación infrarroja sin disminuir notablemente la energía radiante 
de   menor   longitud   de   onda.   las   lámparas   incandescentes   son   fuentes   muy   importantes   para   aplicaciones 
espectrométricas debido a su excelente estabilidad, más que debido a su radiancia espectral.
Lamparas de arco de xenón.  Estas lámparas producen una radiación intensa como consecuencia     del paso de 
corriente a través de una atmósfera de xenón. El espectro es continuo en un   intervalo comprendido entre 
aproximadamente   200   y   1000nm,   con   el   máximo   de   intensidad   a   aproximadamente   500nm.   En   algunos 
instrumentos, la lámpara funciona de forma intermitente mediante descargas regulares que proceden de un 
condensador; se obtienen altas intensidades.

2. Selectores   de   longitud   de   onda.  Para  la   mayoría   de   análisis   espectroscópicos,  se   necesita   una   radiación 
constituida por un grupo limitado, estrecho y continuo de longitudes de onda denominado banda. Un ancho de 
banda estrecho aumenta la sensibilidad de las medidas de absorbancia y con frecuencia es un requisito para 
obtener una relación lineal entre la señal óptica y la concentración. Idealmente, la señal de salida de un selector 
de longitud de onda correspondería a una radiación de una única longitud o frecuencia. No existe selector 
alguno que se aproxime al caso ideal; en su lugar, lo que se obtiene es una banda. 

En este caso, se representa el tanto por ciento de radiación incidente de una determinada longitud de onda que 
es transmitida por el selector en función de la longitud de onda. El ancho de la banda efectiva es una medida 
inversa de la calidad del dispositivo, siendo la resolución mejor cuanto más estrecha es el ancho de banda. 
Existen dos clases de selectores de longitud de onda, los filtros y los monocromadores.
Filtros.  Se emplean dos tipos de filtros para la selección de la longitud de onda: los filtros de interferencia 
(llamados en ocasiones filtros de Fabry­Perot) y filtros de absorción. Estos últimos se limitan a la región 
visible del espectro; mientras que los filtros de interferencia operan en la región ultravioleta, visible y buena 
parte del infrarrojo.
Filtros de interferencia. Como su nombre lo indica se fundamentan en las interferencias ópticas para producir 
bandas estrechas de radiación . Consta de un dieléctrico transparente (con frecuencia fluoruro de calcio o de 
magnesio) que ocupa el espacio entre dos películas metálicas semitransparentes. (con frecuencia plata). Esta 
disposición se coloca entre dos placas de vidrio u otro material transparente . El espesor de la capa dieléctrica 
se controla cuidadosamente para tener solamente una, dos o tres medias ondas (se denominan como filtros de 
primero, segundo y tercer orden) y determinan la longitud de onda de la radiación transmitida. Cuando un haz 
de radiación colimada incide en esta disposición, una fracción atraviesa la primera capa metálica, mientras que 
el resto se refleja. La parte que ha pasado sufre una partición similar cuando incide en la segunda película 
metálica. Si la parte reflejada de esta segunda interacción es de la longitud de onda adecuada, se refleja 
parcialmente desde la cara interna de la primera capa en fase con la luz incidente de la misma longitud de 
onda.   El   resultado   es   que   se   refuerza   esta   determinada   longitud,   mientras   que   la   mayoría   de   las   demás 
longitudes, que no están en fase, sufren una interferencia destructiva. La expresión para las longitudes de onda 
centrales en las que ocurrirá el refuerzo total es:
2nb
=
m
donde m es el número de orden, n es el índice de refracción (también puede expresarse como η) y b es es el 
espesor de la capa (también puede encontrarse como t). Para este tipo de filtros, el ancho de banda es de 10­15 
nm, o sea el ancho total a la mitad del máximo y la transmisión máxima

A medida que se incrementa el orden del filtro, el paso de banda y la anchura de ésta se acortan. 
La longitud de onda del centro de la banda, o sea la longitud de onda nominal, varía con la temperatura del 
filtro y con el ángulo de incidencia de la radiación por filtrar. La transmisión de la banda se desplaza a mayores 
longitudes de onda, cuando se aumenta la temperatura en la mayoría de los filtros. Al aumentar el ángulo de 
incidencia, la longitud de onda del centro de la banda se desplaza hacia longitudes de onda más cortas.
Nota. Se denomina luz colimada a la luz cuyos rayos son paralelos entre sí, lo que se puede lograr de diferentes 
formas, siendo la más sencilla hacerla incidir en un espejo cóncavo desde una fuente situada en el foco.
Filtros de cuña. Este filtro consta de un par de placas parcialmente transparentes, especulares, separadas por una 
capa   de   un   material   dieléctrico   en   forma   de   cuña.   La   longitud   de   la   placas   es   de   50   a   200   nm 
aproximadamente. La radiación transmitida varía en longitud de onda continuamente de un extremo a otro a 
medida que lo hace el espesor de la cuña. Si se escoge la posición lineal adecuada a lo largo de la cuña, se 
puede aislar un ancho de banda de unos 20 nm.
Se disponen de cuñas de interferencia para la región del visible (400 a 700 nm), para la región del infrarrojo 
cercano (1000 a 2000 nm) y para varias zonas de la región del infrarrojo (2500 a 14500 nm)

Filtros de absorción. Estos filtros que en general son más baratos que los filtros de interferencia, se han utilizado 
mucho para la selección de bandas en la región visible. Estos filtros funcionan absorbiendo ciertas zonas del 
espectro. El tipo más habitual es un vidrio coloreado o una suspensión de un colorante en gelatina que de 
coloca entre dos placas de vidrio. El primero tiene mayor estabilidad térmica. 
Los filtros de absorción tienen anchuras de banda efectivas que oscilan entre 30 y 250 nm. Los filtros que 
proporcionan las anchuras de banda más estrechas también absorben una fracción significativa de la radiación 
deseada y pueden tener una transmitancia de 10% o menos en sus picos de banda. En el comercio existen 
filtros   de   vidrio   con   máximos   de   transmitancia   en   toda   la   región   del   visible.   Los   filtros   de   vidrio   son 
ampliamente utilizados en los equipos automáticos de análisis químico y en colorimetría. 
Los filtros de corte y los de corte agudo son ampliamente utilizados como filtros de bloqueo para suprimir 
algunas órdenes espectrales indeseables, que resultan de los filtros de interferencia o de las redes de difracción. 
Unos filtros de corte agudo permiten el paso de longitudes de onda grandes, o sea las series roja y amarilla. 
Otros filtros son para longitudes de onda para permitir el paso de longitudes de onda pequeñas, o sea, permiten 
el paso de las series azul y verde. Los filtros de absorción de vidrio combinados se construyen con dos filtros 
de corte agudo.   La separación espectral entre el 50% de los puntos de corte y corte agudo en la curva de 
transmitancia contra longitud de onda, varía de 20 a70nm. No obstante que estos filtros no alcanzan el paso de 
banda tan estrecho y alta transmisión típica de los filtros de interferencia tienen la ventaja de ser relativamente 
insensibles al ángulo de entrada.

Fuente: D. A. Skoog, F. J. Holler, S. R. Crouch, Principios de análisis instrumental, 6ta edición, Cengage 
Learning, México, 2008.