Extracción de ADN en plantas

Para la extracción de ADN en plantas hemos usado con éxito los siguientes protocolos, que
son modificados del protocolo original conocido como DOYLE (Doyle y Doyle, 1987). Con
estos protocolos hemos extraído ADN de varios grupos de plantas como agaváceas,
coníferas, crasuláceas, cactáceas, leguminosas, entre otras. El protocolo básico es el
siguiente:

Método DOYLE (1987)

1. En un mortero moler alrededor de 1 g de tejido con nitrógeno líquido hasta obtener un

polvo fino.
2. Agregar 1 ml de buffer CTAB 2X y seguir moliendo. Recuperar en un microtubo de 1.5
ml.
3. Centrifugar a 8 000 xg durante 8 min. a 4°C.
4. Eliminar el sobrenadante y resuspender con 600 µl de CTAB 2X.
5. Incubar a 60ºC durante 10 min.
6. Agregar 600 µl de cloroformo: octanol 24:1, agitar hasta homogeneizar.
7. Centrifugar a 5 000 xg durante 12 min. a 4°C (o hasta que le sobrenadante quede
transparente).
8. Trasladar el sobrenadante a un tubo nuevo, cuidando de no tomar la interfase.
9. Agregar 2/3 del volumen final de isopropanol frío para precipitar el ADN.
10. Dejar reposar durante la noche a -20°C.
11. Centrifugar a 8000 xg durante 5 min a 4°C. Eliminar perfectamente el sobrenadante.
12. Limpiar el ADN agregando 1 ml de etanol 70% frío y centrifugar a 7 000 xg durante 5
min.
13. Eliminar el sobrenadante y resuspender con 100 µl de buffer TE.

Este protocolo es eficiente para la extracción de ADN de plantas que no producen

compuestos secundarios o gran cantidad de polisacáridos.

Buffer de extracción CTAB 2X

Tris-HCl 100 mM pH8

NaCl 1.4 M
EDTA 20 mM pH8
CTAB 2%
b-mercaptoetanol 0.3% (no agregar este reactivo hasta el momento de usar el buffer)

Fuente: Ecologia molecular (2007). Luis E. Eguiarte, Valeria Souza, Xitlali Aguirre
(Compiladores). Mexico 591p.