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Curso Validación de Métodos Analíticos Con Formulas PDF
Curso Validación de Métodos Analíticos Con Formulas PDF
ANALÍTICOS, FISICOQUÍMICOS Y
MICROBIOLÓGICOS
1
VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS
I. GENERALIDADES
3
¿¿VALIDACIÓN??
¿¿
¿Cuál es el propósito de
la validación analítica?
y La
L validación
lid ió i li
implica l
la d
demostración
t ió d
de l
la
determinación de las fuentes de variabilidad y del
error sistemático y al azar de un procedimiento,
procedimiento no
sólo dentro de la calibración sino en el análisis de
muestras reales.
2. Métodos No Normalizados:
Método analítico desarrollado por
un tercero o que ha sido adaptado
por el laboratorio a partir de un
método normalizado. (Ref. ILAC-
G18).
G18)
NOTA: El desarrollo del método,
asíí como su adaptación,
d ió incluyen
i l l
la
etapa de su validación.
3. Métodos Desarrollados p
por
el Laboratorio:
Método analítico que no se
encuentra en normas u otras
colecciones de métodos, ni en
publicaciones de terceros,
habiendo sido desarrollado por
el propio laboratorio.
laboratorio
NOTA: El desarrollo del método
incluye la etapa de su validación.
validación
La val
validación
dac ón de los métodos de ensayo debe
debe:
• Reflejar las condiciones reales de ensayo.
• L
La extensión
xt sió ded lal validación
lid ió necesaria
s i dependerá
d p d á
del método y su aplicación.
• LLa debe
d b realizar
li p s n l calificado
personal lifi d para
p esa
s
actividad.
• En todos
t d s los
l s casos
c s s un parámetro
p rám tr para
p r la
l validación
v lid ción
de ensayos es la descripción del método de ensayo.
Es recomendable
d bl la
l utilización
tili ió de
d métodos
ét d s normalizados
li d s
cuando éstos estén disponibles y sean apropiados.
"El llaboratorio
b t i d b
debe confirmar
fi m que pueded aplicar
li
correctamente los métodos normalizados antes de las
pruebas o calibraciones. Si el método normalizado cambia,
p
la confirmación se repetirá ". USP
Licda. Lucrecia Arriola 16
16
¿Cómo se dividen los métodos según el
RTCA 11
RTCA. 03 39: 06 ?
11.03.39:
1. C
Categoría
í I
2 Categoría II
2.
3 Categoría III
3.
4.. Categoría
g IV
V
5. Métodos Microbiológicos
Son las
S l s propiedades,
i d d s características
t ísti s o capacidades
id d s
cuantificables del método que indican su grado de
calidad;
cal dad; incluyen
ncluyen exact
exactitud,
tud, efecto matr matricial,
c al,
repetibilidad, precisión intermedia, reproducibilidad,
especificidad, límite de detección, límite de
cuantificación,
tifi ió li
linealidad,
lid d rango, sensibilidad,
ibilid d
robustez, fortaleza y otras características
relacionadas con los resultados obtenidos por el
método.
y Hay
H 2 formas
f d determinar
de d t i l linealidad:
la li lid d
La curva de
L d calibración
lib ió se grafica
fi colocando
l d l
las
concentraciones de las soluciones en el eje horizontal (x)
y las respuestas
p del instrumento en el ejej vertical (y),
esta relación debe ser lineal con un coeficiente de
determinación (r2) de por lo menos 0.98. (Es preferible
0 99)
0.99). Los valores deben caer dentro de una zona
horizontal angosta, los que queden fuera no son
aceptables para ser incluidos en el intervalo normal de
t b j
trabajo.
En donde:
Licda. Lucrecia Arriola 59
LINEALIDAD
y CV menor o igual a 2.0% (desviación estándar relativa o
coeficiente de variación)
y r mayor o igual a 0.99 (el coeficiente de correlación es
una medida del grado de asociación entre las mediciones y
la concentración del analito)
y r2 mayor o igual a 0.98 (el coeficiente de determinación
mide la exactitud con la que se ajusta la curva de
regresión a los valores experimentales de y)
y b aproximadamente igual a 0 (intercepto de la línea)
y m igual a la sensibilidad del sistema (pendiente de la
línea)
y a) Procedimiento:
V ifi
y Verificar que ell método
ét d analítico
líti proporciona
i
linealidad, precisión y exactitud aceptables cuando
se aplica a muestras que contienen el analito en los
extremos y dentro del intervalo.
Límite de cuantificación
Aplicado a pruebas microbiológicas cuantitativas. El
número más bajo de microorganismos,
microorganismos dentro de
una variabilidad definida, que pueden ser contados
bajo las condiciones experimentales del método bajo
evaluación.
Licda. Lucrecia Arriola 68
VALIDACIÓN DE MÉTODOS
Ó
MICROBIOLÓGICOS
Cultivos de referencia
Termino colectivo para la cepa de referencia y los
stocks de referencia.
Material de referencia
Material suficientemente homogéneo y estable en
relación a una o más propiedades especificadas, el
cual ha sido establecido como idóneo para el uso
previsto, en un proceso de medición.
Especificidad (selectividad)
La habilidad del método para detectar el rango
requerido de microorganismos que podrían estar
presentes en la muestra.
i= n
s=
1
∑ ( xi - x )
2
n - 1 i=0
En donde: n es el número de valores
∑ (n − 1) s i ∂
1
sI =
2
N −k
i
i =1
(N − k )⋅ s 2
+ (k − 1) ⋅ s 2
s= I Z
N −1
En donde N es el número de repeticiones
k es el factor de cobertura, se utilizará k = 2, con un nivel
2
de confianza del 95%
si es el cuadrado de la desviación estándar
s
CV = ⋅100 %
x
1 k
sZ = ∑ ni ( xi − x )
2
k − 1 i =1
En donde
n es el número de valores
k es el factor de cobertura, se utilizará k = 2, con un nivel
de confianza del 95%
sZ es la
l ddesviación
i ió estándar
tá d entret llas repeticiones
ti i o series
i