TRANSFERENCIA DE CO2 1

Evaluación de la transferencia de CO2 al medio de cultivo en un biorreactor tipo

Spinner para el cultivo de fibroblastos
Laura K. Camacho (lkcamachof@unal.edu.co) y
Jorge L. Herrera (jolherreramo@unal.edu.co)1
Universidad Nacional de Colombia

Resumen

Los tejidos conectivos artificiales se pueden desarrollar por medio de biorreactores con
condiciones específicas. El biorreactor tipo Spinner para producir tejido conectivo artificial
mediante el cultivo de fibroblastos en soportes de colágeno I, desarrollado por El Grupo de
Trabajo en Ingeniería de Tejidos presentó deficiencias para regular el pH durante la
producción del tejido. Por tal razón, se investigó la influencia de la transferencia de masa del
𝐶𝑂2 en este biorreactor con un sistema de microdispersión (microburbujeo) en la regulación
y control de pH, para ello se estudió la eficiencia de este sistema de aireación, se calcularon
los KLa (Constante volumétrica de transferencia) para la transferencia de 𝑂2 y 𝐶𝑂2 en una
solución con 3.7 g/L de bicarbonato de sodio y 4.5 g/L de glucosa para simular el medio de
cultivo, se utilizó una velocidad de agitación de 60rpm y un flujo de aireación empleado de
0.250 vvm, se utilizaron dos mezclas de gas: (𝐶𝑂2 5%, 𝑂2 20%, 𝑁2 75%) y (𝐶𝑂2 10%, 𝑂2
20%, 𝑁2 70%). Los resultados señalan que el pH es el mismo a lo largo del biorreactor y
además indican que el pH de la solución en el biorreactor es igual al utilizar diferentes

1
Este artículo es resultado de un ejercicio de análisis y síntesis del trabajo de tesis titulado “Evaluación de la
transferencia de CO2 al medio de cultivo en un biorreactor tipo Spinner para el cultivo de fibroblastos”
realizado por Sergio Casadiegos. Cuya referencia completa es la siguiente:

Casadiegos Rincón, Sergio Alexander (2011) Evaluación de la transferencia de CO2 al medio de cultivo en un
biorreactor tipo Spinner para el cultivo de fibroblastos. Maestría thesis, Universidad Nacional de Colombia.

Los autores reconocen que todas las ideas presentadas en este artículo fueron tomadas de dicho trabajo de tesis
y sólo construyen este artículo como parte de las actividades propuestas en la Asignatura de Transferencia de
masas a cargo del profesor Gerardo Rodríguez (Universidad Nacional de Colombia- Sede Bogotá –
Departamento de Ingeniería Química). Es una actividad que de ningún modo pretende plagiar el trabajo
referenciado, es sólo un ejercicio de aproximación a la escritura académica.
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volúmenes de carga. Finalmente, el sistema de aireación por microdispersión de gas permite

regular el pH del medio de cultivo de forma más eficiente

Palabras clave: Biorreactor, tejido conectivo artificial, transferencia de masa,

microdispersion, constante volumétrica de transferencia.

Abstract

Artificial connective tissues can be developed by means of bioreactors with specific

conditions. The Spinner-type bioreactor to produce artificial connective tissue by fibroblast
culture on collagen I supports, developed by the Working Group on Tissue Engineering
presented deficiencies to regulate pH during tissue production. For this reason, the influence
of the mass transfer of 𝐶𝑂2 on this bioreactor was investigated with a micro-dispersion
(microbubble) system in the regulation and control of pH, for this the efficiency of this
aeration system was studied , KLa (volumetric transfer constant) was calculated for the
transfer of 𝑂2 and 𝐶𝑂2 in a solution with 3.7 g / L of sodium bicarbonate and 4.5 g / L of
glucose to simulate the cultivation medium, using a stirrer speed of 60rpm and an aeration
flow employed of 0.250 vvm, two gas mixtures were used: (𝐶𝑂2 5%, 𝑂2 20%,𝑁2 75%) and
(𝐶𝑂210%, 𝑂2 20%, 𝑁2 70%). The results indicate that the pH is the same throughout the
bioreactor and further indicate that the pH of the solution in the bioreactor is equal to that of
using different charge volumes. Finally, the gas microdispersion aeration system allows to
regulate the pH of the culture medium more efficiently than the surface aeration system, by
providing a faster transfer of 𝐶𝑂2from the gas phase to the liquid phase.

Keywords: Bioreactor, artificial connective tissue, mass transfer, microdispersion, volumetric

transfer constant
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Introducción
Los tejidos artificiales surgen como una alternativa factible al tratamiento de autoinjerto
debido a que este presenta problemas correspondientes a limitación por la cantidad de tejido
disponible para trasplantar y la morbilidad generada en el sitio donante. Sin embargo, el
desarrollo e implementación de estos en el país se ve reducida debido principalmente a la
falta de regulación de estos en el mercado y los altos costos. Como solución a esta polémica,
la investigación en tejidos permite profundizar y plantear equipos en los cuales se establezcan
condiciones, propiedades y mecanismos favorables para el cultivo de tejidos artificiales
satisfactoriamente.
El Grupo de Trabajo en Ingeniería de Tejidos estableció en trabajos previos una metodología
llevada a cabo en modelos animales para el desarrollo de sustitutos de piel y tejido conectivo
oral en biorreactores estáticos(), en los cuales se encontraron buenos resultados como: no
presentar rechazo inmune, promover la regeneración de tejido, disminuir la contractura y el
tiempo de cicatrización ().Sin embargo, con el propósito de implementar la producción de
tejido artificial a una mayor escala el Grupo diseñó un biorreactor de tanque agitado para la
producción de tejido artificial mucoso y de piel (), ya que el uso de biorreactores para cultivar
células eucariotas con condiciones dinámicas beneficia la manufactura de tejido artificial
pues proporciona condiciones controladas de crecimiento, mejora el intercambio de masa y
por consiguiente, las características histológicas de los tejidos artificiales ().

Además de los trabajos en la implementación de biorreactores con condiciones dinámicas, se

realizó la caracterización del mezclado del biorreactor para un diseño inicial y se estudió el
crecimiento de fibroblastos sembrados sobre soportes de colágeno tipo I y el consumo de
nutrientes dentro del sistema (). Con esta investigación se pudo encontrar que el método de
aireación superficial incluido en el diseño inicial, no permitía controlar el pH.

Ahora bien, para la producción de tejidos artificiales se han utilizado diferentes tipos de
biorreactores que permiten el control de parámetros fisicoquímicos (pH, temperatura,
concentración de compuestos químicos y transferencia de nutrientes), en condiciones
óptimas para la proliferación celular y la formación de tejido artificial (), entre ellos se
encuentra biorreactores tipo Spinner, de fibras huecas, de paredes rotadas y de perfusión. El
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Grupo de Investigación desarrolló y patentó un biorreactor tipo Spinner de 2 L para el

escalamiento de la producción de tejido conectivo artificial. Las propiedades hidrodinámicas
del biorreactor, tiempo de mezclado (TM) y distribución de tiempos de residencia (DTR),
fueron determinadas usando diferentes velocidades de agitación y configuraciones del
biorreactor. Este biorreactor ha permitido la obtención de tejido conectivo artificia (), en ellos
es necesario encontrar un equilibrio entre la velocidad de agitación y el transporte de masa
para obtener rendimientos elevados ().
Por otro lado, además de la concentración de 𝑂2 en el medio de cultivo, el control del pH en
el biorreactor es fundamental debido principalmente a que afecta el crecimiento y
metabolismo celular. El pH alto inhibe el metabolismo celular y la síntesis de proteínas, lo
cual afecta el crecimiento celular.
El O2 es uno de los sustratos indispensables en el metabolismo aerobio de las células. In vitro
se ha demostrado que la concentración de O2 en el medio influye directamente en el
crecimiento y en la expresión génica de los fibroblastos. Así, cuando se presentan
condiciones de hipoxia al inicio del cultivo se promueve el crecimiento celular;
contrariamente, si el cultivo se mantiene en hipoxia crónica se inhibe el crecimiento celular
[17, 22]. La hipoxia también regula la expresión de citoquinas y de factores de crecimiento
como eritropoyetina, factor de crecimiento transformante beta (TGF-β), factor de crecimiento
derivado de plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento vascular (VEGF) [17]. Por esto, uno
de los fenómenos más importantes en el cultivo de células en biorreactores es la transferencia
de masa de gases, dióxido de carbono y O2, al medio de cultivo (). Para lograr una buena
transferencia de masas entre la fase gaseosa y el medio líquido, es necesario implementar un
sistema de aireación eficiente. Los sistemas de microdispersión de gas (burbujeo) son muy
utilizados ya que proporcionan una alta transferencia de masa y son fáciles de operar ().
Aunque el burbujeo del gas puede causar daño en las células cultivadas (), varias estrategias
han sido estudiadas para proteger a las células. Entre estas se encuentran el uso de aditivos,
soportes o geles que protegen a las células manteniéndolas en su interior y el uso de una
velocidad de aireación baja.
La transferencia de masa gas-líquido se puede asociar con datos experimentales, mediante la
medición del coeficiente volumétrico de transferencia de masa global (KLa). Este coeficiente
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está relacionado con la velocidad de transferencia de masa de la fase gaseosa a la fase líquida
(). El KLa es específico para cada biorreactor y depende de variables de operación como la
velocidad de agitación, la presión parcial del gas, la densidad del medio y la temperatura.
Luego entonces, es claro el objetivo de encontrar el adecuado mecanismo de aireación con
el cual se obtengan mejores eficiencias mediante un concreto y funcional transporte de masa
de sustratos importantes como el CO2 Y O2 y el pH necesario para el control del crecimiento
de las células de tejido. Debido a las ventajas establecidas previamente para un reactor de
tanque agitado, tipo Spinner, es posible desarrollar tejidos conectivos con mejor eficiencia
que en trabajos previos estableciendo las variables pH y coeficiente volumétrico de
transferencia de masa y observar su funcionalidad en el cultivo

Métodos

Materiales

 Células

Se utilizaron fibroblastos procedentes de cultivos de revestimiento oral de conejo,

separados y conservados por congelación en trabajos previos del grupo (Espinosa L, Sosnik
A, Fontanilla MR,2010). Estos fueron descongelados en un baño termostatado 37ºC y
centrifugados a 1200g por 10 min. La pastilla obtenida fue lavada con medio fresco para
eliminar los restos de dimetil sulfóxido y los fibroblastos fueron resuspendidos en 1 mL de
medio de cultivo DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium). La idoneidad de las células
suspendidas se evaluó con una tinción vital (Eritrosina B, Sigma, USA), imitando los
métodos puntualizado por el grupo (Bello SA,2002,2005). Después de alcanzar la
convergencia, los cultivos se volvieron a subcultivar y tripsinizar. Para la carga del
biorreactor se emplearon fibroblastos de subcultivo de cuarto orden .

 Soportes de colágeno
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El colágeno se extrajo mediante tejido conectivo bovino. La fascia fue bañada con etanol
al 70%, se eliminaron vestigios de tejido muscular y adiposo, posteriormente fue dividida en
trozos de tamaño reducido que se bañaron en ácido acético 0.5 M y se custodiaron a 4°C en
agitación por 48 horas. Se filtró la suspensión. Al filtrado se le añadió NaOH 5 M en la
cantidad conveniente para ajustar su pH en un valor aproximado de 7, se agitó y centrifugó a
12000g durante 10 minutos a temperatura ambiente. El colágeno precipitado sumergió con
PBS (Phosphate buffered saline) durante 1 día y luego en agua destilada por otro día, una vez
pasado este lapso de tiempo se disolvió en ácido acético 0.1M.

Se siguió el protocolo modificado de Pérez y Cols para la preparación de los soportes de

colágeno tipo I (2001) (Pérez S, Doncel A, Roa C, Fontallina Duque MR,2007). Una vez
verificada la concentración del colágeno separado, esta se ajustó a 5 mg/mL. Seguido a ello,
la solución de colágeno fue depositada en contenedores (Becton, Dickinson Labware, NJ,
USA). Ipso facto, se liofilizaron posterior a su congelación a -20°C. En seguida se añadió
glutaraldehído de concentración 0.02%, teniendo esto el propósito de entrecruzar el colágeno
por 24 horas. Luego se higienizaron con óxido de etileno.

 Biorreactor

El biorreactor registrado por el Grupo de Trabajo en Ingeniería de Tejidos, labora en la

periferia de una incubadora de CO2. Su capacidad límite es de 2 litros, y el tope de soportes
sembrados con fibroblastos que pueden incorporarse son 24. Consiste en un envase de fondo
plano cilíndrico hecho en vidrio, esto facilita que el medio sea turbado con un magneto de
agitación no suspendido y que no se requieran elementos adicionales para sostenerlo
verticalmente. En la investigación actual se cambió tenuemente el mecanismo de agitación
sustituyendo el actual por uno magnético con aletas diseñado por Diana Isabel Nieto, este se
situó a cinco cm del fondo del recipiente. (Arevalo P, 2005).

Con la intención de prevenir polución y garantizar el cierre hermético, el sistema tiene una
rienda que sujeta la cubierta, por debajo de esta se encuentra el soporte que permite el ajuste
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de la tapa. El biorreactor cuenta con 4 columnas para fijar los soportes sembrados ,cada uno
con 7 bandejas diseñadas para cargar individualmente un soporte de colágeno. La
distribución de las columnas en el dispositivo es tal permite su fácil acoplamiento y desarme
para modificar la configuración geométrica, modificar su amplitud de fabricación y
simplificar su limpieza. Las bandejas poseen una fracción de vacío en la superficie para
permitir mejorar la transferencia de masa y distribución celular en el soporte a través de un
mayor contacto con el medio. El número de columnas y de bandejas del biorreactor pueden
ser variados. Una de las metas de este trabajo fue cambiar el mecanismo de aireación del
dispositivo. Puesto que el mecanismo actual de aireación se apropia de un volumen
considerable al ser instalado, fue inevitable menguar las bandejas por columna. Este es el
motivo por el cual, para los presentes ensayos se emplearon cinco bandejas por columna del
biorreactor (en total cuatro).

A pesar de la existencia de estos datos para un tanque con el sistema convencional de

aireación superficial, se prefirió realizar una nueva medición en paralelo con la del nuevo
sistema para lograr una comparación ecuánime de los datos.

Implementación de un sistema de transferencia de aire y CO2 en el biorreactor tipo

Spinner

Se utilizaron dos sistemas de aireación. El sistema clásico de aireación superficial y un

mecanismo de microdispersión de gas (microburbujeo) (Ilustración 1). Se estudió la
eficiencia de cada sistema de aireación para controlar el pH y se calcularon los KLa para la
transferencia de O2 y CO2 con cada sistema de aireación en una solución de bicarbonato de
sodio y glucosa para reproducir la atmosfera del cultivo. Debido a que ha demostrado ser
adecuada (Lanza R, 1997), en los ensayos se empleó una velocidad de agitación de 60rpm.
El caudal de aireación utilizado fue de 0.250 vvm, este fue el menos obtenido para sistema
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de flujo que se empleó. Se utilizaron dos mezclas de gas: (CO2 5%, O2 20%, N2 75%) y
(CO210%, O2 20%, N2 70%).

Ilustración 1. Mecanismo de aireación por micro burbujeo del gas. Cilindro de acero sinterizado con
poros de 2-10 m.

Control del pH en el biorreactor

En el biorreactor se cargaron 1.1L de una solución de 3.7 g/L de bicarbonato de sodio y

4.5 g/L de glucosa. Las concentraciones de bicarbonato de sodio y glucosa empleadas
coinciden con las que se localizan en el cultivo DMEM. Se disminuyó el pH de la solución a
7 con HCl al 36%, magnitud correspondiente al pH en el instante de tiempo inicial. En el
ensayo la solución permaneció a 37°C con la velocidad de agitación nombrada. Una vez se
lograron estabilizar las condiciones de trabajo, se arrancó la aireación del reactor con el
mecanismo de micro burbujeo de gas.

A condiciones similares, se empleó el mecanismo tradicional con una sola mezcla de gases
(CO210%, O2 20%, N2 70%). Se recogieron pruebas cada ocho horas por 2 días y ocho
horas, en tres posiciones dispares del dispositivo. En cada lugar, se recogieron 3 alícuotas de
dos mililitros. Una vez conocido el mecanismo mediante el cual se puede tener un mejor
control del pH, se determinaron los cambios que se podían producir en esta variable al
cambiar el volumen de carga.

Determinación de las constantes volumétricas de transferencia de masa de los gases KLa

(i)

 Determinación del KLa del oxígeno [KLa (O2)]

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La determinación del KLa (O2) se efectuó en una solución de NaHCO3 de bicarbonato de

sodio y de glucosa en agua des ionizada. Se ejecutaron dos tandas del biorreactor, cada una
tres veces, utilizando los dos sistemas de aireación. Las magnitudes de KLa (O2) fueron útiles
para confrontar la trasferencia de masa de oxígeno y dióxido de carbono suministrada por
cada uno de los mecanismos. Para estas pruebas se menguó la concentración de oxígeno de
la mezcla burbujeando nitrógeno, posteriormente, se ejecutó la aireación con los dos
mecanismos utilizando una solución con las siguientes características: CO2 10 %/ O2 20%
que además contenía nitrógeno, la cual poseía una humedad inferior a las cinco partes por
millón y con un caudal invariable de 0,250 VVM. Como último paso, se determinó la
concentración de oxígeno solvatado en relación al tiempo.

Con el fin de efectuar el ajuste lineal de los datos recolectados se emplearon las siguientes
fórmulas matemáticas:

𝑑𝐶
= 𝑘𝐿𝑎 (𝐶 ∗ − 𝐶)
𝑑𝑡

La ecuación preliminar es producto de algunas suposiciones: ausencia de contribuciones

de salida, consumo ni fabricación de oxígeno. En ella:

- kLa representa el coeficiente volumétrico de transferencia de O2.

- C*: Concentración de saturación en la interface gas-líquido
- C : Concentración de O2 en el líquido
- dCL/dt : Taza de cambio de la concentración con respecto al tiempo.

Modificando la ecuación obtenemos:

𝑑𝐶
= 𝑘𝐿𝑎 𝑑𝑡
𝐶∗ − 𝐶

Integrando con las condiciones de frontera: CLo para t = 0 y C = CL para t = t

𝐶∗ − 𝐶
ln ( ) = −𝑘𝐿𝑎 𝑡
𝐶 ∗ − 𝐶𝑡=0
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Se graficaron los valores obtenidos en la zona de reaireación siguiendo la ecuación y se

obtuvo una magnitud del kLa al calcular la pendiente de la recta obtenida.

 Determinación del KLa del dióxido de carbono [KLa (CO2)]

Análogamente se calculó la constante volumétrica de la transferencia de dióxido de

carbono mediante una analogía entre las KLa de los gases y sus difusividades moleculares
debido a que estas relacionan los mismos fenómenos, según la ecuación:

𝑘𝐿𝑎 (𝑂2 ) 𝐷𝑂2/𝑠𝑙𝑛

=
𝑘𝐿𝑎 (𝐶𝑂2 ) 𝐷𝐶𝑂2/𝑠𝑙𝑛

Monitoreo de pH en el cultivo

Durante los siete días de crecimiento del cultivo en el dispositivo, a diario se recolectaron
muestras de cinco mililitros del medio. En seguida se midió el pH de cada muestra con un
pHmetro Metler Toledo.

Resultados

Estudio del control del pH en el biorreactor operado sin células

 Reproducibilidad del muestreo de pH efectuadas en el reactor

Se determinó el pH de tres alícuotas tomadas del medio de cultivo, recolectadas con ocho
horas de diferencia del biorreactor en las siguientes 3 condiciones de operación que utilizan
diferentes medios de aireación: (a) Microdispersión de aire y solución 10% CO2; (b)
Microdispersión de aire y solución 5% CO2 (c) Aireación superficial y solución 10 % CO2.
Se graficaron las medias de las magnitudes de potencial de hidrogeno en relación a la variable
tiempo. Se realizaron tres muestras para cada condición de operación. Los resultados indican
que el potencial de hidrogeno es similar en la totalidad del dispositivo de cultivo. (Ilustración
2).
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Ilustración 2.Determinación del pH de la solución de trabajo en relación al tiempo. D: Microdispersión

de aire, S: aireación superficial.

 Control del pH del reactor simulando las condiciones del cultivo de células

Teniendo en cuenta la reproducibilidad de los ensayos y para la mostrar el comportamiento

pH vs tiempo para cada condición de operación, en la Ilustración 3 se graficó la media de
los 9 valores recolectados de tres reproducciones de la determinación de pH con el paso de t.

Ilustración 3. Determinación de pH de la solución de trabajo en función del tiempo. Valores de pH

medidos en el biorreactor operado con: Sistema de aireación por microdispersión de gas y la mezcla de aire/
CO2 5%(o); Sistema de aireación por microdispersión de gas y la mezcla de aire-CO2 10%(o) y Sistema de
aireación superficial y la mezcla de aire CO2 10% (o).
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La Ilustración 4 exhibe el comportamiento del pH de la solución empleada durante

distintos instantes de tiempo en el ensayo, en el reactor que empleo el mecanismo de aireación
basado en micro burbujeo y la mezcla de aire con 10% de dióxido de carbono. Esta condición
de operación fue seleccionada puesto que evidenció los resultados más destacables en el
transcurso la estimación del dominio sobre el pH (Ilustración 3). Los resultados apuntan a
que independientemente del volumen de carga del reactor el pH de la mezcla al interior del
reactor que contienen los fibroblastos es igual.

Ilustración 4.Determinación del pH en función del volumen de trabajo en función del tiempo. Se incluyen
las gráficas correspondientes al biorreactor operado con el sistema de aireación por microdispersión de gas y la
mezcla aire CO2 10%. Los volúmenes de trabajo evaluados, fueron: 1.1L (o), 0.9L, (o) 07L. (o).

 Eficiencia en el control del pH

La Ilustración 5 presenta la fluctuación del pH de la mezcla utilizada durante el ensayo en

función del tiempo, cuando el sistema es intervenido con cada uno de los mecanismos de
aireación simulados. Para estos ensayos con un pH=8,45 correspondiente a la solución de
3,7g/L de bicarbonato de sodio disuelto, se obtuvo un pH invariable de aproximadamente 7.8
sin la intervención de externalidades.
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Ilustración 5.Determinación del tiempo requerido para regular el pH del medio de cultivo del
biorreactor. Estas determinaciones se hicieron con el biorreactor operado con el sistema de aireación por
microdispersión de gas (o) y con el biorreactor operado con el sistema de aireación superficial ( o), contra el
tiempo.

Constantes volumétricas de transferencia de masa de O2 y CO2 KLa (i)

La Ilustración 6 expone las rectas resultantes de graficar ln(1-Cl/Cg) en función del tiempo
(s), donde Cl es la concentración de oxígeno en un instante determinado (inicial) y Cg es la
concentración del mismo cuando la solución se encuentra totalmente saturada. Como es de
esperarse la pendiente de estas rectas corresponde a - KLa.
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Ilustración 6. Determinación de las constantes volumétricas de transferencia de masa (kLa). Rectas

obtenidas al graficar ln(1-cl/cg) en función del tiempo. El panel A, muestra la recta correspondiente al
biorreactor operado con el sistema de aireación por microdispersión. El panel B, muestra la recta
correspondiente al biorreactor operado con el sistema de aireación superficial. kLaO2 h-1

Tabla 1. Promedio de los valores de kLa de O2 y CO2 calculados.

kLaO2 h-1 kLaCO2 h-1
Dispersión Superficial Dispersión Superficial
21.0 0.22 16.5 0.17

Estudio del cultivo de fibroblastos sembrados en soportes de colágeno e incubados en el

biorreactor con cada sistema de aireación
 TRANSFERENCIA DE CO2 15

 Control del pH

La Ilustración 6 presenta las fluctuaciones del pH del medio a lo largo de los 7 días de
siguientes a la carga del biorreactor, con cada uno de los diferentes sistemas de aireación. En
todos los casos el pH decrece en el biorreactor con el transcurso del tiempo, el decrecimiento
del pH fue más acentuado en el medio de cultivo que empleó el mecanismo de aireación por
micro burbujeo para la transferencia de masa al interior del dispositivo.

Ilustración 7.Determinación del pH del medio de cultivo del biorreactor en función del tiempo. Se
presentan las mediciones obtenidas del reactor operado con el sistema de aireación por microdispersión (o) y
del biorreactor operado con el sistema de aireación superficial(o).

Discusión y conclusiones

Fabricar epitelio artificial conectivo en un biorreactor tipo Spinner, demanda sostener ,

monitorear y estabilizar las condiciones operatorias y ambientales del medio en el que crecen
las células en estudio. El pH y el contenido de oxígeno en el medio son agentes taxativos en
el crecimiento, la morfología y la expresión génica de las células cultivadas (Sidiqui A,1996;
Cosmo G,1961). El grupo de Trabajo en Ingeniería de Tejidos, desarrolló un biorreactor tipo
Spinner para la producción de tejido conectivo, con una capacidad mayor a la de los sistemas
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reportados (Arévalo P,2005). Un estudio juicioso de las propiedades del reactor, exhibió que
existían problemas con dominio y sostenimiento del pH y con el transporte de oxígeno al
medio de cultivo (Diaz J.F, 2005; Castro L.A,2009). Teniendo como principal propósito
sobreponerse a estas contrariedades, en este trabajo se cambió el mecanismo de aireación del
antiguo biorreactor. De forma similar, se valoró y contrastó el efecto de los dos mecanismos
de aireación sobre el pH del medio de cultivo.

Como ya se mencionó, para el presente trabajo fue necesario modificar el sistema de

agitación del biorreactor. Debido a que estos cambios afectan el flujo en el dispositivo, fue
necesario determinar los niveles de mezclado del biorreactor modificado para asegurar que
la totalidad de las variables en observación dieran cuenta del comportamiento global del
volumen de control, es decir que se presentara independencia respecto a la posición durante
la toma de muestras. Este procedimiento se realizó en ausencia de células y empleando como
solución para el ensayo glucosa y NaHCO3 en agua desionizada.

Trabajos previos de integrantes del equipo de trabajo muestran el deficiente control del pH
que permita fijarlo en el intervalo adecuado para el cultivo de tejido conectivo (7.4<pH<7.8),
en el biorreactor que utiliza el método convencional de aireación (Diaz J,2008; Castro
L,2009). Un punto de partida del presente trabajo fue que este fenómeno se presentaba debido
a una baja transferencia de masa de dióxido de carbono cultivo, debido a que los volúmenes
de operación del biorreactor (0.7<Volumen<1.5 L) son considerablemente mayores a los
comúnmente usados para cultivos estáticos de tejidos. La determinación del pH de la solución
mostró que el pH de la solución fue mayor a 8.0. Estas observaciones señalan que no es
competente incrementar el área superficial de contacto entre las fases con el fin de obtener
valores óptimos de pH, sino que se requieren de esfuerzos adicionales. Nuestros datos
sugieren que la concentración de saturación de dióxido de carbono cuando se tiene una
mezcla con 5% del mismo no es suficiente.

El hecho de que el pH mostrará independencia respecto al volumen de carga indica que el

biorreactor se puede emplearse con capacidades menores a la máxima (1.5 L). Este
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descubrimiento es relevante, ya que el reactor diseñado podría utilizarse sin problema para
estudios de laboratorio a menos escala, esto ayudaría a reducir el costo de experimentación.

La determinación del coeficiente volumétrico de transferencia de oxigeno reafirmó que en

efecto el transporte interfasial aumenta con el método de aireación por micro burbujeo; este
incremento, hace que mejore la estabilidad del pH y la oxigenación del sistema. El control
de estas variables posibilita el estudio del comportamiento de las células al variar el pH o la
concentración de oxígeno en el medio, estudios que serían inviables en el biorreactor tipo
Spinner del grupo sin haber implementado del mecanismo de aireación utilizado en este
trabajo.

Los datos indican que en el momento del inoculo, el pH del biorreactor aireado con
microdispersión era menor a 7.8, mientras que en el cultivo aireado superficialmente era
cercano a 8.0. Esto respalda aún más, que la microdispersión de la fase gaseosa controla el
pH con mayor eficacia que la aireación superficial al comienzo del procedimiento. El pH en
el cultivo aireado con micro burbujeo disminuyó con una mayor rapidez que en el aireado
superficialmente.

El grupo de observaciones mostrados en este trabajo posibilitan razonar que gracias al

aumento en el área superficial de contacto interfasial que se obtuvo al utilizar el mecanismo
de aireación por micro burbujeo, se logra un incremento del transporte de oxígeno al entorno
de crecimiento celular. El mecanismo de aireación por micro burbujeo de gas proporciona
condiciones óptimas para normalizar el pH cultivo de manera más eficaz que el mecanismo
convencional de aireación superficial, al conceder un transporte más veloz de CO2 desde el
seno del gas a la fase líquida.

Referencias

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