TRABAJO PRÁCTICO N4

BIOENERGÉTICA Y CINÉTICA ENZIMÁTICA

AÑO 2017
OBJETIVOS
- Comprender el alto grado de orden existente en la célula así como la necesidad de
energía para generar y mantener el mismo.
- Relacionar esa necesidad energética con la ingesta y oxidación de los alimentos por
medio de reacciones catalizadas enzimáticamente.

UNIDAD DE CONOCIMIENTO
CONOCIMIENTOS PREVIOS REQUERIDOS: Nociones básicas de equilibrio químico.
Sistemas de coordenadas (manejo de gráficos). Nociones elementales de cinética química.
Trabajos prácticos de pequeñas moléculas y macromoléculas.

TEMARIO

Bioenergética: Universo, sistema y entorno. Sistemas cerrados y abiertos. La célula

como un sistema abierto. Distintos tipos de energía: interconversión entre ellas. El calor
como una forma de energía degradada. Conceptos de entropía (S) y energía libre (G).
Unidades. Reacciones endergónicas y exergónicas. Relación entre G y G, y entre G
y Keq. G’ definición. Criterios de espontaneidad de las transformaciones. Reacciones
acopladas.
Velocidad de Reacción: Definición de velocidad de reacción. Unidades. Estado
activado y energía de activación. Reacciones reversibles e irreversibles. Factores que
modifican la velocidad de reacción. Catalizadores inorgánicos y biológicos. Diferencias
entre ellos.
Enzimas: Definición de enzimas. Centro activo y centro alostérico o regulador.
Características de las enzimas y de la catálisis enzimática. Nociones de cinética
enzimática. Km y Vmáx: Conceptos y unidades. Actividades enzimáticas: efectos del pH y
temperatura. Regulación de la actividad: inhibidores competitivos y no competitivos.
Cofactores enzimáticos: inorgánicos y orgánicos (coenzimas).

VOCABULARIO ESPECÍFICO DEL TEMA

Universo, sistema, energía, entorno, entropía, entalpía, calor, energía interna, energía
libre, endotérmica, exotérmica, endergónico, exergónico, catalizador, velocidad de
reacción, equilibrio químico, trabajo, estado activado, reversibilidad, cinética, inhibidor,
alosterismo, cofactor, sitio activo, sitio alostérico, feedback, apoenzima, holoenzima.

BIBLIOGRAFÍA
- Becker W.M y col. “El mundo de la célula” Ed. Pearson – 2007 -
-Blanco, A. “Química Biológica”. 8a Edición. Editorial El Ateneo. 2015
-Lehninger. Principios de Bioquímica - 6ª Edición Editorial Omega. 2014
-Alberts, B. et al. “Biología molecular de la célula”, Editorial Omega. 6ta Ed. 2014.
- Karp, G. “Biología Celular y Molecular”. Ed. McGraw- Hill Interamericana. 1998.

CUESTIONARIO GUÍA DE ESTUDIO

1
1. a) Defina universo, sistema abierto, cerrado y entorno. Realice un esquema donde se
puedan visualizar estos conceptos.
b) ¿Qué tipo de sistema representa una célula? ¿Por qué?

2. a) Defina G y G. ¿Cómo se vinculan? ¿En que unidades se expresan?

b) Defina S e indique en qué unidades se expresa.
c) ¿Qué entiende por espontaneidad de una transformación?
d) ¿Cómo debe ser G del sistema y S del universo para que una reacción sea
espontánea?
e) ¿Para decidir si una reacción es espontánea o no en una célula debemos tener en
cuenta el valor de G o G?
f) Defina G ’. En biología ¿qué G usamos?

3. Dada la reacción A  B donde GA es mayor que GB:

a) ¿Qué puede decir respecto de la espontaneidad de la reacción A  B y
B  A en condiciones estándar? ¿Por qué?, ¿y en condiciones celulares?
b) ¿Cómo debería ser la concentración de B respecto de la de A para que la reacción
B  A tenga lugar en condiciones celulares?
c) Teniendo en cuenta su respuesta al item b) ¿por qué cree usted que en la célula sólo
son reversibles aquellas reacciones con un G próximo a cero?

4. a) Represente gráficamente los cambios de energía libre en el curso de una reacción.

b) Defina estado activado y energía de activación.
c) ¿Qué entiende por velocidad de reacción química? ¿En qué unidades se mide?
d) ¿De qué depende y cómo puede modificarse la velocidad de una transformación?

5. a) ¿Qué son las enzimas? ¿Todas son proteínas? Fundamente.

b) ¿En qué se diferencian las enzimas de los catalizadores inorgánicos?
c) ¿De qué manera las enzimas aceleran la velocidad de una reacción biológica?
d) ¿Cómo se denomina al sitio donde se une el sustrato?
¿Qué características estructurales posee?
¿Sus aminoácidos deben ser contiguos en la estructura primaria de la enzima?
e) ¿Cómo se modificaría el gráfico de los cambios de energía libre vs. coordenada de
reacción en presencia de un catalizador? Grafíquelo.

6- a) ¿Qué características particulares presentan las enzimas reguladoras?

b) ¿Qué tipo de enzimas reguladoras conoce?

7. a) Defina velocidad enzimática y mencione tres posibles unidades para expresarla.

b) Realice un gráfico en donde se observe como varía la velocidad de reacción en función
de la concentración de reactivos para una transformación catalizada enzimáticamente.
c) ¿A qué se denomina Km y Vmáx y en qué unidades se expresan ambos parámetros?
d) ¿Cómo se puede modificar la actividad de una enzima en función de:
d1) Variación de pH.
d2) Variación de temperatura.
d3) Presencia de un inhibidor competitivo.
d4) Presencia de un inhibidor no competitivo.

8. a) ¿Para qué necesita la célula energía? ¿Cómo la almacena y en qué moléculas?

b) ¿Qué es un trabajo biológico? ¿Qué necesita la célula para realizarlo?

2
c) ¿La energía consumida por la célula es igual, mayor o menor a la estrictamente
requerida para realizar los trabajos biológicos? ¿Por qué?

EJERCICIOS DE APLICACIÓN

1. Es bien conocido que con el tiempo las cosas abandonadas a su suerte pasan a
quedar desordenadas: los edificios se derrumban, los organismos muertos se
descomponen, etc. Esta tendencia general se halla expresada en la Segunda Ley de la
Termodinámica, que afirma que “En toda transformación espontánea la entropía del
universo aumenta”. De acuerdo con esto responda:
a) En un sistema aislado, ¿qué ocurrirá con el grado de desorden del mismo en una
transformación espontánea? Justifique.
b) En una célula la entropía disminuye con el tiempo, esta situación ¿contradice a la
segunda ley de la termodinámica? Justifique se respuesta.

2. Los siguientes datos corresponden a la reacción A B:

 la transformación de la sustancia A en la sustancia B (y viceversa) se produce
cuando las moléculas alcanzan una energía de 12 Kcal/mol.
 G A es de 9 Kcal/mol y G B es de 8,8 Kcal/mol
a) Realice el gráfico de nivel energético vs coordenada de reacción.
b) Calcule los valores de Ea y G de la transformación de A en B y los de B en A.
c) ¿Cuál de las dos transformaciones es más rápida?
d) Si le afirmásemos que en la célula ambas transformaciones (A B y B  A) pueden
ser espontáneas ¿qué nos diría?
e) ¿Cree usted que ésta será una reacción reversible?
f) ¿Cuál de las dos sustancias (A ó B) predominará en el equilibrio?

3. Analice la siguiente frase y responda:

“La transformación XY cuyo G = 3 Kcal/mol puede llevarse a cabo en una célula si se
acoplase a una reacción AB con G < 0 o si existiese una enzima capaz de catalizarla"
a) ¿La frase es completamente cierta? (SI / NO). Justifique.
b) ¿Qué valor deberá tener el G de la reacción acoplada para que la frase sea:
b1- Parcialmente cierta? b2-. Completamente falsa?

4. Los ácidos grasos y la glucosa sufren un proceso denominado “activación” antes de ser
degradados o almacenados:

R-COOH + HS-CoA R-CO-S-CoA + H2O G = 7,52 Kcal/mol

Glucosa + Pi  glucosa – 6 – P + H2O G = 3,30 Kcal/mol

a) ¿Qué puede decir respecto a la espontaneidad de ambas reacciones?

b) ¿Con cuál de las siguientes reacciones acoplaría a las anteriores activaciones
para que el proceso acoplado sea espontáneo en condiciones estándar?

ATP+ H2O  ADP + Pi G = -7,30 Kcal/mol

ATP+ H2O  AMP + PPi G = -10,0 Kcal/mol

c) ¿Cuál sería el valor del G de los procesos acoplados?

5. La sacarosa puede ser clivada por dos mecanismos diferentes:

i.Sacarosa + H2O  glucosa + fructosa G ’ = - 7 kcal/mol

ii. Sacarosa + Pi  glucosa -1-fosfato + fructosa

3
 a) Estime el G’ de la reacción ii sabiendo que la reacción

glucosa -1-P + H2O  glucosa + Pi tiene un G’ = –5 Kcal/mol

b) Si el objetivo de la hidrólisis fuera obtener fructosa, ¿qué ventajas representaría desde

el punto de vista del ahorro energético el clivaje de la sacarosa a través de ii?
c) ¿Cuál de las dos reacciones cree Ud. que será más beneficiosa si fuera acoplada a un
proceso endergónico? ¿Necesita información adicional para tener el 100% de certeza en
su respuesta?
d) ¿Cuál de las dos reacciones será más beneficiosa si el objeto es formar glucosa para su
oxidación?
e) ¿Cree Ud. qué el G de una reacción en la que A se transforma en B variará si el
proceso se lleva a cabo en un sólo paso o en múltiples pasos? Justifique su respuesta.

6. Existen dos enzimas (A y B) capaces de catalizar la reacción X  Z.

Usted sabe que la enzima B genera mayor cantidad de producto por unidad de tiempo que
la A cuando la concentración de X es baja mientras que a concentraciones de X saturantes
para ambas enzimas, A es la que alcanza una mayor velocidad de generación de Z.
a) Con estos datos construya la gráfica de velocidad de reacción vs concentración de
sustrato para las dos enzimas.
b) ¿Qué podría decir del Km de A respecto del de B para este sustrato?
c) Se midieron las velocidades iniciales (v0) de reacción en iguales condiciones de presión,
temperatura y concentración de reactivos, en presencia y en ausencia de ambas enzimas,
obteniéndose los siguientes resultados: - Sin catalizador: v 0 = 4,20 M/min.
- En presencia de A: v0 = 420 mM/min.
- En presencia de B: v0 = 4,20 M/min.
i) ¿Qué puede decir del G de la reacción no catalizada con respecto a las catalizadas?
¿Cuál de las reacciones presenta la menor Ea? Justifique ambas respuestas.
ii) Valiéndose de los gráficos obtenidos en a) determine si la velocidad medida en este
experimento pueden ser la Vmáx para alguna de estas enzimas. Justifique su respuesta.

7. En la siguiente figura se representa la relación entre el pH y la actividad catalítica de

tres enzimas: la pepsina (P), la tripsina (T) y la fosfatasa alcalina (F)
AE
P T F
AE: actividad enzimática

3 5 7 9 11 pH

a) Explique para una enzima en particular ¿a qué se debe la variación de la actividad

catalítica en función del pH en cada región de la curva?
b) Si el pH sanguíneo es 7,3 ¿qué enzimas podrían presentar actividad en el plasma?
c) Siendo la temperatura óptima para la tripsina 37C, realice un gráfico de la variación de
la actividad enzimática vs temperatura, describa qué sucede en cada parte de la curva.

4
8. E es una enzima citosólica hepática que cataliza la reacción A B. Los compuestos X
y Z están presentes en sustancias hepatotóxicas y ambos son inhibidores de esta enzima.
Para caracterizar a la enzima E de hígado de rata y para clasificar el tipo de inhibición
ejercida por X y Z se realizaron los siguientes experimentos:
I- Se incubó una cantidad fija de E con concentraciones crecientes de A y se determinó la
cantidad de B generada a los 60 segundos.
II- Se repitió el protocolo I en presencia de una pequeña cantidad de X
III-Se repitió el protocolo I en presencia de una pequeña cantidad de Z
Los resultados fueron:

[A] uM nmoles de B / minuto

Experimento I Experimento II Experimento III
2 33,33 11,11 26,67
4 50,00 20,00 40,00
8 66,67 33,33 53,33
16 80,00 50,00 64,00
512 99,22 96,97 79,38
4096 99,90 99,61 79,92
36000 99,99 99,96 79,99
100000 100,00 99,98 80,00
1000000 100,00 100,00 80,00

Indique el valor de Km y Vmax obtenido en cada uno de los experimentos.

¿Qué tipo de inhibidores son X y Z? Justifique su respuesta.
¿Espera que X y/o Z sean estructuralmente similares a A? Justifique su respuesta.
Si repite el experimento I poniendo el doble de enzima E ¿qué valores de Km y Vmáx
espera encontrar?

Ejercicios adicionales

1. a) Realice los gráficos correspondientes a nivel energético vs coordenada de reacción

para las reacciones: i: LM
ii: YZ,
Para la confección de los mismos, tenga en cuenta que:
GºL = 4.8 Kcal/mol, GºM=2.1 Kcal/mol, GºY= 5.6 Kcal/mol, GºZ= 4.4 Kcal/mol
y que el estado activado para que se produzcan ambas reacciones se alcanza a una
energía de 7.0 Kcal/mol.
b) Calcule el ∆Gº y la Ea para ambas reacciones e indique ambos parámetros en el
gráfico.
c) ¿Que puede decir en cuanto a la espontaneidad de las reacciones en condiciones
estándar?
d) ¿Cuál de las reacciones ocurrirá a mayor velocidad?
e) Si se agrega un catalizador enzimático específico tanto para la reacción i como para la
ii, ¿Qué ocurrirá con el ∆Gº y con la Ea de cada reacción? Indíquelo en el gráfico.
f) Si se desea acoplar la reacción AB cuyo ∆Gº= 2 Kcal/mol cuál de las dos reacciones
anteriores sería la indicada para que tal reacción ocurra. Justifique.

2. La Hidroxiacil CoA deshidrogenasa es una enzima involucrada en uno de los pasos de

la β-oxidación, la oxidación del 3-hidroxiacil-coA a 3-cetoacil-coA.

5
Represente en forma general un gráfico de velocidad de reacción vs concentración de L-
3Hidroxiacil-CoA, indicando Km y Vmáx:
¿Cómo se modificarán los parámetros mencionados anteriormente si
a) se aumenta la concentración de enzima?;
b) si se agrega un inhibidor competitivo?,
c) si se agrega un inhibidor no competitivo específico de la enzima? Justifique y
represéntelo gráficamente

3. Como vimos en uno de los problemas del TP3 (Macromoléculas), la lactosa es un

disacárido que se encuentra presente en la leche, y que es hidrolizado en sus dos
monómeros constituyentes (glucosa y galactosa) por la enzima lactasa. Ud. estudia la
cinética de la lactasa en presencia de lactosa y obtiene la siguiente tabla:
[Lactosa] (M) V0 (mM/min)
a. ¿Qué parámetros puede obtener a partir de los
0 0,0 datos de la tabla?
-5
1x10 3,5 b. Grafique la velocidad inicial (Vo) en función de la
2x10-5
5,0 concentración de sustrato y ubique dichos parámetros.
-5 c. ¿Con qué características de la enzima se asocian
3x10 6,5
-5
dichos parámetros? Justifique su respuesta
5x10 8,0
-5
10x10 10,0
-5
15x10 10,0
-5
20x10 10,0