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Las enfermedades genéticas son mucho más comunes de lo que se creía anteriormente. Se
estima que la frecuencia de la enfermedad genética en sujetos vivos es de 670 por 1000. Se incluyen
en este número no sólo son enfermedades genéticas "clásico", pero también el cáncer y las
enfermedades cardiovasculares, las dos principales causas de muerte en el mundo occidental.
Ambos tienen componentes genéticos importantes. Las enfermedades cardiovasculares como la
aterosclerosis y la hipertensión, lo que resulta de la interacción entre el gen y el medio ambiente, y
ahora se sabe que la mayoría de los cánceres resultantes de la acumulación de mutaciones somáticas
(capítulo 7).
enfermedades genéticas encontradas en la práctica médica sólo representan la punta de un
iceberg, que son los que tienen errores genotípicas menos extremas, lo que permite un desarrollo
embrionario completo y un nacimiento vivo. Se estima que el 50% de los abortos involuntarios en
el embarazo temprano tienen anomalía cromosómica demostrable; esto es en adición y varios
errores detectables más pequeños y muchos otros todavía más allá de nuestro alcance de
identificación. Aproximadamente el 1% de todos los recién nacidos tiene una anomalía
cromosómica grave, y aproximadamente el 5% de las personas menores de 25 años a desarrollar
una enfermedad grave con un importante componente genético. ¿Cuántas mutaciones permanecen
ocultos?
El borrador de la secuencia del genoma humano se ha completado y se ha aprendido mucho
acerca de la "arquitectura genética" de los seres humanos. Algunas de las cosas reveladas fueron
inesperados. Por ejemplo, ahora sabemos que menos del 2% de la codificación del genoma humano
para las proteínas es más de la mitad como códigos de bloque nucleótidos cuyas funciones son
misterioso. Lo que era totalmente inesperado fue que sólo los seres humanos tienen 30.000 genes en
lugar de los 100.000 predicho anteriormente. Muy excepcionalmente, este número no es mucho más
grande que una planta de mostaza, con 26.000 genes! Sin embargo, también se sabe que por corte y
empalme alternativo, 30000 genes pueden dar lugar a más de 100.000 proteínas. Además, los
estudios muy recientes indican que las proteínas pueden estar formados completamente cortadas y
conectados entre sí para dar lugar a péptidos que no se predijeron en la estructura del gen. Los seres
humanos no son tan pobres después de todo. Con la finalización del proyecto del genoma humano,
un nuevo término, llamados genómica, fue introducido en el vocabulario médico. Mientras que la
genética es el estudio de un solo gen o unos pocos genes y sus efectos fenotípicos, la genómica y el
estudio de todos los genes del genoma y sus interacciones. Análisis de tumores por micromatrices
de ADN (microarrays; Capítulo 7) es un ejemplo del uso clínico genómico actual. Sin embargo, la
contribución más importante de la genómica para la salud humana será la clarificación de las
enfermedades multifactoriales complejas que surgen de la interacción de múltiples genes con
factores ambientales.
Otro sorprendente revelación de los recientes avances en la genómica es que, en promedio,
dos individuos comparten 99,9% de sus secuencias de ADN. Por lo tanto, la notable diversidad de
humano codificado es de alrededor de 0,1% de nuestro ADN. Los secretos de la predisposición a la
enfermedad y la respuesta a los agentes medioambientales y drogas deben entonces residir en estas
regiones variables. Aunque es pequeño en comparación con la secuencia total de nucleótidos que
0,1% representa alrededor de 3 millones de pares de bases. La forma más común de variación de
ADN en el genoma humano es un polimorfismo de nucleótido único (SNP). Típicamente, el SNP
son bi-alélica (es decir, sólo existen dos opciones para un locus dado en la población), y pueden
ocurrir en cualquier parte en el genoma - dentro de los exones, intrones o regiones inter-génicas.
Menos de 1% de SNPs se producen en regiones de codificación. Que, evidentemente, podría
cambiar el producto del gen y generar una enfermedad. Mucho más comúnmente, sin embargo, el
SNP es meramente un marcador que es co-heredó con el gen causante de la enfermedad, debido a la
proximidad física. Otra forma de expresar esto es decir que el SNP y el factor genético están en
desequilibrio de ligamiento. Mucho esfuerzo está en marcha para construir mapas de SNP del
genoma humano por lo que es posible descifrar los determinantes de la enfermedad. A medida que
la genómica implica el estudio de la proteómica todas las secuencias de ADN que se ocupan de la
medición de todas las proteínas expresadas en una célula o tejido. En la actualidad, los avances de
la proteómica se produce después de la genómica, debido a que la metodología para identificar
cientos de proteínas diferentes al mismo tiempo no está completamente desarrollado, pero aún se
está haciendo un gran esfuerzo.
Aunque genómica y la proteómica están revelando una gran cantidad de información,
nuestra capacidad para organizar y extraer información de este vasto conjunto de datos no está
completamente desarrollado aún. Para analizar los patrones de expresión que implica
simultáneamente miles de genes y proteínas necesarias de un desarrollo paralelo de técnicas
computacionales que pueden manejar grandes colecciones de datos. En respuesta a esto, una nueva
disciplina bioinformática interesantes llaman. Este biólogos involucrados, computacional, los
científicos físicos y matemáticos, un verdadero ejemplo de un enfoque multidisciplinario en la
práctica médica moderna.
Gran parte de este progreso en genética médica resultó en espectaculares avances de la
biología molecular, que implica la tecnología de ADN recombinante. Los detalles de estas técnicas
son bien conocidas ahora y no se repiten aquí. Algunos ejemplos, sin embargo, el impacto de la
tecnología del ADN recombinante en la medicina merecen atención:
base molecular de la enfermedad humana: Dos estrategias generales se han utilizado para
aislar y caracterizar genes implicados en enfermedades humanas. El enfoque funcional a la
clonación o clásica, se ha utilizado con éxito para estudiar una variedad de errores innatos
del metabolismo, tales como la fenilcetonuria y trastornos de la síntesis de hemoglobina.
Común a estas enfermedades genéticas es el conocimiento del producto génico anormal y la
proteína correspondiente. Cuando se conoce la proteína afectada, una variedad de métodos
se puede emplear para aislar el gen normal, para clonar y en el final a determinar los
cambios moleculares que afectan a genes en pacientes con la enfermedad. En cuanto a varias
enfermedades comunes mono-genética como la fibrosis quística, no había ninguna pista
sobre la naturaleza del producto del gen defectuoso, se utilizó una técnica alternativa
llamado enfoque de clonación posicional o el "gen candidato". Esta estrategia ignora
inicialmente las pistas del fenotipo y es guiado por la cartografía del fenotipo de la
enfermedad en una localización cromosómica particular. Este mapeo se facilita si la
enfermedad está asociada con un cambio reconocible citogenética (por ejemplo, síndrome X
frágil) o por un análisis de ligamiento. En este último, la ubicación aproximada del gen se
determina mediante su unión a SNPs o "gen marcador" están cerca de ese locus enfermedad
conocida. Una vez que el gen mutante se encuentra en una región de límites bastante
estrechos, el siguiente paso es clonar varias piezas de segmento de ADN relevante en el
genoma. La expresión del ADN clonado in vitro, seguido de la identificación de productos
de proteína puede ser usado para identificar la proteína aberrante codificada por los genes
mutados. Este enfoque ha sido utilizado con éxito para diversas enfermedades tales como la
fibrosis quística, neuro-fibromatosis, distrofia muscular (una enfermedad hereditaria
caracterizada por debilidad muscular progresiva), la condición de los riñones poli-quística y
la enfermedad de Huntington. Además de este enfoque paso a paso, sólo para clonar genes,
el análisis de microarrays de cDNA permite la detección simultánea de miles de genes y sus
productos de ARN. Cuando los tejidos normales y enfermos se analizan de esta manera,
múltiples cambios en los niveles de expresión de genes pueden ser detectados,
proporcionando de ese modo una lista más completa de los cambios genéticos en los tejidos
enfermos.
Producción de agentes biológicamente activos humanos. Una gran cantidad de agentes
biológicamente activos ultra-puro puede ser producido en cantidades prácticamente
ilimitadas mediante la inserción del gen que codifica para las bacterias u otras células
apropiadas en cultivo de tejidos. Algunos ejemplos de productos de ingeniería genética
disponibles en la actualidad incluyen el receptor de TNF por TNF bloqueo en el tratamiento
de la artritis reumatoide, la activación de plasminógeno de tejido para el tratamiento de
estado trombótico, hormona de crecimiento para el tratamiento de estados de deficiencia, la
eritropoyetina para revertir varios casos de anemia y factores de diferenciación mieloide y
de crecimiento (estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, factor, factor
estimulante de colonias de granulocitos) para aumentar la producción de monocitos y
neutrófilos en bajo óseas estados función de la médula.
terapia génica. El objetivo del tratamiento de enfermedades genéticas mediante la
transferencia de células somáticas transfectadas con el gen normal, a pesar de que
conceptualmente simple, todavía tienen que mejorar para grandes escalas. Los problemas
incluyen el diseño de vectores apropiados para transportar el gen, además de las
complicaciones inesperadas que resultan de la inserción aleatoria del gen normal en el
genoma huésped. En los últimos casos bien documentados, la terapia génica en pacientes
con SCID, ligada a X; tuvo que ser interrumpido, que no tienen la cadena gamma común de
receptores de citoquinas debido a que el gen transducido se insertó siguiente
(inmunodeficiencia combinada grave Capítulo 6) un gen huésped que controla la
proliferación celular. La interrupción resultante dio las células T de pacientes de leucemia.
el diagnóstico de enfermedades. Las sondas moleculares están demostrando ser
extremadamente útil en el diagnóstico de enfermedades genéticas como tanto no genético
(por ejemplo, infecciosa). La aplicación de diagnóstico de la tecnología del ADN
recombinante se detalla más adelante en este capítulo.
Este fondo de desarrollo de la genética humana nos permite clasificar las enfermedades
humanas en tres categorías: (1) los determinados por el medio ambiente, (2) las determinadas
genéticamente y (3) aquellos en los que hay influencia de los factores ambientales y genéticos. La
obesidad puede parecer ser representativa de la primera categoría; Sin embargo, hasta ahora, con el
descubrimiento de genes que controlan la saciedad y metabolismo de la energía (capítulo 9), es
evidente que el exceso de nutrición - todas las enfermedades y un mayor o menor grado - está
condicionado por genotipo. En la tercera categoría por encima de encajar varias enfermedades
humanas importantes, tales como la úlcera péptica, diabetes mellitus, aterosclerosis, la
esquizofrenia, enfermedades autoinmunes, y la mayoría de los cánceres, en donde claramente la
naturaleza y la creación representan papeles significativos.
Está más allá del alcance de este libro revisa las enfermedades genéticas humanas normales.
Es beneficioso para revisar algunos conceptos fundamentales que sustentan nuestra comprensión de
las enfermedades genéticas. En primer lugar, sin embargo, aclaramos algunos términos comúnmente
utilizados - hereditaria, congénita y la familia. Las enfermedades hereditarias, por definición, se
derivan de uno de los padres y se transmiten en la línea germinal a través de las generaciones y por
lo tanto están familiarizados. congénita término significa simplemente "nace con". Algunas
enfermedades congénitas no son, por ejemplo genética, sífilis congénita. No todas las enfermedades
genéticas son congénitas; pacientes con enfermedad de Huntington, por ejemplo, comienzan a
expresar su condición sólo después de 20 o 30 años.
mutaciones
La mutación se puede definir como un cambio permanente en el ADN. Las mutaciones que
afectan a la línea germinal se transmite a la progenie y pueden conducir a enfermedades
hereditarias. Las mutaciones que surgen en las células somáticas no causan enfermedades
hereditarias, pero son importantes en la génesis del cáncer y algunas malformaciones congénitas.
Sobre la base de la extensión de los cambios genéticos, las mutaciones se pueden clasificar
en tres categorías. mutaciones genómicas que comprometen la ganancia o pérdida de cromosomas
enteros, lo que lleva a la monosomía o trisomía. mutaciones cromosómicas resultado de la
reordenación del material genético y dan lugar a cambios estructurales notables en el cromosoma.
Las mutaciones que implican cambios en el húmero de cromosomas se transmiten a baja frecuencia
porque la mayoría son incompatibles con la supervivencia. La gran mayoría de mutaciones
asociadas con enfermedades hereditarias son mutaciones de genes sub-microscópicas. Estos pueden
resultar en supresión parcial o completa de un gen o, más a menudo afectar a una sola base. Por
ejemplo, un solo nucleobase puede ser sustituida por una base diferente, lo que resulta en una
mutación puntual. Con menos frecuencia, uno o dos pares de bases pueden ser insertados o
eliminados a partir del ADN, lo que conduce a cambios en el marco de lectura de la cadena de
ADN; por lo que se conocen como mutaciones en fase de lectura. Las consecuencias de los cambios
varían dependiendo de varios factores, incluyendo el tipo de mutación y sitio genómico afectados
por ella. cambios específicos en detalle y sus efectos se discuten con enfermedades relevantes a lo
largo del texto. Aquí, una breve revisión de los principios generales relacionados con los efectos de
las mutaciones del gen.
Para resumir, las mutaciones pueden interferir con la síntesis de proteínas en varios niveles.
La transcripción puede suprimirse con deleciones genéticas y mutaciones puntuales que implican
secuencias de promotor. El procesamiento anormal de ARNm puede ser resultado de mutaciones
que afectan a intrones o uniones de empalme, o ambos. La traducción se ve afectada si se crea un
codón de terminación (terminación de la cadena mutación) dentro de un exón. Por último, algunas
mutaciones puntuales pueden conducir a la formación de proteína anormal sin interrumpir cualquier
etapa de la síntesis de proteínas.
Para concluir, cabe señalar que, en raras ocasiones, las mutaciones pueden tener un efecto
protector. Como se discutió en la sección 6, el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) utiliza
el CCR5 receptor de citoquina para entrar en las células; una deleción en el gen de CCR5 protege
así de la infección por VIH.
Ahora dirigimos nuestra atención a tres categorías principales de enfermedades genéticas y:
(1) las enfermedades relacionadas con el gran efecto genes mutantes; (2) enfermedades con
herencia multi-factorial, y (3) Trastornos cromosómicos. La primera categoría incluye varias
enfermedades relativamente poco comunes, tales como enfermedades de almacenamiento y errores
innatos del metabolismo, todo lo cual resulta de mutaciones en los genes individuales de gran
efecto. Como la mayoría de estas enfermedades sigue la herencia mendeliana clásica estándar, que
también son conocidos por enfermedades mendelianos. La segunda categoría incluye algunas de las
enfermedades más comunes en los seres humanos, tales como la hipertensión y la diabetes mellitus.
Son llamadas multifactoriales porque están influenciados por factores genéticos y factores
ambientales. El componente genético implica el conjunto de resultados de múltiples genes de efecto
pequeño; la contribución del medio ambiente puede ser grande o pequeña, y en algunos casos, es
necesario para la expresión de la enfermedad. La tercera categoría incluye las enfermedades que
resultan de mutaciones genómicas y cromosómicas y por lo tanto se asocian con cambios numéricos
o estructurales en los cromosomas.
Para estas tres categorías bien establecidas, debe añadirse a un grupo heterogéneo de
enfermedades monogénicas con patrones de herencia no clásicos. Este grupo incluye enfermedades
que resultan de mutaciones tri-nucleótidos, los que surgen en el ADN mitocondrial y aquellos donde
la transmisión es influenciada porInprintingmosaicismo genómico o gonadal. Enfermedades de este
grupo son causadas por mutaciones en los genes individuales, pero no siguen el patrón de herencia
mendeliana. Estos se discuten más adelante en este capítulo.
enfermedades mendelianas
cariotipo normal
Como es bien sabido, las células somáticas contienen 46 cromosomas; Estos comprenden 22
pares homólogos de autosomas y dos cromosomas sexuales, XX en las mujeres y XY en los
hombres. El estudio de los cromosomas - cariotipo - es la herramienta básica de citogenetista. El
procedimiento común para la producción de propagación cromosómico es detener la división de
células en mitosis durante la metafase huso mitótico mediante el uso de inhibidores (por ejemplo,
colcemid) y luego teñir los cromosomas. En una extensión cromosómica, los cromosomas
individuales toman la forma de dos cromátidas conecte primero el centrómero. Un cariotipo es la
disposición estándar de un cromosómica extendido en metafase manchado fotografiado y donde los
pares de cromosomas se disponen en la disminución de los tamaños.
Se han desarrollado una variedad de métodos de tinción que permiten la identificación de
cada cromosoma individual, basándose en patrones fiables y distintivos de bandas claras y oscuras a
lo largo de la longitud del cromosoma. Las bandas más comúnmente empleado utilizando la tinción
de Giemsa y se denomina por tanto bandas G G. En aproximadamente 400 a 800 bandas por
conjunto haploide se puede detectar. La resolución obtenida por técnicas de bandeo se puede
mejorar en gran medida mediante la obtención de células en la profase. Los cromosomas
individuales aparecen marcadamente alargada y hasta 1.500 bandas pueden ser reconocidos por
cariotipo. El uso de estas técnicas de bandeo permite la identificación precisa de cada cromosoma,
así como el diseño de los puntos de interrupción precisas y otros cambios, como se describe a
continuación.
Antes de esta discusión cariotipo completo, debe hacer una salvedad respecto a algunos
términos citogenéticas comunes. Los cariotipos se describen a menudo el uso de un sistema de
notación simplificada. La siguiente secuencia se utiliza: se da primero el número total de
cromosomas; seguido de la adición sexo y, finalmente, la descripción de las anormalidades en orden
numérico ascendente. Por ejemplo, un hombre con trisomía 21 se designa 47, XY, + 21. Algunas de
las notaciones que denotan cambios estructurales en los cromosomas se describen en el texto junto
ace anomalías. Aquí hay que mencionar que el brazo corto del cromosoma se llama p (depetit) Y el
brazo largo se llama Q (la siguiente letra del alfabeto). En un cariotipo bandeado, cada brazo del
cromosoma se divide en dos o más regiones de bandas prominentes. Las regiones están numeradas
(por ejemplo, 1, 2, 3) desde el centrómero. Cada región está dividida en sub-bandas y sub-bandas y
estos también están ordenadas numéricamente. Por lo tanto, la notación se refiere al segmento
cromosómico Xp21.2 situado en el brazo corto del cromosoma X en la región 2, la banda 1 y 2
subbanda.
La hibridación fluorescente "in situ". hibridación fluorescente "in situ" (FISH) se ha
convertido en un poderoso aliado en el cariotipo de rutina y el aumento de la potencia de análisis
genético. La limitación principal es que el cariotipo sólo es aplicable a células que se dividen o
pueden ser inducidas a dividir in vitro. Este problema puede ser solapada por las sondas de ADN
que reconocen secuencias cromosómicas específicas. Estas sondas se marcan con tintes
fluorescentes y se aplicaron a núcleos en interfase. La sonda se une a su secuencia complementaria
en el cromosoma y por lo tanto marca el cromosoma específico, que luego se puede ver con un
microscopio fluorescente. La FISH se puede usar entonces para enumerar los cromosomas en los
núcleos en interfase. Sin embargo, la aplicación de los peces no se limita a los núcleos en interfase.
Mediante el uso de sondas de ADN que son específicos para regiones específicas de cromosomas,
pone FISH pueden utilizar para demostrar las sutiles micro-deleciones, translocaciones y cambios
complejos telomérica que no se detectó en el cariotipo de rutina. Además de su utilidad diagnóstica,
FISH también se puede utilizar como una herramienta para mapear físicamente aislados nuevos
genes de interés clínico. nuevas secuencias de ADN se marcan con tintes fluorescentes y después se
aplican a la diseminación cromosómica. ADN se une a su secuencia complementaria, y por lo tanto
indica la ubicación del gen en un punto específico. pintura cromosómico es una extensión de FISH,
donde todo el cromosoma puede ser etiquetado por una variedad de sondas de ADN fluorescentes
que se unen a varios sitios a lo largo de un cromosoma particular. El número de cromosomas que se
pueden detectar de forma simultánea por la pintura cromosoma está limitada por la disponibilidad
de tintes fluorescentes que excitan diferentes longitudes de onda de la luz visible. De este modo, la
pintura ha cromosoma capacidad de visualizar los 46 cromosomas humanos al mismo tiempo
limitado. Esta dificultad se superó mediante la introducción del cariotipo espectral. Mediante el uso
de una combinación de fluorocromos, y cinco señales generadas por ordenador apropiado, todo el
genoma humano puede ser visualizado. El cariotipo espectral (SKY) es tan poderoso que puede
muy bien ser llamado "cariotipo espectacular."
Otra aplicación reciente de FISH compara directamente el contenido de ADN de las
poblaciones normales y tumorales de células marcadas de forma diferente por su co-hibridación en
espalhos cromosómica en metafase común (hibridación genómica comparativa) o en una serie de
clones de ADN placas de vidrio alineados (hibridación genómica comparativa en el arreglo). Por lo
tanto, se puede determinar cambios en el número de copias del gen de tumores específicos.
enfermedades citogenéticas
Diagnóstico molecular
Las aplicaciones médicas de la tecnología del ADN recombinante han alcanzado la mayoría
de edad. Con el proyecto genoma humano, sondas de ADN pueden ser herramientas poderosas en el
diagnóstico de enfermedades humanas, tanto genéticos y adquiridos. técnicas de diagnóstico
moleculares han encontrado aplicación en prácticamente todas las áreas de la medicina. Estos
incluyen los siguientes:
La edad materna avanzada (más de 34 años) debido al aumento del riesgo de trisomías.
Un padre que lleva una translocación equilibrada recíproca, una translocación o inversión
Robertsoniana (en estos casos, los gametos se puede desequilibrar, y por lo tanto los niños
están en riesgo de enfermedades cromosómicas).
Un padre con un hijo con una anomalía cromosómica.
Un padre que es portador de una enfermedad genética, ligada a X (para determinar el sexo
del feto).
Muchas enfermedades genéticas son causadas por cambios sutiles en los genes individuales
que no pueden ser detectados por cariotipo. Tradicionalmente, el diagnóstico de enfermedades
monogénicas ha dependido de la identificación de productos génicos anormales (por ejemplo,
enzimas o hemoglobina mutante) o sus efectos clínicos tales como anemia o retraso mental (por
ejemplo, fenilcetonuria). Ahora es posible para identificar las mutaciones a nivel de ADN y
proporcionar el diagnóstico genético de varias enfermedades mendelianas graves. El uso de
tecnología de ADN recombinante para el diagnóstico de enfermedades hereditarias tiene varias
ventajas sobre otras técnicas de: