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DE URGENCIA
Las técnicas citadas han sido recopiladas de libros, apuntes personales e internet, o bien
cedidas por colegas bioquímicos de diferentes laboratorios del país.
Ninguna de las técnicas es de producción personal, pero se les dio el ordenamiento de
MARCHA TOXICOLÓGICA que aplico en mis lugares de trabajo.
A. TÓXICOS VOLÁTILES
1. ETANOL
2ml del destilado + 0.5ml NH4(OH) + gota a gota solución yodo yodurada hasta tinte
oscuro
III. CUANTIFICACIÓN
Cp Ct Æ Cp = Ct . DOp
DOp DOt DOt
2. METANOL
Técnica
sodio y agitar hasta decoloración total, después de la cual se debe agregar 0.2ml del ácido
cromotrópico al 0.5% y mezclar bien colocando ambos tubos en un baño de hielo y sal.
Posteriormente se agregan 2.5ml de ácido sulfúrico concentrado y se lleva a baño maría
hirviente durante 15 minutos. Se deja enfriar y se mezcla, y se lee a 570 manómetros.
Para estimar la concentración del formol y del formaldehído debe hacerse una curva
de calibración, con una solución madre de metanol (790mg/l) que se prepara diluyendo
1ml de metanol absoluto en c.s.p. para 1.000ml con ácido sulfúrico al 10% v/v. En la tabla
inferior se detallan los puntos tentativos de la curva.
3. MONÓXIDO DE CARBONO
I- Reacciones de ORIENTACIÓN
1) ENSAYO DE DILUCIÓN
Se diluye en dos tubos rotulados, una muestra de sangre normal como testigo y la
muestra problema, al 1% en agua destilada (+ó-).
2) ENSAYO ALCALINO:
(Reacción de Hoppe – Seyler).. Se les agrega unas gotas de Na(OH) 0,1N a cada tubo y se
observa la diferencia y la velocidad de cambio de coloración.
III- CUANTIFICACIÓN
CARBOXIHEMOGLOBINA.
Método facilitado por la Red de Toxicología RETOXLAB
DEFINICIONES-ABREVITURAS: Carboxihemoglobina (COHb), Oxihemoglobina
(OHb), solución (sol), minutos (min).
DESARROLLO
MUESTRA:
Sangre obtenida por punción venosa o arterial y recolectada sobre Heparina en un tubo lo
más hermético y lleno posible (para evitar pérdidas por evaporación). Se puede conservar
hasta 48 hs en heladera. En lo posible remitir lo antes posible al laboratorio.
FUNDAMENTO:
Las distintas formas de la Hemoglobina tienen la particularidad de presentar bandas de
absorción en la región del espectro visible.
En solución alcalina y en presencia de hidrosulfito la oxiHb y la metaHb se transforman
en deoxiHb con un máximo de absorción a 555 nm.
La COHb no es afectada en estas condiciones y su máximo ocurre a 541 nm.
El empleo de la solución amoniacal es para formar hematina alcalina que posee una curva
de absorbancia distinta a la COHb y OHb.
REACTIVOS:
Solución de hidróxido de amonio 0.12M (1.6 ml de amoníaco en 100 ml de agua
destilada), es estable en heladera por un año. Hidrosulfito de sodio sólido (ditionito), ácido
sulfúrico, formiato de sodio, hidróxido de sodio 10 %(P/V).
INSTRUMENTAL:
Espectrofotómetro que posea un ancho de banda de 3nm. Celdas de lectura de 10 mm de
paso de luz. Centrífuga. Equipo generador de monóxido de carbono.
TÉCNICA:
1.- Realizar una dilución de la sangre 1/10 en agua (0.5 ml + 4.5ml). Homogeneizar. Dejar
en reposo 5 min. Y centrifugar 10 min a 3000 rpm.
2.- Tomar 0.5 ml de la sol anterior y colocar en 4.0 ml de sol amoniacal y agregar una
pizca (aproximadamente 10 mg) de ditionito. Homogeneizar y dejar reposar 5 min.
3.- Leer las absorbancias a 541 y 555 nm.
4.- Obtener el cociente de absorbancias Ab 541/Ab 555.
Cálculo:
Empleando la relación obtenida en el punto 4 anterior, entrar en la curva de calibración (o
empleando la ecuación de regresión lineal) y hallar el % de COHb.
Construcción de una curva de calibrado:
A una muestra de sangre fresca obtenida con heparina (o pool de muestras) de pacientes
normales, no fumadores y sin patologías respiratorias, efectuar dos diluciones 1/10 por
separado en agua.
A una fracción hacer burbujear Oxígeno de 99.5% de pureza por 15 min para eliminar el
posible monóxido de carbono presente.
A una segunda fracción hacer burbujear monóxido de carbono durante 20 min obtenido a
partir de ácido sulfúrico y formiato de sodio (como se describe en el diagrama); si se
dispone de un tubo de monóxido de 99.5% de pureza, burbujear 5 min. De esta manera se
obtendrá una sangre con 100% de saturación.
4. CIANUROS
I. REACCIÓN DE IDENTIFICACIÓN
II. CUANTIFICACION:
2ml del destilado o de cámara de Conway en medio amoniacal (NH3, 6N) + IK , se titula
con NO3Ag 0,1 N hasta turbidez amarilla de IAg ( se basa en la acción disolvente del
anión cianógeno sobre el IAg coloidal, mientras haya CN- se forma el complejo
ARGENTICIANOGENO soluble, cuando se acaba el CN- se forma la turbidez del IAg)
5. TOLUENO
I. REACCIÓN DE ORIENTACIÓN
II. CUANTIFICACIÓN
6. CLORADOS
I. REACCIÓN DE ORIENTACIÓN
7. BENCENO
I. CUANTIFICACIÓN
Reactivos
Método
a. Ajustar el pH de 1.0ml de muestra o del estándar a 2 con el ácido
clorhídrico 0.05mol/l, y agregar el cloruro de sodio hasta saturación.
I. REACCIÓN DE ORIENTACIÓN
1) Reacción de DILUCIÓN
Con niveles importantes se ve sangre color chocolate que no cambia a rojo – rosa
incluso luego de 10 minutos de contacto con el aire.
II. CUANTIFICACIÓN
1) Método ESPECTROFOTOMÉTRICO
Los métodos de cuantificación se basan en que lla hemoglobina presenta un máximo
de absorción a 522nm y la metahemoglobina a 578nm. Se realizan lecturas a ambas
longitudes de onda de un hemolizado desconocido y un control al que se le agrega
ferricianuro de potasio para llevar toda la hemoglobina a metahemoglobina.
Materiales
2) PARAAMINOFENOL: metabolito.
B. TÓXICOS METÁLICOS
EXTRACCIÓN Y REACCION DE ORIENTACIÓN GENERAL Ensayo de Reinsch:
para arsénico, antimonio, bismuto y mercurio
RESULTADO:
1. ARSÉNICO
I. REACCIONES DE ORIENTACIÓN
REACTIVO
Hipofosfito de Na 10gr
Agua destilada 10ml
ClH puro 100ml
1) Método de Gutzeit
Se puede realizar en la laminilla usada para la reacción de Reinsch o en la solución
proveniente de la mineralización sulfo- nitro – perclórica. FORMACIÓN DE
ARSENAMINA.
Reactivos:
- ClH purísimo
- Cl2Sn al 40 % en ClH al 60 % en vol.
- Zn puro
- NO3Ag puro
- Papel impregnado y seco en sol. Alcohólica de Cl – o Br- mercúrico al 5% cortar en
franjas para adaptar al tubo C
A: Erlenmeyer
otro ensayo de identificación. Depositar 1 gota de agua sobre los cristales y se observará de
inmediato que el color amarillo desaparece y se hace negro (Agº)
Depósito sobre Cu
2AsO3H2- + 6 Cu ° + 8 H+ → As2 Cu3 + 6 H2O + 3 C u++
As2O3 + 6 Cu ° + 6 H+→ As2 Cu3 + 3 H2O + 3 C u++
2. TALIO
I. REACCIONES DE ORIENTACIÓN
1) TECNICA DE KOVARIN-MOUCKA
Puede realizarse en forma directa (orina) o sobre el producto de la mineralización.
A 2 ml de la solución acuosa – sulfúrica del mineralizado obtenido por vía húmeda, o bien,
a 2ml de orina, agregar 2 gotas de ClH puro y 5 gotas de agua de Br a saturación. Agitar
bien y dejar reposar durante 2 minutos. Reducir el exceso de Br por agregado de 5 gotas
de solución acuosa de ácido sulfosalicílico al 20 % agitando enérgicamente después del
agregado de cada gota (no debe percibirse olor a Br). Agregar 2 – 3 ml de benceno y luego
2 gotas de violeta de metilo en solución acuosa al 0.2 %. Agitar enérgicamente y dejar
separar: en presencia de Tl la capa bencénica superior adquiere color azul – violeta a
violeta de intensidad variable. Es importante ensayar el benceno (blanco) usando una
solución acuosa – sulfúrica al 10 % en volumen. LA capa inferior acuosa adquiere color
verde o amarillo de acuerdo con la acidez del medio, ya que el colorante se comporta como
un indicador.
Ensayo negativo: capa orgánica superior incolora, mientras el colorante queda en la fase
inferir o acuosa.
Ensayo positivo:
El Tl es oxidado por el Br:
Tl +3 + 4 Cl- → Cl4Tl-
El complejo (Cl4Tl-) origina el derivado que sigue, con el violeta de metilo, de color azul a
azul – violeta.
El violeta de metilo es una mezcla de los clorhidratos tetra, penta y hexametil p –
rosanilina. Algunos autores recomiendan usar el violeta cristal como colorante, ya que es
un compuesto puro (clorhidrato de exametilrosanilina). Este ensayo puede realizarse con
otros colorantes derivados del trifenilmetano como el verde brillante y verde malaquita. Se
ha visto que en las condiciones de mineralización el Au interfiere notoriamente, no así los
elementos normales y otros que pueden estar presentes.
II. CUANTIFICACIÓN
Reactivo
a. Reactivo del cianuro. Disolver 1.6 g de hidróxido del sodio, 1.2 g de
tartrato de sodio de potasio y 1.36g de cianuro del potasio en 10 ml de
agua.
b. Solución del Ditizona (250mg/l) en el cloroformo (recién preparado)
Estándares
a. Orina como blanco.
b. Orina a la cual se ha agregado una solución del acetato del talio en el
agua purificada (1.0-g/l) para dar concentraciones de ion talio de 0.1,
1.0, 5.0 y 10.0mg/l.
Método
a. Agregar 1 ml de reactivo de cianuro a 5 ml de muestra o al estándar
en un tubo de vidrio de 10ml tapado agitar en vortex por 10 segundos.
1) ANALGÉSICOS
b. SALICILATOS
TÉCNICA
INTERPRETACIÓN
2. HERBICIDAS
1) Test de Marquis
Resultados:
7. DROGAS DIVERSAS
Esta técnica, cuando no tenemos otro métodos con tecnología de última generación
para realizar exámenes de certeza, se puede transformar en tal cuando realizamos una
corrida general para ácidos ó básicos tipo screening primero y luego una corrida
específica para cada sustancia, SIEMPRE con TESTIGOS, y si se puede en dos solventes
diferentes para tener dos rf cada uno con su testigo.
1) EXTRACTO ÁCIDO
REVELADORES:
Para aspirina: Cl3Fe al 5%.
Para barbitúricos: El más sencillo sol. acuosa de MnO4K2.
Secuencial:
Acetato de cobalto en metanol una pizca. Siembra barbitúricos
Li(OH) en metanol.
A estufa: barbitúricos: color violeta.
b. PESTICIDAS
1) Reacción de orientación:
REVELADORES: secuencial
Observar con luz UV.
Solución de Cl de Pd al 5% en ClH al . (fosforados amarillos)
Na(OH) al 10%: fosforados amarillos y marrones. Este paso ES OBLIGATORIO.
Para nitro benceno/tetra/fluoroborato una pizca en etanol – dietilénglicol (9:1).
Carbamatos, violetas o azules.
2) EXTRACTO ALCALINO
Para benzodiazepinas, cocaína, marihuana, anfetaminas, antidepresivos, antisicóticos
y cualquier droga alcalina., también ESTRICNINA. TRABAJAR CON TESTIGOS.
REVELADORES: secuencial
1- Observación con UV: se observa con UV. Las benzodiazepinas se ven celestes
fluorescentes en la parte superior de la placa, van casi con el solvente de corrida.
Marcha Toxicológica de Urgencia
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3- Con NQS (Nafto Quinón Sulfonato de Sodio): se prepara con un poquito de droga y
agua.
4- Con IODOPLATINATO:
Solución 1: iodoplatinato 1gr
Agua 20ml