TECNICATURA EN ANLISIS CLNICOS

BIOQUMICA

CLASE 3
 ENZIMAS
Las enzimas son protenas, producidas por los seres vivos que tienen
capacidad para catalizar con gran eficiencia procesos muy
especficos.

Un catalizador es una sustancia que aumenta la velocidad de una

reaccin, sin verse alterada en el proceso global.
Ejemplos de reacciones enzimticas:
gluclisis.
Ejemplos de reacciones enzimticas: ciclo
de la urea (hepatocitos).

1- carbamoil-fosfato-sintetasa I
2- ornitina transcarbamoilasa
3- argininosuccinato sintetasa
4- arginino succinato liasa
5- arginasa
* Las enzimas ejercercen su poder cataltico en condiciones suaves de
temperatura, pH, presin, etc., compatibles con la vida. Adems, las
enzimas son catalizadores susceptibles de regulacin en su actividad, lo
que permite armonizar el entramado metablico de acuerdo con las
necesidades del organismo.
Ausencia de enzimas NO metabolismo celular NO vida
* Aplicaciones de las enzimas:
- Anlisis clnico
- Aplicaciones mdicas
- Aplicaciones industriales
* Qumica orgnica
* Qumica farmacutica
* Alimentacin
* Detergentes
* Textil
 Coenzimas: Ciertas enzimas requieren de
ciertos compuestos para cumplir con su funcin
cataltica; estas molculas se denominan
coenzimas y son generalmente vitaminas o
metales.

Los inhibidores enzimticos son molculas

que se unen a las enzimas y disminuyen su
actividad. Algunos anticoagulantes pueden
actuar como inhibidores enzimticos.
Inhibidor enzimtico
Formas multiples de una enzima: Isoenzimas

Definicin:
Isoenzimas o Isozimas son cualquiera de las mltiples formas de
una enzima, proveniente de diferencias determinadas genticamente
en la estructura primaria.
* El trmino Isoenzima es un trmino operacional, que hace
referencias a un conjunto de enzimas que catalizan la misma reaccin en
la misma clula o en el mismo organismo.
Lctico deshidrogenasa; posee 5 isoenzimas
 Creatinafosfokinasa
Posee tres isoenzimas.

CK-MM o CK 3 (localizacin muscular)

CK-MB o CK2 (localizacin cardaca)
CK-BB o CK 1(localizacin cerebral)
Clasificacin de las enzimas segn
el tipo de reaccin que catalizan

Oxidorreductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas
Ligasas
 Enzimologa Clnica
Se define a la enzimologa clnica como a
la aplicacin del estudio de las enzimas.
La cuantificacin de las enzimas se realiza
a travs de la medida de la velocidad de
reaccin del sistema que catalizan.
 Clasificacin clnica de Bcher
1. Enzimas Plasmoespecficas

2. Enzimas secretadas o exocitoenzimas

3. Enzimas celulares o endocitoenzimas

 Clasificacin clnica de Bcher
1.Enzimas Plasmoespecficas:
Enzimas que participan en la coagulacin (ej:
plasmingeno, protrombina)
pseudocolinesterasa.
Son sintetizadas fundamentalmente por el
hepatocito.
Interesa fundamentalmente sus valores
inferiores. Una disminucin de su actividad
indica alteracin de la sntesis; (alteracin de
la funcionalidad heptica).
2.Enzimas secretadas o exocitoenzimas.

Son enzimas secretadas por glndulas o

tejidos muy especializados.
Ejemplo: enzimas digestivas pancreticas
que actan en el duodeno
amilasa
Lipasa
tripsina
3.Enzimas celulares o endocitoenzimas

Tienen lugar de accin dentro de la misma

clula que las sintetiza, no tienen accin
en el plasma.
Ubicuas (LDH, GPT, GOT, CK)
Organoespecficas. (enzimas del ciclo de la
urea; 5 nucleotidasa; isoenzimas especficas
como CK MB, LDH1)
ENZIMAS PANCRETICAS
 ENZIMAS PANCRETICAS
Baja actividad en sangre
Sus niveles aumentan en patologas
agudas como pancreatitis aguda.
En patologas crnicas su actividad est
disminuda en su lugar de accin
(duodeno).
Determinacin de enzimas sricas hepticas.
 Determinacin de enzimas
sricas hepticas.
Enzimas de inters clnico (Hepatopatas)

Transaminasas (GOT/GPT).
Fosfatasa alcalina (FAL)
Gammaglutamiltranspeptidasa (GGT)
5 nucleotidasa (5ND)
Hepatitis: Lesin o necrosis de los hepatocitos
Etiologa fundamentalmente viral; tambin puede ser de origen txica o
autoinmune.

Colestasis: Impedimento total o parcial de la llegada de la bilis al duodeno

por incapacidad para su formacin o flujo causado por una gran cantidad de
enfermedades.
Etiologa: Intrahepticas (ej: hepatitis aguda, hepatitis crnica, cirrosis ,
tumores o quistes hepticos); Extrahepticas (ej: Litiasis biliar, tumores).

Perfil heptico
- Marcadores de compromiso inflamatorio y/o compromiso necrtico:
Transaminasas (GPT/GOT)
Glutamato deshidrogenasa (GDH)
sorbitol deshidrogenasa (SDH).

- Marcadores de compromiso colestsico:

Fosfatasa alcalina (FAL)
Gammaglutamiltranspeptidasa(GGT)
5Nucleotidasa.
 Transaminasas (GPT/GOT).
Realizan reacciones de transaminacin
(transferencia del grupo amino de un
aminocido dador a un cetocido aceptor).
No son especficas del hgado (tambin se
encuentran en msculo, corazn, pncreas y
cerebro).
En todas las enfermedades hepticas que
cursan con necrosis celular existe
hipertransaminasemia (en hepatitis vricas y
txicas aumentan hasta 10 veces el valor
normal)
 Gammaglutamiltranspeptidasa
(GGT)
Cataliza la transferencia de grupos
gammaglutamil de un pptido a otro o de
un pptido a un aminocido.
Se encuentra en rin, pncreas, hgado,
bazo y el pulmn.
Aumenta en la mayora de las
enfermedades del hgado.
 Fosfatasa alcalina (FAL)
Se encuentra en hgado, rin, placenta,
intestino, huesos y leucocitos).
Durante el crecimiento, los niveles sricos
son altos debido al aumento de la fraccin
sea, lo mismo ocurre durante el
embarazo).
Valores de referencia
Adultos: 15-69 UI/l
Nios: hasta 150 UI/l
Determinacin de enzimas sricas
en el infarto de miocardio
Creatinafosfokinasa; Posee tres
isoenzimas.
CK-MM o CK 3 (localizacin muscular)
CK-MB o CK2 (localizacin cardaca) (6-8 hs)
CK-BB o CK 1(localizacin cerebral)
Lactato deshidrogenasa
LDH1 (24-60 hs)
GOT (16-48 hs)
Infarto de miocardio
 Determinacin de enzimas en el
laboratorio.
Mtodos de una sola medida o de tiempo de incubacin
fija: Se determina la actividad de la enzima, despus de
actuar en el sistema durante un tiempo determinado,
midiendo luego, colorimetricamente un producto de
reaccin, o la disminucin de un sustrato.
Mtodos cinticos o de medidas mltiples o de
monitoreo continuo: Se determima la variacin de
absorcin de algn componente del sistema (sustrato
o producto de la reaccin) a travs de varias medidas
sucesivas en intervalos cortos de tiempo, que
aseguren la linealidad de la reaccin (velocidad de
reaccin constante).
Cintica enzimtica
 Lactato deshidrogenasa (LDH)
EC 1.1.1.27
Mtodo cintico segn la Federacin Internacional de Qumica Clnica
(IFCC)

LDH
L-lactato + NAD+ Piruvato + NADH + H +

Reactivos
Medicin de la absorbancia (340 nm)
NAD+ cada 10 segundos durante 2-3 minutos.
L(+) Lactato
Buffer N-metil-D-glucamina UI A
=
Condiciones l b min l
Temperatura 300,05 C
pH 9,4 0,05
 Espectrofotometra
La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms
usado en las investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro
es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida
o transmitida por una solucin que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad
conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el
vidrio que parece ser completamente transparente absorbe
longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua
absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo.
La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e
infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es
caracterstica para cada sustancia qumica.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es
absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto
sin ser absorbida.
Espectrofotmetro UV/visible de doble haz
Evolution 600 UV-Vis