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CDIGO: PPL-LAB-01-PNI

Versin: 1.0
FRACCIONAMIENTO Fecha de vigencia: 03/2015
PRIMARIO
UCE- FAC.CCQQ
LABORATORIO
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DE PRODUCTOS
NATURALES I

PRCTICA # 3
TEMA: Fraccionamiento Primario

1. OBJETIVO:
Realizar el fraccionamiento primario del extracto total de hojas y flores de Bidens
andicola.

2. ALCANCE:
El presente instructivo debe ser puesto en conocimiento por el docente y aplicado por los
estudiantes del laboratorio de Productos Naturales de la Facultad de Ciencias Qumicas
de la Universidad Central de Ecuador.

3. DEFINICIONES:
Cromatografa: Es un conjunto de tcnicas de separacin de sustancias utilizadas
con funcin analtica de purificacin y que se basan en la diferente capacidad de
migracin de los componentes de una muestra al ser arrastrados por una fase mvil
(eluyente) en su desplazamiento a travs de una fase estacionaria (materia porosa)
(Casado Snchez, Durn Barquero, & Paredes de la Sal, 2012).

Gel de slice: Es la fase estacionaria ms comnmente utilizada por los qumicos or-
gnicos de laboratorio para separar mezclas. El gel de slice es un cido silcico altamente
poroso, deshidratado y pulverizado a un tamao de partcula de 0.04 - 0.2 mm con un
dimetro de poro de 50 - 100 A, y una superficie de 200 - 400 m2 por gramo. (Guarnizo
& Martnez, 2007).

4. RESPONSABILIDADES:

RESPONSABLE ACTIVIDADES
Profesor de la Ctedra de PNI Poner en conocimiento el presente instructivo
Verificar el cumplimiento del presente
instructivo.
Ayudante de Ctedra de PNI
Proveer el material y materia prima necesaria para
la realizacin de la prctica.

Estudiante de Ctedra de PNI Poner en prctica el siguiente instructivo.

Mireya Medina Dr. Fernando Novillo


Elaborado Revisado Aprobado

Cargo: Ayudante de Ctedra Cargo: Docente de Ctedra Cargo:

Firma Firma Firma


Nombre y Apellido Nombre y Apellido Nombre y Apellido
Fecha: 23 Septiembre 2016 Fecha: 05 Octubre 2016 Fecha:
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Cuidar recursos, limpiar y ordenar el lugar de


trabajo.

5. CONTENIDO:

a. MTODO

Mtodo estndar utilizado en los laboratorios de Productos Naturales.

b. FUNDAMENTO

b.1 SEPARACIN DE LOS CONSTITUYENTES ACTIVOS

Mtodos cromatogrficos
Cristalizacin fraccionada
Combinacin de reacciones qumicas y procesos de particin
Mtodos qumicos
Destilacin fraccionada
Liberacin fraccionada (Mata Essayag, 2000).

b.2 PURIFICACIN DE LOS PRINCIPIOS ACTIVOS

Mtodos cromatogrficos
Cristalizacin
Sublimacin
Destilacin

La cristalizacin es una de las tcnicas ms efectivas en la purificacin de substancias en


estado slido. Los compuestos cristalinos generalmente son ms estables y fciles de
manipular que las soluciones o aceites, y pueden caracterizarse e identificarse
correctamente.

Los cristales pueden obtenerse a partir del fundido (fase lquida super-.enfriada), la fase
de vapor (en la sublimacin), o a partir de una solucin sobresaturada. La cristalizacin a
partir de una solucin sobresaturada es la que se emplea.

b.3 IDENTIFICACIN DE CONSITUYENTES QUMICOS

Se puede emplear pruebas: fsicas, qumicas e instrumentales


Entre las fsicas:
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1. Realizar punto de fusin y TLC (comparar Rfs experimentales con


tericos)

Entre las qumicas:


1. Reacciones de identificacin, dependientes del tipo de metabolito.
2. Reveladores qumicos
Entre las instrumentales:
1. Infrarrojo
2. HPLC acoplado a masas

c. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

c.1 Materiales
Vaso de precipitado
Vidrio reloj
Columna
Lana de vidrio
Varilla de vidrio
Base de caja petri

c.2 Equipos
Estufa
Balanza

c.3 Reactivos
Sulfato de sodio anhidro
Hexano
Acetato de etilo

d. PROCEDIMIENTO

d.1 SEPARACIN DE LOS CONSTITUYENTES QUMICOS

d.3.1 Cromatografa en columna

Consideraciones iniciales:
*Cantidad de adsorbente que se requiere: de 30 a 100 veces el peso de la muestra
(50 veces es un buen promedio).
*Dimensiones de la columna: el adsorbente se debe empacar en sta en una
proporcin de altura/dimetro de 10:1; para estimar la cantidad de adsorbente en
relacin con el dimetro de la columna.
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*Las Velocidades del flujo altas proporcionan malas separaciones. Una regla
emprica indica de 3 a 4 ml por minuto en una columna de 40 cm de altura.

1. Sujetar firmemente la columna en forma vertical


2. Comprimir firmemente un pedazo de algodn en el fondo de la columna con una
varilla de vidrio y cbrala con una capa de arena de mar o sulfato de sodio anhidro
bien limpia (aproximadamente 0.5-1 cm).
3. Vaciar el adsorbente previamente pesado:
a) Almina: en forma de un fluido delgado, mientras la columna se golpea
suavemente con un pedazo de manguera de hule.
b) Gel de slice: como una papilla en el disolvente o totalmente seca.
4. Permitir que el disolvente corra (golpeando suavemente la columna) hasta que
quede aproximadamente 1 mm por arriba de la parte superior del adsorbente.
5. Disolver la substancia en la cantidad mnima de disolvente (que no sea ms polar
que el eluyente) y aplicar con cuidado y uniformemente en la parte superior de la
columna (con la llave cerrada).
6. Despus, abrir la llave y permitir que el disolvente corra hasta que quede
nuevamente una capa de 1 mm por arriba del adsorbente. Repita la misma
operacin varias veces utilizando cantidades pequeas de eluyente.
7. Llenar cuidadosamente con el eluyente el volumen de la columna que queda por
arriba del adsorbente, para proteger la superficie de ste, se puede depositar una
capa de arena de mar o de sulfato de sodio anhidro de 1 cm de espesor en la parte
superior de la columna.
8. Abra la llave y colecte el eluyente en fracciones.
9. Evaporar cada fraccin
10. Pesar el residuo
11. Las fracciones que contienen los mismos componentes (corrobore por medio de
TLC) pueden combinarse, purificarse (por cristalizacin, destilacin) y
posteriormente caracterizarse.

d.2 IDENTIFICACIN DE CONSTITUYENTES QUMICOS

Realizar pruebas fsicas:


Punto de fusin
TLC

e. CLCULOS
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Rf =
( )

6. BIBLIOGRAFA

1. Casado Snchez, E. M., Durn Barquero, P., & Paredes de la Sal, A. J. (2012).
Operaciones bsicas de laboratorio. Madrid: Paraninfo.
2. Mata Essayag, R. (s.f.). Curso de Farmacognosia.

7. ANEXOS

Figura 1: TLC - Tomada de (Casado Snchez, Durn Barquero, & Paredes de la Sal, 2012)
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Figura 2: Cromatografa en columna (Casado Snchez, Durn Barquero, & Paredes de la Sal, 2012)

CUESTIONARIO

1. El TLC puede utilizarse para fines cuantitativos? Explique


2. Cuntos y cules son los otros tipos de cromatografa existentes?

8. CONTROL DE CAMBIOS

Revisin N Fecha Razn de la modificacin


Versin 1.0 05 Octubre 2016 Versin Inicial

9. LISTA DE DISTRIBUCIN

Copia N de Documento Cdigo rea Cargo del


copias responsable
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impresa 1 prctica de LAB-01- Asignatura
laboratorio PNI
Original Instructivo de PPL- Archivo Docente /
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Controlada 1 prctica de LAB-01- Asignatura
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Controlada 1 prctica de LAB-01-
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