3.

BIOSINTESIS DE NUCLEOTIDOS PURICOS

Vernica Gonzlez Nez

Universidad de Salamanca
ESQUEMA. Biosntesis de nucletidos pricos

1. Va de novo de la biosntesis de nucletidos pricos

- Precursores
- Caractersticas de la va
- Reacciones de la va hasta la sntesis del IMP
- Balance
- Sntesis de ATP y GTP
- Sntesis de nucletidos trifosfato
- Sntesis de purinas vs. pirimidinas
- Agentes bloqueantes de la va de novo

2. Regulacin de la biosntesis de nucletidos pricos

- Regulacin de la va de novo de biosntesis de nucletidos pricos
- Regulacin coordinada de las sntesis de purinas y pirimidinas

3. Va de recaptacin de nucletidos pricos

4. Catabolismo de los nucletidos pricos

5. Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos

- Sndrome de Lesch-Nyhan: deficiencia en HGPRT
- Hiperuricemias y gota
SINTESIS DE NOVO DE NUCLEOTIDOS PURICOS

PRECURSORES

CO2
Gly
Asp
Formato

Formato
Gln

Estudios con marcaje radiactivo

Caractersticas de la va

- 2 procesos: Sntesis del IMP 11 pasos

Sntesis de AMP & GMP

- Los tomos del anillo prico se incorporan 1 a 1, excepto la Gly

- El anillo prico se sintetiza unido a la ribosa-5P

- Elevado gasto : 7 ATP / IMP

- Localizacin: en el hgado

Channeling en animales en la sntesis del IMP

3 polipptidos multifuncionales

- Fosforribosil aminoimidazol sintasa: reacciones 3, 4, 6

- Fosforribosil aminoimidazol succinil carboxamida sintasa: reacciones 7 & 8
- IMP sintasa: reacciones 10 & 11
SINTESIS DEL IMP

Fuente de la imagen
http://en.wikipedia.org/wiki/Category:Biochemistry
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1. Sntesis de la PRPP (I)

-D-ribosa-5P + ATP PRPP + AMP

Ribosa5P Fosforribosilpirofosfato (PRPP)

Ciclo de las pentosas-P

Precursor de:
- nucletidos pirimidnicos
- His & Trp
Enzima: Ribosa-5P pirofosfokinasa
1. Sntesis de la PRPP (II)

Enzima: Ribosa-5P pirofosfokinasa

Mecanismo: ataque nucleoflico del C1-OH de la ribosa al enlace fosfato- del

ATP y transferencia del grupo pirofosfato
Formacin de un enlace en configuracin entre el fosfato y el C1 de la ribosa

PRPP: reactivo limitante en la sntesis de nucletidos pricos

Regulacin: + PPi, 2,3BPG

- ADP & GDP
2. Adquisicin del N9 de la Gln (I)

PRPP + Gln + H2O P-ribosil--amina + Glu + PPi

PRPP Fosforribosilamina

Enzima: Amido-fosforribosil-transferasa

(PPi 2Pi Enzima: pirofosfohidrolasa)

2. Adquisicin del N9 de la Gln (II)

PRPP + Gln + H2O P-ribosil--amina + Glu + PPi

Enzima: Amido-fosforribosil-transferasa

(PPi 2Pi Enzima: pirofosfohidrolasa)

- Primera reaccin especfica de la va

- Punto clave en la regulacin

- Inversin de la configuracin

- Inhibicin por retroalimentacin negativa

3. Adquisicin de los tomos C4, C5 & N7 de la Gly

fosforribosil--amina + Gly + ATP GAR + ADP + Pi

Fosforribosilamina GAR

Enzima: GAR Sintetasa

GAR: Glicinamida ribtido

- Formacin de un enlace amida con el grupo COOH de la Gly

- Formacin de un intermediario activado (acil-P)

Gly + ATP NH2-CH2-COO-PO32- +ADP

4. Adquisicin del C8 (I)

GAR + N10-formil-THF FGAR + THF

GAR FGAR

Enzima: GAR Transformilasa

FGAR: Formilglicinamida ribtido

4. Adquisicin del C8 (II)

GAR + N10-formil-THF FGAR + THF

Enzima: GAR Transformilasa

- C cedido por el N10-formil-THF procede de Ser / Gly

- Grupo formilo clave en la condensacin del ciclo

Mecanismo

Ataque nucleoflico del grupo NH2 del GAR al grupo formilo del N10-formil-THF

Formacin de un intermediario tetradrico

Transferencia del grupo formilo

5. Adquisicin del N3 (I)

FGAR + Gln + ATP + H2O FGAM + Glu + ADP + Pi

FGAR
Enzima: FGAM Sintetasa

FGAM
Formilglicinamida ribtido

FGAM
5. Adquisicin del N3 (II)

FGAR + Gln + ATP + H2O FGAM + Glu + ADP + Pi

Mecanismo de accin de la FGAM sintetasa

1. C=O de FGAR (forma isoamida) + ATP intermediario P-ster

Gln (C amidado) + SH de la enzima formacin de un tioster

2. Hidrlisis del tioster: Glu + NH3

3. NH3 + P-ster formacin de un aducto tetradrico

4. Desfosforilacin y formacin del enlace imino

6. Cierre del anillo imidazol

FGAM + ATP AIR + ADP + Pi

FGAM AIR

Enzima: AIR Sintetasa

AIR: 5-aminoimidazol ribtido

- Condensacin intramolecular

- Tautomerizacin imino # enamino propiedades aromticas

7. Adquisicin del C6 (I)

AIR + ATP + HCO3- CAIR + ADP + Pi

AIR CAIR

Enzima: AIR Carboxilasa

CAIR: Carboxiaminoimidazol ribotido

7. Adquisicin del C6 (II)

AIR + ATP + HCO3- CAIR + ADP + Pi

Enzima: AIR Carboxilasa

- Carboxilacin directa con aporte de

- Ausencia de biotina

- AIR carboxilasa de E. coli: heterodmero PurE & PurK

(sinergia cataltica)
8. Adquisicin del N1

CAIR + Asp + ATP SACAIR + ADP + Pi

CAIR
SAICAR
Enzima: SACAIR Sintetasa

SACAIR: 5-aminoimidazol-4-N-succinil carboxamida ribtido

- Condensacin y formacin de un enlace amida

- Reaccin parecida a la reaccin 3 (GAR sintetasa)

9. Eliminacin del fumarato (I)

SACAIR AICAR + fumarato

AICAR
SAICAR

Enzima: Adenilsuccinato liasa

AICAR: 5-aminoimidazol-4-carboxamida ribtido

9. Eliminacin del fumarato (II)

SACAIR AICAR + fumarato

Enzima: Adenilsuccinato liasa

- Transformacin de un grupo carboxilo en un grupo amida

- Reaccin anaplertica del ciclo de Krebs

Gran importancia en el metabolismo muscular

- Reacciones 8 + 9 anlogas a la amidacin de la citrulina para formar Arg

(en el ciclo de la urea)
10. Adquisicin del C2

AICAR + N10-formil-THF FAICAR + THF

AICAR FAICAR

Enzima: AICAR Transformilasa

FAICAR: 5-formaminoimidazol-4-carboxamida ribotido

- Similar a la reaccin 4

- Grupo formilo clave para la condensacin del ciclo

11. Cierre del anillo y formacin del IMP (I)

FAICAR IMP + H2O

FAICAR IMP

Enzima: IMP Ciclohidrolasa

IMP: Inosina monofosfato

Base prica del IMP: hipoxantina

11. Cierre del anillo y formacin del IMP (II)

FAICAR IMP + H2O

Enzima: IMP Ciclohidrolasa

- Condensacin intramolecular en ausencia de hidrlisis de ATP

- El IMP no se acumula en la clula, sino que se transforma rpidamente

en AMP & GMP

Balance de la sntesis de IMP

2 ATP en el paso 1: sntesis de PRPP
1 ATP en el paso 3: GAR sintetasa
1 ATP en el paso 5: FGAM sintetasa
1 ATP en el paso 6: AIR sintetasa
1 ATP en el paso 7: AIR carboxilasa
1 ATP en el paso 8: SACAIR sintetasa
Balance total: 7 ATP
SINTESIS DE AMP (I)

IMP + Asp + GTP adenilsuccinato + GDP + Pi

IMP Adenilsuccinato

Enzima: Adenil-succinato sintetasa

Sntesis de AMP (II)

Adenilsuccinato fumarato + AMP

Adenilsuccinato AMP

Enzima: Adenilsuccinato liasa

Reaccin global: sustitucin del grupo ceto en C6 por un grupo amino

Es la misma enzima que la que cataliza la reaccin 9 de la sntesis del IMP

Balance : + 1 ATP
SINTESIS DE GMP (I)

IMP + NAD+ +H2O XMP + NADH + H+

IMP XMP

Enzima: IMP DH

Flavoenzima

XMP: Xantosina monofosfato

Sntesis de GMP (II)

XMP + Gln + ATP + H2O GMP + Glu + AMP + PPi

XMP GMP

Enzima: GMP sintetasa (PPi 2Pi)

Reaccin global: introduccin de un grupo amino en C2

Balance : + 2 ATP
SINTESIS DE NUCLEOTIDOS DI- & TRIFOSFATO

Nuclesido monofosfato kinasas

AMP+ATP 2ADP Enzima:Adenilato kinasa

GMP+ATP GDP+ADP Enzima:Guanilato kinasa

NodistinguenNMPsdedNMPs
Altaespecificidaddebasenitrogenada

Nuclesido difosfato kinasa

ATP+GDP ADP+GTP

Bajaespecificidaddebasenitrogenada
Reaccionescercanasalequilibrio

Mecanismocatalticodepingpong
1.NTPfosforila unresiduodeHis delaenzima
2.Laenzimatransfiereelgrupofosforilo alotroNDP NTP

ImportanciaBiomedica: Activacindenuclesidos antiviralescomolaAZT

SINTESIS DE PURINAS vs. PIRIMIDINAS

Purinas Pirimidinas
Adicindelostomos1a1 Sntesisapartirde2precursores
(exceptolaGly) metablicos
Adicindelostomossobrela Sntesisdelanillopirimidnico y
ribosa5P posterioruninalaribosa5P
ObtencindeIMP ObtencindeUMP&CMP
Balance:7ATP(hastaIMP) Balance:4ATP(hastaUMP)
+12ATP(ATP/GTP) +1ATP(sntesisdeCTP)
RegulacinporATP&GTP RegulacinporUTP
(productosfinales) (productofinal)
AGENTES BLOQUEANTES DE LA VIA DE NOVO (I)

Gln Azaserina
Acido micofenlico
Anlogos de la Gln
Impiden la donacin de grupos de NH4+ Inhibe la IMP DH

Inhibe la proliferacin
de linfocitos

6-mercaptopurina
Competicin con el IMP en la sntesis del AMP

Droga inmunosupresora

Tratamiento de leucemias
Agentes bloqueantes de la va de novo (II)

Sulfonamidas

Anlogos del cido p-aminobenzoico (PABA)

Inhibidores competitivos de la sntesis del cido flico en bacterias

Inhibicin de la dihidropteroato sintetasa no se genera THF

Inhibicin de la sntesis de timina y de purinas

Inhibicin del crecimiento bacteriano (bacteriosttico)

Animales: las sulfonamidas no tienen efecto

Causa: los animales no pueden sintetizar el cido flico, sino que han
de ingerirlo con la dieta

Nota: Importancia del cido flico como suplemento alimentario durante el

primer trimestre del embarazo
Agentes bloqueantes de la va de novo (III)

Resistencia a las sulfamidas

Mutaciones que producen alteraciones en el centro activo menor afinidad

Aumento de la produccin de PABA neutraliza la competicin

Plsmido que codifica para una dihidropteroato sintetasa alterada con menor
afinidad por las sulfamidas que por PABA (1/1000 afinidad)

Trimetoprima

Antibitico bacteriosttico que inhibe la dihidrofolato reductasa

Accin sinrgica junto con las sulfamidas

La combinacin de sulfamidas y trimetoprima es un potente bactericida

REGULACIN DE LA BIOSNTESIS DE NUCLETIDOS PRICOS (I)

Importancia
1. Regulacincoordinadadelabiosntesisdelosnucletidospricos
Obtencindecantidadesequimolares denucletidosdeadenina&guanina

2.Regulacindelosniveles intracelulares(nivelesdeATP&GTP)
Importancia:losniveles intracelularesregulanmuchosprocesosmetablicos

2procesosimplicadosenlaregulacin
1.Inhibicincompetitivaporproductofinal
Importancia:evitarlaacumulacindeexcesodeproducto

2.CrossestimulacindelasntesisdeATP&GTP
Importancia:obtencindecantidadesequimolares deambosnucletidos

Punto clave
Regulacin recproca desustratos
ElGTPestaimplicadoenlasntesisdeATPyviceversa
Regulacin de la biosntesis de nucletidos pricos (II)

Puntos de regulacin en la via de novo

Sntesis de IMP

Ribosa-P pirofosfokinasa (R1): - ADP & GDP (negative feedback)

+ PPi & 2,3BPG

Amidofosforribosil-transferasa (R2): - ATP, ADP & AMP (sitio 1) sinergia

- GTP, GDP & GMP (sitio 2) neg. feedback
+ PRPP (feedforward activation)

Sntesis IMP AMP - AMP (inhibicin competitiva por producto final)

(adenilsuccinato sintetasa) + GTP (sntesis coordinada de ATP & GTP)

Sntesis IMP GMP - GMP (inhibicin competitiva por producto final)

(IMP DH) + ATP (sntesis coordinada de ATP & GTP)

PurK: represor de purinas en bacterias

Regulacin coordinada de purinas y pirimidinas (I)

PRPP: Activa la biosntesis de IMP (amidofosforribosil-transferasa)

Orotato fosforribosil transferasa depende de la disponibilidad de PRPP

ATP: estimula la sntesis de pirimidinas: ATCasa (bacterias)

carbamil-P sintetasa II (animales)

inhibe la sntesis de PRPP

inhibe la sntesis de IMP

Efector Accin / Va

PRPP Pur / Pir
ATP Pir / GTP
Pur / ATP / PRPP
GTP ATP
Pur / GTP / PRPP
CTP Pir
UTP Pir
dTDP PRPP
Regulacin coordinada de purinas y pirimidinas (II)
VA DE RECAPTACIN DE NUCLETIDOS PRICOS (I)

Salvage pathway

En animales: Necesidad de la recaptacin de bases pricas

- A partir de la degradacin de DNA & RNA se obtienen bases pricas

- La va de novo de biosntesis de purinas es muy cara

- La va de novo no puede satisfacer las necesidades totales de purinas en

determinados tejidos (especialmente en el tejido nervioso)

- El 90% de las bases pricas libres son recuperadas y recicladas

PRPP: metabolito comn a las vas de sntesis de novo y de recaptacin

Va de recaptacin de nucletidos pricos (II)

Enzima: APRT - Adenina fosforribosil-transferasa

adenina + PRPP AMP + PPi

Enzima: HGPRT Hipoxantina - Guanina fosforribosil transferasa

hipoxantina + PRPP IMP + PPi

guanina + PRPP GMP + PPi

Posteriormente: PPi 2Pi Enzima: Pirofosforilasa

Fosforilaciones sucesivas hasta obtener los NDPs & NTPS

AMP + ATP 2 ADP & GMP + ATP GDP + ADP

ATP + GDP ADP + GTP

Balance : 2 ATP
CATABOLISMO DE NUCLEOTIDOS PRICOS (I)

Enanimales,lasbasespricas sondegradadashastaelcidorico

Enzima:5nucleotidasa (hidrlisis)
Nucletidos+H2O nuclesidos+Pi

Enzima: PNP Purinanuclesidofosforilasa

Nucleosido+Pi ribosa1P+purina

Isomerizacindelaribosa:ribosa1Pribosa5P

Enzima:AMPdesaminasa

AMP+H2O IMP+NH4+

Enzima:Adenosinadesaminasa(ADA)

Adenosina+H2O Inosina+NH4+

Enzima: Guaninadesaminasa

Guanina+H2O Xantina+NH4+
Catabolismo de nucletidos pricos (II)

Enzima:PurinaNuclesidofosforilasa(PNP)
Inosina Hipoxantina (Hipoxantina=6oxopurina)
Xantosina Xantina (Xantina=2,6dioxopurina)
Guanosina Guanina

Enzima: Xantinaoxidasa

Hipoxantina+O2 +H2O Xantina+H2O2

Lahipoxantinapuedeserrecaptada

Enzima: Guaninadesaminasa

Guanina+H2O Xantina+NH4+

Enzima:Xantinaoxidasa

Xantina+O2 +H2O cidorico+H2O2

Enzima:catalasa:H2O2 H2O+ O2
Catabolismo de nucletidos pricos (III)

Reacciones catalizadas por la xantina oxidasa

hipoxantina xantina acido urico

Tautomera ceto-enlica (lactama-lactima) del cido rico

El cido rico es un cido dbil

Catabolismo de nucleotidos puricos (IV)

Importanciafisiolgicadelurato

1. Es un potente antioxidante, ya que elimina ROS (Reactive Oxygen Species:

radicaleshidroxilo,anionessuperxido,oxgenoatmicoetc.)

Enhumanos,laconcentracinde urato ensangre est prxima a su lmite de

solubilidad(7mg/dL a37Cdeuratomonosdico)

2.Elcidoricononecesitaagua ensuexcrecin,mientrasqueelNH4+ s

Mantenimientode losnivelesdeaguaenespeciesterrestres

Importanciaevolutiva

La evolucinha favorecidolaacumulacindeun metabolito hasta ellmite

desusolubilidadporquedesempea otra importante funcin fisiolgica?
ALTERACIONES DEL METABOLISMO DE PURINAS EN HUMANOS (I)

No en genes de la va de novo letales durante el desarrollo

Sndrome de Lesch-Nyhan: Deficiencia en HGPRT

- Enfermedad congnita ligada al sexo (cromosoma X). Carcter recesivo

- Manifestaciones
hiperuricemias y gota
desrdenes neurolgicos: espasticidad, retardo mental y comportamiento
agresivo y destructivo (automutilaciones en labios y dedos)

- La muerte suele estar causada por fallo renal (por depsitos de urato
monosdico)

- Fue la primera enfermedad psiquitrica asociada al defecto en una sola enzima

La aparicin de alteraciones neurolgicas indica que la va de recaptacin de

purinas es clave en el tejido nervioso
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (II)

Causa bioqumica del Sndrome de Lesch-Nyhan

Ausencia de actividad HGPRT

Bloqueo de la va de recaptacin de purinas

Consecuencias

Acumulacin de PRPP

Estimulacin de la biosntesis de novo de nucletidos

(x200 biosntesis de purinas)

Aumento de la degradacin de purinas  cido rico hiperuricemia y gota

Depsitos de urato
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (III)

Hiperuricemia

Aumento de los niveles de cido rico en sangre y otros fluidos

Gota

Enfermedad causada por la hiperuricemia

Cursa con

- inflamacin de las articulaciones y dolor articular muy intenso, generalmente

en el dedo pulgar del pie, y en hombres

- depsito de cristales de urato (monosdico) en las articulaciones

- depsito de cristales en el rin y urteres dao renal y obstruccin del

tracto urinario
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)

Causas de la gota

Fallos en la excrecin de cido rico

Superproduccin de urato

- Deficiencia en HGPRT

- PRPP sintetasa hiperactiva: se salta la retroinhibicin alostrica

- Glucogenosis de von Gierke: la Glc se desva hacia la ruta de las

pentosas-P  sntesis de PRPP

- Frmacos que pueden producir hiperuricemia

niacina, diurticos, aspirina, ciclosporina, drogas citotxicas
Tratamiento de la gota (I)

Tratamiento no farmacolgico de la gota

- Prdida de peso
- Evitar comidas ricas en purinas: carne roja y casquera, mariscos,
arenques, anchoas
- Evitar el alcohol
- No utilizar frmacos hiperuricmicos (aspirina)

Tratamiento farmacolgico de la gota (I)

Colchicina
Disminucin de la movilidad de leucocitos, de la fagocitosis y la lactiacidosis

Tratamiento farmacolgico de la gota (III)

Agentes uricosricos probenecid: inhibe la reabsorcin tubular de urato

Tratamiento de la gota (II)

Tratamiento farmacolgico de la gota (III)

Alopurinol
Anlogo de la hipoxantina

Mecanismo

1. El alopurinol se comporta primero como sustrato de la xantina oxidasa

alopurinol aloxantina
2. La aloxantina permanece fuertemente unida al centro activo
INHIBIDOR SUICIDA

hipoxantina alopurinol aloxantina

Tratamiento de la gota (III)

Consecuencias

-  produccin de cido rico y  niveles de hipoxantina y xantina

La hipoxantina y la xantina son ms solubles en agua, por lo que se eliminan
mejor por va renal

- El alopurinol secuestra PRPP

 estimulacin de la biosntesis de purinas

 cantidad de sustrato (PRPP) disponible para la amido-fosforribosil-transferasa

Disminucin de la produccin de cido rico

Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)

Deficiencia en AMP desaminasa

No tiene lugar la reaccin: Adenosina + H2O Inosina + NH4+

Importancia

En la conversin de IMP AMP, se produce fumarato

En el msculo, no se expresan otras enzimas de las reacciones anaplerticas

del ciclo de Krebs (el fumarato es un intermediario del ciclo de Krebs)

La deficiencia gentica en AMP desaminasa produce fatiga muscular y

calambres tras realizar ejercicio fsico
Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)

Sndrome de inmunodeficiencia causado por deficiencia en PNP

Muerte selectiva de linfocitos T

Causa

El tejido linfoide presenta una elevada actividad del metabolismo de los

nucletidos (alta tasa proliferativa)

La ausencia de alguna de las enzimas implicadas en estas rutas provoca una

manifestacin muy clara en el tejido linfoide

Idea para el tratamiento

La ausencia de respuesta de linfocitos T podra aprovecharse como
tratamiento para enfermedades autoimnunes (artritis reumatoide, psoriasis),
algn tipo de diabetes, as como para frenar el crecimiento de linfomas de
clulas T

Estructura de rayos X de la PNP diseo de inhibidores especficos