AUTOFAGIA

Introduccin La autofagia (comerse a s mismo), trmino acu- ado por Duve y Wattiaux
(1966), es un proceso altamente conservado por el cual los componentes citoplasmticos son
secuestrados en autofagosomas (vacuolas con doble membrana) y entregados al lisosoma
(autolisosomas) donde se degradan en un medio cido(1,2). Como principal va de reciclaje
intracelular, la autofagia es crucial en la homeostasis celular y en la remodelacin durante el
desarrollo. Los elementos a reciclar son identificados mediante ubiquitinas transferidas por
ligasas. La biognesis de los autofagosomas requiere la intervencin de protenas reguladoras
de autofagia (ATG) que actan en diferentes etapas, siendo algunas de las ms importantes
ULK1, ATG5, ATG7, el complejo PI3KIII (Beclin 1, VPS34, p150, ATG14) y LC3 (microtubule-
associated light chain 3). La autofagia tiene un rol importante en la sobrevida celular al evitar el
acmulo de protenas de larga duracin y organelas defectuosas. Puede as contraponerse a
estmulos proapoptticos, mientras que su disfuncin est asociada a patologas metablicas,
neurodegenerativas y neoplsicas. La autofagia forma parte de las respuestas celulares que
tienen lugar durante las infecciones bacterianas y virales, inclusive participando en la
eliminacin del patgeno y/o regulando la respuesta inmune innata o adquirida(3). La autofagia
no selectiva es una respuesta catablica que ocurre en situaciones como la deplecin de
nutrientes, para proporcionar aminocidos y otras materias primas necesarias para la sobrevida
celular. En estos casos no hay eliminacin de organelas o complejos moleculares particulares de
la clula(4). Por el contrario, la autofagia selectiva consiste en la eliminacin de blancos
especficos: peroxisomas (pexofagia), retculo endoplsmico (ER, erfagia), ribosomas (ribofagia),
lpidos (lipofagia), microorganismos (xenofagia) y mitocondrias (mitofagia)

Mitofagia, una forma selectiva de autofagia La

mitofagia conforma un potente sistema de
resistencia a la toxicidad por dao mitocondrial. El
rol de mantener la integridad y funcin mitocondrial
es importante para el bienestar celular(6). En primer
lugar, requiere identificar las mitocondrias
disfuncionales que sern eliminadas mediante un
proceso de autofagia. Esto ocurre de manera
integrada con otros procesos como la creacin de
nuevas mitocondrias (biognesis mitocondrial) y los
reordenamientos morfolgicos de la red
mitocondrial (proceso de dinmica mitocondrial que
comprende fusin y fisin de mitocondrias). Este
sistema en su conjunto permite adaptar cantidad y
calidad mitocondrial a las condiciones
microambientales y demandas fisiolgicas (Figura 1)
Mitofagia y su interaccin con la dinmica y biognesis mitocondrial La fisin es el primer paso
de un sistema de control de calidad mitocondrial. El retculo endoplsmico (RE) marca los sitios
donde se ensamblan los complejos moleculares que dividen a las mitocondrias. El dao
mitocondrial se refleja en una cada del potencial de membrana. Las unidades con bajo potencial
se muestran con trama diagonal. Dependiendo de la extensin del dao, el balance puede
inclinarse hacia la mitofagia y eliminacin de las mitocondrias daadas (izquierda) facilitando la
sobrevida celular, o hacia la permeabilizacin de la membrana externa mitocondrial (MEM) con
liberacin de citocromo c (Cyt c) e inicio de la apoptosis intrnseca o mitocondrial (derecha). En
el caso de la mitofagia la cada de potencial estabiliza Pink1 (Pi) y recluta Parkin (Pk) a la
mitocondria. Parkin a su vez ubiquitiniza (U) masivamente las protenas de la MEM, permitiendo
que p62 establezca un puente con LC3 y se inicie la formacin de la ves- cula de doble
membrana o mitofagosoma (M). El mitofagosoma finalmente se une a los lisosomas (L), para
completar la degradacin en un medio cido formando un mitofago-lisosoma (ML). Por el
contrario, las mitocondrias con potencial de membrana normal pueden volver a fusionarse. La
biognesis mitocondrial compensa la eliminacin por mitofagia creando nuevas unidades
respiratorias (B) en un proceso coordinado entre ncleo y mitocondria (recambio mitocondrial).

La mitofagia ocurre en situaciones como la hipoxia, donde las mitocondrias se convierten en

fuentes de ROS intracelular por alteraciones en la fosforilacin oxidativa (OXPHOS). Durante la
respuesta adaptativa a la hipoxia la mitofagia elimina mitocondrias a la vez que se estimula la
produccin de energa por medio de la gliclisis anaerbica, pero si esta respuesta es
insuficiente, la propia red mitocondrial puede iniciar el proceso de muerte programada
(apoptosis intrnseca o mitocondrial). Un ejemplo ilustrativo son las clulas cardacas en
situaciones de isquemia. La hipoxia es uno de los principales inductores de mitofagia mediada
por BNIP3, una protena de la familia bcl-2 del tipo BH3-only, cuya expresin est controlada por
el factor de induccin de hipoxia-1 (HIF-1)(8). La mitofagia tambin participa en varios
procesos fisiolgicos como la eliminacin de las mitocondrias paternas del vulo fecundado, la
hematopoyesis y la eritropoyesis. Su aumento conduce a reducciones en nmero y tama- o de
las mitocondrias, como ocurre en las clulas madre quiescentes. La mitofagia es esencialmente
una sucesin de transformaciones que culmina con la degradacin lisosmica. Es entonces
importante interpretarla como un flujo de mitocondrias en proceso de eliminacin (flujo
mitofgico), que est regulado en cada etapa por una gran variedad de mecanismos
moleculares, desde la identificacin de las mitocondrias a eliminar, hasta su remocin definitiva.
La identificacin inicial est relacionada con la dinmica mitocondrial, ya que las mitocondrias
falladas presentan bajo potencial y no pueden volver a fusionarse (Figura 1).
2.2.5. Vas de sealizacin que regulan la autofagia
La autofagia, como proceso fundamental de limpieza celular, debe estar finamente
regulada para poder controlar la supervivencia de la clula y organismo. De hecho, se ha
demostrado que una activacin defectuosa del proceso autofgico se encuentra asociado con
diferentes enfermedades y con un envejecimiento acelerado (Schiavi and Ventura, 2014). El flujo
autofgico ocurre en el interior de la clula por la exposicin a condiciones de estrs durante
minutos u horas y es mediado por la modificacin de protenas posttraduccionales que
dependen de la activacin de programas transcripcionales especficos (Grumati et al., 2011). La
regulacin de ste proceso, como ya se ha mencionado, es compleja y est controlada por
acciones coordinadas de ms de 30 genes (Papackova and Cahova, 2014). Se han descrito
diversas rutas de sealizacin implicadas en la regulacin del proceso autofgico.
Regulacin va mTOR
Como ya se ha apuntado en el apartado 2.2.4., mTOR participa en la regulacin la autofagia.
Adems, mTOR tiene un papel fisiolgico actuando como sensor para diversas seales, como
factores de crecimiento, nutrientes, hipoxia o estado energtico, entre otras. Aunque existen
dos complejos mTOR diferentes, C1 y C2, mTORC1 es el que est especficamente implicado en
la regulacin negativa del proceso de autofagia mediante la inhibicin del complejo ULK1/2 (Into
et al., 2012). La regulacin negativa que ejerce mTORC1 sobre la autofagia puede llevarse a cabo
por el inmunosupresor rapamicina, por lo que sta molcula se utiliza clsicamente para activar
el proceso de autofagia. La inactivacin y disociacin de mTORC1 se produce por mecanismos
de fosforilacin
Regulacin va AMPK
La va AMPK (protena activada por AMP) es una va independiente de mTOR. AMPK es un
sensor del estado bioenergtico que participa en el mantenimiento de la homeostasis
energtica de la clula. Se piensa que AMPK desempea tambin un papel como activador de la
autofagia (Into et al., 2012). Cuando hay falta de nutrientes, decrece la cantidad de ATP
(adenosn trifosfato), por tanto, la relacin AMP/ATP aumenta y AMPK se activa. Su papel como
activador de la autofagia se lleva a cabo por varias vas, de las cuales la ms importante es la
fosforilacin de la molcula TSC2 (protena de la esclerosis tuberosa 2), que se encuentra
formando un complejo con TSC1 (complejo TSC1/2), el cual inhibe mTOR a travs de otra
molcula, Rheb (Moruno Manchn, 2013). Esta ruta de activacin iniciada directamente por
AMPK tambin conduce, finalmente, a la fosforilacin de ULK1 y beclin1.
Regulacin va Bcl2
La apoptosis, tambin conocida como muerte celular programada, es un proceso por el
cual las clulas, cuando no son necesarias o estn daadas, se suicidan de una forma controlada
que minimiza el dao en sus alrededores (Alberts et al., 2002). La familia Bcl2 (familia de la
clula B del linfoma 2) es bien conocida por su papel como regulador, a nivel mitocondrial, de la
muerte celular por la va apopttica, bien inhibindola o bien activndola (Into et al.,
2012). Algunos miembros de la familia Bcl2, como Bcl2 o BclXL son conocidos inhibidores de
apoptosis pero, recientemente, se ha demostrado que tambin pueden actuar como inhibidores
de la autofagia. Dicha inhibicin autofgica la realizan unindose y separando el complejo
Beclin1VPS34, necesario, recordemos, para la formacin del fagforo (Into et al., 2012). Por
tanto, beclin1 es un importante nexo de unin entre la autofagia y la muerte celular
programada, ya que las protenas antiapoptosis Bcl2 y BclXL se unen a beclin1 para inhibir la
autofagia.
Regulacin de la maquinaria de autofagia
La formacin de un autofagosoma es el primer paso del proceso de autofagia. Inducida por la
inanicin u otro estrs, la construccin del autofagosoma es orquestada por las protenas Atg
(autofagia) (Fig. 2). Estas protenas se han descubierto por primera vez en la levadura, y se
encuentran altamente conservadas en eucariotas superiores, que van desde drosophila a los
mamferos (Mizushima et al., 2011). La nucleacin y elongacin de los autofagosomas es iniciada
por el complejo serina-treonina protena quinasa ULK1 (el homlogo Atg1), que consta de varias
protenas autofagias incluyendo ULK1, Atg13, FIP200 y Atg101 (Hara et al., 2008; Mizushima,
2010). Bajo condiciones ricas en nutrientes, ULK1 es suprimido por mTORC1, un importante
regulador negativo de la autofagia. Tras la induccin de la autofagia, mTORC1 se inhibe;
Mientras tanto, se puede activar la AMPK (protena quinasa activada por AMP). Cualquier
condicin, la desfosforilacin de ULK1 mediante la inhibicin de mTORC1 o la fosforilacin de
ULK1 por AMPK, activa ULK1 (Jung et al., 2010; Shang y Wang, 2011). Una vez activado, el
complejo ULK1 es capaz de regular hacia arriba el complejo de fosfatidilinositol clase III (PtdIns)
3-quinasa (PtdIns3K), que comprende Beclin 1 / Atg6, Atg14, Vps15, Vps34 y Ambra1. La
induccin del complejo de quinasa genera el fosfatidilinositol 3-fosfato lipdico (PI3P), que
recluta ms protenas de unin a PI3P esenciales para la formacin de vesculas, incluyendo WIPI
y DFCP1 (Proikas-Cezanne et al., 2004; Al., 2009, Burman y Ktistakis, 2010).

Adems, se requieren dos sistemas de conjugacin tipo ubiquitina, Atg12-Atg5-Atg16 y Atg8 /

LC3-PE (fosfatidiletanolamina), para el alargamiento de la membrana (Hanada et al., 2007; Geng
y Klionsky, 2008; ). El complejo anterior sirve como ubiquitina E3-like ligase para el ltimo
sistema LC3-PE. En resumen, Atg12 se conjuga con Atg5 mediante una enzima activadora de tipo
E1 Atg7 y una enzima de conjugacin de tipo E2 Atg10. Atg16 luego interacta Con los
conjugados Atg12-Atg5 para facilitar la formacin de LC3-PE. De forma similar, en el sistema
LC3-PE, el LC3 citoslico es procesado por la proteasa Atg4 y conjugado a PE por Atg7 (E1), Atg3
(una enzima similar a E2) y el complejo Atg12-Atg5-Atg16. La LC3 conjugada con PE se incorpora
a continuacin en la membrana autofagosomal y, por lo tanto, puede usarse como una protena
marcadora para los autofagosomas.

Adems de la inhibicin de mTORC1 y la activacin de AMPK, la actividad de PtdIns3K tambin

se regula mediante el secuestro directo de Beclin 1 por la protena anti-apoptosis y anti-
autofagia Bcl-2. Cuando los nutrientes son abundantes, Beclin 1 forma un complejo con la
protena Bcl-2 asociada a ER, que inhibe el reclutamiento y la funcin de Beclin 1 en el complejo
PtdIns3K; En respuesta a la inanicin, Beclin 1 se libera de la unin inhibitoria de Bcl-2 para el
funcionamiento en la formacin de autofagos-algunos (Pattingre et al., 2005, Matsunaga y otros,
2009, Zhong et al., 2009). La disociacin de la unin de Beclin 1-Bcl-2 est mediada a travs de
la fosforilacin de Bcl-2 en tres sitios (T69, S70 y S84) por JNKs (quinasas N-terminales c-Jun)
durante la inanicin (Wei et al., 2008) Se necesita ms investigacin para determinar si otras
quinasas aguas arriba estn implicadas en la induccin de la autofagia bajo otras condiciones de
estrs.

Los trabajos recientes tambin han revelado los papeles de muchos factores metablicos en la
regulacin t ranscripcional de la autofagia, incluyendo PPAR (receptor activado por
proliferador de peroxisoma-), CREB (protena de unin de elemento de respuesta de AMPc),
TFEB (factor de transcripcin de hlice-bucle-hlice EB ), FoxO1 / 3 (caja Forkhead O1 y O3) y
FXR (receptor farnesoid X) (Zhao et al., 2007, Mammucari et al., 2007, Sengupta et al, 2009,
Settembre et al. Al., 2013, Seok et al., 2014, Lee et al., 2014). Entre ellos, PPAR, CREB, TFEB y
FoxO3 son reguladores positivos de los genes de autofagia en condiciones de ayuno o estrs, y
FXR es un receptor nuclear que detecta y es activado por el estado rico en nutrientes y reprime
la expresin de genes autofagia. Sin embargo, la regulacin transcripcional de la maquinaria de
la autofagia en muchos rganos an no est clara, y los papeles de muchos otros factores de
transcripcin y cofactores en la autofagia estn a la espera de ser descubiertos.

Autofagia selectiva en el metabolismo

Aunque la autofagia se suele considerar como un proceso no selectivo para la degradacin
masiva de componentes citoplsmicos, se han descrito varios tipos de autofagia selectiva en la
ltima dcada (Bjrky et al., 2005, Geisler et al., 2010 ). Se encuentra que la ubiquitinacin es
la seal clave para que las protenas de carga sean reconocidas por los receptores de autofagia
selectiva, tales como la protena de unin a LC3 p62 / SQSTM1. Esta protena contiene un
dominio de unin a la ubiquitina (UBA) que interacta especficamente con las protenas
ubiquitinadas y dirige su secuestro en autofagosomas mediante unin a LC3 (Johansen y Lamark,
2011). Este es el mecanismo principal para eliminar las protenas txicas agregadas en las clulas
(Ravikumar et al., 2002, Jeong et al., 2009; Knaevelsrud y Simonsen, 2010). Adems de la p62,
varios otros receptores de autofagia selectiva, incluyendo NBR1, Alfy, NDP52 y optineurina
(Simonsen et al., 2004; Kirkin et al., 2009; Boyle y Randow, 2013; Han sido identificados.
Tambin se ha descrito una focalizacin especfica de diferentes protenas de carga, tales como
mitocondrias o protenas patgenas (Levine y Kroemer, 2008, Zheng et al., Ogawa et al., Wong
et al., 2012).

La autofagia es esencial para el mantenimiento del metabolismo celular durante la privacin de

nutrientes. La degradacin autofgica de molculas y orgnulos genera un importante
reservorio de metabolitos que puede ser reutilizado para la sntesis de novo o la produccin de
energa. En las clulas, el glucgeno, la protena, los ribosomas y las gotitas de lpidos (LD) son
el almacenamiento principal de nutrientes de carbohidratos, aminocidos, cidos nucleicos y
cidos grasos, respectivamente. En respuesta a la inanicin, la maquinaria de autofagia tiene
acceso a estos almacenes para la degradacin lisosomal, y las molculas resultantes sirven como
bloques de construccin o combustibles para la produccin de ATP a travs de procesos
aerbicos o anaerbicos (Rabinowitz y White, 2010, Ryter et al. Y Lee, 2014) (figura 1).

Resumen

La autofagia es un proceso celular donde componentes citoplasmticos y an organelas

completas son secuestrados en vesculas de doble membrana (autofagosomas) y luego
degradados al fusionarse con los lisosomas. Tiene un rol importante en los cambios metablicos
que se necesitan para mantener la homeostasis celular. Existen formas selectivas de autofagia
en las que se eliminan organelas especficas. ste es el caso de la mitofagia, una autofagia
selectiva de mitocondrias daadas o que resultan excesivas para la demanda metablica. En
situaciones como la hipoxia, la respiracin mitocondrial puede ser deficiente y producir dao
por la produccin de especies reactivas del oxgeno (ROS). En este caso, la mitofagia opera como
una respuesta adaptativa, reduciendo la masa de mitocondrias a la vez que la energa pasa a
obtenerse de la gliclisis. En circunstancias fisiolgicas como la maduracin del eritrocito, la
mitofagia elimina definitivamente la red mitocondrial. Las clulas madre hemopoyticas (CMH)
estn adaptadas a un ambiente hipxico donde tambin la energa deriva de la gliclisis,
reduciendo la produccin de ROS al suprimir la fosforilacin oxidativa. Esto requiere que la CMH
mantenga niveles elevados de mitofagia y autofagia. La supresin g- nica de la mitofagia en
modelos murinos incrementa el ROS en CMH, la prdida de quiescencia y de autorrenovacin,
induciendo citopenias y neoplasias hematolgicas. La mitofagia y la autofagia tambin pueden
estar exacerbadas en las neoplasias hematolgicas para resistir en circunstancias hostiles, como
la hipoxia y la deplecin de nutrientes, teniendo importancia en la resistencia a frmacos
citotxicos.