Juan Rolando Vzquez Miranda

CROMATOGRAFIA

Un mtodo fsico utilizado para la separacin de los componentes de una

muestra en la cual los componentes se distribuyen en dos fases, una de las
cuales es estacionaria, mientras que la otra se mueve.

La fase estacionaria puede ser un slido, un lquido sobre un soporte slido, o

un gel.
La fase movil puede ser un gas, un liquido o un fluido supercritico

La fase estacionaria esta contenida en una columna cromatografica.

CROMATOGRAFIA HISTORIA
 TIPOS DE CROMATOGRAFIA

Cromatografia de gases:
a) gas-liquido (cromatografia de reparto)
b) gas-solido (cromatografia de adsorcion)
Cromatografia de liquidos: En todos los casos la fase estacionaria es solida y la
fase movil es liquida
a) Solido-liquido (cromatografia de adsorcion o de fase normal)
b)Solido-liquido (Cromatografia de reparto o de fases enlazadas o de
fase reversa)
c)Solido-liquido (Cromatografia de intercambio ionico)
d)Solido-Liquido (Cromatografia de exclusion molecular)
e)Solido-liquido (Cromatografia de afinidad)
 TIPOS DE CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS
CLASIFICACION DE ACUERDO A LA NATURALEZA DE LA FASE MOVIL
CROMATOGRAFIA DE ADSORCION Y DE REPARTO EN CROMATOGRAFIA
DE GASES Y LIQUIDOS
VARIANTES DE CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS
CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR O PERMEACION EN GEL Y
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO (LIQUIDOS)
CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD (LIQUIDOS)
CLASIFICACION DE ACUERDO A NATURALEZA DE FASE MOVIL Y
FASE ESTACIONARIA
CROMATOGRAFIA DE FASE INVERSA
FASE ESTACIONARIA: FASES ENLAZADAS
FASE MOVIL: AGUA MAS UN MODIFICADOR DE ELUCION ORGANICO
CLASIFICACION DE ACUERDO A NATURALEZA DE FASE MOVIL Y
FASE ESTACIONARIA

CROMATOGRAFIA DE FASE NORMAL

FASE ESTACIONARIA: FASES POLARES, SILICA ALUMINA
FASE MOVIL: DISOLVENTE NO POLAR MAS UN MODIFICADOR DE
ELUCION ORGANICO (ETANOL, IPA)
QUE SE OBSERVA DURANTE UNA SEPARACION CROMATOGRAFICA?
PICOS CROMATOGRAFICOS
 PROCESO DE SEPARACION EN CROMATOGRAFIA DE REPARTO
En mecanismo de separacin reparto, los solutos se repartirn entre una fase
estacionaria lquida y otra estacionaria.
la separacin se produce porque las molculas de soluto se distribuyen entre las
dos fases en funcin de su solubilidad relativa en cada una de ellas o debido
interacciones de diferente naturaleza.
En su desplazamiento a lo largo del sistema cromatogrfico, los solutos se
mueven a diferentes velocidades, dependiendo de su afinidad por la fase
estacionaria respecto a la fase mvil.
Cada analito, por tanto, se distribuir entre ambas fases segn un equilibrio
caracterizado por una constante denominada constante de distribucin,
coeficiente de distribucin o coeficiente de reparto (K). Para un soluto, s,

Donde [Ss] en la concentracin de soluto en la fase estacionaria y [Sm] la

concentracin de soluto en la fase mvil.
 TEORIA DE PLATOS
La teora de platos consiste en considerar la columna cromatografa compuesta
de un nmero de zonas adyacentes en cada una de las cuales hay suficiente
espacio para que un analito est en equilibrio entre las dos fases
Cada una de estas zonas se denomina plato terico (de los que hay N en cada
columna de longitud, L).
La longitud de una columna contiene una HETP (altura equivalente de plato
terico), H, expresada en unidades de longitud, normalmente m. El valor
numrico de N y H, para cada columna en particular, es propio de cada analito.

Donde:
= Desviacin estndar del pico gaussiano
X = Distancia que recorre el analito dentro de la
columna.
= anchura del pico en la base
= Tiempo de retencin del pico
 TEORIA CINETICA
La teora cintica considera que el ensanchamiento de las bandas
cromatografcas (picos) es una consecuencia de que el desplazamiento del
soluto a lo largo de la columna ocurre a velocidad finita.
La forma de las bandas, por tanto, es afectada por la velocidad de elucin y
depende de los siguientes factores:
Difusin turbulenta o difusin de Eddy (A)
Difusin longitudinal a lo largo de la columna (B/u)
Resistencia a la transferencia de masa (Cu)
Esta influencia de la fase mvil en el ensanchamiento de banda y, por tanto, en
la eficiencia queda reflejado en la primera ecuacin cintica, formulada por van
Deemter quin la desarroll para columnas empaquetadas en cromatografa de
gases (van Deemter et al., 1956).

H = A + B/u + C u Ecuacin de Van Deemter

donde u = L/tM, en (cms-1), siendo L, la longitud de la columna.

REPRESENTACION GRAFICA DE LA ECUACION DE VAN DEMTEER
La siguiente figura muestra la representacin grfica, determinada
experimentalmente, de HETP (H) en funcin de la velocidad lineal media de
fase mvil (u), para cromatografa de gases y de lquidos.
 PARAMETROS CROMATOGRAFICOS
Tiempo de retencin, tR (min)
Tiempo muerto, tM (min)
Factor de capacidad, k (adimensional), F. R.

Selectividad, (adimensional)

Resolucin, Rs (adimensional

Nmero de platos tericos, eficiencia, N (adimensional)

Altura equivalente de plato terico, H

 MEJORA DE LA EFICIENCIA EN SISTEMAS CROMATOGRAFICOS

Existen adems otros factores extra-columna que tambin contribuyen al

ensanchamiento de la banda cromatogrfica, como son el sistema de inyeccin
de muestra y los volmenes muertos de los diferentes tubos de conexin.

En resumen, a la hora de obtener alto valor de eficiencia en una separacin

cromatogrfica determinada, habra que trabajar con pequeos dimetros de
partcula (dp), con empaquetamientos uniformes, a temperaturas
relativamente elevadas, minimizando los volmenes muertos de las conexiones
y aplicando la muestra en una zona lo ms estrecha posible en la cabeza de la
columna.
En el caso de cromatografia de gases, los factores que afectan la eficiencia son
principalmente la longitud de la columna, y el grosor de la fase estacionaria, a
menor grosor y menor diametro de la columna mayor eficiencia.
 CROMATOGRAFIA DE GASES

En cromatografia de gases se hace pasar el analito en forma gaseosa

atravez de la columna, arrastrado por una fase movil gaseosa llamada
gas portador o gas acarreador.

En cromatografia gas-liquido de reparto la fase estacionaria es un

solido que recubre la parte interior de la columna.

En cromatografia gas-solido de adsorcion el analito se adsorbe

directamente sobre las particulas solidas de fase estacionaria
CROMATOGRAFIA DE GASES (INSTRUMENTACION)
CROMATOGRAFIA DE GASES (INSTRUMENTACION)
CROMATOGRAFIA DE GASES (INYECTORES, SPLIT, SPLITLESS)
CROMATOGRAFIA DE GASES (INYECTOR , SPLITLESS)
CROMATOGRAFIA DE GASES (DETECTOR DE IONIZACION DE
FLAMA FID)
CROMATOGRAFIA DE GASES (DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
TERMICA)
CROMATOGRAFIA DE GASES (DETECCTOR DE CAPTURA
ELECTRONICA)
CROMATOGRAFIA DE GASES (DETECTOR DE MASAS)
CROMATOGRAFIA DE GASES (DETECTORES)
 CROMATOGRAFIA DE GASES (TIPOS DE COLUMNAS)
COLUMNAS EMPAQUETADAS
COLUMNAS TUBULARES ABIERTAS
CROMATOGRAFIA DE GASES (TIPOS DE COLUMNAS)
CROMATOGRAFIA DE GASES (TIPOS DE COLUMNAS)
CROMATOGRAFIA DE GASES (TIPOS DE COLUMNAS)
CROMATOGRAFIA DE GASES (TIPOS DE COLUMNAS)
CALCULOS