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FACULTAD DE MINAS
POSGRADO EN INGENIERA DE MATERIALES Y PROCESOS
MEDELLN
2010
Tesis presentada a la Facultad de Minas como requisito parcial para optar al ttulo de Magster en
Ingeniera Materiales y Procesos
Por
DIRECTOR
Marco Antonio Mrquez Godoy
PhD. Mineraloga, UNALMED
CO-DIRECTOR
lvaro Lus Morales Aramburo
PhD. Fsica, UdeA
Jos Saramago
(1922 2010)
ii
AGRADECIMIENTOS
A las personas que durante la consecucin de sta tesis no permitieron que me desmoronara y abandonara esta
ardua tarea, mi gran amor Erica, mis grandes amigos el Negro, Laura y Lucho y en especial a mi familia.
A Isabel Cristina Cardona, de la Universidad de West Virgina, USA, por sus comentarios y sugerencias sobre el
desarrollo de ste trabajo.
A los integrantes del Grupo de Mineraloga Aplicada y Bio-procesos (GMAB) por su valiosa colaboracin y
compaa.
A los profesores lvaro Morales Aramburo y Marco Antonio Mrquez Godoy por su diligente, paciente y
siempre oportuna colaboracin, orientacin, y conocimientos aportados a este trabajo.
Al profesor Mauricio Arroyave Franco, Laboratorio de Fsica Aplicada, departamento de Ciencias Bsicas,
Universidad EAFIT por su invaluable colaboracin en las medidas de AFM-NC.
A Ingeominas y el Cimex por la realizacin de los anlisis qumicos por espectrofotometra de absorcin atmica
(AAS).
Al profesor Vijayendra K. Garg, del instituto de fsica, de la Universidad de Brasilia, por la realizacin de los
espectros Mssbauer.
Al grupo de Fsica de Estado Slido, de la Universidad de Antioquia, por los espectros Mssbauer.
A el Laboratorio de Bio-mineraloga por proporcionar el espacio y los equipos necesarios para el desarrollo de
este trabajo.
Al profesor Oswaldo Bustamante por su asesora y valiosos aportes durante la consecucin de este trabajo.
A la empresa Centricol por el soporte tcnico dado durante el transcurso de este estudio.
Y muy especialmente a m segunda familia, empleados y compaeros del bloque M1 y parque de la minera
(Ingeominas), especialmente a las siguientes personas a las cuales les tengo un inmenso cario: Martha Salazar,
doa Gloria, Gloria, Oscar Jaramillo, Angelita, Aurelio, don Eucario, don lvaro, Alex, don Mauricio y a mis
queridos Luna y Simn.
iii
TRABAJOS PRESENTADOS DURANTE LA
REALIZACIN DE LA TESIS
V Congreso Latinoamericano de Fsica y Qumica Ambiental y VI jornadas Chilenas de Fsica y Qumica Ambiental.
Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Arica. Duracin 14 al 17 de Octubre de 2009. Poster: Bio-oxidacin de la
galena.
V Congreso Latinoamericano de Fsica y Qumica Ambiental y VI jornadas Chilenas de Fsica y Qumica Ambiental.
Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Arica. Duracin 14 al 17 de Octubre de 2009. Poster: Mineraloga del proceso
de oxidacin bacteriana de la arsenopirita: Implicaciones ambientales.
III Latinometalurgia. Universidad Nacional de San Antonio de Abad del Cusco, Per. Duracin 14 al 16 de Octubre de
2009. Ponencia: Bio-oxidacin de pirita.
III Latinometalurgia. Universidad Nacional de San Antonio de Abad del Cusco, Per. Duracin 14 al 16 de Octubre de
2009. Ponencia: Bio-lixiviacin de esfalerita desease.
IV Simposio sobre Bio-fbricas. Universidad Nacional de Colombia sede Medelln. Duracin: 4 al 6 de agosto de 2009.
Ponencia: Mineraloga del proceso de oxidacin de la arsenopirita (FeAsS) por Acidithiobacillus ferrooxidans en
erlenmeyers agitados.
IV Simposio sobre Bio-fbricas. Universidad Nacional de Colombia sede Medelln. Duracin: 4 al 6 de agosto de 2009.
Ponencia: Oxidacin de esfalerita (ZnS) por Acidithiobacillus ferrooxidans y cultivos mixtos de Acidithiobacillus
ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans a escala de laboratorio.
IV Simposio sobre Bio-fbricas. Universidad Nacional de Colombia sede Medelln. Duracin: 4 al 6 de agosto de 2009.
Ponencia: La biotecnologa: diversas aplicaciones como una opcin ms limpia para la minera.
XIX Encuentro nacional de estudiantes de ingeniera qumica y de procesos. Universidad Nacional de Colombia, sede
Medelln. Duracin: 20 a 25 de julio de 2009. Ponencia: Bacterias: Ingenieras de Superficies?
E.R. Meja, J.D. Ospina, M.A. Mrquez and A.L. Morales. Oxidation of chalcopyrite (CuFeS2) by Acidithiobacillus
ferrooxidans and a mixed culture of Acidithiobacillus ferrooxidans and Acidithiobacillus thiooxidans like bacterium in
shake flask. Advanced Materials Research. Vol. 71-73 p.p. 385-388. 2009.
II conferencia internacional de espectroscopia, Spectra 2009 Lima, Per. Duracin: 9-13 de marzo de 2009. Poster:
Oxidation of chalcopyrite (cufes2) by Acidithiobacillus ferrooxidans like and a mixed culture of Acidithiobacillus
ferrooxidans-like and Acidithiobacillus thiooxidans-like bacterium in shake flasks.
VIII Conferencias Internacionales sobre Tecnologas Limpias para la Industria Minera 2008 (VIII CTWMI 2008. Congreso
CTWMI 2008). Santiago de Chile. Duracin: 13-16 de abril de 2008. Ponencia: PROCESS MINERALOGY OF GALENA
SAMPLES OXIDATION BY Acidithiobacillus ferrooxidans.
E.R. Meja, J.D. Ospina and M.A. Mrquez. Mineraloga del proceso de oxidacin bacteriana de la galena (PbS) por
Acidithiobacillus ferrooxidans, mediante anlisis de microscopia electrnica de barrido, FTIR Y DRX. Scientia et Technica.
Vol. 36. 2007.
IV congreso internacional de materiales. Universidad tecnolgica de Pereira. Duracin 10-14 de septiembre de 2007.
Ponencia: Mineraloga del proceso de oxidacin bacteriana de la galena (PbS) por Acidithiobacillus ferrooxidans, mediante
anlisis de microscopia electrnica de barrido, FTIR Y DRX.
III Simposio sobre Bio-fbricas. Universidad Nacional de Colombia sede Medelln. Duracin: 15 al 17 de agosto de 2007.
Ponencia: Influencia del tamao de grano en la oxidacin bacteriana de la galena (PbS) por medio Acidithiobacillus
ferrooxidans mediante Anlisis de microscopia electrnica de barrido y FTIR.
iv
TABLA DE CONTENIDO
AGRADECIMIENTOS.. iii
TRABAJOS PRESENTADOS DURANTE LA REALIZACIN DE LA TESIS iv
CONTENIDO.. v
RESUMEN... vii
LISTA DE FIGURAS. viii
LISTA DE TABLAS... xvi
1. INTRODUCCIN. 1
2. HIPTESIS Y OBJETIVOS 4
3. REVISIN BIBLIOGRFICA.... 5
3.1. Arsenopirita (FeAsS) 5
3.2. Pirita (FeS2) 18
3.3. Microorganismos 24
4. METODOLOGA.. 27
5. RESULTADOS.. 31
5.1. Caracterizacin inicial del mineral 31
5.1.1. Arsenopirita (FeAsS) 31
5.1.2. Pirita (FeS2) 33
5.2. Purificacin y adaptacin de microorganismos acidfilos 35
5.2.1. Arsenopirita 37
5.2.1.1. Adaptacin de concentrados sobre malla Tyler 200 37
5.2.1.2. Adaptacin de concentrados sobre malla Tyler 325 37
5.2.2. Pirita 38
5.2.2.1. Adaptacin de concentrados sobre malla Tyler 200 38
5.2.2.2. Adaptacin de concentrados sobre malla Tyler 325 38
5.3. Arsenopirita (FeAsS) 39
5.3.1. Seguimiento de la dinmica del proceso 39
v
5.3.2. Microscopa electrnica de barrido con analizador de estados slido (SEM/EDS) 44
5.3.3. Difraccin de rayos-X (DRX) 51
5.3.4. Espectroscopa de infrarrojo con transformada de Fourier (FTIR) 55
5.3.5. Microscopa de fuerza atmica (AFM) 58
5.4. Pirita (FeS2) 60
5.4.1. Seguimiento de la dinmica del proceso 60
5.4.2. Microscopa electrnica de barrido con analizador de estados slido (SEM/EDS) 64
5.4.3. Difraccin de rayos-X (DRX) 71
5.4.4. Espectroscopa de infrarrojo con transformada de Fourier (FTIR) 74
5.4.5. Espectroscopa de adsorcin Mssbauer 77
5.4.6. Microscopa de fuerza atmica (AFM) 82
6. DISCUSIN Y CONCLUSIONES. 84
vi
RESUMEN
Se realiz la caracterizacin mineralgica del proceso de oxidacin bacteriana de la arsenopirita
(FeAsS) y pirita (FeS2) por microorganismos, acidfilos, compatibles con Acidithiobacillus
ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans, sin adicionar al medio de crecimiento sulfato ferroso o
azufre elemental como fuentes principales de energa, obligando a los microorganismos, mediante un
proceso de adaptacin en etapas sucesivas, a oxidar el mineral y crecer a expensas del fenmeno
electroqumico generado.
La arsenopirita, pasante malla Tyler 200, fue casi totalmente oxidada durante el proceso por
Acidithiobacillus ferrooxidans. Cuando se empleo cultivos mixtos, de 50% A. ferrooxidans y 50% A.
thiooxidans, la arsenopirita presento el mismo comportamiento, la oxidacin del mineral fue igual a
cuando se empleo A. ferrooxidans. Para los cultivos de solo A. thiooxidans la arsenopirita no se oxido.
La malla Tyler 325 presento el mismo comportamiento con todos los sistemas microbianos evaluados,
baja oxidacin y un ambiente ms agreste para el crecimiento bacteriano, pero la velocidad de
disolucin fue mucho menor que la presentada por la malla Tyler 200.
La pirita presento una velocidad de disolucin muy baja durante los treinta das de proceso, solo 5% de
disolucin, para todos los ensayos y las dos distribuciones de tamaos de partcula evaluadas, pero
genero durante todos los experimentos de oxidacin potenciales redox y niveles de acidez muy altos,
~650 mV y pH ~1,5, favoreciendo la disolucin de los sulfuros acompaantes.
El principal producto de la oxidacin de ambos minerales fue un sulfato frrico hidratado bsico, tipo
jarosita. En el caso de la arsenopirita, sta jarosita se encontr en diferentes morfologas, como
agregados individuales, pelculas recubriendo ncleos remanentes y deposicin por pulsos sobre restos
de cristalitos. En todos los casos incorpor grandes cantidades de arsnico. La disolucin oxidativa de
la pirita no mostr la formacin de pelculas y la jarosita presente solo se encontr en forma de
agregados individuales y pequeos depsitos sobre surcos de corrosin. Tambin se observ la
formacin de un xido de hierro en pequeas cantidades para ambos minerales, en la arsenopirita, ste
oxido concuerda con schwertmannita y en la pirita con goetita. En los anlisis realizados se evidenci
la formacin de pelculas de azufre elemental, aunque para el final del proceso esta formacin no fue
contundente, posiblemente por la disolucin de sta y su transformacin hasta cido sulfrico.
Por DRX fueron observadas cantidades importantes de hidroxisulfato frrico (Fe(OH)(SO4). Hematita
y goetita ocurren en cantidades menores. La qumica de los sulfatos de hierro indica que la
amoniojarosita, en la oxidacin de la arsenopirita, y la hidroniojarosita, en el proceso de oxidacin de
la pirita, para cada ambiente genera jarositas con alto y bajo contenido de arsnico. La amoniojarosita
pobre en arsnico contiene en proporcin hasta un 10% de As2O5 y la rica contiene hasta 20% As2O5.
La hidroniojarosita pobre en arsnico contiene en proporcin hasta un 2% As2O5 y la rica contiene
hasta un 28% As2O5. Lo que sugiere una relacin de substitucin 1:1 entre el ion S2-n y el ion As3+, lo
que sugiere una solucin slida en direccin a una As jarosita.
Finalmente, se propone un modelo de oxidacin por capas para ambos minerales. Para el caso de la
arsenopirita, el modelo de oxidacin muestra la formacin de cinco capas denominadas de la siguiente
manera: una pelcula de azufre elemental, una pelcula de xidos de arsnico, una pelcula de xidos
de hierro frrico, una pelcula de sulfoarsenatos de hierro frrico y en la superficie ms externa
amoniojarosita. En el caso de la pirita, se tiene: una pelcula de azufre elemental, una pelcula de
xidos de hierro frrico y en la superficie ms externa hidroniojarosita.
Con estas cinticas de oxidacin definidas se procedi a hacer una flotacin diferencial en celda tipo
Hallimond, encontrando una separacin entre la pirita y la arsenopirita de hasta el 80% con solo 48
horas de pretratamiento biooxidante.
vii
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Diagramas de Pourbaix, 25C, 1 atm, para el sistema Fe-As-S-O, para dos
concentraciones diferentes, donde se muestra los campos de estabilidad de la arsenopirita. El rea
5
encerrada por el rectngulo punteado indica condiciones tpicas cercanas a la superficie del
mineral.
Figura 2. Diagramas de Pourbaix, 25C, 1 atm, para los sistemas Fe-S-H2O y Fe-As-S-H2O. 6
Figura 3. Espectros de XPS para la regin Fe2p(3/2) en la arsenopirita: (A) clivada a 10-9 torr; (B)
clivada a 10-8 Pa (espectro a) y clivada en aire (espectro b); (C) luego de una exposicin durante
7
25 horas en aire; y (D) luego de expuesta por cuatro semanas en medios de cultivo bacterial, a pH
2 y en ausencia de microorganismos.
Figura 4. Diagramas esquemticos para las pelculas formadas durante la oxidacin de la
arsenopirita. De izquierda a derecha: izquierda, oxidacin por O2. Centro, oxidacin en aire y 12
derecha, oxidacin por exposicin en aire durante 25 das, medidas hechas perfiles AES.
Figura 5. Diagrama para la formacin de pelculas de azufre elemental durante el proceso de
13
oxidacin de la arsenopirita.
Figura 6. Diagrama para la oxidacin de la arsenopirita. 15
Figura 7. Mecanismos de oxidacin bacteriana propuestos por Silverman (1967). a) Mecanismo
16
indirecto. b) Mecanismo de contacto indirecto. c) Mecanismo de contacto directo.
Figura 8. Imgenes de microscopa ptica de luz plana polarizada, modo luz reflejada
(MOLPP/LR), para granos individuales de arsenopirita (Aspy) con pequeas inclusiones y fases
acompaantes. (A) cristal euhedral de arsenopirita con pequeas inclusiones de pirita (Py) y una
textura porosa. (B) cristal subedral de arsenopirita con inclusiones de pirrotita (Po) al borde del
31
grano. (C) cristal anedral de arsenopirita, con una textura fracturada y algo porosa y pequeas
inclusiones de minerales de la ganga. (D) cristal de arsenopirita euedral de forma romboedral y
pequeas inclusiones de pirita en forma de gotculas. (E) cristal euedral de arsenopirita con
inclusiones de pirita ~ 80 m. (F) cristal subedral de arsenopirita muy fracturado.
Figura 9. Imgenes de SEM/EDS, modo de electrones retro proyectados (BEC) para granos
individuales de arsenopirita (Aspy) con pequeas inclusiones y fases acompaantes. (A) cristal
euhedral de Aspy, acompaado de su anlisis microqumico, donde se observa una textura
porosa, bordes definidos y perfilados. (B) cristal subedral de Aspy, donde se observa su
topografa accidentada (fracturas y poros a travs de todo el grano). (C) cristal de Aspy, con
32
pequeas inclusiones de pirrotita y monacita (Moc) (en anlisis microqumico de esta imagen es
realizado sobre el grano de monacita). (D) cristal de Aspy euedral con pequeas inclusiones de
pirita en forma de gotculas (el anlisis microqumico es para el grano de pirita). (E) cristal
euedral de arsenopirita con nquel y cobalto, como se observa en el espectro de EDS, en solucin
slida. (F) cristales de Aspy muy fracturado y ms inclusiones de monacita.
Figura 10. Difractogramas de rayos-X para las muestras de arsenopiritas molidas. A) malla Tyler
-200 y B) malla Tyler -325. Arsenopirita (Aspy) y cuarzo (Qz) con pequeas cantidades de pirita 33
(Py) y moscovita (Msc).
Figura 11. Imgenes de microscopa ptica de luz plana polarizada, modo luz reflejada
(MOLPP/LR), para granos individuales de pirita (Py) con pequeas inclusiones y fases
acompaantes. (A) cristal anedral de pirita con pequeas inclusiones de calcopirita (Cpy) y
material de la ganga (material gris)) y una textura porosa y fracturada. (B) cristal anedral de pirita 33
con inclusiones de esfalerita (Sph) al borde del grano y granos de la ganga intercrecidos con los
cristales de pirita. (C) cristales euedrales de pirita con una textura muy poco fracturada y casi sin
porosa; se observan cristales de pirita crecidos dentro de material de la ganga.
viii
Figura 12. Imgenes de SEM/EDS, modo de electrones retro proyectados (BEC) para granos
individuales de pirita (Py) con pequeas inclusiones y fases acompaantes. (A) cristales euhedral,
subedrales y anedrales de Py, acompaado de pequeas inclusiones de esfalerita (Sph), donde se
observa una textura porosa, bordes definidos y perfilados. (B) cristales subedral de Py, donde se
observa su intercrecimiento en una matriz de ganga, principalmente cuarzo. (C) cristal de Py 34
crecido en una fractura de esfalerita e intercrecido con un cristal hexagonal de slice. (D) cristal
de Py anedral, muy fracturado y con intercrecimientos de esfalerita al interior del grano y al
borde del mismo. (E) cristales euedrales y subedrales de Py en una matriz de ganga (F) cristales
de Py con intercrecimiento de galena y esfalerita inmersos en una matriz de cuarzo.
Figura 13. Izquierda. Imagen de SEM de un cristal de pirita, modo de electrones retro
proyectados (BEC). Derecha, Mapa composicional del cristal donde se observa la zonacin 34
causada por la entrada de arsnico en solucin slida.
Figura 14. Difractogramas de rayos-X para las muestras molidas de pirita. A) malla Tyler 200.
B) malla Tyler 325. Smbolos: Pirita (Py) cuarzo (Qz) y arsenopirita (Aspy) con pequeas 35
cantidades de galena (Gn).
Figura 15. De izquierda a derecha: Recubrimiento de Caparrosa en las paredes de la mina.
Zona de toma de muestra slida con oxidacin intensa y formacin de hidrxidos de hierro,
36
cruzada principal 500mt. Zona de toma de de lixiviado en poza pequea con alta acumulacin de
xidos, la colmena gua 200mt (Tomado de Ossa 2004).
Figura 16. Crecimiento de colonias individuales de Acidithiobacillus ferrooxidans sobre agar. 36
Figura 17. De izquierda a derecha: Izquierda. Enriquecimiento de bacterias, acidfilas, en medio
lquido, donde los tres primeros erlenmeyers, con coloracin amarillosa, son para A. thiooxidans
y los dos erlenmeyers siguientes, con coloracin rojiza, son para A. ferrooxidans y el erlenmeyer
36
final con tonalidad verdosa es un cultivo inicial para A. ferrooxidans. Derecha. Pruebas
bioqumicas positivas para sulfato ferroso de los microorganismos compatibles con A.
ferrooxidans.
Figura 18. Izquierda, medidas de potencial redox. Derecha, medidas de pH. Para A. ferrooxidans
crecidas en concentrados de arsenopirita. Smbolos 2,5% de slidos y 100% de Fe2+. 5,0%
37
de slidos y 75% de Fe2+. 7,0% de slidos y 50% de Fe2+. 9,0% de slidos y 25% de Fe2+ y
10,0% de slidos y 0,0% de Fe2+.
Figura 19. Izquierda, medidas de potencial redox. Derecha, medidas de pH. Para A. ferrooxidans
crecidas en concentrados de arsenopirita. Smbolos 2,5% de slidos y 100% de Fe2+. 5,0%
38
de slidos y 75% de Fe2+. 7,0% de slidos y 50% de Fe2+. 9,0% de slidos y 25% de Fe2+ y
10,0% de slidos y 0,0% de Fe2+.
Figura 20. Izquierda, medidas de potencial redox. Derecha, medidas de pH. Para A. ferrooxidans
crecidas en concentrados de arsenopirita. Smbolos 2,5% de slidos y 100% de Fe2+. 5,0%
38
de slidos y 75% de Fe2+. 7,0% de slidos y 50% de Fe2+. 9,0% de slidos y 25% de Fe2+ y
10,0% de slidos y 0,0% de Fe2+.
Figura 21. Izquierda, medidas de potencial redox. Derecha, medidas de pH. Para A. ferrooxidans
crecidas en concentrados de arsenopirita. Smbolos 2,5% de slidos y 100% de Fe2+. 5,0%
39
de slidos y 75% de Fe2+. 7,0% de slidos y 50% de Fe2+. 9,0% de slidos y 25% de Fe2+ y
10,0% de slidos y 0,0% de Fe2+.
Figura 22. (A) Cambios en el potencial redox y (B) Cambios en el pH durante el proceso de
disolucin oxidativa de la arsenopirita en la presencia de Acidithiobacillus ferrooxidans.
39
Smbolos: and arsenopirita malla Tyler 200 y 325 respectivamente. y controles
estriles para las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 23. (A) Cambios en el potencial redox y (B) Cambios en el pH durante el proceso de
40
disolucin oxidativa de la arsenopirita en la presencia de Acidithiobacillus ferrooxidans y
ix
Acidithiobacillus thiooxidans. Smbolos: and arsenopirita malla Tyler 200 y 325
respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 24. Concentracin de arsnico (grfico externo) y curva de concentracin celular (grfico
interno) para Acidithiobacillus ferrooxidans. Smbolos: and arsenopirita malla Tyler 200 y 41
325 respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 25. Concentracin de arsnico (grfico externo) y curva de concentracin celular (grfico
interno) para Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans. Smbolos: and
41
arsenopirita malla Tyler 200 y 325 respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler
200 y 325 respectivamente.
Figura 26. Cambios en la concentracin de hierro total para el ensayo con Acidithiobacillus
ferrooxidans. Smbolos: and arsenopirita malla Tyler 200 y 325 respectivamente. y 42
controles estriles las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 27. Cambios en la concentracin de hierro ferroso (A) y hierro frrico (B) para el ensayo
con Acidithiobacillus ferrooxidans. Smbolos: and arsenopirita malla Tyler 200 y 325 42
respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 28. Cambios en la concentracin de hierro total para el ensayo con Acidithiobacillus
ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans. Smbolos: and arsenopirita malla Tyler 200 y 43
325 respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 29. Cambios en la concentracin de hierro ferroso (A) y hierro frrico (B) para el ensayo
con Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans. Smbolos: and
43
arsenopirita malla Tyler 200 y 325 respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler
200 y 325 respectivamente.
Figura 30. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC). Malla Tyler 200,
donde se observan granos individuales de mineral despus de cinco das de iniciado el proceso.
(A) se aprecia un grano de Aspy con golfos y pits de corrosin, algunas fracturas y la aparicin
de una pelcula que recubre el grano, los EDS realizados a sta pelcula (imagen a su derecha)
sugieren ser una jarosita con arsnico en solucin slida o pequeas partculas de arsenato dentro
de la pelcula (Mrquez 1999). (B) Cristal anedral de Aspy muy fracturado. Tambin se sugiere
la formacin de una pelcula. Se observan cristalitos de cuarzo sin disolucin y agregados
individuales de jarositas con arsnico (fase JAs). El EDS es realizado sobre la pelcula. (C)
Cristal de Aspy subedral con las misma topografa observada en los cristales anteriores pero la 44
pelcula que recubre este grano no se forma por uno de los lados del cristal lo que se puede deber
a un proceso de precipitacin y no a la formacin in situ de la capa. (D) Cristal anedral de Aspy
con surcos y fracturas profundas y un golfo de corrosin en el que se deposita material
precipitado. El EDS sugiere la formacin de la fase JAs con calcio en solucin posiblemente
debida a la disolucin de carbonatos de calcio, responsables por el incremento del pH en las
etapas tempranas del proceso. (E) Cristal anedral de Aspy con surcos de corrosin muy marcados
y rectos, posiblemente a travs de planos de clivaje. (F) Cristal anedral de Aspy recubierto
totalmente por una pelcula, el EDS muestra la misma composicin qumica de la fase JAs.
Figura 31. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC). Malla Tyler 325,
donde se observan granos individuales de mineral despus de cinco das de iniciado el proceso.
(A) se aprecia un grano de Aspy, euedral, con la aparicin de algunos surcos y pits de corrosin,
los EDS realizados a la pelcula sobre el cristal de cuarzo (imagen a su derecha) sugieren ser una
jarosita con arsnico en solucin slida o pequeas partculas de arsenato dentro de la pelcula 45
(Mrquez 1999). (B) Cristal subedral de Aspy con fracturas y surcos de corrosin. Se observan
agregados individuales de jarositas con arsnico (fase JAs). El EDS es realizado sobre la pelcula.
(C) Cristal de Aspy subedral con las misma topografa observada en los cristales anteriores sin la
presencia definida de pelculas recubriendo el grano. (D) Cristal subedral de Aspy con un golfo
x
de corrosin muy marcado en el que se deposita material precipitado. El EDS sugiere la
formacin de la fase JAs. (E) Cristal subedral de Aspy con surcos de corrosin. (F) Cristal
anedral de Aspy con pequeas cantidades de precipitados sobre l.
Figura 32. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC). Malla Tyler 200,
donde se observan granos individuales de mineral despus de quince das de iniciado el proceso.
(A) se aprecia un grano de Aspy en la que los EDS realizados a sta pelcula (imagen a su
derecha) sugieren ser una jarosita con arsnico en solucin slida o pequeas partculas de
arsenato dentro de la pelcula (Mrquez 1999). Tambin se sugiere la precipitacin por capas
durante el desarrollo del proceso. (B) Cristal anedral de Aspy en el que la precipitacin por
pulsos es ms evidente y la composicin del material interno a la capa de color gris brillante se
ajusta a la de un sulfo-arsenato frrico (C) Cristal de Aspy anedral con la misma topografa 46
observada en los cristales anteriores, se conservan los golfos de corrosin lo que da injerencia en
que el proceso de disolucin continua a pesar de la formacin de esta pelcula. (D) panorama
general de la cantidad de precipitados aislados, de formas circulares, formados durante el proceso
de disolucin oxidativa del mineral. (E) Cristal anedral de Aspy donde se reflejan dos pelculas,
la pelcula A es un material con mayor contenido de arsnico y la pelcula B presenta menor
cantidad de arsnico y su composicin es similar a la de un sulfo-arsenato frrico. (F) Cristal
subedral de cuarzo con pequeos indicios de disolucin debido a la geometra irregular mostrada.
Figura 33. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC). Malla Tyler 325,
donde se observan granos individuales de mineral despus de quince das de iniciado el proceso.
(A) se aprecia un grano subedral de Aspy con algunos surcos de oxidacin, rodeado de pequeos
agregados de material precipitado, los EDS realizados sobre este material (imagen a su derecha)
sugieren ser la fase JAs antes descrita. (B) Cristal subedral de Aspy en el que se manifiestan
surcos de corrosin a travs de todo el grano. (C) Cristal anedral de Aspy con la misma
topografa observada en los cristales anteriores, pero se aprecia mejor la cantidad de la fase JAs 47
precipitada alrededor del grano. (D) Grano subedral de Aspy en el que se puede observar cmo se
van disolviendo algunos bordes del material, crculo rojo. (E) Cristal anedral de Aspy donde
sobre una de sus borde empieza a depositarse una pelcula de la fase JAs, tambin se manifiesta
el proceso de disolucin en la generacin de surcos prolongados de corrosin. (F) Cristal
subedral de Aspy donde se manifiesta el desarrollo del proceso de disolucin localizada en forma
de surcos y algunos pits de corrosin.
Figura 34. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC). Malla Tyler 200,
donde se observan granos individuales de mineral despus de treinta das de iniciado el proceso.
(A) Grano de Aspy, completamente anedral, con golfos y pits de corrosin muy marcados, sin
fracturas y pelcula que recubre el grano, los EDS realizados a sta pelcula sugieren ser la fase
JAs antes mencionada. (B) Cristal anedral de Aspy. Se observa el desarrollo de una pelcula
gruesa de jarosita ~30m. (C) Cristal de Aspy anedral con la misma topografa observada en los
cristales anteriores pero la pelcula que recubre este grano cambia de tonalidad en la parte ms 47
externa, sugiriendo una composicin qumica diferente. (D) Cristales anedrales de Aspy
recubiertos por pelculas gruesas de jarosita. (E) Cristal anedral de Aspy donde se evidencia la
formacin de dos pelculas de composicin qumica similar, solo vara el contenido de arsnico.
La presencia de estas dos capas sugiere la precipitacin por pulsos de este material. (F) Cristal
anedral de Aspy recubierto totalmente por una pelcula, el EDS muestra la misma composicin
qumica de la fase JAs y algunos precipitados de aluminio dentro de esta capa.
Figura 35. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC). Malla Tyler 325,
donde se observan granos individuales de mineral despus de treinta das de iniciado el proceso.
48
(A) Grano de Aspy, anedral, con golfos y pits de corrosin muy marcados, los EDS realizados a
ste material no sugieren cambios significativos. (B) Cristal anedral de Aspy. Se observa el
xi
desarrollo de una pelcula discontinua de la fase JAs ~0,45m. (C) Cristal de Aspy anedral con
las misma topografa observada en los cristales anteriores pero las fracturas y surcos de corrosin
son ms pronunciados. (D) Cristal anedral de Aspy recubiertos por una pequea pelcula de JAs.
(E) Cristal anedral de Aspy donde se evidencia la precipitacin de JAs sobre cristales de la
ganga. (F) Cristales anedrales de Aspy donde se observa la precipitacin preferencial sobre los
granos.
Figura 36. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC), malla Tyler 200,
49
para los controles estriles despus de 30 das de proceso.
Figura 37. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC), malla Tyler 325,
49
para los controles estriles despus de 30 das de proceso.
Figura 38. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
200 durante la evolucin del proceso de oxidacin. Donde se desglosa el primer conjunto de seis
imgenes para los cinco primeros das del proceso. el segundo conjunto de seis imgenes muestra 50
los patrones de oxidacin para el da 15 del proceso y el tercer grupo de seis imgenes muestra la
evolucin del proceso para el da 30 del proceso.
Figura 39. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
325 durante la evolucin del proceso de oxidacin. Donde se desglosa el primer conjunto de seis
imgenes para los cinco primeros das del proceso. El segundo conjunto de seis imgenes 51
muestra los patrones de oxidacin para el da 15 del proceso y el tercer grupo de seis imgenes
muestra la evolucin del proceso para el da 30 del proceso.
Figura 40. Espectros de FTIR para las muestras provenientes del proceso de biooxidacin. A y
B: ensayos con Acidithiobacillus ferrooxidans para las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
56
C y D: ensayos con Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans para las
mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 41. Imgenes de microscopa de fuera atmica (AFM) para la superficie de arsenopirita
luego de 12 horas de interaccin con medio T&K sin bacterias. El rea de medida fue de 576 58
m2, imagen superior, y de 25 m2 imagen inferior.
Figura 42. Imgenes de microscopa de fuera atmica (AFM) para la superficie de arsenopirita
luego de 12 horas de interaccin con medio T&K inoculado. El rea de medida fue de (12 x 12) 59
m2.
Figura 43. Imgenes de microscopa de fuera atmica (AFM) para la superficie de arsenopirita
luego de 12 horas de interaccin con medio T&K inoculado. El rea de medida fue de (3 x 3) 59
m2, imagen superior, y de (2 x 2) m2, imagen inferior.
Figura 44. Cambios en el potencial redox (grfico izquierdo) y en el pH (grfico derecho)
durante el proceso de disolucin oxidativa de la pirita en la presencia de Acidithiobacillus
60
ferrooxidans. Smbolos: and pirita malla Tyler 200 y 325 respectivamente. y
controles estriles las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 45. Cambios en el potencial redox (grfico izquierdo) y en el pH (grfico derecho)
durante el proceso de disolucin oxidativa de la pirita en la presencia de Acidithiobacillus
61
ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans. Smbolos: and pirita malla Tyler 200 y 325
respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 46. Concentracin de hierro total (grfico externo) y curva de concentracin celular
(grfico interno) para Acidithiobacillus ferrooxidans. Smbolos: and arsenopirita malla
61
Tyler 200 y 325 respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler 200 y 325
respectivamente.
Figura 47. Concentracin de hierro total (grfico externo) y curva de concentracin celular
(grfico interno) para Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans. Smbolos: 62
and arsenopirita malla Tyler 200 y 325 respectivamente. y controles estriles las
xii
mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 48. Concentracin de hierro ferroso (grfico izquierdo) y concentracin de hierro frrico
(grfico derecho) para el proceso de disolucin de la pirita por Acidithiobacillus ferrooxidans.
63
Smbolos: and pirita malla Tyler 200 y 325 respectivamente. y controles estriles las
mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 49. Concentracin de hierro ferroso (grfico izquierdo) y concentracin de hierro frrico
(grfico derecho) para el proceso de disolucin de la pirita por Acidithiobacillus ferrooxidans y
63
Acidithiobacillus thiooxidans. Smbolos: and pirita malla Tyler 200 y 325
respectivamente. y controles estriles las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
Figura 50. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
200, donde se observan granos individuales de mineral despus de cinco das de iniciado el
proceso. (A) se aprecia un grano de pirita (Py) fracturado, con algunos golfos de corrosin, los
EDS no muestran la formacin de pelculas superficiales. (B) imagen donde se muestra un efecto
galvnico entre un cristal de Py y un cristal de galena (Gn), donde el mineral disuelto es la 65
galena;. (C) Cristal de Py subedral con una amplia gama de pits y surcos de corrosin. (D)
Cristales euedrales de pirita sin signos marcados de corrosin. (E) cristal subedral de pirita en
donde se manifiesta la formacin de una pelcula de xido de hierro. (F) cristal de Py donde se
inicia la formacin de golfos de corrosin.
Figura 51. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
325, donde se observan granos individuales de mineral despus de cinco das de iniciado el
proceso. (A) se aprecia un grano anedral de pirita recubierto de una pelcula. Los EDS sugieren
una composicin similar a la de una jarosita; (B) Cristales subedrales de Py que presentaron
fracturas y algunos pits de corrosin; (C) Cristal anedral de Py en avanzado estado de deterioro
acompaado por un xido de hierro; (D) panorama general de los estados de corrosin presentes 65
en las muestras donde se sugiere que el proceso de disolucin inicia por lo granos ms pequeos;
(E) cristal subedral de pirita en donde se manifiesta la corrosin por pits que sufre las cristales
durante el proceso de disolucin; (F) cristal subedral de Py donde se inicia la formacin de golfos
de corrosin y pelculas de sulfatos. Tambin es evidente el proceso de disolucin de los sulfuros
acompaantes.
Figura 52. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
200, donde se observan granos individuales de mineral despus de quince das de iniciado el
proceso. (A) cristal subedral de pirita (Py) con algunos surcos corrosin. An no es muy evidente
la formacin de pelculas y precipitados de jarosita en formas individuales; (B) cristales
subedrales de Py sin evidencias notorias de oxidacin y un cristalito de galena mu oxidado
66
recubierto por una pelcula de anglesita; (C) cristal de Py anedral con una amplia gama de pits y
surcos de corrosin y una pelcula recubriendo el cristal remanente; (D) cristales euedrales y
subedrales de pirita en diferentes estados de corrosin; (E) agregado de jarosita con inclusiones
de aluminio y silicio y restos de cristalitos de galena disueltos; (F) cristal de galena sin oxidacin
al interior de un cristal de pirita.
Figura 53. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
325, donde se observan granos individuales de mineral despus de quince das de iniciado el
proceso. (A) Granos de pirita, el ms pequeos recubierto de una pelcula de jarosita y en el ms
grande se observa la formacin de una pelcula discontinua de jarosita y un oxido de hierro
recubriendo la parte superior del grano. (B) imagen donde se muestra un cristal subedral de Py 66
con formacin de pits de corrosin (C) Cristal de Py en avanzado estado de deterioro con pelcula
de jarosita recubrindolo. (D) Cristales euedrales de pirita con evidencia de surcos. (E) cristal
euedral de pirita en donde se manifiesta la formacin de una pelcula difusa de xido de hierro.
(F) cristal de Py donde se observa la formacin de una pelcula de jarosita.
xiii
Figura 54. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
200, donde se observan granos individuales de mineral despus de treinta das de iniciado el
proceso; (A) cristal euedral de Py con un golfo de corrosin muy pronunciado en el que se
deposito una capa de un xido de hierro; (B) agregado de jarosita (fase J) donde se observan
restos de cristales de Py y galena (Gn); (C) cristal de Py donde se marca la iniciacin de los
67
surcos de corrosin, el dimetro de los surcos no sobrepasa las 0,5m; (D) cristal de Py con
surcos de corrosin muy marcados y con restos de Gn depositada sobre uno de sus bordes; (E)
cristal subedral de pirita en donde se manifiesta la formacin de una pelcula de xido de hierro.
(F) cristal de Py subedral donde se marca como los surcos se van transformado en golfos de
corrosin.
Figura 55. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
325, donde se observan granos individuales de mineral despus de treinta das de iniciado el
proceso. (A) cristal euedral de Py al lado de un agregado de jarosita; (B) cristales subedrales con
pocas seales de oxidacin;(C) agregado de jarosita ricos en aluminio y silicio; (D) cristal
67
subedral de pirita en estado avanzado de corrosin. (E) cristal de Py subedral con la misma
topografa observada durante todo el proceso para ambas distribuciones de tamaos de partcula
empleadas; (F) grano anedral de Py de granulometra muy pequea en un estado muy avanzado
de corrosin.
Figura 56. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC), malla Tyler 200,
68
para los controles estriles despus de 30 das de proceso.
Figura 57. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC), malla Tyler 325,
68
para los controles estriles despus de 30 das de proceso.
Figura 58. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
200 durante la evolucin del proceso de oxidacin. Donde se desglosa el primer conjunto de seis
imgenes para los cinco primeros das del proceso. El segundo conjunto de seis imgenes 69
muestra los patrones de oxidacin para el da 15 del proceso y el tercer grupo de seis imgenes
muestra la evolucin del proceso para el da 30 del proceso.
Figura 59. Imgenes de SEM, modo de electrones retroproyectados (BEC) para la malla Tyler
325 durante la evolucin del proceso de oxidacin. Donde se desglosa el primer conjunto de seis
imgenes para los cinco primeros das del proceso. el segundo conjunto de seis imgenes muestra 70
los patrones de oxidacin para el da 15 del proceso y el tercer grupo de seis imgenes muestra la
evolucin del proceso para el da 30 del proceso.
Figura 60. Espectros de FTIR para las muestras provenientes del proceso de biooxidacin. A y
B: ensayos con Acidithiobacillus ferrooxidans para las mallas Tyler 200 y 325 respectivamente.
C y D: ensayos con Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans para las 75
mallas Tyler 200 y 325 respectivamente. Smbolos: SO42- : Jarosita. NH4+: Amonio-jarosita. CH3
CH2: Grupos alifticos. Py: Pirita. Fe-O: Goetita.
Figura 61. Muestra de pirita, con un tamao de partcula entre 7545 m, sin oxidacin
78
bacteriana.
Figura 62. Muestra de pirita, con un tamao de partcula entre 7545 m, sometida a oxidacin
78
bacteriana durante 15 das.
Figura 63. Muestra de pirita, con un tamao de partcula entre 7545 m, sometida a oxidacin
79
bacteriana durante 30 das.
Figura 64. Comparacin de las muestras de pirita, con un tamao de partcula entre 7545 m,
sometidas a oxidacin bacteriana, durante 15 y 30 das, y sin oxidacin. Smbolos: Malla Tyler 79
200 sin oxidacin. Malla Tyler 200 oxidada 15 das y Malla Tyler 200 oxidada 30 das.
Figura 65. Muestra de pirita, con un tamao de partcula entre 4515 m, sin oxidacin
80
bacteriana.
xiv
Figura 66. Muestra de pirita, con un tamao de partcula entre 4515 m, sometida a oxidacin
80
bacteriana durante 15 das.
Figura 67. Muestra de pirita, con un tamao de partcula entre 4515 m, sometida a oxidacin
81
bacteriana durante 30 das.
Figura 68. Comparacin de las muestras de pirita, con un tamao de partcula entre 4515 m,
sometidas a oxidacin bacteriana, durante 15 y 30 das, y sin oxidacin. Smbolos: Malla Tyler 81
325 sin oxidacin. Malla Tyler 325 oxidada 15 das y Malla Tyler 325 oxidada 30 das.
Figura 69. Imgenes de microscopa de fuera atmica (AFM) para la superficie de arsenopirita
luego de 12 horas de interaccin con medio T&K sin bacterias. El rea de medida fue de 10 x 10 82
m2.
Figura 70. Imgenes de microscopa de fuera atmica (AFM) para la superficie de pirita luego
de 12 horas de interaccin con medio T&K inoculado. El rea de medida fue de (10 x 10) m2, 83
imagen superior; y (5 x5) m2, imagen inferior.
Figura 71. Imgenes de microscopa de fuera atmica (AFM) para la superficie de pirita luego
de 12 horas de interaccin con medio T&K inoculado. El rea de medida fue de (5 x 5) m2, 83
imagen superior; y (3 x3) m2, imagen inferior.
Figura 72. Diagrama esquemtico de la celda Hallimond, modificada, empleada para todos los
98
ensayos de bio-flotacin.
Figura 73. Difraccin de rayos-X para la mezcla pirita-arsenopirita a ser sometida por oxidacin
99
bacteriana. Smbolos: pirita (Py), arsenopirita (Aspy), cuarzo (Qz) y pirrotita (Po).
Figura 74. Grfico de barras para el proceso de flotacin diferencial en celda Hallimond
modificada de la mezcla artificial de pirita-arsenopirita. Donde se identifica: 0 horas, mezcla
original. 1 hora, mezcla flotada sin tratamiento bacteriano. 2 horas, mezcla flotada despus de 99
dos horas de pre-tratamiento bio-oxidante. 4, 12, 24 y 48 horas, mezcla flotada despus de 4, 12,
24 y 48 horas de pre-tratamiento bio-oxidante. Colores: vinotinto: pirita y morado: arsenopirita.
Figura 75. Grfico de barras para el proceso de flotacin diferencial en celda Hallimond
modificada de la mezcla artificial de pirita-arsenopirita. Donde se identifica: 0 horas, mezcla
original. 1 hora, mezcla flotada sin tratamiento bacteriano. 2 horas, mezcla flotada despus de 100
dos horas de pre-tratamiento bio-oxidante. 4, 12, 24 y 48 horas, mezcla flotada despus de 4, 12,
24 y 48 horas de pre-tratamiento bio-oxidante.
xv
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Minerales identificados durante el proceso de disolucin de la arsenopirita, con
Acidithiobacillus ferrooxidans, pasante malla Tyler 200, y sus abundancias relativas.
Intensidades de los picos: (*****) muy alta; (****) alta; (***) media; (**) media - baja; (*)
51
baja; (t) trazas, (nd) no detectado. El da 0 significa el mineral original, el da 5 significa el
mineral despus de ser sometido a oxidacin con bacterias durante cinco das y as
sucesivamente.
Tabla 2. Minerales identificados durante el proceso de disolucin de la arsenopirita, con
Acidithiobacillus ferrooxidans, pasante malla Tyler 325, y sus abundancias relativas.
Intensidades de los picos: (*****) muy alta; (****) alta; (***) media; (**) media - baja; (*)
52
baja; (t) trazas, (nd) no detectado. El da 0 significa el mineral original, el da 5 significa el
mineral despus de ser sometido a oxidacin con bacterias durante cinco das y as
sucesivamente.
Tabla 3. Minerales identificados durante el proceso de disolucin de la arsenopirita, con
Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans, pasante malla Tyler 200, y sus
abundancias relativas. Intensidades de los picos: (*****) muy alta; (****) alta; (***) media;
53
(**) media - baja; (*) baja; (t) trazas, (nd) no detectado. El da 0 significa el mineral original, el
da 5 significa el mineral despus de ser sometido a oxidacin con bacterias durante cinco das
y as sucesivamente.
Tabla 4. Minerales identificados durante el proceso de disolucin de la arsenopirita, con
Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans, pasante malla Tyler 325, y sus
abundancias relativas. Intensidades de los picos: (*****) muy alta; (****) alta; (***) media;
54
(**) media - baja; (*) baja; (t) trazas, (nd) no detectado. El da 0 significa el mineral original, el
da 5 significa el mineral despus de ser sometido a oxidacin con bacterias durante cinco das
y as sucesivamente.
Tabla 5. Minerales identificados durante el proceso de disolucin de la pirita, con
Acidithiobacillus ferrooxidans, pasante malla Tyler 200, y sus abundancias relativas.
Intensidades de los picos: (*****) muy alta; (****) alta; (***) media; (**) media - baja; (*)
72
baja; (t) trazas, (nd) no detectado. El da 0 significa el mineral original, el da 5 significa el
mineral despus de ser sometido a oxidacin con bacterias durante cinco das y as
sucesivamente.
Tabla 6. Minerales identificados durante el proceso de disolucin de la pirita, con
Acidithiobacillus ferrooxidans, pasante malla Tyler 325, y sus abundancias relativas.
Intensidades de los picos: (*****) muy alta; (****) alta; (***) media; (**) media - baja; (*)
73
baja; (t) trazas, (nd) no detectado. El da 0 significa el mineral original, el da 5 significa el
mineral despus de ser sometido a oxidacin con bacterias durante cinco das y as
sucesivamente.
Tabla 7. Minerales identificados durante el proceso de disolucin de la arsenopirita, con
Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans, pasante malla Tyler 200, y sus
abundancias relativas. Intensidades de los picos: (*****) muy alta; (****) alta; (***) media;
73
(**) media - baja; (*) baja; (t) trazas, (nd) no detectado. El da 0 significa el mineral original, el
da 5 significa el mineral despus de ser sometido a oxidacin con bacterias durante cinco das
y as sucesivamente.
Tabla 8. Minerales identificados durante el proceso de disolucin de la arsenopirita, con
Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans, pasante malla Tyler 325, y sus 74
abundancias relativas. Intensidades de los picos: (*****) muy alta; (****) alta; (***) media;
xvi
(**) media - baja; (*) baja; (t) trazas, (nd) no detectado. El da 0 significa el mineral original, el
da 5 significa el mineral despus de ser sometido a oxidacin con bacterias durante cinco das
y as sucesivamente.
xvii
1. INTRODUCCIN
Una gran variedad de microorganismos han participado en la generacin de depsitos minerales y
solubilizacin de metales en la corteza terrestre desde tiempos geolgicos antiguos y su mayor
actividad se ha relacionado con los ciclos del hierro y el azufre (Rawlings, 2002). En general, procesos
tales como alteracin de rocas y minerales, movilizacin de metales, generacin de depsitos minerales
y formacin de sedimentos, estn relacionados con la accin de microorganismos y sus productos
metablicos (McIntosh et al., 1997; Ehrlich & Newman, 2009). Pero, slo fue hasta 1947, donde los
geoqumicos, que pensaban que en la naturaleza la movilizacin de metales a partir de sulfuros era un
proceso abitico, se dieron cuenta, con los trabajos de Colmer & Hinkle (1947), que la oxidacin de
hierro asociada a la formacin de drenajes cidos era un proceso que involucraba ciertos
microorganismos, los cuales aumentaban la oxidacin y solubilizacin de los sulfuros presentes en las
zonas mineras de West Virginia, USA. Grandes esfuerzos en la caracterizacin de la flora microbiana
de estos efluentes de mina dieron sus resultados cuando finalmente se logr aislar un grupo de
microorganismos semejantes, pero no idnticos, a los ya conocidos como Thiobacillus thiooxidans
(Colmer & Hinkle, 1947; Temple & Colmer, 1950). Este nuevo grupo de microorganismos tena la
capacidad de aumentar la velocidad de oxidacin de las inclusiones de pirita en el carbn y, entre 1950
y 1951, Colmer, Temple y colaboradores de la Universidad de West Virginia aislaron a partir de
drenajes cidos de una mina de carbn, en las cercanas de la ciudad de Pittsburgh, bacterias
quimiolitoauttrofas, que son microorganismos con la habilidad de derivar energa, necesaria para la
produccin de ATP, de la catlisis oxidativa de compuestos inorgnicos, adems de fijar el carbono
necesario para su metabolismo a partir del CO2 atmosfrico, las cuales fueron consideradas como los
microorganismos responsables de la oxidacin del ion Fe2+ hasta el ion Fe3+, para lo cual ellos
propusieron el nombre de Thiobacillus ferrooxidans sp. (Colmer & Hinkle, 1947; Temple & Colmer,
1950). En adelante, y debido al gran inters econmico y a la relevancia en diversas reas de la
actividad humana, muchas investigaciones han sido enfocadas sobre el papel de los microorganismos
en la oxidacin y lixiviacin de sulfuros (Vanselow, 1976; Bruynesteyn, 1989; Acevedo & Gentina,
1993; Ahonen & Tuovinen, 1993, 1994; Brierley & Brierley, 2001, Rohwerder et al., 2003; Olson et
al., 2003; Da Silva, 2004; Francisco, 2006).
En las ltimas dcadas, los procesos biotecnolgicos en minera se han convertido en una tecnologa
comercialmente viable para la extraccin de metales base y preciosos, enmarcndose dentro de una
gran rea conocida como la biohidrometalrgia, la cual se encarga del estudio y la aplicacin del
potencial econmico que puede obtenerse de la interaccin entre los microorganismos y los minerales y
en la cual estn involucradas reas que, directa o indirectamente, estn comprometidas con la
explotacin de recursos minerales y proteccin ambiental, como la biogeoqumica, geomicrobiologa y
por supuesto, la hidrometalrgia, donde podemos encontrar sus reas de apoyo como la geologa,
geologa econmica, ingeniera de minas, metalurgia e ingeniera qumica y de materiales (Rossi,
1990).
Adicionalmente, la biohidrometalrgia es bien conocida por su utilizacin en el tratamiento de drenajes
cidos o bio-remediacin, para la remocin de metales pesados presentes en reas mineras, suelos y
sedimentos contaminados o residuos industriales como cenizas de incineracin (Bosecker, 2001);
tambin en la degradacin de cianuro (Akcil et al., 2007), adecuacin de concentrados para separacin
por flotacin (Patra & Natarajan, 2003), biodesulfurizacin de carbones (Eligwe, 1988; Rossi, 1990),
entre otras.
En la industria minera, el procesamiento de minerales utilizando microorganismos viene siendo
utilizado principalmente para la extraccin de oro, cobre, uranio y cobalto (Ehrlich & Newman, 2009),
ganando gran atencin a nivel internacional. En el caso del cobre en Chile, dentro de las siete plantas
1
de biolixiviacin que operan comercialmente, se procesan alrededor de ochenta cuatro mil toneladas al
da de concentrado (Brierley & Brierley, 2001), y, actualmente, del 10 al 15% de la produccin
mundial de cobre es obtenida mediante biolixiviacin de minerales de cobre de bajo tenor (Bevilaqua,
2003).
Los procesos alternativos como la biohidrometalrgia presentan ventajas que otros procesos
tradicionales no pueden proveer, como por ejemplo, bajos costos de operacin y capital de inversin,
los cuales pueden llegar a ser significativamente menores, hasta un 50% en insumos econmicos, y
bajos requerimientos de energa, (Acevedo & Gentina, 1993; Garca & Urenha, 2001). Otras ventajas
incluyen la simplicidad en la puesta en marcha de los sistemas de operacin (Brierley & Brierley,
2001), la versatilidad en cuanto a la adaptacin a los diferentes tipos de proceso (Brierley & Luinstra,
1993) y, desde el punto de vista ambiental, la no produccin de gases nocivos, en comparacin con
otros mtodos usados rutinariamente en el beneficio de minerales, como por ejemplo la tostacin
(opur, 2001) y la generacin de desechos ambientalmente ms amigables o qumicamente ms
estables (Rawlings, 2002, Devacia & Natarajan, 2004).
En el mundo una alta cantidad de sulfuros provenientes de la explotacin minera, sulfuros con
caractersticas refractarias y/o con iones en su estructura cristalina nocivos al medioambiente y a la
salud humana, han sido acumulados en el tiempo; con contenidos de oro relevantes en la mayora de los
casos, el tratamiento de stos materiales no es factible por mtodos convencionales, lo que incrementa
el costo de la recuperacin de los valores metlicos presentes (Rodrguez et al., 2003; Marsden &
House, 1992).
El problema de la refractariedad ha situado a la pirita como uno de los ms importantes sulfuros que
encapsulan en su matriz elementos valiosos como oro, sea en la forma de pequeas inclusiones
(Mrquez 1999) o como oro invisible (Mrquez & Gaspar 1996), lo cual hace que la mayora de las
veces la cianuracin de estos minerales requiera largos periodos de exposicin, obtenindose de este
modo un material de mayor costo y una ganancias menores (Suzuki, 2001).
Los cambios fisicoqumicos que tienen lugar sobre la superficie de la pirita y arsenopirita durante los
procesos de biooxidacin son importantes, ya que la formacin de minerales secundarios sobre stos
puede generar la inhibicin de la difusin de oxidantes hacia la superficie y, en consecuencia, reducen
la velocidad de disolucin. Por ejemplo, la formacin de especies intermedias, tales como azufre
elemental y compuestos reducidos de azufre, pueden jugar un papel importante en la cintica de las
reacciones. La segregacin de productos intermedios en la superficie y la cintica de su produccin son
cruciales para entender cmo ellos y las comunidades bacterianas, que con ellos interactan, impactan
o afectan en conjunto la velocidad de disolucin de los sulfuros (Edwards et al., 2000).
La caracterizacin mineralgica ha venido siendo utilizada desde hace varias dcadas como
herramienta para el entendimiento de diversos procesos, tanto naturales como artificiales, donde se dan
cambios de fase (Buckley &Woods 1987; Buckley et al., 1988; Ahonen &Tuovinen 1993; Breed et al.,
1997; Becker et al., 2001; Borda et al., 2003; Abraitis et al., 2004) adems, da a da sta presenta
mayores alcances debido al creciente desarrollo, tanto a nivel de nuevos y mejores equipos, como de
software ms completos y amigables. Las mltiples tcnicas que pueden ser utilizadas brindan gran
cantidad de informacin que, adecuadamente interpretada, convierten la caracterizacin mineralgica
en una herramienta muy eficaz para el entendimiento de los procesos y sus transformaciones, no slo
de minerales, sino de materiales en general.
En el campo de las transformaciones de minerales, que se dan en los procesos que contemplan la accin
de microorganismos, la identificacin de los productos de oxidacin es comnmente complicada,
debido a que las fases formadas normalmente presentan baja cristalinidad, niveles complejos y variados
de solucin slida, adems de partculas muy finas (Murphy & Strongin 2009); sin embargo, existe una
amplia variedad de tcnicas mediante las cuales se hace posible monitorear, desde diversos mbitos y
niveles, los tipos de transformaciones.
2
Para el sector minero es importante, tanto desde el punto de vista econmico como ambiental, el
conocimiento de los mecanismos que gobiernan la biooxidacin de sulfuros y las velocidades de
disolucin de stos, ya que se podra mejorar en gran parte el diseo y operacin de plantas de
biolixiviacin (Rawlings, 2002).
De otro lado, aunque las investigaciones y publicaciones a nivel internacional en el rea de la
biolixiviacin y biooxidacin han venido incrementndose en los ltimos tiempos (una amplia revisin
ha sido realizada por Olson et al., 2003 y Rawlings, 2005), en Colombia desafortunadamente existen
pocos trabajos publicados en esta rea (Prez & Velsquez, 1998; Duque & Noguera, 2001; Muoz,
2002; Ossa, 2004; Ossa et al., 2005; Cardona & Mrquez 2009) y ms an en el rea de caracterizacin
de la mineraloga de procesos que contribuyan a un entendimiento de los mecanismos de biooxidacin
(Zapata et al., 2005; Mrquez et al., 2006; Cardona & Mrquez, 2009), lo que ha contribuido a que en
nuestro pas la implementacin a escala comercial de stos procesos presente dificultades concernientes
al entendimiento de nuestros propios recursos minerales y de nuestra microbiota, generando un
impedimento adicional al investigador para proponer nuevos esquemas de trabajo.
As, esta tesis pretende continuar profundizando en la lnea de investigacin en mineraloga de
procesos y bio-mineraloga, especialmente relacionada con biooxidacin de pirita y arsenopirita. Por
medio de la caracterizacin de los productos que resultan del proceso de biooxidacin se espera generar
informacin que de luces sobre el mecanismo de oxidacin de pirita y arsenopirita en diferentes etapas,
as como identificar los parmetros que controlan la precipitacin de nuevas fases y cmo afectan el
proceso de disolucin.
3
2. HIPTESIS Y OBJETIVOS
HIPTESIS
Mediante la utilizacin, combinada, de tcnicas analticas tales como microscopa ptica de luz plana
polarizada, modo luz reflejada (MOLPP/LR), difraccin de rayos-X (DRX), microscopa electrnica de
barrido con analizador de estado slido tipo EDX (SEM/EDX), espectroscopa Mssbauer,
espectroscopa de infrarrojo con trasformada de Fourier (FTIR) y microscopa de barrido por sonda
(SPM) en su modo de fuerza atmica (AFM) y su interpretacin a la luz de la mineraloga, se puede
definir los mecanismos globales de biooxidacin, en el tiempo, de la pirita y la arsenopirita, sulfuros
asociados a la minera del oro en Colombia, con el fin de dar soporte para el entendimiento de la
transformacin de stos en procesos naturales o industriales, con impactos importantes en el mbito
ambiental y econmico a nivel local y mundial.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL.
OBJETIVOS ESPECFICOS.
Identificar las transformaciones morfolgicas que, a nivel micro y nanomtrico, se dan en la pirita
(FeS2) y la arsenopirita (FeAsS), debido a la accin de los microorganismos.
Identificar las transformaciones de fase, producto del proceso de biooxidacin de la pirita (FeS2) y la
arsenopirita (FeAsS).
4
3. REVISIN BIBLIOGRFICA
3.1.Arsenopirita (FeAsS)
La arsenopirita es la fuente mineral de arsnico ms comn en la superficie terrestre. Se puede
encontrar en una variedad de sistemas tales como depsitos magmaticos, hidrotermales y prfidos,
entre otros. Es por esto que la arsenopirita es comnmente asociada a la aparicin de oro, generando su
amplia explotacin y posterior descarga como desechos slidos en los procesos mineros (Corkhill &
Vaughan, 2009).
Es un mineral estable bajo condiciones reductoras, pero es oxidado durante condiciones de
intemperismo, liberando durante este proceso H2SO4, H3AsO3 y H3AsO4 (Nesbitt et al., 1995).
Las figuras 1 y 2 son diagramas de Pourbaix donde se muestran los campos de estabilidad de los
sistemas Fe-As-S-O, Fe-S-H2O y Fe-As-S-H2O.
Es por esto que el estudio y comprensin de la salida de arsnico, debido a la oxidacin de la
arsenopirita, es de gran importancia para entender los impactos generados por la explotacin minera a
la salud humana y al medio amiente (Craw et al., 2003; Yunmei et al., 2004; Walker et al., 2006;
Ehrlich & Newman, 2009).
Figura 1. Diagramas de Pourbaix, 25C, 1 atm, para el sistema Fe-As-S-O, para dos concentraciones diferentes, donde se muestra los
campos de estabilidad de la arsenopirita. El rea encerrada por el rectngulo punteado indica condiciones tpicas cercanas a la superficie
del mineral (Modificado de Craw et al., 2003).
5
Figura 2. Diagramas de Pourbaix, 25C, 1 atm, para los sistemas Fe-S-H2O y Fe-As-S-H2O (Modificado de Marsden & House, 1992).
6
Los ajustes espectrales empleando la teora de estados superficiales mltiples es una de las formas
comnmente empleadas para interpretar los datos de Fe2p(3/2) provenientes de la oxidacin de sulfuros
metlicos y, en comparacin con otros mtodos, proporciona ms detalles sobre los estados
superficiales del Fe(II) y Fe(III) (Costa et al., 2002; Mikhlin et al., 2006). Es por esto que el uso de
diferentes mtodos en la interpretacin espectral de los estados de oxidacin de los diferentes
componentes durante la oxidacin de la arsenopirita, ha resultado en discrepancias sobre los
mecanismos de oxidacin del mineral.
El primer y ms elaborado estudio sobre la oxidacin superficial de la arsenopirita fue desarrollado por
Nesbitt et al., (1995). Para ello se empleo una superficie del mineral completamente libre de oxidacin,
producida por clivaje bajo condiciones controladas de presin. In situ, el clivaje de la arsenopirita y
posterior anlisis espectral mediante XPS revelaron una superficie no afectada por el O2, con seales
provenientes del Fe, As y S, figura 3.
Figura 3. Espectros de XPS para la regin Fe2p(3/2) en la arsenopirita: (A) clivada a 10-9 torr (modificado de Nesbitt et al.,1995); (B)
clivada a 10-8 Pa (espectro a) y clivada en aire (espectro b) (modificado de Mikhlin et al., 2006); (C) luego de una exposicin durante 25
horas en aire (modificado de Nesbitt et al., 1995); y (D) luego de expuesta por cuatro semanas en medios de cultivo bacterial, a pH 2 y en
ausencia de microorganismos (modificado de Corkhill et al., 2008).
Los resultados sugieren la presencia de Fe(II)(AsS) que comprende el 74% atmico de Fe sobre la
superficie del mineral y la presencia de Fe(III)(AsS), para un aporte de Fe(III) a la superficie del
mineral de 16% atmico. Los anlisis para la regin espectral S2p sugieren la presencia del ion di-
sulfuro (S22-) en 78% atmico, monosulfuro (S2-) en 15% atmico y polisulfuros (Sn2-) en 7% atmico,
mientras que para la regin espectral As3d los resultados sugieren la presencia de As(I) en 85%
atmico y As(0) en 15% atmico.
Corkhill et al., (2008), es sus estudios sobre la oxidacin de arsenopirita con Leptospirillum
ferrooxidans compara una superficie clivada en una atmsfera rica en N2 con una superficie oxidada
con bacterias. Ellos encontraron que sus espectros se ajustaban con las mismas especies qumicas que
encontr Nesbitt et al., (1995) y, adems, encontraron tiosulfato (SO3)-2 y especies de arsnico As(I) y
As(III).
Schaufuss et al. (2000), utilizando radiacin sincrotrn pudo describir los resultados de la oxidacin de
la arsenopirita discriminando los datos como superficiales o volumtricos. Encontraron que la seal
volumtrica proveniente de la regin espectral S2p haca referencia a la densidad electrnica del
compuesto AsS2, desplazada hacia el tomo de azufre y que el enlace existente entre el arsnico y el
7
azufre, en la arsenopirita, es polar. sta misma regin espectral les presento una dificultad en su
interpretacin debi, probablemente, a la presencia de dos diferentes sitios superficiales del azufre, uno
causado por la ruptura del enlace FeS y otro debido a la ruptura del enlace AsS. Ellos postularon que
el azufre es ms electronegativo que el hierro y que el arsnico, lo que conlleva a que cuando hay
rompimiento de enlaces entre FeA y AsS ste es asimtrico, as cuando se rompen enlaces FeS los
tomos de azufre se coordinan con dos tomos de hierro y un tomo de arsnico, y cuando el
rompimiento es de los enlaces AsS los tomos de azufre son coordinados por tres tomos de hierro.
Hacquard et al., (1999) y Mikhlin et al., (2006) empleando un procedimiento simplificado para ajustar
la regin espectral Fe2p(3/2) describieron la superficie de una arsenopirita, sin alteracin superficial y
una oxidada en celda electroqumica. Hacquard et al., (1999) despus de bombardear la superficie del
mineral, con iones Ar+, obtuvo una superficie limpia constituida, principalmente, por Fe(II) y Fe(III),
algunas especies de arsnico que no definieron y especies del tipo S22-. En el trabajo de Mikhlin et al.,
(2006) se encontr la presencia de xidos de Fe(II) y Fe(III), algunos especies de arsnico tales como
As(0), As(I), As(III) y As(V), tambin algunas especies de arsnico no identificadas a 41.5 eV y
compuestos de azufre incluyendo AsS2-.
El primer trabajo sobre la oxidacin de la arsenopirita empleando XANES (X-ray absorption near-edge
structure spectroscopy) y EXAFS (Extended X-ray absorption fine structure) fue desarrollado por
Mosselmans et al., (1995). Los anlisis espectrales se enfocaron en el FeK, SK, FeL y AsL, y
establecieron para la relacin Fe L3/L2, Fe(II) de alto spin. Resultados que coinciden con lo reportado
con Mikhlin & Tomashevich (2005) quienes empleando XANES estudiaron la estructura electrnica de
la arsenopirita por comparacin de espectros de alta resolucin de los niveles SL y FeL.
Los productos de ste proceso de oxidacin incluyen: As(I), As(II) y As(III) enlazados al oxigeno,
Fe(II) en solucin slida con sulfoarseniuros, Fe(III) enlazados con oxgenos y disulfuros. En ste
trabajo no se observo la presencia de productos de la oxidacin del compuesto SO.
Richardson & Vaughan (1989) sugirieron que la oxidacin de la arsenopirita, expuesta en aire, a
150C, produce las siguientes especies qumicas: As(III), S, Fe(III) y Fe(II). Ellos sugirieron, debido a
las altas concentraciones de Fe(II) en comparacin con Fe(III), la presencia de wustita (Fe 1-xO) y
magnetita (Fe2O3).
Nesbitt et al., (1995) caracterizaron la superficie de una arsenopirita luego de oxidada durante 25 horas
en aire. Las especies qumicas observadas incluyen la presencia de O2, grupos hidroxilos y agua
superficial. Se identificaron oxihidrxidos de hierro con energas similares a las de la goetita (FeOOH),
tambin especies qumicas como As(I), As(III) y As(V).
Schaufuss et al. (2000), identificaron principalmente Fe(II) y pequeas cantidades de Fe(III), en las
muestras de arsenopirita oxidada en presencia de O2 bajo condiciones controladas de presin, en forma
de oxihidrxidos de hierro y algunos compuestos qumicos como FeAs.
8
medidas, en estado estacionario, de la salida de As, S y Fe. Ellos encontraron que a altas
concentraciones de oxigeno disuelto la concentracin en solucin de As(V) se incrementaba.
Sorprendentemente, los autores sugieren que la oxidacin de la arsenopirita no depende de la
concentracin de oxigeno disuelto. Ellos explican sto en trminos de un modelo de oxidacin en tres
pasos consecutivos (Williamson & Rimstidt, 1994; Rimstidt & Vaughan, 2003) y de los cuales
cualquiera podra ser el paso limitante. El primero paso es la donacin de electrones desde el sitio
catdico hacia el agente oxidante. Luego de sto se da la transferencia electrnica desde el sitio
andico. Esto es controlado por la resistividad del mineral. Luego la adhesin del oxigeno disuelto,
proveniente del agua, a las especies de arsnico y hierro.
De stos pasos Walker et al., (2006) sugiere que el primer paso no es probable ya que la oxidacin es
independiente de la concentracin del oxigeno disuelto, el segundo es poco probable ya que la
resistividad de la arsenopirita es similar a la de la pirita y ste paso no es el limitante para ese mineral.
Por lo tanto es el tercer paso el determinante en el proceso de oxidacin de la arsenopirita. Los autores
tambin proponen una serie de reacciones para la oxidacin de la arsenopirita a pH cercano a 7.
A travs de sta serie de reacciones, Walker et al., (2006) sugieren que la oxidacin del hierro y del
arsnico no es completa y da una velocidad constante de 10-10 (mol)(m-2)(s-1) en un intervalo de pH de
6,36,7. Esto es significativamente ms lento que lo propuesto por McKibben et al., (2008) quienes en
su estudio sobre el efecto del oxigeno disuelto sobre la velocidad de disolucin de la arsenopirita
obtienen una velocidad de 10-6 (mol)(m-2)(s-1) en un intervalo de pH de 24,5.
Yunmei et al., (2007) investig el mecanismo y la velocidad de disolucin de la arsenopirita por el
oxigeno disuelto en un amplio rango de pH, temperatura y oxigeno disuelto. La velocidad de oxidacin
fue medida usando la velocidad de conversin de As(III) a As(V). La velocidad de salida de arsnico se
incremento con el incremento de la concentracin de oxigeno disuelto y la temperatura y fue similar a
pH inferiores a 7 y superiores a 10. Tambin observaron que la velocidad de oxidacin pasa por un
mnimo en valores de pH cercanos a 7,5. Esto se puede explicar como un cambio en la concentracin
de las principales especies oxidantes.
9
al arsnico, tambin encontraron tiosulfatos y sulfatos, en 68,6% atmico, para una arsenopirita que se
oxido en H2SO4. Igual resultado arrojo la oxidacin del mineral en agua (Nesbitt & Muir 1998) lo que
est en desacuerdo con varios autores (Buckley & Walker, 1988; Costa et al., 2002; Mikhlin et al.,
2006). Corkhill et al. (2008) sugiri que el arsnico es un elemento que oxida rpidamente bajo
condiciones cidas y que el hierro y el azufre oxidan a la misma velocidad. Los resultados de ste
estudio mostraron que luego de 32 das de reaccin bajo condiciones cidas se liberaron al medio 1340
ppm de hierro y 886 ppm de arsnico.
Mikhlin & Tomashevich (2005) confirmaron la presencia de pelculas delgadas ricas en arsnico,
azufre y hierro crecidas sobre la superficie de la arsenopirita. Ellos encontraron que el hierro
conservaba en gran medida una configuracin de bajo spin (t2g)6 y el contenido de Fe2+ de alto spin se
incrementaba. El alto spin del Fe2+ se atribuyo a la formacin, aumento en el grosor de la pelcula, de
las capas de arsenito y arsenato frrico.
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solubilizar metales de inters, sulfuros metlicos tales como calcopirita (CuFeS2), calcocita (Cu2S),
covelita (CuS), bornita (Cu5FeS4) y algunos otros minerales (Rossi, 1990). Bryner et al., (1954) y
Bryner & Anderson (1957), en trabajos pioneros sobre la biolixiviacin de sulfuros metlicos,
marcaron el inicio de una intensa actividad investigativa en el tema, para finalmente producir en 1961
una lista con 19 sulfuros metlicos, para la que investigadores de diferentes partes del mundo
aseguraban que sus velocidades de oxidacin se vean aceleradas ante la presencia de Acidithiobacillus
ferrooxidans (Bryner et al., 1954; Bryner & Anderson, 1957; Silverman et al., 1961).
Jones et al., (2003) investig los cambios fsicos y qumicos en la superficie de la arsenopirita ante la
presencia de Thiobacillus ferrooxidans microorganismos comnmente encontrados en drenajes cidos
de minera. Los perfiles composicionales tomados mediante XPS a los controles abiticos, revelaron
una superficie altamente enriquecida en azufre y empobrecida en arsnico y hierro. Por debajo de sta
capa superficial, aproximadamente 1,3 a 1,7 nm, la estequiometria coincide con la arsenopirita. Para las
muestras que se oxidaron ante la presencia de bacterias, el deterioro superficial se extenda 2 o 3
rdenes de magnitud en relacin a los controles abiticos.
Corkhill et al., (2008) investig el proceso de disolucin oxidativa de la arsenopirita ante la presencia
de Leptospirillum ferrooxidans. Sus resultados mostraron que luego de cuatro semanas de oxidacin la
superficie del mineral mostr una completa disolucin con 89% atmico de especies SO, 95%
atmico de especies AsO, 64% atmico de especies FeO y adicionalmente se observ 14% atmico
de especies Fe(III)SO42-. Estos resultados confirman que la arsenopirita oxida ms rpidamente y a
una mayor profundidad en la presencia de bacterias.
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Figura 4. Diagramas esquemticos para las pelculas formadas durante la oxidacin de la arsenopirita. De izquierda a derecha: izquierda,
oxidacin por O2 (Modificado de Schaufuss et al., 2000). Centro, oxidacin en aire (modificado de Schaufuss et al., 2000) y derecha,
oxidacin por exposicin en aire durante 25 das, medidas hechas perfiles AES (modificado de Nesbitt et al., 1995).
Las diferencias en las velocidades de oxidacin observadas se han atribuido a los elementos en
solucin slida del mineral y a la formacin de pelculas que recubren el mineral y disminuyen los
procesos de transferencia de masa. Nesbitt et al., (1995) fue el primero en identificar, qumicamente,
una pelcula desarrollada sobre la superficie del mineral empleando AES (Auger electron spectroscopy)
y XPS. La composicin de la capa coincide con la de un oxido de hierro rico en arsnico, figura 4.
Nesbitt & Muir (1998) sugirieron que la pelcula estaba compuesta por un sulfato de hierro frrico, un
arsenato de hierro frrico y una goetita. Al medir sta pelcula, los resultados arrojaron un grosor
inferior a los 90. Schaufuss et al. (2000), tambin observaron la presencia de una pelcula compuesta
por FexAsyO cuando trabajaron bajo atmosfera ricas en O2, bajo atmosferas ricas en aire se presentaba
la misma composicin pero apareca una pelcula, encima de la anterior, de FeOOH. El modelo
propuesto se presenta en la figura 4. Empleando un argumento similar al de Nesbitt et al., (1995),
Schaufuss et al. (2000) propuso un mecanismo para la formacin de la pelcula en la cual los procesos
difusivos de arsnico y hierro continan, a pesar de la formacin de la capa, debido a un gradiente de
concentracin. Buckley & Walker (1988) reportan que la velocidad de oxidacin del mineral disminuye
luego de la formacin de stas pelculas.
Figura 5. Diagrama para la formacin de pelculas de azufre elemental durante el proceso de oxidacin de la arsenopirita (modificado de
Fernndez et al., (1996a,b)).
Aunque sta capa de azufre elemental es sugerida por los autores, en el trabajo no hubo evidencia
experimental directa para su presencia. Costa et al., (2002) confirm la presencia de azufre elemental
empleando espectroscopa RAMAN sobre la superficie de una arsenopirita oxidada en ambientes
cidos, con HCl y NaCl, durante una hora a 800 mV. La superficie del mineral fue totalmente
transformada a azufre elemental. Cruz et al., (1997) sugiri que la pelcula pasivante de azufre
elemental formada durante su experimento, en medio cido, es formada de acuerdo con la siguiente
expresin:
Los resultados de ste estudio implican que la formacin de pelculas de azufre elemental inhiben la
oxidacin del mineral, y para que el proceso de oxidacin contine sta pelcula debe ser disuelta.
Fernndez et al., (1996a) tambin sugiere que la oxidacin solo puede ocurrir cuando los iones logran
difundir a travs de la capa. Mikhlin et al., (2006) observ que sta capa se disuelve bajo la aplicacin
de altos potenciales que corresponden a una oxidacin acelerada del mineral.
Algunos autores han observado la presencia de precipitados de arsnico y hierro sobre la superficie de
la arsenopirita en los procesos de oxidacin electro-qumica. Cruz et al., (1997) empleando FTIR
identific arsenatos frricos hidratados sobre la superficie del mineral. Mientras que Fernndez et al.,
(1996b) observaron la formacin de Fe(II), As(III) y As(V) y Almeida & Giannetti (2003) reportaron la
formacin especies de arsenatos a altos potenciales. Costa et al., (2002) observ la presencia de xidos
de hierro y arsnico y sugiri que la oxidacin electro-qumica de la superficie de la arsenopirita
produce una rpida transformacin en profundidad. Ellos observaron que la oxidacin del hierro,
arsnico y el azufre no ocurre a la misma velocidad lo que est de acuerdo con los estudios de Nesbitt
et al., (1995); Nesbitt & Muir (1998); Schaufuss et al., (2000) y Corkhill et al., (2008).
Cruz et al., (1997) propuso que la oxidacin electro-qumica de la arsenopirita ocurre va dos
mecanismos, el primero en el que la arsenopirita es rpidamente oxidada a rejalgar (As2S2) y Fe(II) en
medio cido y el Fe(II) es oxidado a Fe(III), segn las siguientes ecuaciones:
Almeida & Giannetti (2003) propusieron una secuencia de reacciones para la disolucin de la
arsenopirita. Los autores propusieron que los grupos OH- eran formados a travs de la interaccin de
las molculas de agua con los orbitales 3d del hierro. Y son stos grupos hidroxilos los que generan la
hidrolizacin y subsecuente oxidacin de las especies AsS y la salida de Fe(II) a la solucin. Sin
13
embargo, Fernndez et al., (1996a) dijo que la hidrolizacin del hierro solo es posible si el seno de la
solucin es lo suficientemente cido y ms cido que la superficie del mineral.
La velocidad de oxidacin electro-qumica de la arsenopirita vara con los diferentes electrolitos.
Cuando la inmersin se hace en soluciones ricas en Fe2(SO4)3, FeCl3 y Fe(NO3)3, Mikhlin et al., (2006)
concluyo que las velocidades de oxidacin incrementaban como Fe(NO3)3 > FeCl3 > Fe2(SO4)3
mientras que para la formacin de productos superficiales la relacin es FeCl3 < Fe2(SO4)3 < Fe(NO3)3.
Estas diferencias son influenciadas por la presencia de diferentes aniones sobre las velocidades de
salida del hierro y del arsnico.
Beattie & Poling (1987) estudio la oxidacin electro-qumica de la arsenopirita en soluciones alcalinas
incrementando el pH. Observaron que a pH de 7 se formaba una pelcula de hidrxido frrico sobre la
superficie del mineral y sta se ve favorecida con el incremento de la temperatura. Esta capa de
hidrxido frrico tambin fue observada por Wang et al., (1992) y por Chang et al., (1994).
Nicol & Guresin (2003) describieron la formacin de sta capa y la formacin de especies como
As(III), Fe(III) y SO42-. Ellos observaron que las capa de Fe(OH)3 se formaban por la oxidacin
andica del mineral y sugirieron que en soluciones alcalinas la oxidacin de la arsenopirita es un
proceso que involucra la transferencia de 14e-. Wang et al., (1992) tambin sugiere que el arsenato
producido durante el proceso se adsorbe entre las capas de Fe(OH)3 y pasiva la oxidacin del mineral.
14
Las velocidades de disolucin oxidativa de algunos sulfuros metlicos como la arsenopirita se ven
incrementadas por la actividad metablica de microorganismos acidfilos generando durante el proceso
grandes cantidades de cido y la salida de arsnico al medioambiente.
stos microorganismos no solo promueven la generacin de drenajes cidos de minera, sino que
tambin son usados comercialmente para mejorar la recuperacin de oro de minerales refractarios
como la arsenopirita (Rawlings & Johnson, 2007).
Acidithiobacillus ferrooxidans son los microorganismos acidfilos ms estudiados. Ehrlich (1964)
investigo la oxidacin bacteriana de la arsenopirita a un pH de 3,5. Encontr que en la presencia de
bacterias al seno de la solucin ingresaba el doble de arsnico y el pH permaneca constante alrededor
de 2,5.
Acidithiobacillus ferrooxidans fue considerado ser los ms prevalecientes microorganismos en los
ambientes de drenajes cidos de minera, pero luego se demostr que leptospirrillum ferrooxidans es el
ms prevaleciente (Schrenk et al., 1998; Rawlings et al., 1999; Druschel et al., 2004; Harneit et al.,
2005; Corkhill et al., 2008).
Otros microorganismos como Pseudomonas arsenitooxidans ha mostrado la habilidad para oxidar
arsenopiritas (Ilyaletdinov & Abdrashitova, 1981) y Sulfolobus sp. (Ngubane & Baecker, 1990).
Consorcios de microorganismos han sido empleados para investigar la oxidacin de la arsenopirita y
han mostrado ser ms eficientes comparados con cepas solas (Tuovinen et al., 1994; Clark & Norris,
1996; McGuire et al., 2001b).
Las principales reacciones de disolucin de la arsenopirita debido a la catlisis oxidativa de
microorganismos acidfilos se discuti en los trabajos de Collinet & Morin (1990) cuyo principal
resultado es la produccin de H3AsO3 y H3AsO4 son:
Mandl et al., (1992) discuti la migracin del arsnico durante la oxidacin bacteriana de la
arsenopirita y propuso el siguiente esquema de reaccin:
Donde (a) hace referencia a la lixiviacin bacteriana, (b) hace referencia a la oxidacin del arsnico por
el Fe(III) en la presencia de bacterias, (c) hace referencia a la formacin de precipitados de hierro y (d)
hace referencia a la produccin de arsenatos frricos.
Como uno de los desarrollos ms notables en el estudio de los procesos de disolucin de minerales,
durante los ltimos aos, se encuentra los fundamentos bioqumicos de las reacciones de lixiviacin,
que en este contexto explican los mecanismos qumicos detrs del comportamiento del azufre en estos
procesos (Schippers & Sand 1999; Schippers et al., 1996 y 1999).
15
Hoy por hoy, la comunidad cientfica internacional, en general, tienen consenso sobre que
microorganismos como Acidithiobacillus ferrooxidans no son capaces de oxidar directamente un
mineral a travs de la adherencia a la superficie de ste (Sand et al., 1995; Jonson et al., 2007), pero el
acuerdo tambin es general referente a que stos microorganismos son capaces de transformar los iones
Fe(II) a Fe(III) y el rol de las bacterias es regenerar el ion Fe(III), nombrando esta ruta del proceso
como mecanismo indirecto de oxidacin y discriminndolo en dos submecanismos: de contacto
indirecto y de no contacto, como se muestra en la figura 7 (Rawlings 2001; Sand et al., 2001; Rawlings
2002; Foucher et al., 2003; Vardanyan & Akopyan, 2003; Mignone & Donati, 2004; Rawlings, 2005).
Figura 7. Mecanismos de oxidacin bacteriana propuestos por Silverman (1967). a) Mecanismo indirecto. b) Mecanismo de contacto
indirecto. c) Mecanismo de contacto directo (modificado de Crundwell (2003)).
16
y loellingitas. Encontraron que la adherencia de las clulas se deba, probablemente, a una unin
proteica. Fernndez et al., (1995) sugiri un mecanismo de tres pasos para la biooxidacin de la
arsenopirita por A. ferrooxidans. Ellos propusieron que el mecanismo de oxidacin es iniciado por el
crecimiento de las bacterias sobre la superficie del mineral, lo que genera pits de corrosin y disolucin
preferencial de Fe(II), As(III), S(IV) y S(0), segn las siguientes ecuaciones:
17
clula y una bomba especfica de salida de arsnico (arsB) saca ste ion, fuera de la clula, a travs de
la membrana citoplasmtica. Un mecanismo similar fue identificado para A. ferrooxidans (Butcher et
al., 2000), para L. ferriphilum (Tuffin et al., 2006) y para L. ferrooxidans (Corkhill et al., 2008)
quienes observaron, tambin, que L. ferrooxidans es capaz de soportar una concentracin mucho mayor
de arsnico en comparacin con los dems microorganismos.
18
superficie del mineral. En la naturaleza hay varios agentes oxidantes capaces de aceptar electrones
provenientes del ion ferroso, dentro de los cuales estn NO3-, Cl2, y H2O2, pero los iones ms
importantes por su cintica de transformacin y su potencial redox son el Fe3+ y O2 (Schring et al.,
1999). El mecanismo de reaccin es el siguiente:
Este conjunto de ecuaciones muestran que el proceso de oxidacin no tiene como objetivo oxidar el
hierro, ya que el hierro dentro del mineral es Fe(II) y continua as cuando sale a la solucin, sino ms
bien oxidar el azufre. Brown & Jurinak (1989) propusieron que durante el mecanismo de oxidacin de
sulfuros metlicos el paso limitante era la reaccin catdica, debido a la produccin de sulfatos como
producto final. Williamson & Rimstidt (1994) observaron que la velocidad de oxidacin de la pirita
depende de la concentracin de Fe(III) y O2.
Estudios realizados por Rimstidt et al., (1994) sobre la oxidacin de galena, esfalerita, calcopirita y
arsenopirita muestran que tambin en su proceso de oxidacin la reaccin catdica es el proceso
determinante. Aun no hay reportes sobre la naturaleza exacta del sitio catdico y la estructura del
complejo activado, pero hay evidencia de que los electrones son transferidos hasta el agente oxidante
va sitios metlicos sobre la superficie del mineral y no desde los sitios del azufre (Williamson &
Rimstidt, 1994; Rimstidt et al., 1994; Schring et al., 1999).
Rosso et al., (1995) estudiaron la interaccin de la superficie de la pirita con O2 y H2O, en condiciones
de alto vacio. Ellos observaron que cuando la superficie era expuesta al O2 y H2O, al mismo tiempo, la
superficie era ms agresivamente oxidada que solo con O2, tambin observaron algunos puntos
discretos de oxidacin donde reaccionaban los sitios del hierro superficial. De esta manera, para la
pirita, el complejo activado podra involucrar la transferencia de un electrn hacia los Fe(III)
absorbidos, en forma de hidratos, a partir de los Fe(II) en la solucin. ste Fe(II) es de nuevo lanzado a
la solucin y un electrn es transportado desde el sitio andico. Asimismo, Lowson (1982) propuso un
mecanismo para la reduccin del oxigeno en la superficie de la pirita. Primero el O2 se absorbe en los
sitios del Fe(II) y luego se da la transferencia de un electrn desde el sitio del hierro hasta el O 2. Luego,
el hidrogeno reacciona con el oxigeno para producir HO2 para luego transportar un electrn desde el
sitio andico y reducir el Fe(III) hasta Fe(II). Los dems hidrgenos reaccionan con el grupo HO 2 y de
nuevo se da la reduccin del ion Fe(III). La transferencia de este tercer electrn desde el Fe(II) hacia el
perxido transforma uno de los oxgenos a hidrxido liberndolo a la solucin, el otro es transformado
hasta OH.
El Fe(III) es reciclado hasta Fe(II) por la transferencia de un electrn ms desde el sitio andico y
transportado hasta el radical OH y transformado hasta OH- y liberado a la solucin. Por ltimo, un
electrn se transporta desde el sitio andico hasta la reduccin del Fe(III) dejando el sitio andico de la
misma forma que al inicio del proceso, despus de transferir 5 electrones a travs de l, segn las
siguientes expresiones:
Es evidente que el transporte de electrones a travs de la pirita, desde el sitio andico hasta el sitio
catdico, es un proceso muy importante para el mecanismo de disolucin del mineral. La pirita, como
19
los dems sulfuros metlicos, es un material semi-conductor. La conductividad de ste material puede
variar ampliamente entre 0,02 y 562 (cm)-1 con un valor promedio de 48 (cm)-1 (Pridmore & Shvey,
1976; Doyle & Mirza, 1996).
Abraitis et al., (2004) revis los tipos y concentraciones de impurezas presentes en piritas naturales.
Ellos observaron que la pirita poda contener trazas de Ag, Au, Bi, Cd, Mo, Ni, Pd, Pb, Ru, Sb, Se, Te y
Zn. Algunos elementos pueden estar en porcentajes aun mayores como As, Co y Cu. Dependiendo del
tipo de impureza las piritas se comportaban como semiconductores tipo-n o tipo-p. Las piritas
semiconductoras tipo-p, por lo general, presenta en su estructura cantidades significativas de arsnico
mientras que las piritas tipo-n, por lo general, presenta una deficiencia en el sitio del azufre y son
relativamente ricas en cobalto y nquel (Abraitis et al., 2004).
La conductividad de una pirita tipo-p es mucho menor que una tipo-n, el promedio vara entre 0,5 y 56
(cm)-1 respectivamente (Abraitis et al., 2004). Es comn que las piritas exhiban ambos
comportamientos, semi-conduccin tipo-p y tipo-n, incluso dentro de un mismo ejemplar se puede
presenta ambas conductas (Abraitis et al., 2004).
La oxidacin de sulfuros metlicos transfiere, al menos, siete electrones desde el ion S22- hasta el S0
y, al menos, ocho electrones hasta el SO42-. Esto quiere decir que los tomos de azufre deben pasar a
travs de varias etapas de oxidacin y que diferentes compuestos de azufre estn involucrados en el
proceso, algunos de ellos han sido identificados en el laboratorio (Moses et al., 1987).
Hay evidencia que sugiere que son los iones de SO42- los predominantes en los drenajes cidos de
minera, donde el Fe(III) es el agente oxidante ms importante y el pH es bajo, y no otros tipos de
compuestos de azufre o que sus concentraciones son muy pequeas (Rimstidt & Vaughan 2003;
Abraitis et al., 2004), por lo que los autores concluyen que es el ion SO42- el producto de oxidacin
predominante; aunque no el nico posible. Algunos estudios han encontrado la presencia de tiosulfatos
en sus experimentos (Goldhaber 1983; Moses et al., 1987). Williamson & Rimstidt (1993) observaron
que las formas de tiosulfato colorean, rpidamente, hasta purpura en la presencia de Fe(III), y que ste
complejo descompone hasta tetrationato y luego Fe(II). Los autores tambin sugieren que en soluciones
cidas, en ausencia de Fe(III), el tiosulfato reacciona hasta transformarse en sulfito y luego hasta
politionato, lo que gener en sus precipitados una solucin coloidal de color amarilloso. Estos
politionatos eventualmente se transformaron a azufre elemental. Ninguno de stos compuestos se
encontr en cantidades significativas asociados a la oxidacin de la pirita, sugiriendo que estas especies
de azufre no juegan un papel importante en la generacin de drenajes cidos, pero si encontraron
cantidades significativas a valores de pH relativamente elevados.
Debido a que son varios electrones los que se deben remover desde cada tomo de azufre hasta
transformarse a sulfato, el proceso de oxidacin de los sulfuros metlicos es por lejos uno de los ms
complejos y difciles de entender.
Debido a que es poco probable a que ms de un electrn sea removido, al mismo tiempo, desde el
azufre (Basolo & Pearson 1967) debe haber varias etapas en este proceso.
Williamson & Rimstidt (1992) investigaron la estabilidad termodinmica de las especies qumicas en
solucin que podran ser intermediarias durante el proceso de oxidacin y observaron que para que la
reaccin ocurra, va stos intermediarios, el sistema no procede paso a paso. ste es un argumento en
favor de la idea que todos los compuestos de azufre permanecen sobre la superficie del mineral durante
el proceso de oxidacin. Buckley & Woods (1987) proporcionaron evidencia, para varios sulfuros
metlicos, que durante su proceso de disolucin el primer paso produce una pelcula de azufre
elemental sobre la superficie del mineral. Sin embargo, esto es difcil de probar experimentalmente ya
que el azufre es una especie voltil, es fcil de perder antes de un anlisis, particularmente cuando se
emplea equipos de alto vacio (Rimstidt & Vaughan 2003).
La disolucin oxidativa de la pirita produce una disminucin en el sitio del catin y un enriquecimiento
en el sitio del anin. sta disminucin ocurre debido, posiblemente, a la movilidad que pueda tener el
20
catin en el mineral, ste fenmeno se ha observado en el caso de la pirrotita y los sulfuros de cobre
(Buckley & Woods 1987), pero las velocidades de difusin catinica, a travs de la superficie, de los
sulfuros metlicos es limitada, donde se producen los grupos Sn2- (Buckley & Riley 1991).
Rimstidt & Vaughan (2003) propusieron un esquema de reaccin unificada basados en una extensiva
investigacin sobre la oxidacin de la pirita. Ellos concluyeron que la oxidacin del mineral debera ser
descrita por un modelo electroqumico donde, los electrones son conducidos entre los sitios andicos y
los sitios catdicos a travs de un material semiconductor. Las molculas de agua reaccionan con los
sitios de azufre deficientes en electrones hasta formar oxianiones de azufre y el oxigeno es reducido en
el sitio catdico como etapa limitante del proceso. El proceso de oxidacin del azufre hasta tiosulfato
es similar a lo propuesto por Kelsall et al., (1999).
Becker et al., (2001) mediante ensayos terico/experimentales introdujo la nocin de un efecto de
proximidad en semiconductores donde, por ejemplo, la oxidacin de un sitio especifico hace ms
factible el ataque oxidativo a sus vecinos.
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Kelsall et al., (1999) evalu la alteracin superficial de la pirita debida a la oxidacin con HCl 1N. Los
datos electroqumicos recogidos, evaluados en un rango de 0,4 0,6 V vs. SCE, sugieren pequeos
cambios superficiales. Los autores atribuyeron esto a la adsorcindesorcin reversible de agua y
protones sobre la superficie. Guevremont et al., (1998) investig la interaccin del H2S con una
superficie de pirita. La mayora de las molculas adsorbidas de H2S desorbieron a 300K. Stirlin et al.,
(2003) demostr la no favorable adsorcin de H2S sobre la superficie de piritas. A diferencia de la
adsorcin de agua, los enlaces de hidrogeno no contribuyeron a la adsorcin de las molculas de H2S.
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sobre la superficie del mineral era proporcional a la cantidad de Fe(III) superficial. La concentracin de
Fe(III), en el trabajo experimental, fue controlada mediante la exposicin de la superficie del mineral a
iones de baja energa de He+. La muestra de pirita fue expuesta a una solucin rica en fosfatos y luego a
un ambiente gaseoso oxidante. Los resultados sugieren que la superficie de la pirita, con fosfatos
adsorbidos, presenta una disminucin de la formacin de xidos de hierro y una disminucin de
sulfatos. Los autores sugieren que los iones PO43- se enlazan en las regiones superficiales ricas en
Fe(III) e inhibe la oxidacin del mineral debido al bloqueo que le genera al O2 o alterando la estructura
electrnica de las regiones y limitando la transferencia electrnica desde el Fe(II) al O2. Zhang et al.,
(2003) estudio la adsorcin de una bicapa de lpidos, con iones de fosfato en su estructura, sobre la
superficie de la pirita. Los resultados mostraron inhibicin del sitio activo por el grupo funcional del
fosfato y supresin de la oxidacin del mineral.
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hidrxidos frricos y oxianiones de azufre como SO32-, SO42-, S2O32- y politionatos. Los autores
sugieren que los sitios deficientes en hierro sirven como sitios activos para el proceso catdico de
disolucin.
3.3. Microorganismos
La arsenopirita (FeAsS) es la principal fuente de arsnico. Este mineral bajo condiciones oxidantes,
como las que se presentan en ambientes mineros, inicia su proceso de disolucin liberando arsnico,
24
hierro y azufre al ambiente, generando drenajes cidos con altas concentraciones de arsnico (Corkhill
& Vaughan, 2009). La pirita (FeS2) es el sulfuro de mayor abundancia sobre la superficie terrestre y su
reactividad es de gran importancia para el entendimiento de procesos como drenajes cidos de minera,
desulfurizacin de carbones y recuperacin de oro (Murphy & Strongin, 2009).
Los microorganismos comnmente presentes es ste tipo de ambientes son acidfilos, viven en
ambientes cuya acidez puede bajar hasta pH<1, mesfilos, se presentan en intervalos de temperatura
entre los 20 y 30C y quimiolittrofos, los cuales derivan la energa para llevar a cabo sus procesos
metablicos de la oxidacin de compuestos reducidos del azufre y/o del ion ferroso, como
Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans (Daoud & Karamanev, 2005; Rawling et
al., 1999, Bozdemir et al., 1996).
La exposicin de ste tipo de microorganismos a ambientes ricos en sulfuros metlicos resulta en la
disminucin o inhibicin de la actividad de stos, las razones para esto han sido diversas, reduccin de
la cantidad de oxigeno disuelto, dao a la pared celular como resultado de la friccin entre las
partculas minerales y los microorganismos y al efecto nocivo de los iones metlicos como el As3+,
As5+ y Fe3+, entre otros (Marhual et al., 2008; Akcil et al., 2007; Mousavi et al., 2007; Gmez et al.,
1999). Sin embargo, microorganismos como Acidithiobacillus ferrooxidans pueden ser adaptados para
incrementar su tolerancia a estos ambientes y disminuir los efectos inhibitorios sobre los
microorganismos (Xia et al., 2008; Mason & Rice, 2002).
Uno de los factores principales a tener en cuenta en procesos de biooxidacin son las altas
concentraciones de arsnico provenientes de la disolucin de la arsenopirita y, en menor cantidad, la
pirita, responsables en gran medida de la disminucin de la actividad bacteriana debido a la
interferencia en el proceso de formacin de ATP por la formacin de un complejo ADP-arsnico
inestable, generando la inhibicin en la velocidad de crecimiento (Harvey & Crundwell, 1996).
Tuovinen et al., (1971) encontraron que el arsnico es txico entre 50 y 100 mgL-1 para
Acidithiobacillus ferrooxidans. Braddock et al., (1984) determinaron que el As3+ no puede ser oxidado,
por stas bacterias, hasta As5+ y en etapas sucesivas de crecimiento con concentraciones entre 1,33 y
2,67 mM de As3+ no se observ variaciones en las velocidades de crecimiento. Collinet & Morin
(1990) determinaron que la velocidad de crecimiento de Acidithiobacillus ferrooxidans y
Acidithiobacillus thiooxidans se ve inhibida a concentraciones de 5 gL-1 de As3+ y 40 gL-1 de As5+.
Barret et al., (1993) encontraron que concentraciones de As3+ cercanas a 30 mM limitaba el
crecimiento de microorganismos mesfilos y concentraciones cercanas a 90 mM de As3+ resultaba ser
nocivo.
Attia & Zeky (1989) trabajaron con minerales refractarios, principalmente pirita y arsenopirita, previa
adaptacin de Acidithiobacillus ferrooxidans sobre el mineral. Ellos encontraron que el proceso de
adaptacin, previo al proceso de biooxidacin, aumenta la velocidad de lixiviacin hasta cuatro rdenes
de magnitud con relacin a los microorganismos sin adaptacin en el proceso de disolucin. Shahverdi
et al., (2001) y Xia et al., (2008) tambin reportaron que la eficiencia en el proceso de disolucin de un
concentrado pirtico por Acidithiobacillus ferrooxidans, despus de un proceso de adaptacin, se ve
favorecido. Datos reportados por Shi & Fang (2004) sobre Acidithiobacillus ferrooxidans, previa
adaptacin sobre un concentrado de marmatita, muestran como la velocidad de disolucin del mineral
se ve favorecida compara con los microorganismos sin adaptar.
Das et al., (1998) en un proceso de adaptacin permitieron que Acidithiobacillus ferrooxidans
continuara utilizando energa del ciclo de oxidacin del hierro ferroso a frrico mientras se
incrementaba la concentracin de iones metlicos pesados en solucin. De esta manera, durante la fase
lag encontrada en sus experimentos, los microorganismos se adaptaban a este ambiente.
La metodologa comnmente empleada en los procesos de adaptacin, a la presencia de iones metlicos
pesados, de Acidithiobacillus ferrooxidans y Acidithiobacillus thiooxidans consiste en una serie de
cultivos sucesivos en los cuales los microorganismos son crecidos progresivamente, incrementndose
25
la concentracin de iones metlicos pesados en el medio. El principal inconveniente de esta
metodologa es que no se sigue un protocolo determinado, siendo necesario periodos de adaptacin de
hasta aos en algunos casos (Das et al., 1997; Natarajan et al., 1994; Brahmaprakash et al., 1988).Las
densidades de pulpa, tambin juegan un papel importante en el proceso de adaptacin de
microorganismos, mesfilos, puros o en consorcios, aunque algunos investigadores no han testeado
este parmetro en sus experimentos (Mousavi et al., 2006a,b; Sampson et al., 2005; Third et al., 2000).
Los intervalos pueden variar desde 1 hasta 5% w/vol (Zhen et al., 2009; Shi et al., 2006; Shi & Fang,
2005; Deveci et al., 2004; Mason & Rice, 2002).
Otro punto importante es determinar cundo los microorganismos estn adaptados a una determinada
densidad de pulpa o concentracin de iones metlicos pesados. En los trabajos antes mencionados el
criterio empleado para esto fue la velocidad de oxidacin del hierro ferroso, cuando ste alcanzaba
valores aproximados a los obtenidos en medios de cultivo libres de iones metlicos pesados, se
consideraba que los microorganismos estaban adaptados.
Algunos criterios diferentes empleados en los procesos de adaptacin son los empleados por Xia et al.,
(2008) para Acidithiobacillus ferrooxidans sobre un concentrado de calcopirita, el cual consista en la
medicin de la concentracin celular durante el proceso, considerando una buena poblacin bacteriana
una densidad de 107 clulas/mL. Astudillo & Acevedo (2008) para un proceso de biooxidacin de un
concentrado pirtico relacionaban la eficiencia en la adaptacin y el proceso cuando la razn Fe3+/Fe2+
era ms baja que uno y Mason & Rice (2002) garantizaban una adecuada adaptacin de
Acidithiobacillus ferrooxidans midiendo la concentracin de nquel disuelto durante dos procesos
sucesivos de crecimiento bacteriano.
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4. METODOLOGA
La metodologa empleada para este estudio consisti de los siguientes pasos:
1. Revisin bibliogrfica
2. Muestreo
Se escogieron depsitos de los cuales se pudo extraer la cantidad de muestras necesarias para llevar
a cabo todas las pruebas de biooxidacin. De esta forma se tom los minerales, supeditado a la
disponibilidad y/o accesibilidad de los depsitos, de la siguiente manera:
a. Pirita (FeS2)
Se tom del distrito minero de Marmato, Caldas, en la mina San Antonio, donde sta fase es la
principal acompaante del oro.
b. Arsenopirita (FeAsS)
Se tom de la mina El Violn, Anor, Antioquia, donde la mineralizacin del oro est
predominantemente asociada a ella.
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4. Caracterizacin mineralgica Inicial
En esta etapa, se defini las caractersticas generales de la pirita y la arsenopirita, as como sus fases
acompaantes.
a. Conteo de puntos
La caracterizacin mineralgica inicial fue hecha mediante la tcnica de conteo de puntos
mediante el uso de un microscopio ptico de luz plana polarizada, modo luz reflejada, marca
Leitz Laborolux 11POL, con objetivos de aumento de 10X y 20X en aire y 32X y 50X de
inmersin en aceite, segn norma ASTM D 2799 de 2009. Determinando la concentracin
volumtrica de los componentes acompaantes del sustrato de inters.
b. Difraccin de rayos X (DRX)
Los anlisis se realizaron empleando un difractmetro marca Bruker D8ADVANCE con una
velocidad de barrido de 2 por minuto, modo continuo y radiacin Cu = 1.5406 , radiacin
generada 35kV y 30mA. Los espectros se analizaron por medio del software Diffrac Plus Eva,
haciendo uso de la base de datos PDF 2.0
c. Microscopa ptica de luz plana polarizada (MOLPP)
Las secciones pulidas fueron analizadas mediante microscopa ptica de luz plana polarizada,
modo luz reflejada, utilizando un microscopio ptico marca Leitz Laborolux 11POL, con
objetivos de aumento de 10X y 20X en aire y 32X y 50X de inmersin en aceite, con el fin de
identificar las fases presentes, haciendo nfasis en las texturas y asociaciones determinando tipos
de inclusiones y grado de liberacin, de manera cualitativa.
d. Microscopa electrnica de barrido con analizador de estado slido tipo EDX (SEM/EDX)
Las imgenes de SEM se tomaron en un equipo marca JEOL JSM 5910 LV, con detector de
estado slido tipo EDS marca OXFORD para los anlisis microqumicos. Para el anlisis con
SEM/EDX las muestras fueron previamente metalizadas con oro y se utiliz un voltaje de
aceleracin de 18kV, con un tiempo de colecta de 120 segundos.
e. Espectroscopa Mssbauer
Para todas las medidas se utiliz un espectrmetro Mssbauer en modo de transmisin, 512
canales, con una fuente de 57Co en una matriz de Rh.
5. Ensayos de biooxidacin
5.1. Preparacin del inculo bacteriano
Se determin la poblacin idnea de los microorganismos compatibles con el gnero
Acidithiobacillus previamente adaptados y aclimatados a los minerales, los cuales fueron
tomados del laboratorio de BIO-MINERALOGA, Facultad de Minas, Universidad Nacional
de Colombia.
5.2. Realizacin de ensayos
Los ensayos fueron realizados a nivel de agitador orbital, usando erlenmeyers de 500ml,
utilizando un volumen final de 200ml y un porcentaje de pulpa de 10% (w/v) (20g de
concentrado de sustrato). Para los ensayos utilizando A. ferrooxidans, el medio de cultivo
empleado fue el T&K con las siguientes proporciones de sales basales: (NH4)SO4: 0.5g/L;
MgSO4.7H2O: 0.5g/L; K2HPO4: 0.5g/L, ajustando el pH a 1,8 con cido sulfrico (H2SO4);
esta solucin fue esterilizada en autoclave a 120C por 20 minutos. Adicionalmente, se prepar
una solucin de sulfato ferroso (33.3g/L FeSO4.7H2O), para las etapas de adaptacin de los
microorganismos, la cual fue previamente esterilizada por filtracin en membrana. Para los
ensayos finales se utilizaron 180ml del medio T&K y 20ml (10% v/v) de inculo. Todos los
ensayos se hicieron por duplicado.
Para los ensayos utilizando una mezcla de A. ferrooxidans ms A. thiooxidans se utiliz el
mismo medio T&K pero con la adicin de Ca(NO3)24H2O: 0.01g/L sin adicin de azufre;
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ajustando el pH a 1.8 con cido sulfrico (H2SO4). Adicionalmente, se realiz un control (sin
bacterias) bajo las mismas condiciones y para ambos sustratos evaluados. Todas las muestras
fueron incubadas a 35C en un agitador orbital a 180 10rpm, durante 30 das.
5.3. Seguimiento qumico del proceso
Se hizo un seguimiento del proceso de biooxidacin mediante medidas de potencial redox, pH,
SO42-, Fe2+ y Fe3+ en la solucin, as como medidas de absorcin atmica para la determinacin
de arsnico total en la solucin, cada 5 das hasta el da 30. Las mediciones de pH y xido-
reduccin (Eh) se hicieron mediante el uso de un equipo SCHOTT Handylab, con electrodo de
referencia Ag/AgCl y un electrodo de pH con electrolito de KCl. Las mediciones de hierro se
hicieron en un espectrofotmetro marca GENESYS UV 10, bajo las normas estndar 3500-Fe
B para determinacin de hierro por el mtodo colorimtrico o-fenantrolina y 4500 SO42--E
para la determinacin de sulfatos, por el mtodo turbidimtrico.
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fin de obtener una superficie con acabado espejo, el procedimiento se realiz bajo la norma
ASTM D2797 2009, luego fueron metalizadas con oro.
6.4. Espectroscopa Mssbauer
Los espectros Mssbauer fueron tomados de la siguiente manera: los espectros de arsenopirita
fueron tomados por el profesor lvaro Morales Aramburo en el laboratorio de fsica del estado
slido, Instituto de Fsica, Facultad de Ciencias exactas y Naturales de la Universidad de
Antioquia. Los espectros de pirita fueron tomados por el profesor Vijayendra K. Garg, del
instituto de fsica, de la Universidad de Brasilia. Las interpretaciones fueron realizadas por el
autor con la orientacin del profesor Aramburo. Los espectros fueron obtenidos a temperatura
ambiente RT (Room Temperature) (297 K) y LNT (Liquid Nitrogen Temperature) (77 K),
usando una fuente de 57Co en una matriz de Rh. La radiacin transmitida fue registrada por un
contador proporcional y almacenada en un analizador multicanal con 256 canales. El espectro
fue ajustado empleando anlisis Lorentziano. El tratamiento de los datos se hizo con ayuda del
software Mssbauer Analysis Software for Windows RECOIL 1,05 ken Lagarec 2002.
8. Ensayos de Biomodulacin/Bioflotacin
Los ensayos de flotacin diferencial fueron llevados a cabo en una celda de flotacin, tipo
Hallimond empleando un gramo de mineral, como una mezcla artificial de pirita y arsenopirita. Las
muestras fueron, primero, pre-oxidadas con Acidithiobacillus ferrooxidans en 100 ml de medio
T&K a pH 2 y una poblacin de 107 bacterias ml-1 durante periodos de tiempo de 2, 4, 12, 24 y 48
horas y luego se empleo isopropil-xantato como colector, acondicionando la solucin durante 5
minutos; la solucin fue flotada durante un periodo de un minuto despus de la introduccin de MIC
como agente espumante. La velocidad del flujo de aire fue de 120 cm3min-1 durante todo el proceso
de flotacin. Algunos ensayos se desarrollaron en ausencia de microorganismos, como
modificadores superficiales, pero ante la presencia de colector.
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