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Coloraciones
Coloraciones
MICROSCOPICA
Lunes
1. Observacin en fresco
preparacin en fresco simple
preparacin en gota pendiente
2. Observacin con tinciones
Tincin simple: un solo colorante.
Tincin diferencial: ms de un colorante
Tincin especial
Tincin negativa: colorea el medio que rodea
a la bacteria permaneciendo sta sin teir.
Procedimiento para un preparado en fresco
("entre porta y cubre")
Muestra
Porta objeto
Observacin microscpica
1. Observacin en fresco
Bacterias: Leptospiras, treponemas (M.
campo oscuro)
Observacin microscpica
1. Observacin en fresco : (SSF)
Parsitos : Trofozoitos, larvas.
Observacin microscpica
1. Observacin en fresco
Hongos: Levaduras
Observacin microscpica
1. Observacin en fresco con modificaciones
Hongos
NaOH 10% (hifas)
Procedimiento para un preparado en fresco
en gota pendiente
2. TINCIONES O COLORACIONES
COLORANTE: DEFINICIN
b) La fijacin
c) Coloracin.
Tincin de clulas para la observacin
microscpica
Metanol
TCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIN COLOREADA
c) Coloracin. SIMPLE : Positiva o negativa
Lunes
Tincin simple de azul de metileno.
Frotis y fijacin
1.- Poner una gota de agua 2.- Tomar la muestra con el 3.-Extender sobre el agua y
en un porta asa de siembra fijar a la llama del mechero
Tincin
Micrococcus luteus
Lunes
Tincin negativa.
cpsulas tanto bacterianas como de levaduras, esporas que se observan como cuerpos
refringentes y espiroquetas
Hongos
Tincin negativa
TCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIN COLOREADA
c) Coloracin. Diferencial o compuesta
se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos
Etapas :
1. tincin primaria
2. Tincin de contraste o secundaria
- Ejemplo.: COLORACION GRAM, COLORACION DE ZIEHL-
NEELSEN, ESPORAS
TERMINOS
Los mordientes, aunque no son
colorantes, intensifican la tincin
porque aumentan la afinidad de la
clula por el colorante. Tambin se
pueden utilizar para producir un
engrosamiento de ciertas estructuras
celulares externas, como los flagelos,
que debido a su delgadez no podran
ser visualizados de otra forma.
Diferencias en la pared celular
Lunes
Tincin
L-3.2.3.- Tincin de Gram
Frotis y fijacin
1.- Poner una gota 2.- Tomar la muestra 3.- Extender sobre el
de agua en un porta con el asa de siembra agua y fijar a la llama 1.- Cubrir la 2.- Aadir Lugol
del mechero preparacin con (mordiente) durante 1
Cristal Violeta 2
Aadir Lugol,
Paso 2 dejar actuar 2 minutos
Tincin de contraste
Con safranina 2 minutos.
Las clulas G+
se ven azul-violeta.
Paso 4
Las G- rosas o rojas.
Gram -
PROCEDIMIENTO COLORACION
GRAM
Lunes
Tincin de Gram
1.-Poner una gota de agua 2.- Tomar la muestra de un 3.-Extender sobre el agua y
en un porta cultivo de Mycobacterium fijar a la llama del mechero
1.-Cubrir la preparacin
con Fuchina fenicada
Tincin
Frotis y fijacin
Las clulas Gram positivas permanecen tenidas, pero las negativas pierden el
colorante. Se tie con safranina (contraste). El color violeta de las Gram
positivas se vuelve ms oscuro y las Gram negativas se tien de rosa.
Tincin de Dos colorantes; distingue entre las Se tien las clulas con fucsina bsica y se calienta a emisin de vapores
cido-alcohol micobacterias (cido-alcohol resistentes) y el durante 5 minutos. Todas las bacterias se tinen de rojo. Se decolora
resistencia resto de las bacterias brevemente con una mezcla de alcohol-HCl. Las bacterias resistentes
(Ziehl-Neelsen) permanecen teidas de rojo; todas las dems se decoloran. Se trata con el
colorante de contraste azul de metileno. Las bacterias cido-alcohol resistentes
continan tenidas de rojo, las otras se tien de azul.
Tinciones
especificas
Tincin de Tie selectivamente las endosporas Se cubre la preparacin con verde de malaquita y se calienta a emisin de
esporas de vapores durante 60 segundos. Se lava con agua durante 30 segundos y se tie
Wirtz-Cortitlin con safranina. Las endosporas retienen el color verde; el resto de la clula toma
el color rosa.
Tincin de Permite observar los flagelos A las clulas previamente fijadas, se le aade una mezcla de cido tnico
flagelos de (mordiente) y del colorante rosanilina. El mordiente engruesa los flagelos y el
Leifson colorante los fine.
Tincin negativa Revela la presencia de cpsulas Se utiliza tinta china o nigrosina para tenir una preparacin en fresco del
espcimen. Las particulas de colorante no pueden penetrar en la cpsula, que
se observa como una regin clara alrededor de la clula.
Imgenes de Paramecium al mismo aumento (1000x), pero con distintos
microscopios. (a) La microscopa de campo claro permite observar la forma y las
estructuras internas de mayor tamao, como el ncleo. (b) La imagen de
contraste de fases muestra mayor detalle interno, y el caracterstico halo. (c) La
microscopa de campo oscuro revela la presencia de cilios. (d) La imagen de
Nomarsky es casi tridimensional.
PARASITOS: Plasmodium
GIEMSA O WRIGHT
COLORACION LEISHMAN
HONGOS
AZUL DE LACTOFENOL
T. MENTAGROPHYTES
COLORACION DE TEJIDOS
HEMTOXILINA /EOSINA
Hay alguna pregunta?
o de lo contrario
seguimos en la
prxima clase !!!