Problema 5:

Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reaccin catalizada

enzimticamente sobre un solo sustrato, obtenindose los siguientes resultados

Concentracin de sustrato Concentracin del inhibidor

(mmol L -1) (mmol L -1)
0 0.5 1.0
Velocidad de reaccin n (mmol L -1 min-1)

0.05 0.33 0.20 0.14

0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) De que manera acta el inhibidor? B) Obtngase los valores para Vmx, y Km.

SOLUCIN
A) La manera ms sencilla de deducir cmo acta un inhibidor es graficar 1/n en funcin de
1/[S]0 para cada concentracin del inhibidor.

7 1
1/n 0 (mmol L -1 min-1 )

5 0.5
[I ] 0 (mmol L-1)

4 [I ] 0,5 (mmol L-1)

Vmx 0
[I ] 1,0 (mmol L-1)
3

0
-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25
-1 -1
1/[S] 0 [(mmol L ) ]
-1/Km

Grfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la grfica se puede observar que la pendiente de las curvas se modifica con los
cambios en la concentracin del inhibidor pero no la interseccin en el eje 1/nVmax). Por
ello los datos anteriores indican que el inhibidor I est actuando como un inhibidor
competitivo.

B) De la interseccin en el eje 1/n se puede estimar Vmax= 1(mmol L -1 min-1) y de la

interseccin con el eje 1/[S]0 los valores de Km=0,1 (mmol L -1) sin ihnhibidor, Km=0,2(mmol
L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor y Km=0,3 (mmol L -1) con 1(mmol L-1)
2.-
3.- Se hacen cinco mezcla de reaccin que contiene concentraciones iguales de una enzima,
a las concentraciones de S indicadas en la tabla, y se miden las V de reaccin.El experimento
se repite luego con un inhibidor enzimtico presente a una concentracin de 2.2 x 104M EN
CADA MEZCLA DE REACCIN.Utilizando las grficad de Lieneweaver-Burk de estos
datos,determine grficamente la KM para el S ,la Ki para el inhibidor y la Vmx en ausencia
y presencia del inhibidor. Es este un inhibidor competitivo o no competitivo.

Inhibidor ausente Inhibidor presente

S (moles/litro) V(umoles/min) (2.2 x 104M)
V(umoles/min)

1.x104 28 18
1.5x104 36 24
2x104 43 30
5x104 63 51
 7.5x104 74 63

Respuesta .
Calcule los valores para 1/(S), 1/v sin inhibidor y1/v con inhibidor para toda la
concentracin de sustrato.Luego grafique 1/v contra 1/(S).Deber obtener los resultados
que se muestran. Con base en estos resultados puede calcular.

1
Km = ------------------------------------------ =2.7 x 10-4 M
-3.7x10-3 litros /mol

-1/KM (1 +[ I ]) = 2.0 x 10-3 litros mol)

Ki

(2.0 x 10-3 KM[ I ])

Ki = -----------------------------------M
1 (2.0 x 10-3 KM)

(2.0 x 10-3)(1.4 x 10-4) (2.2 x 10-4)M

Ki = ----------------------------------------------- = 2.6 x 10-4 M
1 - (2.0 x 10-3) (2.7 x 10-4)

1
Vmx = ------------------ = 100 umoles/min
0.01 min7mol