Gua N 4

SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

Objetivos:

- Comprender los conceptos de siembra y cultivo de

microorganismos
- Aprender las tcnicas aspticas de siembra de microorganismos
- Realizar siembras en medios lquidos y slidos aplicando las
tcnicas aprendidas

1. Concepto de siembra:

En Microbiologa se entiende como siembra el proceso mediante el

cual se deposita una pequea cantidad de microorganismos (inculo)
en un medio de cultivo estril. El inculo puede proceder de una
muestra o de un cultivo previo. (al crecimiento de microorganismos
obtenido, se le denomina cultivo)
La finalidad de la siembra es permitir la multiplicacin de los
microorganismos, al proporcionarles las condiciones ptimas para su
desarrollo, dentro de las cuales, se debe considerar: temperatura,
nutrientes, pH, disponibilidad de oxgeno, entre otros.
La siembra de microorganismos debe llevarse a cabo con
instrumentos y medios previamente esterilizados trabajando siempre
bajo condiciones de asepsia, lograda por medio de un mechero
Bunsen que, debido a las corrientes de conveccin verticales que
genera, es capaz de crear un ambiente estril en la zona
inmediatamente alrededor y debajo de la llama.

2 Tcnicas de siembra:

a) Siembra de medios lquidos: sta se realiza en tubos de ensayo o

en matraces. El crecimiento se observa por la turbidez del medio,
por la formacin de velo o pelcula superficial, o por acumulacin
de microorganismos en el fondo del tubo (Figura 1). El inculo se
toma con el asa de loop, pipetas o micropipetas. Se utiliza para el
enriquecimiento de microorganismos, algunas tcnicas de
recuento, pruebas bioqumicas, etc.
 a b c d

Figura 1: crecimiento de microorganismos en medios de

cultivo lquido a: velo superficial; b: crecimiento en el fondo del
tubo;
c: turbidez en todo el tubo; d: tubo control
b) Siembra en medios slidos: se realiza en tubos de ensayo o en
placas de Petri, tiene distintos usos, segn el objetivo del cultivo a
realizar.

Siembra por estra en tubos: se utilizan tubos con agar inclinado y

con el asa de loop se siembra sobre la superficie del agar con un
movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior del tubo.
Se observa el crecimiento sobre la superficie del agar. (Figura 2)

Figura 2: siembra por estra en tubo

Siembra por picadura: se utilizan tubos con agar , y se agrega el

inculo con el asa en punta. El asa se introduce en el centro del agar
con un solo movimiento. Se observa el crecimiento en la linea de
 inoculacin. En agar semislido, se utiliza para la prueba de
movilidad. (Figura 3)

Figura 3: siembra en picadura en medio semislido

Siembra por extensin en placas: consiste en poner un inculo en la

superficie del agar y luego extenderlo sobre el medio. La extensin
del inculo se puede hacer con asa de loop, tcnica denominada
siembra en estras o el asa de Drygalsky, tcnica denominada
siembra homognea

Siembra en estras: con un asa de loop previamente esterilizada a

la llama del mechero, se deposita un pequeo inculo y se
extiende, en estrias, sobre un rea pequea de la placa. Se
esteriliza el asa, se enfra en la tapa de la placa y a partir de la
siembra realizada anteriormente, se estra la zona contigua. El
proceso se repite sucesivamente, hasta sembrar en cuatro zonas
(Figura 4). Los microorganismos se adhieren a la superficie del
medio y se multiplican formando colonias. Este tipo de siembra se
utiliza para aislar bacterias y obtener cultivos puros
 Figura 4: siembra de estras en placa

Siembra homognea: se toma un pequeo volumen a partir de un

cultivo o muestra lquida. Generalmente y dependiendo del objetivo de
la siembra, se toman inculos desde 0,1 a 2ml. Luego se distribuye
homogneamente sobre el agar con el asa de Drygalsky. Se utiliza para
recuento de microorganismos y como tcnica de aislamiento, previa
dilucin de la muestra. (Figura 5)

Figura 5: Dilucin y siembra homognea

Siembra en profundidad: en una placa de Petri se vaca un pequeo

volumen (1 ml) de muestra y a continuacin se agrega el medio de
cultivo (agar nutritivo) fundido y temperado a 45 C. Se mezclan por
rotacin suave de la placa. (Figura 6) Los microorganismos se
distribuirn en forma homgnea en el medio de cultivo, permitiendo,
as el desarrollo de colonias separadas en el agar. Se deja enfriar la
placa hasta que solidifique el medio. Esta tcnica se utiliza para
 determinar el nmero de bacterias viables, anerobias facultativas y
microaerfilas, presentes en la muestra

Figura 6: Siembra en profundidad

Las siembras realizadas en placas de Petri, permitirn observar el

crecimiento de los microorganismos a travs de la formacin de
colonias. Cada colonia se desarrolla a partir de la multiplicacin de una
clula, y cada colonia se denomina Unidad Formadora de colonia
(UFC). Las colonias pueden diferenciarse de acuerdo a:

Tamao: Grande (mayor a 1 mm de dimetro); media ( 1mm de

dimetro); pequea ( menor a 1 mm de dimetro)
Elevacin: plana, convexa, centro elevado, umbilicada, cncava
Forma: circular, filamentosa, irregular, puntiforme, rizoide,
ovalada, fusiforme
Margen o borde: entero, ondulado, lobulado, dentado,
filamentoso, rizado
Color: blanco, negra, crema, naranja, etc
Apariencia de la superficie: brillante, opaca, suave, rugosa,
granular
Consistencia: observada al tomar la colonia con el asa, puede ser:
cremosa, viscosa, granular
(Figura 7)
 Umbilicada

Figura 7: Caractersticas de las colonias

3 Normas generales para realizar siembra de microorganismos

Para trabajar bajo condiciones de asepsia en el laboratorio y mantener la

esterilidad
de los medios de cultivo que sern sembrados, se deben seguir las siguientes
indicaciones:

1. El trabajo es individual, por lo tanto cada alumno debe disponer de

un mechero
2. Lavarse las manos con agua y jabn desinfectante
3. Desinfectar el rea de trabajo con etanol
4. Encender el mechero
5. Dejar al alcance de sus manos el material a utilizar (medios de
cultivo, asas, pipetas, cementerio, etc)
6. Debe flamearse a la llama del mechero la boca de los tubos de
ensayo antes y despus de tomar un inculo
7. Las asas rectas y de loop deben esterilizarse al rojo cada vez que se
utilizan y dejan de utilizar. Antes de tomar el inculo deben
enfriarse, dejndolas cerca del mechero
8. Las asas de Drygalsky deben esterilizarse por flameado en alcohol y
enfriadas en la tapa de la palca, antes de ser utilizadas. Una vez
utilizadas deben dejarse en alcohol. Para ello, se mantendrn en un
vaso con etanol.
9. La boca y tapa de los pipeteros deben flamearse a la llama del
mechero, cada vez que se saque una pipeta. Las pipetas utilizadas
 deben dejarse en un recipiente con solucin desinfectante
(cementerio)
10. Para la siembra en placas, stas deben abrirse frente al mechero,
sin dejar la tapa boca abajo sobre el mesn.
11. Una vez que la siembra se ha realizado, los tubos y placas sern
incubados bajo condiciones controladas de temperatura. En el caso
de las placas, debe incubarse invertidas.

Trabajo Prctico
Siembra de microorganismos

Materiales y equipos:

- Asa de loop
- Asa recta
- Asa de Drygalsky
- Pipetas de 1 ml
- Vasos pp con alcohol
- Etanol
- Mechero
- Gradillas
- Medios de cultivo esterilizados: agar nutritivo inclinado y recto, Agar
nutritivo en placas, caldo nutritivo
- Cepas bacterianas en cultivos lquidos y slidos

Actividades: Trabajo individual

Cada alumno realizar las siguientes siembras:

- Siembra en medio lquido

- Siembra en picadura
- Siembra por estras en tubo
- Siembra por estras en placa
- Siembra homognea

Resultados:
 Los resultados sern observados a la semana siguiente. El alumno
deber revisar cada siembra realizada y anotar los resultados
obtenidos:

Tipo de siembra Crecimiento Asa utilizada Utilidad de la

tcnica
Picadura
Estra en tubo
Medio lquido
Caractersticas
de las colonias
(forma, color,
elevacin)
Estrias en
placas

Homognea

Autoevaluacin:

1 Por qu debe utilizar el mechero Bunsen durante la siembra?

2. Cmo esteriliza el asa de loop y el asa de Drygalsky?
3 Qu tipo de siembras puede realizar con el asa de loop?
4. Si tuviera que determinar la movilidad de una cepa bacteriana.
a) qu tipo de siembra realizara?
b) Qu tipo de medio de cultivo utilizara?
c) Describa paso a paso el procedimiento que realizara