AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE GRAU____

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Prctica N1:

NUMERACIN DE MICROORGANISMOS
AEROBIOS MESFILOS VIABLES
Ingeniera en Universidad
industrias
1.- INTRODUCCION: Nacional Jorge
Alimentarias Basadre
En la presente practica de laboratorio que lleva por ttulo: NUMERACIN DE
MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS VIABLES Teniendo en cuenta que las tcnicas
Practica N 1: NUMERACIN DE
para poder encontrar la numeracin de aerobios mesfilos viables son: el recuento de
colonias en placa por profundidad,
MICROORGANISMOS superficie o MESFILOS
AEROBIOS por goteo; otro el Mtodo del nmero ms
probable (MPN) de grmenes como clculo estadstico del nmero de clulas viables. En la
prctica se usara el mtodoVIABLES
del recuento de colonias en placas por profundidad, en la cual
se observara y recontara los microorganismos en la placa volteada y a contraluz o usando
un contador de colonias.

Sabiendo que Este mtodo del recuento total de bacterias en placa es un mtodo til para
obtener una idea del grado de frescura o pronta alteracin de los alimentos, dependiendo
de la cantidad de bacterias presentes. La mayora de los alimentos deben ser
considerados como inadecuados para el consumo cuando contienen un gran nmero de
microorganismos, aun cuando estos microorganismos no sean conocidos como
patgenos y no hayan alterado de forma apreciable los caracteres organolpticos
del alimento. (Thatcher y Clark, 1973)

La presencia de microorganismos aerobios mesfilos en los alimentos puede ser relacionada

directamente con la manipulacin, el estado de frescura o de descomposicin del producto
y la temperatura de conservacin del producto. Un nmero relativamente bajo de estas
bacterias no es sinnimo de buena calidad bacteriolgica del alimento, ya que puede
contener microorganismos que producen enterotoxinas o son patgenos. (Venegas y col.,
1990). NOMBRE: Yoselin Noelia Jalanoca Quispe
PROFESOR: Amelia Castro Gamero
CURSO: Laboratorio de Microbiologa
AO: Tercero
HORARIO: Lunes 11:00am 01:00pm
2.- OBJETIVOS:
Tacna Per
Conocer el mtodo para determinar el nmero de microorganismos aerobios
mesfilos viables. 2016
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Determinar si el producto alimenticio que se analiza est en condiciones aptas para

el consumo humano.

Determinar cuntos microorganismos presenta la muestra que analizamos.

3.- FUNDAMENTO TEORICO:

En el grupo de los mesfilos aerobios se incluyen todas las

bacterias, mohos y levaduras capaces de desarrollarse a 30
C en las condiciones establecidas.

RECUENTO MICROORGANISMOS VIABLES

TOTALES:

Se trata de conocer el nmero total de microorganismos presentes en el alimento.

Este nmero no guarda relacin con el de microorganismos patgenos por lo que no
puede usarse como ndice de su presencia y slo debe considerarse un indicador de
las caractersticas higinicas generales del alimento.

Dependiendo de las caractersticas del medio utilizado (medio rico, medio limitado
en nutrientes para medida de la flora no lctica de alimentos fermentados) y de las
condiciones de incubacin (mesfilos, psicrfilos) los microorganismos analizados
sern miembros de poblaciones diferentes.
En general se investiga la presencia de microorganismos aerobios o aerotolerantes
(anaerobios facultativos); aunque, en ciertas
situaciones (alimentos envasados al vaco), puede
ser de inters hacer recuentos de anaerobios
totales. Se han desarrollado tcnicas que hacen
posible la automatizacin del proceso, hay cuatro
tcnicas biolgicas bsicas tcnicas de recuento
de viables:

Contaje de Placa: Consiste en el plaqueo

de una muestra de volumen conocido del alimento que se analiza. El resultado
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es funcin de una serie de factores como son el mtodo de muestreo, el tipo

de microorganismo, el tipo de alimento y las caractersticas del medio de
cultivo. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa como en superficie,
aunque hay que considerar que los cultivos en masa son letales para la flora
psicotrofa. Cada bacteria viable formar una colonia, el plaqueo puede
hacerse en una placa normal o por medio de un plaqueador en espiral que va
depositando concentraciones progresivamente ms diludas de la muestra.

Filtros de membrana: Utilizados cuando el nmero de bacterias es bajo.

Son filtros con un poro de 0,45 mm que retienen las bacterias. Se filtra un
volumen dado y se coloca el filtro sobre una placa del medio de cultivo
apropiado. La muestra puede haber sido procesada para epifluorescencia
previamente, lo que facilita el recuento (la epifluorescencia se puede provocar
con naranja de acridina que tie especficamente los cidos nucleicos).

Microcolonias en DEFT: DEFT son las iniciales en ingls de Direct

Epifluorescence Filter Technique ( tcnica deepifluorescencia directa en filtro ).
En esta tcnica las bacterias se filtran para retenerlas en una membrana
apropiada que posteriormente se trata con un agente fluorescente (como la
naranja de acridina) para teir las clulas bacterianas (se somete el filtrado a
un tratamiento previo con detergentes para destruir las clulas somticas). La
deteccin de los microorganismos ha de hacerse mediante microscopa de
fluorescencia o por cualquier otro mtodo de medida de la epifluorescencia.
En ciertos casos, las membranas se incuban para producir colonias que son
ms fcilmente detectables.

Contaje de microcolonias al microscopio: Se aade un pequeo volumen

de agar-cultivo a un porta y se incuba para seguir la formacin de
microcolonias al microscopio.

Gotitas de agar: Se hacen diluciones de la muestra (solucin madre) y se

depositan gotitas de 10 ml en una placa Petri (gotitas de cultivo + agar). Se
examina el crecimiento de las colonias en las gotitas tras la incubacin.
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Films secos (Petrifilm): Son pelculas deshidratadas de medios de cultivos

generales o selectivos en las que se deposita 1 ml de la muestra que rehidrata
el medio. Tras la incubacin se hace el recuento.

Mtodo del nmero ms probable: Basado en series de diluciones y

clculo estadstico del nmero de bacterias presentes en las diluciones ms
altas. Se puede hacer con 3 5 tubos. El mtodo es popular aunque poco
excto.
Mtodos basados en la reduccin de colorantes: Usando azul de
metileno o resazurina. Colorantes reducidos por las bacterias; al reducirse
cambian de color y esto es medible. Usado en medios lquidos (lcteos).

Tubos rodantes: Son tubos hermticamente cerrados en los que hacindolos

girar se forma una fina capa de agua. Utiles para recuento de anaerobios.

Contaje microscpico directo: Usando cmaras de cuenta, se coloca un

volumen determinado y se recuentan las bacterias.

4.-
MATERIALES:

Equipos:

- - 01 Cocinilla elctrica.
- 01 Bao Mara:
- 01 Estufa.
- 01 Balanza.
- 01 Mechero Bunsen.
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- Contador de Colonias.

Materiales:

- 19 placas Petri.
- 19 Tubos de Ensayo.
- 02 Matraces Erlenmeyer.
- 03 Morteros con sus timones.
- Pipetas.
- Agar PlateCount (PC).
- Agua Peptonada.
- Alcohol de 96 C.

Muestras:

- 02 Sandwich de pollo.
- 01 Sandwich de hamburguesa.

5.- PROCEDIMIENTO:

Preparacin de la Muestra:

a) Preparar con anterioridad el agar PC, segn las indicaciones dadas por el frasco y
conservar en el refrigerador.

b) Prender la cocinilla elctrica y poner ah el matraz con el

agar PC, hasta que este deje de estar gelatinizado y sea
lquido.

c) Llevar el matraz con el agar lquido al Bao Mara mientras

seguimos preparando nuestra muestra.

d) Esterilizar la mesa de trabajo, primero limpiar con el alcohol, esperar un

momento y luego pasar con el mechero.

e) Triturar la muestra en el mortero.

f) Pesar 10 g de la muestra en un matraz y agregar 90 ml de

agua peptonada.

g) Agitar nuestra muestra durante 1 min, y rotularemos con -1.

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h) Rotular 5 tubos de ensayo con -2, -3, -4, -5 y -6 y agregar a cada uno 9 ml de
agua peptonada.

i) Agregar 1 ml de -1 a -2, luego 1 ml de -2 a -3 y asi sucesivamente hasta agregar

1 ml de -5 a -6.

j) Poner en orden las placas Petri e ir agregando a cada

una en orden 1 ml de cada tubo de ensayo por placa,
empezando por el tubo -6 y por incorporacin una vez
que este en la placa agregaremos el agar a
la altura que no sobrepase la mitad del fondo de la
placa y realizaremos movimientos de vaivn,
luego continuar con la placa -5 y sucesivamente.

k) Rotular la placa indicando el nmero de grupo, el agar usado y el nmero de

dilucin realizado y dejar unos minutos para que el agar gelatinice.

l) En otra placa aparte solo agregaremos el agar y rotularemos con la letra T que
significa testigo, esto para comprobar que se realizo el cultivo en un ambiente
esterilizado.

m) Llevar las placas a la estufa a temperatura de 30 31 C por 48 horas en

posicin invertida.

Recuento de colonias:

a) Poner las placas en orden y seleccionar las placas en las que se sea posible
contar sus colonias.

b) Elegir el mtodo por el que contar las colonias, si estas son pocas, entonces
podemos contarlas mirando hacia la luz con la placa y en caso de que sean
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muchas pero sea posible contar contaremos las colonias en el contador de

colonias.

6.- RESULTADOS:

SANDWICH DE POLLO, GRUPO I:

Placas escogidas
para el conteo: -3 y -4

- Placa -3: 49 Colonias. 49 000 +

- Placa -4 : 3 Colonias. 30 000
79 000 2 = 39 500= 395x102ufc/g

SANDWICH DE POLLO, GRUPO II:

Placas escogidas para el conteo: -3 y -4

- Placa -4: 232 Colonias. 2 320 000 +

- Placa -5: 13 Colonias. 1 300 000
3 620 000 2 = 1 810 000= 181x104 ufc/g
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Sandwich de hamburguesa, grupo III:

SANDWICH DE HAMBURGUESA, GRUPO III:

Placas escogidas para el conteo: -4y -5

- Placa -4: 18 Colonias. 180 000 +

- Placa -5: 1 Colonias. 100 000
280 000 2 = 140 000= 14x104ufc/g

7.-CONCLUSIONES:

Se observ que en la muestra del sndwich de pollo a diferencia de la hamburguesa

esta posee mayor cantidad de colonias, esto debido a que al momento de preparar
ese sndwich el pollo pasa por un deshilachado en el que no se toma un buen
cuidado, mientras la hamburguesa pasa por una plancha para poder cocinarla, lo
cual elimina a algunos microorganismos, esta prctica nos demostr que el recuento
de mesfilos nos puede indicar las condiciones de salubridad por las que pas un
alimento.

RECOMENDACIONES:
Realizar cada procedimiento de la prctica al lado del mechero, esto nos
permitir tener un ambiente mejor esterilizado y evitar errores al momento de
ver nuestros resultados.

8.- BIBLIOGRAFIA:
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https://es.scribd.com/doc/232184397/Numeracion-deMicroorganismos-Aerobios-
Mesofilos-Viables-docx
http://myslide.es/documents/determinacion-de-bacterias-aerobios mesofilos-
viables.html
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
https://es.scribd.com/doc/31881556/Numeracion-de-Microorganismos-Aerobios-
Mesofilos-Viables
http://www.analizacalidad.com/docftp/fi178arm2004-4.pdf
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-metodos
%20de%20recuento.htm