CROMATOGRAFAENPLACAFINA

Fundamento

Lacromatografaencapafina(eninglsthinlayerchromatographyoTLC)esunatcnicaanalticarpida
ysencilla,muyutilizadaenunlaboratoriodeQumicaOrgnica.Entreotrascosaspermite:

Determinarelgradodepurezadeuncompuesto.Sepuededeterminaras,porejemplo,laefectividad
deunaetapadepurificacin.
Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podran ser idnticas. Si, por el contrario,
correndistintoentoncesnosonlamismasustancia.
Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar cmo desaparecen los reactivos y cmo
aparecenlosproductosfinaleso,loqueeslomismo,sabercundolareaccinhaacabado.
La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lmina de plstico o aluminio que
previamentehasidorecubiertadeunafinacapadeadsorbente(faseestacionaria).Entonces,lalminasecoloca
enunacubetacerradaquecontieneunoovariosdisolventesmezclados(eluyenteofasemvil).Amedidaquela
mezcladedisolventesasciendeporcapilaridadatravsdeladsorbente,seproduceunrepartodiferencialdelos
productospresentesenlamuestraentreeldisolventeyeladsorbente.

Adsobentesyeluyentes

Los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms ampliamente utilizados son la gel de slice (SiO2) y la
almina (Al2O3), ambas de carcter polar. La almina anhidra es el ms activo de los dos, es decir, es el que
retiene con ms fuerza a los compuestos; por ello se utiliza para separar compuestos relativamente apolares
(hidrocarburos,halurosdealquilo,teres,aldehdosycetonas).Elgeldeslice,porelcontrario,seutilizapara
separar sustancias ms polares (alcoholes, aminas, cidos carboxlicos). El proceso de adsorcin se debe a
interaccionesintermolecularesdetipodipolodipolooenlacesdehidrgenoentreelsolutoyeladsorbente.El
adsorbente debe ser inerte con las sustancias a analizar y no actuar como catalizador en reacciones de
descomposicin. El adsorbente interacciona con las sustancias mediante interaccin dipolodipolo o mediante
enlacedehidrgenosilopresentan.

.
Elordendeelucindeuncompuestoseincrementaalaumentarlapolaridaddelafasemviloeluyente.
Estepuedeserundisolventenicoodosmisciblesdedistintapolaridad.Enelsiguienterecuadroserecogepor
ordencrecientedefuerzaeluyentelosdisolventesmscomnmenteempleados.

Hexano<tetraclorometano<cloroformo<diclorometano<acetatodeetilo<acetona<2propanol<metanol<
agua

Engeneral,estosdisolventessecaracterizanportenerbajospuntosdeebullicinyviscosidad,loqueles
permite moverse con rapidez. Raramente se emplea un disolvente ms polar que el metanol. Usualmente se
emplea una mezcla de dos disolventes en proporcin variable; la polaridad de la mezcla ser el valor
promediadoenfuncindelacantidaddecadadisolventeempleada.Eleluyenteidneoparacadacasohade
encontrarsepor"elmtododelensayoydelerror".
DeterminacindelRf

Laretencinsepuedeexplicarenbasealacompetenciaqueseestableceentreelsolutoasepararyla
fasemvilporadsorbersealoscentrosactivospolaresdelafaseestacionaria.As,lasmolculasdesolutose
encuentranadsorbidasenlafaseestacionariayamedidaqueseproducelaelucinvansiendodesplazadaspor
la fase mvil. La retencin y la selectividad en la separacin dependen de los valores respectivos de las
constantesdelosdiferentesequilibriosqumicosquetienenlugar,queestnenfuncinde:
lapolaridaddelcompuesto,determinadaporelnmeroynaturalezadelosgruposfuncionalespresentes.Los
solutosmspolaresquedarnmsretenidospuestoqueseadsorbenmsfirmementealoscentrosactivosdela
faseestacionaria,mientrasquelosnopolaresseeluirnconmayorfacilidad.
naturalezadeldisolvente.As,paraunmismocompuesto,unaumentoenlapolaridaddeldisolventefacilitasu
desplazamientoenlaplaca.

Larelacinentrelasdistanciasrecorridasporelsolutoyporeleluyentedesdeelorigendelaplacase
conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas condiciones cromatogrficas
determinadas(adsorbente,disolvente,tamaodelacubeta,temperatura,etc.).Debidoaqueesprcticamente
imposible reproducir exactamente las condiciones experimentales, la comparacin de una muestra con otra
deberealizarseeluyendoambasenlamismaplaca.

ParacalcularelRfseaplicalasiguienteexpresin:
Rf=distanciarecorridaporelcompuesto(X)/distanciarecorridaporeleluyente(Y)

Ladistanciarecorridaporelcompuestosemidedesdeelcentrodelamancha.Sistaesexcesivamente
grandeseobtendrunvalorerrneodelRf.

Se recomienda elegir un eluyente en el que los componentes de la mezcla presenten un Rf medio en
tornoa0.30.5.Paracompuestospocopolares,sedebeutilizarundisolventeapolarcomoelhexano.Enelcaso
de compuestos con polaridad media, se aconseja utilizar mezclas hexano/acetato de etilo en distintas
proporciones. Los productos ms polares, requieren disolventes ms polares como mezclas de
diclorometano/metanolendistintasproporciones.

Reveladodelasplacas

La mayor parte de las placas de cromatografa llevan un indicador fluorescente que permite la
visualizacindeloscompuestosactivosalaluzultravioleta(254nm).ElindicadorabsorbelaluzUVyemiteluz
visible.LapresenciadeuncompuestoactivoenelUVevitaqueelindicadorabsorbalaluzenlazonaenlaque
seencuentraelproducto,yelresultadoeslavisualizacindeunamanchaenlaplacaqueindicalapresenciade
uncompuesto.

En el caso de compuestos que no absorben luz UV, la visualizacin (o revelado) del cromatograma
requiere utilizarunagenterevelador. Estetienequereaccionar conlosproductosadsorbidosproporcionando
compuestoscoloreados.

Parteexperimental

Materialportaquilla
Cmaracromatogrfica
Probetade10mL
2xErlenmeyerde25mL
Reglade10cm
6xPlacasdecromatografa
Micropipeta
4xvialesde5mL
1xpipeta+1xchupeteparapipeta
Reactivos
Disolucionesde0,5gen500mLdeacetatodeetilo:
(B)Disolucindecidobenzoico
(A)Disolucinde4aminobenzoatodeetilo
(F)Disolucinde9fluorenona
Hexano2x
Acetatodeetilo
Acetona

Procedimiento

En esta prctica se llevar a cabo la cromatografa en placa fina de tres compuestos orgnicos, cido
benzoico,4aminobenzoatodeetiloy9fluorenona.

Enunvialponerconunapipetaunapequeacantidaddeunamuestradisueltaenacetatodeetilo(que
cubraelfondodelvialyunpocoms).Enotrosdosvialesdiferentesponerotramuestraencadaunodela
mismaforma.Lastresdisolucionesdelasmuestrasenacetatodeetiloestarnyapreparadas.

EnunaplacadeTLCnuevasetrazaconlpizunalneaa710mmdelbordeinferiorysesealansobre
ellatrespuntosequidistantesynodemasiadocercadelborde(comoenlafiguraa,perocon3puntosenlugar
de2).

Conayudadeunamicropipetadevidriosetomaunamuestradeunvial.Seintroducelamicropipetayel
lquidosubeporellaporcapilaridad.Altocarbrevementelaplacaconlamicropipetaellquidoseabsorbeenla
placatambinporcapilaridad.Sepinchabrevementetresvecesenelpuntoparaconseguirunamanchade
pequeotamaoquedamejorresolucin.

Despusdeponerunamanchaselavalamicropipetaintroduciendolapuntaenacetonaenunvial,se
dejaquesellenehastalamitadysepinchasobrepapeldefiltroparaqueabsorbalaacetona.Repetirellavado
tresveces.Lapipetasereutilizaparalasiguientemuestra,repitiendoelprocesodeponerlamuestraenlaplaca
yellavado.

LaplacadeTLCsedepositadentrodeunacubetadecromatografa,alaquepreviamentesehaaadido
unapequeacantidaddeleluyentedeseado.Hayquetenercuidadodequeelniveldeeluyenteestpordebajo
delpuntodondehasido"pinchado"elproducto(Figurac).

Setapalacubetaysedejaqueeleluyenteasciendaporcapilaridad.
 Antesdequeelfrentedeldisolventelleguealotroextremodelaplaca,stasesacadelacubetacon
unaspinzasyconunlpizsehaceunasealindicandohastadndehallegadoeleluyente(Figurad).
Trasdejarevaporareldisolventedelaplaca,revelarlaplacamirandoenelvisordeUV.
Se hacen placas diferentes con distintos eluyentes tal como se indica en el esquema siguiente,
estudiandolasmuestrasde:F(fluorenona),A(amina)yB(benzoico).Sedibujanlasplacasenelesquemadela
cuestin2yseanotanlosvaloresdeRfdelasplacascentrales,quesemidensobrelasplacas.

Hex/AcOEt:1:0 4:12:11:1 0:1

RfF:
RfA:
RfB:

Unavezquesehaencontradoeleluyenteadecuadoparaverlasmuestrasseparadas,seestudiauna
muestraproblema(MP)paraaveriguarloscomponentesquetiene,quepuedenserunoovariosdelos
compuestosF,A,Butilizadosenlaprctica,siguiendoelesquemaacontinuacin.Sedibujalaplacayseponen
losresultadosenlacuestin5.

Hex/AcOEt:

ComposicindeMP:

RfdentrodeMP:Rfmuestras: