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La Cromatografia y Sus Aplicaciones Bibl PDF
La Cromatografia y Sus Aplicaciones Bibl PDF
Bibliografa de consulta:
Cromatografia sobre papel y capa fina. Electrofresis. (I. Smith y J. Feinberg)
Quimica Analtica Cualitativa. (Burriel)
Vnculos Web en Internet
Qu es la cromatografia?
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clasificacin. Los principales mecanismos que intervienen en la separacin
cromatografica son:
Adsorcin: Gases o lquidos contenidos en la fase mvil son retenidos por una
adsorcin selectiva en la superficie del slido que constituye la fase estacionaria.
En la interfase slido-fase mvil hay un aumento de concentracin respecto a la
inicial. Este mecanismo controla la cromatografia gas-slido y lquido-slido.
Reparto: Los componentes de la fase mvil son retenidos por la fase estacionaria
liquida en funcin de su solubilidad en ella. Si las dos son liquidas se tiene un
proceso de extraccin en continuo.
Intercambio Ionico: La fase estacionaria constituida por un slido intercambiando
iones con iones contenidos en la fase mvil, liquida. El intercambio de iones
slido-solucin esta regulado por la afinidad quimica de los iones con ambas fases
y por sus respectivas concentraciones.
Tamao Molecular: Especies neutras de alto peso molecular pueden ser
separadas en virtud de su tamao donde la fase estacionaria es un gel hidrofilico
altamente poroso que retiene las molculas de menor tamao al de los poros. Las
molculas de mayor tamao son retardadas en su paso por pequeas fuerzas de
adsorcin de la superfie externa del gel que luego son excluidas de la fase
estacionaria.
Migracin Elctrica: Los componentes inicos de una muestra son separados por
su diferente velocidad y sentido con que se desplazan en un campo elctrico. La
fase estacionaria puede ser un papel saturado por un electrolito. La aplicacin de
un campo provoca un movimiento diferencial de los iones dependiendo de su
carga y de su movilidad ionica.
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
Qu es la cromatografia en papel?
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En ambos casos el disolvente avanza a lo largo del papel pasando por encima de
la mancha, al avanzar disuelve y arrastra las sustancias de la mancha, cada una
de ellas se mueve, por lo general a distinta velocidad que las otras.
Se deja actuar el disolvente un tiempo determinado, se seca el papel y se
observan las sustancias separadas si tienen color, o en caso de no tener color se
procede al revelado por una reaccin quimica apropiada.
Esta tcnica se conoce como cromatografa monodimencional y el papel resultante
recibe el nombre de cromatograma monodimencional.
Fuerzas propulsoras:
Cuando se realiza un cromatograma en papel, las fuerzas propulsoras ms
importantes son: el flujo de disolvente y la solubilidad de cada sustancia en le
disolvente.
Flujo del disolvente:
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Si la sustancia cromatografiada fuera completa e instantneamente soluble
en el disolvente que avanza, por ejemplo agua y azcar, y no actuaran fuerzas de
retardo la sustancia ascender desde el origen hasta donde llega el diluyente. En
cambio si la sustancia fuera completamente insoluble en el disolvente en
movimiento no se movera del origen.
La corriente del disolvente es la misma para todas las sustancias de la mancha,
as pues, si el disolvente fuese capaz de disolver instantnea y completamente
todas las sustancias, estas avanzaran juntas hasta el final de la trayectoria del
disolvente y terminaramos donde empezamos con todas las sustancias juntas.
Solubilidad:
Una fuerza diferencial es, en efecto, la solubilidad. Pocas son las sustancias
que ofrecen la misma solubilidad en cualquier disolvente. La particular solubilidad
de una sustancia en la corriente del disolvente es una fuerza propulsora que
tiende a desplazarla, manteniendola en movimiento a lo largo del papel.
Fuerzas retardantes:
Hay tambin dos fuerzas retardantes principales: la adsorcin y el reparto.
Adsorcin:
La celulosa de la que esta hecho el papel de filtro, posee propiedades
adsorbentes. Las sustancias depositadas en el papel, en cromatografa, pueden
ser ms o menos adsorbidas en el papel.
La adsorcin es otra de las fuerzas diferenciales, esto significa que unas
sustancias son adsorbidas ms que otras y, por consiguiente, la liberacin de las
sustancias de las manchas variar de una sustancia a otra. Esto contribuye de
nuevo a la separacin. Mientras que se va realizando el cromatograma, las
sustancias mas fuertemente adsorvidas se van quedando atrs, mientras que las
adsorvidas con menos fuerza avanzan hacia el frente.
Reparto:
La cormatografia se basa, en una medida considerable, en la presencia de dos
fases liquidas individualizadas. Una de ellas es la corriente del disolvente
circulando por el papel de filtro. La otra es la fase acuosa contenida en el mismo
papel de filtro. Una hoja de papel de filtro aparentemente seca contiene entre un 6
y 12% de agua firmemente adherida a la celulosa. Aqu es donde entra en funcin
el reparto.
Cuando una sustancia que es soluble en dos disolventes no mezclados es
expuesta al mismo tiempo a ambos, se repartir entre ellos. La cantidad que se
encuentre en cada disolvente depender de la relativa solubilidad del soluto en
cada uno. El grado de reparto, una vez conseguido el equilibrio, se llama
coeficiente de reparto o razon de distribucin.
Constante Rf:
El ltimo punto alcanzado por el disolvente en su avance se denomina frente del
disolvente. Puede usarse como punto de referencia para expresar las distancias
relativas recorridas por las diferentes sustancias en un cromatograma. El smbolo
utilizado para designar esta distancia relativa es Rf y se define mediante:
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distancia recorrida por el compuesto desde el origen
Rf =
Distancia del origen al frente del disolvente
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c) Anlisis por elucin.- Despus de fijar los componentes en la parte superior
se pasa un disolvente puro que no se adsorbe. Los componentes van avanzando
por la columna dependiendo de la fuerza con que son adsorbidos; cada uno de los
cuales es distribuido en una pequea zona. Si la columna es suficientemente larga
y los valores de Rf difieren bastante, se puede lograr la separacin de mezclas
bastante complejas. En la Fig. VIII-12 se muestra un cromatograma desarrollado
por este mtodo. Cada componente puede ser recogido y analizado a la salida de
la columna.
Adsorbente y eluyentes
Son muchos los slidos que se han utilizado como fase estacionaria en
cromatografa de adsorcin. Los ms importantes son almina, silicato de
aluminio, silicagel, xido, silicato y carbonato de magnesio, xido, carbonato y
fosfato de calcio, como inorgnicos; y carbn, almidn y azcares como orgnicos.
Normalmente deben ser sometidos a un proceso trmico de activacin superficial
antes de su utilizacin.
Como eluyentes se utilizan agua, alcoholes, cetonas, steres, cloroformo,
tetracloruro de carbono, etc. Su capacidad de elucin depende de su polaridad,
del absorbente y de las especies a eluir.
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molculas de mayor tamao pasarn a travs del mismo, con lo que, en principio,
se origina una separacin de molculas de acuerdo con su diferente tamao.
El fenmeno puede considerarse como una filtracin a travs de un tamiz
molecular y por eso a esta tcnica se la llama tambin cromatografa con tamiz
molecular (ctm); as mismo se la ha denominado, Penetracin sobre gel,
exclusin molecular y tamizado molecular.
Electroforesis
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soporte (que deben atenuarse en lo posible), del voltaje aplicado y de la intensidad
de corriente.
CROMATOGRAFIA DE GASES
INSTRUMENTACION
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DETECTORES: son muchos tipos de detectores, estos actan siempre por
comparacin de alguna propiedad fsica o quimica (densidad, calor de combustin,
etc.) del gas portador solo (antes de la introduccin de la muestra) y de la mezcla
de gas portados y componentes de problemas. Los detectores se diferencian
principalmente por su selectividad y sensibilidad, por destruir o no la muestra y por
ser integrales o diferenciales, los primeros miden continuamente la muestra
acumulada desde el principio del analisis y los segundos miden concentraciones
instantneas. Se utilizan ms los detectores diferenciales.
V r = tr F
APLICACIONES
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En las cromatografas clsicas, en las que la fase mvil es un lquido que fluye a
traves de un slido por el efecto de la gravedad para alcanzar alta resolucin seria
necesario emplear columnas excesivamente largas, lo que se traducira en un
desarrollo muy lento de los cromatogramas.
Estos inconvenientes se han resuelto con la cromatografia de alta resolucin, en la
que se trabaja con pequeas columnas, muy empaquetadas y forzando el paso de
la fase mvil mediante elevadas presiones, con lo que se consiguen separaciones
muy efectivas en un plazo muy corto de tiempo.
Dependiendo de la fase estacionaria, el mecanismo de separacin puede ser
reparto, adsorcin, tamao molecular (geles) e incluso cambio ionico, aunque los
mtodos mas utilizados estn basados en reparto y adsorcin.
El esquema fundamental de un cromatografo de alta resolucin esta constituido
por un deposito y un dispositivo de bombeo de la fase mvil que opera a elevada
presin (hasta 500 atm.), un sistema de inyeccin de la muestra, columnas
resistentes, generalmente e acero inoxidable, rellenas de fase estacionaria, un
detector y un sistema de registro grfico. La columna y los detectores van
introducidos en termostatos.
Los detectores ms utilizados en esta tcnica estn basados en absorciometria
UV y en medida de ndices de refraccin, siendo los cromatogramas obtenidos
semejantes a los de cromatografia gaseosa con detector diferencial.
APLICACIONES
1. Concentracin de trazas
2. Separacin de iones interferentes en analisis clsico
3. Separaciones de iones de caractersticas similares
4. Desmineralizacin del agua
5. Preparacin de disoluciones patrn
6. Disolucin de sustancias insolubles.
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CROMATOGRAFIA EN COLUMNA CERRADA
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
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