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Familiarizacin con
ChemStation
Familiarizacin con Agilent ChemStation
Agilent Technologies
Avisos
Agilent Technologies, Inc. 2004, Garanta Avisos de seguridad
2005-2009
El material contenido en este docu-
No se permite la reproduccin de parte
mento se proporciona "tal como es" PRECAUCIN
alguna de este manual bajo cualquier
y est sujeto a modificaciones, sin
forma ni por cualquier medio (incluyendo su
previo aviso, en ediciones futuras. Un aviso de PRECAUCIN indica
almacenamiento y recuperacin electrnic-
Adems, hasta el mximo permitido un peligro. Llama la atencin
os y la traduccin a idiomas extranjeros) sin
el consentimiento previo por escrito de Agi- por la ley aplicable, Agilent rechaza sobre un procedimiento de ope-
lent Technologies, Inc. segn lo estipulado cualquier garanta, expresa o racin, una prctica o similar que,
por las leyes de derechos de autor esta- implcita, en relacin con este
manual y con cualquier informacin si no se realizan correctamente o
dounidenses e internacionales.
contenida en el mismo, incluyendo, no se ponen en prctica, pueden
Nmero de referencia pero no limitado a, las garantas provocar daos en el producto
del manual: implcitas de comercializacin y o prdida de datos importantes.
adecuacin a un fin determinado.
G2070-95126 En ningn caso Agilent ser respons- No avance ms all de un aviso
able de los errores o de los daos de PRECAUCIN hasta que se
Edicin incidentales o consecuentes relacio- entiendan y se cumplan comple-
07/09 nados con el suministro, utilizacin tamente las condiciones indica-
o uso de este documento o de cual-
Impreso en Alemania quier informacin contenida en el das.
Agilent Technologies mismo. En el caso que Agilent y el
Hewlett-Packard-Strasse 8 usuario tengan un acuerdo escrito
76337 Waldbronn separado con condiciones de garanta ADVERTENCIA
que cubran el material de este docu- Un aviso de ADVERTENCIA
mento y que estn en conflicto con
estas condiciones, prevalecern las indica un peligro. Llama la aten-
condiciones de garanta del acuerdo cin sobre un procedimiento de
separado. operacin, una prctica o simi-
lar que, si no se realizan correc-
Revisin de software Licencias sobre la tecnologa
tamente o no se ponen en
El hardware y/o software descritos
Esta gua es vlida para las revisiones
en este documento se suministran
prctica, pueden provocar
B.04.xx del software Agilent ChemStation, daos personales o la muerte.
bajo una licencia y pueden utilizarse
donde xx hace referencia a revisiones
menores del software que no afectan a la
o copiarse nicamente de acuerdo No avance ms all de un aviso
con las condiciones de tal licencia. de ADVERTENCIA hasta que se
exactitud tcnica de esta gua.
entiendan y se cumplan comple-
tamente las condiciones indica-
das.
En esta gua
2 Mtodos
En este captulo se describe el concepto de mtodos y su funcionamiento.
3 Adquisicin de datos
En este captulo se describen los conceptos de adquisicin de datos, ficheros
de datos y libro de registro, entre otros.
4 Integracin
En este captulo se describen los conceptos de integracin de los algoritmos de
integracin de ChemStation. Describe el algoritmo de integracin, la integra-
cin y la integracin manual.
5 Cuantificacin
En este captulo se describe cmo ChemStation lleva a cabo la cuantificacin.
Proporciona detalles sobre los clculos de % de rea y % de altura, el clculo
por estndar externo o ESTD (External Standard), el clculo de % Norm, el cl-
culo por estndar interno o ISTD (Internal Standard) y la cuantificacin de
picos no identificados.
6 Identificacin de picos
En este captulo se describen los conceptos de identificacin de picos.
7 Calibracin
En este captulo se describe la calibracin de ChemStation.
8 Automatizacin
En este captulo se describen los conceptos de automatizacin. Se explica
cmo utilizar secuencias en ChemStation, qu ocurre cuando se analiza una
secuencia y cmo personalizar secuencias.
Contenido
2 Mtodos 43
Definicin de mtodo 45
Partes de un mtodo 46
Estado de los mtodos 49
Creacin de mtodos 51
Edicin de mtodos 52
Estructura de los directorios de mtodos 54
Qu sucede cuando se ejecuta un mtodo? 55
Resumen de la operacin del mtodo 60
3 Adquisicin de datos 63
Definicin de la adquisicin de datos 64
Ficheros de datos 65
Monitores en lnea 67
Libro de registro 68
Informacin del estado 69
4 Integracin 71
Definicin de la integracin 73
Funcin de la integracin 74
Algoritmos de integracin de ChemStation 75
Introduccin 77
Definicin de trminos 82
Principio de funcionamiento 84
Reconocimiento de picos 85
Asignacin de la lnea base 95
Medida del rea de pico 108
Eventos de integracin 111
Integracin manual 117
5 Cuantificacin 121
Definicin de la cuantificacin 122
Clculos de cuantificacin 123
Factores de correccin 124
Procedimientos de clculo no calibrados 126
Procedimientos de clculo calibrados 127
Clculo ESTD 128
Clculo de % Norm 131
Clculo ISTD 132
7 Calibracin 151
Definicin de trminos 152
Tabla de calibracin 153
Curva de calibracin 154
Muestras desconocidas 156
Tipos de calibracin 157
Calibracin de grupo 164
Suma de picos 165
Recalibracin 166
8 Automatizacin 171
Definicin de la automatizacin 173
Definicin de una secuencia o plantilla de secuencia 174
Preferencias: ficha Secuencia 175
Parmetros de secuencia 177
Tabla de secuencias 178
Creacin de secuencias(Secuencias y plantillas de secuencias) 179
Uso de secuencias (secuencias y plantillas de secuencias) 181
Archivo de registro de secuencias 184
Qu ocurre cuando se analiza una secuencia? 185
Estructura del fichero de datos de la secuencia (Activar creacin de carpeta
nica) 187
Asignacin de nombres a ficheros de datos en una secuencia 188
Operacin postsecuencia 190
Recalibracin automtica 192
Especificacin de recalibraciones 193
Tipos de secuencia 196
Secuencias de calibracin explcita 197
Secuencias de calibracin cclicas de un nico nivel 198
Secuencias de calibracin cclicas multinivel 199
Calibraciones explcitas y cclicas juntas 203
Secuencias de calibracin cclica con agrupamiento 206
Secuencias de recalibracin cclica con mltiples viales que contienen la misma
dilucin de un estndar 210
1
Caractersticas de Agilent ChemStation
Descripcin general 11
Mdulos instrumentales adicionales 12
Mdulos de evaluacin de datos adicionales 12
Productos slo de evaluacin de datos 13
Hardware de ChemStation 14
Acerca del software de ChemStation 15
Sistema operativo 15
Mtodos y secuencias 15
Configuracin del sistema 15
Modelo de datos 16
Convenciones de los nombres de ficheros 16
Interfase de usuario de software 18
Adquisicin de datos 19
Anlisis de datos: presentacin 21
Anlisis de datos: integracin 22
Anlisis de datos: cuantificacin 22
Anlisis de datos: revisin de datos, reproceso de datos y revisin por
lotes 22
Anlisis de datos: informes estndar 23
Anlisis de datos: informes especializados 24
Utilidades y compatibilidades 27
Personalizacin 27
Automatizacin 27
Buenas prcticas de laboratorio 29
Instrument Control 33
Trabajo en red 33
Documentacin 34
Estructura de directorios de ChemStation 36
Agilent Technologies 9
1 Caractersticas de Agilent ChemStation
En esta gua
Panel de navegacin 40
Botones de navegacin 40
ChemStation Explorer 40
Descripcin general
ChemStations para los sistemas GC, LC, LC/MSD, CE, CE/MSD y A/D son sis-
temas de control instrumental, adquisicin de datos y evaluacin de datos
para
cromatgrafos de gases Agilent 7890A,
cromatgrafos de gases Agilent 6890N, 6890Plus y 6890A,
cromatgrafos de gases Agilent 6850,
cromatgrafo de gases 5890 Serie II,
mdulos y sistemas Agilent Serie 1100/1200 para LC,
LC/MSD Agilent Serie 1100,
LC/MSD Single Quad Agilent Serie 6100,
sistema de electroforesis capilar de Agilent 1600 (CE),
sistema de electroforesis capilar de Agilent 7100 (CE),
sistema CE/MS Agilent e
interfase analgico/digital de doble canal Agilent 35900E.
El software est diseado para equipos personales compatibles con IBM con
un sistema operativo Microsoft Windows XP Professional.
El software se vende como una ChemStation bsica de un solo instrumento
con cinco versiones. Todas las versiones incluyen adquisicin de datos, control
instrumental, anlisis de datos (integracin, cuantificacin e informes), auto-
matizacin y personalizacin para un instrumento analtico. Un instrumento
est definido como de ejecucin en una sola base de tiempo, pero puede reco-
pilar datos simultneamente de diferentes detectores. Las cinco versiones son:
ChemStation de un solo instrumento para sistemas de cromatografa de
gases (GC), referencia G2070BA
ChemStation de un solo instrumento para sistemas de cromatografa de
lquidos (LC), referencia G2170BA
ChemStation de un solo instrumento para sistemas de electroforesis capilar
(CE), referencia G1601BA
ChemStation de un solo instrumento para sistemas de cromatografa de lq-
uidos/detector selectivo de masas (LC/MSD), referencia G2710BA, y
Hardware de ChemStation
Sistema operativo
ChemStation requiere el sistema operativo Microsoft Windows XP Professio-
nal SP3 o Windows Vista Business SP1.
Los grficos de control de ChemStation requieren Microsoft Excel.
Mtodos y secuencias
El mtodo analtico describe completamente cmo se realiza una separacin
determinada. Contiene todos los parmetros para el control instrumental y la
adquisicin y evaluacin de datos, incluida la integracin, cuantificacin e
informes. El sistema se puede configurar para que adquiera los datos de varias
muestras con diferentes mtodos. El fichero de control de este tipo de opera-
cin se denomina secuencia, y contiene la informacin de cada muestra, refe-
rencias a los mtodos apropiados y especificaciones de recalibracin
automtica. Para obtener ms informacin sobre mtodos y secuencias, con-
sulte Automatizacin en la pgina 27 y el sistema de ayuda en lnea.
Modelo de datos
El software ChemStation est diseado sobre un modelo de datos basado en
una estructura de memoria denominada registro. Los registros son estructu-
ras multipropsito que pueden contener datos analticos y datos para infor-
macin bidimensional (por ejemplo, tiempo/intensidad) e informacin
tridimensional (por ejemplo, tiempo/intensidad/longitud de onda).
ChemStation proporciona los comandos y funciones para construir, expandir,
extraer y editar registros, siempre que no se alteren los datos primarios. Para
obtener ms informacin, consulte la Gua de programacin de macros dis-
ponible como ayuda en lnea.
En los tests realizados para validar las convenciones de los nombres de ficheros se utilizan
N O TA equipos con sistema operativo en ingls, japons y chino. Agilent no puede garantizar el
soporte de sistemas operativos que no sean en ingls y sus caracteres especiales.
Todos los mensajes del sistema de informes de los libros de registro de ChemS-
tation en formato ampliado y las cadenas de informacin se imprimen en
varias lneas. En determinados informes, por ejemplo el informe de secuencia,
los nombres de ficheros pueden aparecer truncados para que encaje toda la
informacin en la plantilla de informe.
Adquisicin de datos
En la pantalla se monitoriza y se actualiza constantemente el estado de los ins-
trumentos, adems del tiempo de anlisis transcurrido, tanto cuando el soft-
ware est en una ventana visible como cuando es un icono. Las transacciones
que se producen durante el anlisis, incluidos los errores y las condiciones del
instrumento al principio y al final del anlisis, se registran en el libro de regis-
tro del sistema y con cada fichero de datos se guarda un extracto del mismo.
Con cada fichero de datos se pueden guardar las condiciones del instrumento,
por ejemplo, flujo, temperatura, presin y composicin del disolvente en el
caso de cromatgrafos de lquidos. Estos parmetros del instrumento se pue-
den mostrar y trazar para confirmar la calidad de cada anlisis. La naturaleza
exacta de los parmetros registrados depende tanto de la tcnica como de la
capacidad del instrumento configurado.
Se puede usar una o varias ventanas para monitorizar en tiempo real los datos
que el instrumento est adquiriendo. Los datos se muestran con unidades de
medida reales como mAU, voltios, grados o bar. Cada ventana puede mostrar
superpuestas varias seales de cromatografa o electroferografa o parmetros
de instrumentos, por ejemplo, la presin. La configuracin predeterminada de
la pantalla se puede ajustar y el sistema la recuerda para que los usuarios pue-
dan establecer su propia configuracin como predeterminada del instru-
mento. La ventana tiene funcin de zoom y se puede usar el cursor para
mostrar la respuesta de una seal determinada en cualquier momento del
tiempo.
Durante un anlisis, se pueden usar todas las funciones de ChemStation
mediante la copia fuera de lnea. Mientras se realiza la adquisicin, la parte de
anlisis de datos de la sesin fuera de lnea de un instrumento no es accesible
y la revisin de los datos hay que realizarla en la copia fuera de lnea.
Los usuarios que desean comenzar el proceso de datos antes de terminar el
anlisis disponen de una funcin de instantnea. La instantnea hay que
tomarla en la copia fuera de lnea de las sesiones del instrumento y se muestra
inmediatamente para su revisin.
El diseo de las ventanas de informacin de seal y estado, incluidos los com-
ponentes del diagrama esquemtico de la interfase del instrumento, se guarda
automticamente.
Para obtener ms informacin sobre adquisicin de datos, consulte Adqui-
sicin de datos en la pgina 63 y el sistema de ayuda en lnea.
Informes personalizados
ChemStation incluye una ventana de diseo de informes personalizados para
aquellos usuarios que desean definir el contenido exacto de sus informes. El
usuario define grficamente un diseo de informe que puede incluir informa-
cin general sobre la muestra, informacin sobre seales, integracin y resul-
tado analtico cuantitativo. Se pueden definir los elementos individuales,
como el texto, las tablas y los grficos, organizarlos en secciones informativas
y ajustar grficamente su posicin relativa y la orientacin de cada elemento
definido. Se pueden aadir, eliminar, reordenar y anidar las secciones indivi-
duales.
El usuario puede definir cabeceras y pies de pgina para que aparezcan en
cada pgina, marcas de hora del informe y numeracin de pgina con el for-
mato page x of y. La informacin incluida en el informe puede ser cualquier
parmetro de ChemStation o definido por el usuario.
Una vez diseado el informe, se puede asociar a un mtodo por defecto para
que sea el formato de informe por defecto para ese tipo por defecto de anlisis.
Los informes personalizados se pueden enviar a la pantalla, a la impresora y a
un fichero. Los informes en pantalla contienen grficos.
Para obtener ms informacin sobre el diseo de informes, consulte el sistema
de ayuda en lnea.
Utilidades y compatibilidades
General
ChemStation puede importar y exportar ficheros de datos con el formato de
cromatografa andi (Analytical Data Interchange) de la Analytical Instrument
Association (AIA), revisin 1.0, copyright 1992. Se admite la importacin de
datos en el nivel de conformidad uno (informacin de muestra y datos de
seal) y la exportacin de datos en el nivel de conformidad dos (informacin
de muestras, datos de seal y resultados de integracin).
ChemStation incluye comandos y funciones para admitir la norma de inter-
cambio dinmico de datos (DDE) de Microsoft Windows, tanto como cliente
DDE como servidor DDE. Se incluyen comandos para establecer y terminar las
conexiones, transferir informacin en ambas direcciones y ejecutar funciones
remotas.
Personalizacin
ChemStation se puede personalizar mediante un eficaz conjunto de comandos.
Estos comandos se pueden agrupar para ejecutar automticamente una fun-
cin especfica; este grupo se denomina macro. Los usuarios que escriben
macros pueden definir sus propias variables, crear constructos condicionales
o de bucle, realizar E/S fsicas como el tratamiento de ficheros y la interaccin
de usuarios, anidar sus macros y programar e intercambiar datos con otras
aplicaciones de MS-DOS o Microsoft Windows.
Para obtener ms informacin sobre la personalizacin, consulte la Gua de
programacin de macros disponible como ayuda en lnea.
Automatizacin
ChemStation puede ejecutar secuencias multimtodo.
El grupo de parmetros de secuencia puede definirse para utilizar ficheros
generados automticamente o numerados secuencialmente, con un prefijo de
hasta quince caracteres. El usuario puede seleccionar si desea realizar anlisis
completos o reprocesar los datos nicamente de secuencias. Tambin puede
Proceso de desarrollo
El certificado de validacin entregado con cada paquete de software docu-
menta las fases de desarrollo y pruebas del software realizados como parte del
proceso de desarrollo. El proceso de desarrollo est registrado segn la norma
de calidad ISO 9001. Est documentado, junto con los protocolos de revalida-
cin in situ, en el Cuaderno de validacin de Agilent ChemStation para LC.
Instrument Control
Trabajo en red
ChemStation dispone del software LanManager de Agilent y se ha probado su
compatibilidad con los productos de Microsoft Windows XP Professional y
Microsoft Windows Vista Business basados en la especificacin IEEE 802.3
CSMA/CD. Debera ser compatible con cualquier software de red compatible
con las normas de programacin de Microsoft Windows.
Estos productos permiten a ChemStation compartir dispositivos fsicos, por
ejemplo, plotters e impresoras con otros ordenadores del laboratorio, adems
de compartir informacin como ficheros de datos y mtodos.
Cliente/Servidor
El software ChemStation se puede instalar en un servidor de red apropiado y
descargarse en los PC cliente cuando sea necesario. La configuracin especfi-
ca de cada cliente garantiza un entorno apropiado para las diferentes tcnicas
y usuarios individuales, mientras que la instalacin centralizada del software
evita tener que gestionar muchas copias de la misma instalacin de ChemSta-
tion en un entorno de trabajo.
Documentacin
Instalacin y aprendizaje
Cada producto de software ChemStation se entrega con un manual de instala-
cin que incluye detalles sobre los pasos clave de los requisitos de software y
hardware del PC, la instalacin de la interfase instrumental, instalacin de
ChemStation y cualificacin de la instalacin. El manual de instalacin es
especfico de la configuracin adquirida y puede incluir solucin de proble-
mas, registros del sistema y consejos sobre el mantenimiento del sistema.
Personalizacin
Los usuarios avanzados que desean personalizar el funcionamiento de ChemS-
tation o que desean incorporar funciones adicionales, pueden hacerlo escri-
biendo macros.
El manual de referencia principal, Gua de programacin de macros, disponi-
ble como ayuda en lnea, contiene un amplio conjunto de ejemplos funcionales
adems de una descripcin completa de los tipos y estructuras de datos inter-
nos.
El fichero de ayuda de comandos, al que se accede directamente desde el
men Ayuda o el cuadro de dilogo Mostrar comando de ChemStation, es la
referencia funcional del programador. Contiene explicaciones sobre la sintaxis
y los parmetros, con macros de ejemplo que ilustran el uso de muchos de sus
comandos. Como estn en lnea, el usuario puede copiar los ejemplos y la sin-
taxis del comando directamente en sus propios ficheros fuente de macros.
8=:B(' G:EHINA:
8DG: E>8IJG:H
AVc\jV\Z
]ZaeZcj
&%')
-%%
IddaWVgHjeedgi;^aZh
A8
<8
8:
BH
>FI
9G>K:GH AVc\jV\Z
-%%
IddaWVgHjeedgi;^aZh
<8>
GVe^Y
I:BE
& 96I6 9:BD
B:I=D9H 9:BD
H:FJ:C8:
K:G>;N
heZXa^Wh
Figura 1 Estructura de directorios de ChemStation
Directorio Contents
Directorio Contents
Panel de navegacin
Botones de navegacin
Los botones de navegacin permiten cambiar la ventana de ChemStation
haciendo clic en el botn de navegacin especfico. La seccin botn de nave-
gacin se puede minimizar, expandir y reorganizar.
ChemStation Explorer
El contenido del panel de navegacin depende de la ventana. En las ventanas
Mtodo y Control de anlisis, Anlisis de datos y Diseo del informe, ChemS-
tation Explorer permite navegar a los diferentes elementos de ChemStation.
Por defecto, estos elementos de datos, mtodos y secuencias se basan en las
opciones del editor de configuracin. Las ubicaciones de estos elementos se
pueden expandir y se pueden especificar nuevos nodos para mtodos, secuen-
cias y ubicacin de datos mediante la opcin Preferencias del men.
2
Mtodos
Definicin de mtodo 45
Partes de un mtodo 46
Informacin del mtodo 46
Control instrumental 46
Anlisis de datos 46
Lista de control del anlisis 47
Estado de los mtodos 49
Mtodos almacenados 49
Mtodo actual 50
Creacin de mtodos 51
Edicin de mtodos 52
Partes editables del mtodo 52
Estructura de los directorios de mtodos 54
Qu sucede cuando se ejecuta un mtodo? 55
Operacin del mtodo 55
Macro o comando de ejecucin previa(Lista de control del
anlisis) 56
Adquisicin de datos(Lista de control del anlisis) 56
Anlisis de datos(Lista de control del anlisis) 57
Anlisis personalizado de datos(Lista de control del anlisis) 58
Salvar datos GLP(Lista de control del anlisis) 58
Macro o comando post-anlisis(Lista de control del anlisis) 59
Guardar una copia del mtodo con los datos(Lista de control del
anlisis) 59
Guardar una copia del mtodo como DA.M con los datos (ChemStation
por defecto) 59
Resumen de la operacin del mtodo 60
Agilent Technologies 43
2 Mtodos
Panel de navegacin
Definicin de mtodo
Partes de un mtodo
Control instrumental
Define los parmetros que controlan el instrumento o sus componentes. Con
un instrumento LC, los parmetros (composicin de la fase mvil, velocidad
de flujo, volumen de inyeccin, longitud de onda del detector, etc.) controlan
la bomba, el inyector y el detector. Con un instrumento GC, los parmetros
(temperatura del inyector, presin del inyector, ajuste del flujo de la columna
empaquetada, etc.) controlan el instrumento.
Anlisis de datos
Define los parmetros que controlan el procesamiento de los datos.
Detalles de la seal
Define las seales y sus propiedades usadas para evaluacin de datos.
Eventos de integracin
Define los eventos programados que tendrn lugar en momentos de retencin
o migracin especficos en un cromatograma o electroferograma. Estos even-
tos programados se pueden usar para cambiar la manera en que se integra una
seal.
Identificacin de picos
Define los parmetros del proceso de datos asociados a la identificacin de
picos en el cromatograma o electroferograma.
Cuantificacin de picos
Define los parmetros de proceso de datos que afectan a los clculos de cuan-
tificacin que determinan la cantidad o concentracin del componente de la
muestra correspondiente a cada pico.
Calibracin y recalibracin
Define los parmetros de proceso de datos que afectan a la calibracin y la fre-
cuencia con que sta se realiza.
Campos personalizados
Define las propiedades de campos personalizados relacionados de muestra o
compuestos disponibles para el mtodo. Estos campos permiten aadir infor-
macin personalizada a una muestra o compuesto en una muestra.
Informe
Define el formato del informe que se imprime despus de un anlisis.
Mtodos almacenados
Son mtodos almacenados en el disco del equipo. Los mtodos almacenados
tienen un nombre compuesto por hasta cuarenta caracteres alfanumricos
seguidos de la extensin .M. Los mtodos se guardan en tres ubicaciones posi-
bles de ChemStation:
El mtodo maestro se guarda en un subdirectorio de mtodos, disponible en
el nodo Mtodos de ChemStation Explorer, y no est directamente asociado
a ningn contenedor de datos.
Cuando se ejecuta una secuencia (mediante la opcin Unique Folder Creation
ON (consulte Preferencias: ficha Secuencia en la pgina 175), se almace-
nan las copias de todos los mtodos maestros utilizados en el contenedor de
datos de secuencia junto con los ficheros de datos de secuencia. Estos mt-
odos estn directamente vinculados a la secuencia y tambin se usan
cuando se reprocesa la secuencia. Los cambios realizados en estos mtodos
no se propagan a los mtodos maestros. Los cambios se propagan al mtodo
del contenedor de secuencias, as como a los mtodos individuales (DA.M)
cuando se reprocesa la secuencia. Si, a continuacin, desea utilizar el mto-
do del contenedor de secuencias actualizado para la adquisicin de datos,
debe realizar lo siguiente
copiar este mtodo del contenedor de datos de secuencias a una de las
rutas de mtodos definidas, o bien
utilizar la opcin save as para guardar el mtodo actualizado como mt-
odo maestro.
El mtodo nuevo o actualizado estar disponible en ChemStation Explo-
rer, en la ventana de mtodos, como mtodo maestro.
Adems, con los ficheros de datos se guardan dos copias del mtodo utili-
zado para analizar una muestra: los mtodos individuales de ficheros de
datos ACQ.M y DA.M ACQ.M son el mtodo de adquisicin, DA.M es el mt-
odo de anlisis de datos. DA.M es el mtodo que se carga con los ficheros de
datos si est seleccionada la casilla de verificacin Load DA method from data
file en la ficha Signal Options del cuadro de dilogo Preferences. Los cambios
de este mtodo (por ejemplo, eventos de integraciones programados) son
especficos del fichero de datos asociado y no se propagan al mtodo de
secuencias ni al mtodo maestro.
La tabla de navegacin proporciona una posibilidad de actualizacin para
mtodos individuales y mtodos de secuencia a su secuencia o mtodo maes-
tro correspondiente haciendo clic en el botn derecho del ratn en el elemento
de lnea del mtodo. Al ejecutar la Update Master Method o la Update Sequence
Method, se copian los parmetros del anlisis de datos del mtodo seleccio-
nado al mtodo maestro o de secuencia correspondiente. La actualizacin
automtica se reflejar en el historial del mtodo objetivo.
Mtodo actual
Cuando se vuelve a llamar a un mtodo almacenado en el disco, se convierte
en el mtodo actual. Siempre hay un mtodo actual en la memoria. Cuando se
inicia ChemStation por primera vez, el mtodo por defecto proporcionado por
Agilent Technologies siempre se carga como parte del proceso de arranque.
Por ejemplo, podra ser uno de los siguientes:
DEF_LC.M para un instrumento LC
DEF_GC.M para un instrumento GC
DEF_CE.M para un instrumento CE
Se coloca en la memoria una copia del mtodo por defecto que se convierte en
el mtodo actual. En cualquier momento se puede cargar un mtodo diferente
que se convierte en el mtodo actual.
Creacin de mtodos
Cuando cargue un mtodo para analizar una muestra, utilice siempre un mtodo maestro
N O TA de un nodo de mtodos de ChemStation Explorer. Evite utilizar mtodos de secuencias (de
un contenedor de datos de secuencias) o mtodos individuales asociados a ficheros de
datos (ACQ.M o DA.M).
Edicin de mtodos
Para editar un mtodo se puede usar la opcin Editar el mtodo entero del
men Mtodo. Se le guiar por todos los cuadros de dilogo del mtodo y, al
final, podr guardarlo. Este proceso se muestra a continuacin:
BidYdZcY^hXd
8Vg\VgbidYd
:abidYdhZXVg\VZcbZbdg^VnhZXdck^ZgiZZcZabidYdVXijVa
HZaZXX^dcZ:Y^iVgZabidYdZciZgdZcZabZcBidYd
:Y^iVgbidYd
<jVgYVgbidYdPXdbdR
<jVgYVgXdccdbWgZcjZkd <jVgYVgXdccdbWgZcjZkd
HZXgZVjcbidYdcjZkd HdWgZhXg^WZZabidYdVXijVa
ZcZaY^hXd
Figura 2 Edicin de mtodo
El cuadro de dilogo Lista de control del anlisis especifica las partes del mt-
odo que se van a ejecutar al iniciar un anlisis.
En Lista de control del anlisis hay ocho partes:
macro o comando de ejecucin previa,
adquisicin de datos,
anlisis de datos estndar,
mtodo de anlisis para una segunda seal (slo GC),
anlisis de datos personalizado,
guardar los datos GLP,
macro o comando post-anlisis, y
guardar una copia del mtodo con los datos (RUN.M).
Cuando se realiza un anlisis, se ejecutan las partes del mtodo especificadas
en el cuadro de dilogo Lista de control del anlisis.
Tenga en cuenta que en el caso del modo "Desactivar creacin de carpeta nica" no se
N O TA generan ACQ.M y DA.M. Para obtener ms informacin, consulte Preferencias: ficha
Secuencia en la pgina 175.
<jVgYVgGJC#BdeX^dcVa <jVgYVg96#B
:hiVYdYZ8]ZbHiVi^dc >cnZXX^c <jVgYVg68F#BedgYZ[ZXid edgYZ[ZXid
BVXgdedhiZg^dgVaVc{a^h^h
C^kZaZhYZZhiVYd
:kVajVX^cYZYVidh
>cnZXX^cn[jcX^dcVb^ZcidYZa^chigjbZcid
9Vidheg^bVg^dh
[^X]ZgdXZggVYd
BVXgdegZk^VVaVc{a^h^h
EgZk^dVaVc{a^h^h
BidYdYZVc{a^h^h^c^X^VYdZcZabZcYZ8]ZbHiVi^dc
I^Zbed
Integracin
Los objetos del cromatograma o electroferograma de la seal se integran
segn se indica en el cuadro de dilogo Eventos de integracin.
Se determinan el inicio y el mximo del pico, el tiempo de retencin o
migracin y el final del pico.
Se definen lneas base debajo de cada pico para determinar la altura y el
rea final del pico.
Los resultados de integracin se incluyen en la lista Resultados de integra-
cin.
Imprimir informe
Se genera un informe con la identidad y cantidad de los componentes detecta-
dos en el anlisis.
Estos datos se guardan slo si la funcin Save GLP Data est activada; para
activarla, seleccione la casilla de verificacin en Lista de control del anlisis.
Los datos GLP se pueden revisar, pero no editar, en el men Anlisis de datos
de ChemStation.
Guardar una copia del mtodo con los datos(Lista de control del
anlisis)
Se realiza despus de la adquisicin de los datos y slo si la opcin Adquisi-
cin de datos est seleccionada en Lista de control del anlisis. Copia el mt-
odo actual al directorio de datos, denominado RUN.M
Guardar una copia del mtodo como DA.M con los datos
(ChemStation por defecto)
Segn los elementos marcados en la Run Time Checklist, se guarda como DA.M
una copia del mtodo actual ejecutado junto con el fichero de datos. Esto se
realiza con el anlisis del ltimo elemento marcado en la Run Time Checklist,
normalmente despus del Standard Data Analysis.
9 Se guarda una copia del mtodo con los datos (DA.M) - ChemStation por
defecto
3
Adquisicin de datos
Definicin de la adquisicin de datos 64
Ficheros de datos 65
Monitores en lnea 67
Monitor de seales en lnea 67
Monitor de espectros en lnea 67
Libro de registro 68
Informacin del estado 69
Estado de ChemStation 69
Barra de estado 69
Diagrama del sistema 70
Agilent Technologies 63
3 Adquisicin de datos
Definicin de la adquisicin de datos
Ficheros de datos
Nombre Description
*.UV Ficheros de datos espectrales UV. El nombre del fichero est compuesto por
el tipo de detector y el nmero de dispositivo (slo con detectores de
diodo-array y de fluorescencia).
LCDIAG.REG Slo para LC. Contiene las curvas de los instrumentos (gradientes,
temperatura, presin, etc.), el volumen de la inyeccin y la descripcin de los
solventes.
ACQRES.REG Contiene informacin sobre las columnas. Para GC, tambin contiene el
volumen de la inyeccin.
Nombre Description
GLPSAVE.REG Parte del fichero de datos cuando se especifica Save GLP Data.
Monitores en lnea
Libro de registro
El libro de registro muestra los mensajes que genera el sistema analtico. Estos
mensajes pueden ser de error, del sistema o de eventos de un mdulo. El libro
de registro registra estos eventos aunque no se hayan mostrado. Para obtener
ms informacin acerca de un evento del libro de registro, haga doble clic en la
lnea correspondiente para mostrar un texto de ayuda descriptivo.
Estado de ChemStation
La ventana ChemStation Status muestra un resumen del estado del software
ChemStation.
Cuando se ejecuta un solo anlisis:
la primera lnea de la ventana ChemStation Status muestra el anlisis en
curso,
la segunda lnea de la ventana muestra el estado del mtodo actual, y
la tercera lnea muestra el nombre del fichero de datos primarios adems
del tiempo de anlisis en minutos (para los instrumentos GC, tambin se
muestran los ficheros de los inyectores delantero y posterior).
La ventana Instrument Status ofrece informacin sobre el estado de los mdu-
los instrumentales y detectores. Muestra el estado de cada componente y las
condiciones actuales cuando corresponda, por ejemplo, presin, gradiente y
flujo.
Barra de estado
La ventana Mtodo y Control de anlisis de la interfase grfica del usuario del
sistema ChemStation est compuesta por barras de herramientas y barras de
estado. La barra de estado contiene un campo de estado del sistema e informa-
cin sobre el mtodo y la secuencia actualmente cargados. Si se modificaron
despus de cargarlos, aparecen marcados con una rueda dentada amarilla.
Para el mdulo Agilent Serie 1100/1200 para LC, el smbolo EMF amarillo
recuerda al usuario que se han excedido los lmites de utilizacin establecidos
para consumibles (por ejemplo, la lmpara).
Color Status
amarillo no preparado
verde listo
azul en ejecucin
rojo error
4
Integracin
Definicin de la integracin 73
Funcin de la integracin 74
Algoritmos de integracin de ChemStation 75
Capacidades del integrador 75
Introduccin 77
Definicin de la lnea base inicial 78
Seguimiento de la lnea base 78
Asignacin de la lnea base 79
Identificacin de los puntos cardinales de un pico 80
Definicin de trminos 82
Puntos cardinales 82
Pico de disolvente 82
Hombro (frontal, trasero) 83
Pendiente 83
Principio de funcionamiento 84
Reconocimiento de picos 85
Anchura de pico 85
Filtros de reconocimiento de picos 86
Agrupamiento 88
El algoritmo de reconocimiento de picos 89
Clculos no gaussianos 92
Asignacin de la lnea base 95
Construccin de la lnea base por defecto 95
Inicio de la lnea base 96
Marcas de sealizacin 96
Final de la lnea base 96
Penetracin de la lnea base 97
Agilent Technologies 71
4 Integracin
Informacin del estado
Relacin pico/valle 98
Divisin tangencial 100
Picos no asignados 105
Cdigos de separacin de picos 106
Medida del rea de pico 108
Determinacin del rea 108
Unidades y factores de conversin 110
Eventos de integracin 111
Eventos iniciales 111
Eventos programados 115
Integracin automtica 115
Integracin manual 117
Definicin de la integracin
Funcin de la integracin
Introduccin
6cX]jgVYZe^XdZheZgVYV
'I
'I
'I gZhiVWaZX^b^ZcidYZaVacZVWVhZ
'I
Al comienzo del anlisis, el valor del parmetro de lnea base se utiliza como
lnea base inicial. Si no hay un valor fijado, se utiliza el primer punto de datos.
El punto de lnea base se restablece entonces peridicamente de acuerdo con
la siguiente frmula:
Inicio
1 Pendiente y curvatura dentro del lmite: prosigue el seguimiento de la lnea
base.
2 Pendiente y curvatura por encima del lmite: posibilidad de un pico.
3 La pendiente permanece por encima del lmite: se reconoce un pico, se
define el punto cardinal correspondiente.
4 La curvatura se hace negativa: punto de inflexin frontal.
Mximo
1 La pendiente pasa por cero y se hace negativa: mximo del pico, se define el
punto cardinal correspondiente.
2 La curvatura se hace positiva: punto de inflexin trasero.
Final
1 Pendiente y curvatura dentro del lmite: se aproxima el final del pico.
2 La pendiente y la curvatura se mantienen dentro del lmite: final del pico,
se define el punto cardinal correspondiente.
3 El integrador vuelve al modo de seguimiento de la lnea base.
Definicin de trminos
Puntos cardinales
b{m^bdYZae^Xd
ejcidYZ^c[aZm^c ejcidYZ^c[aZm^c
ejcidYZacZVWVhZ ejcidYZacZVWVhZ
XddgYZcVYV]dg^odciVa
YZi^ZbedigVchXjgg^Yd
XddgYZcVYVkZgi^XVaYZVaijgV
Los puntos cardinales son los puntos elegidos por el integrador para definir y
cuantificar un pico. Se designan como puntos cardinales y se graban los pun-
tos de lnea base, puntos de valle, mximos de pico y puntos de inflexin. A
cada punto cardinal le corresponde una coordenada horizontal de tiempo
transcurrido y una coordenada vertical de altura desde la lnea base, adems
de otros parmetros tales como tipo de pico, cdigos de separacin, valores de
inicio/final de picos potenciales y las correspondientes lecturas de altura,
rea y pendiente que el integrador utiliza para calcular las reas de pico.
Pico de disolvente
El pico de disolvente, generalmente un pico de gran tamao sin relevancia
analtica, no suele integrarse. No obstante, cuando hay pequeos picos de inte-
rs analtico con elucin cercana al pico de disolvente, por ejemplo en la cola
del mismo, es posible establecer condiciones de integracin especiales para
calcular sus reas corregidas teniendo en cuenta la contribucin de la cola del
pico de disolvente.
Pendiente
La pendiente de un pico, que denota el cambio de concentracin del compo-
nente en funcin del tiempo, se utiliza para determinar el inicio, el mximo y
el final del pico.
Principio de funcionamiento
EVg{bZigdh^c^X^VaZh
9Z[^c^X^cYZaV
acZVWVhZ^c^X^Va
>c^X^Va^oVX^c
HZ\j^b^ZcidngZhiVWaZ"
X^b^ZcidYZaVacZVWVhZ
>c^X^dYZa\gjedYZe^Xdh
HZ\j^b^ZcidYZaVacZVWVhZ
EVg{bZigdh
egd\gVbVYVh
>YZci^[^XVX^cYZaVh
XddgYZcVYVhYZe^Xd
9ZiZXX^cYZaV
acZVWVhZ
;^cYZa\gjedYZe^Xdh
9ZiZXX^cYZa\gjed
8dchigjXX^cYZ
acZVhWVhZ
9ZiZXX^c
h`^bbZghQmY*
6abVXZcVb^ZcidYZ 8VaXjaVgZhiVYhi^XVh
e^XdhZciVWaVYZe^Xdh YZe^Xd
:kVajVX^cYZa\gjed
Figura 6 Diagrama de flujo del integrador
Reconocimiento de picos
Anchura de pico
Durante la integracin, se calcula la anchura de pico a partir del rea y la
altura del pico:
Anchura = rea/Altura
o, si los puntos de inflexin estn disponibles, a partir de la anchura entre los
puntos de inflexin.
;h Gh
=[ =g
V& V' V( V)
i& i' i( i)
Figura 7 Clculo de la anchura de pico
Agrupamiento
El agrupamiento es el medio que el integrador utiliza para ensanchar conti-
nuamente los picos dentro del rango de efecto de los filtros de reconocimiento
de picos con el fin de mantener una buena selectividad.
Cuando los picos se ensanchan, el integrador no puede continuar aumentando
la anchura de pico de forma indefinida. Llegara un momento en que los picos
fueran tan anchos que no pudieran ser identificados por los filtros de recono-
cimiento. Para superar esa limitacin, el integrador agrupa los puntos de
datos entre s, estrechando en trminos prcticos el pico sin que el rea se vea
alterada.
Cuando se agrupan datos, los puntos de datos se agrupan en dos elevado a la
potencia de agrupamiento, o sea, sin agrupar = x1, agrupamiento realizado
una vez = x2, realizado dos veces = x4, etc.
El agrupamiento se realiza basndose en la velocidad de datos y la anchura de
pico. El integrador utiliza esos parmetros para fijar el factor de agrupa-
miento de modo que se obtenga el nmero de puntos de datos apropiado
Tabla 9 en la pgina 88.
El agrupamiento se realiza en potencias de dos en funcin de la anchura de
pico esperada u obtenida. El algoritmo de agrupamiento se resume a continua-
cin en Tabla 9 en la pgina 88.
6ggVcfjZ
i' i&
AcZVWVhZ
i(
i*
EZcY^ZciZVhXZcYZciZ
i)
i&& i&%
EZcY^ZciZYZhXZcYZciZ
i,
i- i+
:migVXX^cYZae^Xd
i.
6abVXZcVb^Zcid
YZae^Xd
Clculos no gaussianos
Picos solapados
Los picos solapados se producen cuando un pico nuevo comienza antes de
encontrar el final de otro pico. La figura ilustra cmo trata el integrador los
picos solapados.
EjcidYZkVaaZ
Hombros
Los hombros son picos no resueltos ubicados en el avance o el rastro de un
pico ms grande. Cuando hay un hombro presente, no existe un verdadero
valle en el sentido de una pendiente negativa seguida por otra positiva. Un
pico puede tener cualquier nmero de hombros frontales y/o traseros.
&*#**%
V
W
&*#)&%
&*#+.%
Los hombros se detectan a partir de la curvatura del pico, que viene dada por
la segunda derivada. Cuando la curvatura cae a cero, el integrador identifica
un punto de inflexin, como los puntos a y b en Figura 10 en la pgina 93.
Existe un posible hombro frontal cuando se detecta un segundo punto de
inflexin antes del mximo del pico. Si se confirma la presencia de un hom-
bro, el punto de inicio del mismo se fija en el punto de mxima curvatura
positiva previo al punto de inflexin.
BVgXVhYZhZVa^oVX^c
AcZVWVhZ
Figura 11 Construccin de la lnea base por defecto
Marcas de sealizacin
Las marcas de sealizacin identifican el inicio y el final de un pico. Sus posi-
ciones vienen determinadas por las horas de inicio y final de pico almacena-
das en la tabla de picos.
W
Figura 12 Penetracin de la lnea base
HZ\j^b^ZcidZhi{cYVg HZ\j^b^ZcidYZaVacZV
YZaVacZVYZWVhZ YZWVhZh^ceZcZigVX^dcZh
Figura 13 Seguimiento estndar de la lnea base y seguimiento de la lnea base (sin
penetraciones)
El seguimiento de la lnea base (sin penetraciones) no est disponible para los picos de
N O TA disolvente con sus hombros y picos secundarios.
Relacin pico/valle
Este parmetro especificado por el usuario forma parte del modo de segui-
miento avanzado de la lnea base. Se utiliza para decidir si dos picos que no
muestran separacin a nivel de la lnea base deben separarse utilizando una
lnea de cada vertical o una lnea base de valle. El integrador calcula la rela-
cin entre la altura corregida por la lnea base del menor de los picos y la
altura corregida por la lnea base del valle. Cuando la relacin pico a valle es
inferior al valor especificado por el usuario, se utiliza una lnea de cada verti-
cal; de lo contrario, se traza una lnea base desde la lnea base del inicio del
primer pico al valle y desde el valle a la lnea base del final del segundo pico
(comprese Figura 13 en la pgina 98 con Figura 14 en la pgina 99).
=& ='
=k
&-#*'. &-#*'.
&.#%+% &.#%+%
GZaVX^ce^Xd$kVaaZ GZaVX^ce^Xd$kVaaZ
^c[Zg^dgV hjeZg^dgV
kVadgZheZX^[^XVYdedgZajhjVg^d kVadgZheZX^[^XVYdedgZajhjVg^d
Divisin tangencial
La divisin tangencial es una forma de lnea base construida para picos que se
encuentran en las pendientes ascendente o descendente de otro pico. Cuando
est habilitada, hay cuatro modelos disponibles para el clculo de las reas de
pico adecuadas:
ajuste a una curva exponencial,
nueva divisin exponencial
divisin mediante lnea recta,
clculos de recta y exponencial combinados para obtener el mejor ajuste
(divisin estndar).
&)#'.+ &)#(*,
&)#&))
E^Xdeg^cX^eVa
&)#'.+ &)#(*,
E^XdhhZXjcYVg^dh
&)#&))
AcZVhYZXVYVkZgi^XVaZh
8jgkVYZY^k^h^cZmedcZcX^Va
AcZVWVhZYZae^Xdeg^cX^eVa
&)#'.+ &)#(*,
&)#&))
Divisiones estndar
El mtodo de clculo apropiado se elige para cada aplicacin particular; por
defecto, el mtodo elegido es una combinacin de clculos de curva exponen-
cial y lnea recta para obtener el mejor ajuste.
El paso de un clculo exponencial a uno lineal se realiza de modo que no haya
discontinuidades abruptas en las alturas o las reas.
Cuando la seal se encuentra apreciablemente por encima de la lnea base,
el clculo para ajustar la cola es exponencial.
Cuando la seal se encuentra en la zona de lnea base, el clculo para ajus-
tar la cola es una lnea recta.
Los clculos combinados se muestran como divisin exponencial o tangencial.
Criterios de divisin
Dos son los criterios que determinan si se va a utilizar una lnea de divisin
para calcular el rea de un pico secundario que eluye en el rastro de otro prin-
cipal:
relacin de alturas para divisin de cola
=e
=k =X
&(#.()
&)#'.+ &)#(*,
&)#&))
=W
=d
Id
6
8
8jgkVYZe^XdhZXjcYVg^d
XdggZ\^YV
La divisin de picos frontales se trata del mismo modo que la de picos de cola,
utilizando los mismos modelos de divisin.
Los criterios de divisin son los siguientes:
relacin de alturas para divisin frontal
relacin de altura con respecto al valle
La relacin de altura con respecto al valle tiene el mismo valor para divisiones
tanto de picos frontales como de picos de cola (vase la seccin Relacin de
altura con respecto al valle); la relacin de alturas para divisin frontal se cal-
cula del mismo modo que la relacin de alturas para divisin de cola (vase la
seccin Relacin de alturas para divisin de cola) pero puede tener un valor
diferente.
Picos no asignados
Con algunas construcciones de lnea base, hay pequeas reas que quedan por
encima de la lnea base y por debajo de la seal y que no forman parte de nin-
gn pico reconocido. Por lo general, estas reas ni se miden ni se muestran. Si
se habilita la funcin de picos no asignados, dichas reas se miden y se mues-
%#)-' %#-('
%#*-&
Caracteres 1 y 2
El primer carcter describe la lnea base al inicio del pico, mientras que el
segundo carcter describe la lnea base al final del pico.
B El pico se inici o se detuvo en la lnea base.
V El pico se inici o se detuvo con una cada vertical en un valle.
P El pico se inici o se detuvo estando la lnea base penetrada.
H El pico se inici o se detuvo en una lnea base horizontal forzada.
F El pico se inici o se detuvo en un punto forzado.
M El pico se integr manualmente.
U El pico no ha sido asignado.
Pueden aadirse asimismo sealizadores adicionales (en orden de prioridad):
Carcter 3
D El pico estaba distorsionado.
A La integracin fue abortada.
U Se produjo una condicin de "por debajo del rango".
O Se produjo una condicin de "por encima del rango".
Carcter 4
El cuarto carcter describe el tipo de pico:
S El pico es un pico de disolvente.
N El pico es un pico negativo.
+ El pico es un pico de rea sumada.
T Pico con divisin tangencial (divisin estndar).
X Pico con divisin tangencial (divisin con el modo exponencial antiguo).
E Pico con divisin tangencial (divisin con el nuevo modo exponencial).
m Pico definido por una lnea base manual.
n Pico negativo definido por una lnea base manual.
t Pico con divisin tangencial definido por una lnea base manual.
R El pico es un pico de disolvente recalculado.
f Pico definido por una tangente de hombro frontal.
b Pico definido por una tangente de hombro trasero.
F Pico definido por una cada vertical de hombro frontal.
B Pico definido por una cada vertical de hombro trasero.
U Pico no asignado.
77
Figura 24 Medida del rea para picos de lnea base a lnea base
para picos de valle a valle (VV), el rea por encima de la lnea base segmen-
tada con lneas de cada verticales trazadas a partir de las marcas de seal-
izacin, como se muestra en Figura 25 en la pgina 109,
KK
para picos tangenciales (T), el rea por encima de la lnea base restablecida,
para picos de disolvente (S), el rea por encima de la extrapolacin horizon-
tal desde el ltimo punto de lnea base encontrado y por debajo de la lnea
base restablecida asignada a picos tangenciales (T). Es posible que un pico
de disolvente produzca una elevacin de la seal demasiado lenta para el
reconocimiento del pico o que en medio del anlisis aparezca un grupo de
picos que el usuario considere que deben ser tratados como un disolvente
con una serie de picos montados. se suele ser el caso de un grupo de picos
solapados en el que el primer pico es mucho mayor que el resto. El trata-
miento ms simple, el de la lnea de cada vertical, exagerara los picos pos-
teriores al estar stos en realidad sobre la cola del primero. Forzando el
reconocimiento del primer pico como pico de disolvente, es posible dividir
de la cola el resto del grupo,
los picos negativos que se dan bajo la lnea base tienen un rea positiva,
como se muestra en Figura 26 en la pgina 110.
gZVidiVaYZaVodcV"gZVedgYZWV_dYZaVacZVWVhZ2gZVXdggZ\^YV
Eventos de integracin
Eventos iniciales
Initial peak width establece el valor de anchura de pico que el integrador utiliza
internamente al comienzo del anlisis. Esta anchura de pico inicial se utiliza
para escalar el acumulador que detecta pendientes ascendentes, pendientes
descendentes y colas. El integrador actualiza la anchura de pico como sea
necesario durante el anlisis para optimizar la integracin. El usuario especi-
fica la anchura de pico en unidades de tiempo correspondientes a la anchura a
media altura del primer pico esperado (excluido el pico de disolvente).
Slope sensitivity establece el nivel de sensibilidad para la deteccin de picos. Es
un parmetro que cambia en una escala lineal.
Height reject establece el umbral de rechazo del pico por la altura final. Los
picos con altura inferior al valor fijado como mnimo aceptable no se mues-
tran.
Area reject establece el umbral de rechazo del pico por el rea final. Los picos
con rea inferior al valor fijado como mnimo aceptable no se muestran.
Cuando shoulder detection est habilitada, el integrador detecta los posibles
hombros utilizando la curvatura de pico dada por la segunda derivada.
Cuando la curvatura se hace cero, el integrador identifica ese punto de
inflexin como un posible hombro. Si el integrador identifica otro punto de
inflexin antes del mximo del pico, se ha detectado un hombro.
Anchura de pico
El parmetro anchura de pico controla la selectividad del integrador para dis-
tinguir los picos del ruido de la lnea base. Para obtener buenos resultados,
debe fijarse un valor cercano a la anchura a media altura de los picos cromato-
grficos o electroferogrficos reales. El integrador actualiza la anchura de pico
como sea necesario durante el anlisis para optimizar la integracin.
Refinamiento de la integracin
Con frecuencia resulta til modificar los valores de sensibilidad de pendiente,
anchura de pico, rechazo por altura y rechazo por rea para personalizar as la
integracin.
Figura 27 en la pgina 114 muestra cmo afectan esos parmetros a la integra-
cin de cinco picos de una seal.
GZX]VodedgVaijgV
AcZVWVhZ
( +
&
,
*
6cX]jgVYZe^Xd '
Pico integrado S No S No No S
Eventos programados
El usuario puede utilizar eventos programados para personalizar la construc-
cin de la lnea base de la seal cuando la construccin por defecto no resulte
apropiada. Dichos eventos pueden resultar tiles para sumar reas de pico
finales y para corregir aberraciones a corto y largo plazo de la lnea base. Para
obtener informacin adicional acerca de los parmetros de integracin, con-
sulte la seccin Eventos iniciales en la pgina 111.
Integracin automtica
La funcin Autointegrate proporciona un punto de partida para el estableci-
miento de valores de los eventos iniciales. Eso resulta particularmente til
durante la implantacin de un nuevo mtodo. El usuario parte de una tabla de
eventos de integracin por defecto que no contiene eventos programados y
optimiza entonces los parmetros propuestos para uso general por la funcin
Integracin automtica.
Principios de funcionamiento
La funcin Autointegrate lee los datos cromatogrficos y calcula los valores
ptimos de los parmetros de integracin iniciales para cada seal del croma-
tograma.
El algoritmo examina un 1% al inicio y el final del cromatograma y determina
el ruido y la pendiente de esas zonas. El ruido se determina como 3 veces la
desviacin estndar de la regresin lineal dividida por la raz cuadrada del
Integracin manual
Integracin manual
Este tipo de integracin permite al usuario integrar determinados picos o gru-
pos de picos. A excepcin del valor de rechazo por rea inicial, los eventos de
integracin del software se ignoran dentro del rango especificado para la inte-
gracin manual. Si uno o varios de los picos resultantes de la integracin
manual estn por debajo del umbral de rechazo por rea, esos picos se des-
echan. Los eventos de integracin manual utilizan valores de tiempo absoluto.
No se ajustan por la deriva de la seal.
La Manual Integration permite al usuario definir los puntos de inicio y final del
pico para despus incluir las reas recalculadas en las rutinas de cuantifica-
cin e informes. Los picos integrados manualmente se etiquetan en los infor-
mes con el cdigo de separacin de picos M.
La Manual Integration ofrece las siguientes funciones:
Draw Baseline especifica dnde se van a trazar las lneas base para un pico o un
conjunto de picos. El usuario puede especificar tambin si se debe producir o
no la separacin automtica en los puntos de valle de los picos incluidos en el
rango dado.
Negative Peaks especifica cundo considerar las reas por debajo de la lnea
base como picos negativos. El usuario puede especificar tambin si se debe
producir o no la separacin automtica en los puntos de valle de los picos
incluidos en el rango dado.
Tangent Skim calcula las reas de picos divididos tangencialmente de un pico
principal. El rea del pico dividido tangencialmente se resta del rea del pico
principal.
Split Peak especifica el punto donde dividir un pico con una lnea de cada ver-
tical.
Delete Peak(s) elimina uno o varios picos de los resultados de integracin.
5
Cuantificacin
Definicin de la cuantificacin 122
Clculos de cuantificacin 123
Factores de correccin 124
Factor de respuesta absoluta 124
Multiplicador 124
Factor de dilucin 124
Cantidad de muestra 125
Procedimientos de clculo no calibrados 126
% de rea y % de altura 126
Procedimientos de clculo calibrados 127
Clculo ESTD 128
Clculo de % Norm 131
Clculo ISTD 132
Anlisis 1: Calibracin 133
Anlisis 2: Muestra desconocida 134
Clculo ISTD de picos calibrados 134
Clculo ISTD de picos no calibrados 135
Definicin de la cuantificacin
Una vez integrados e identificados los picos, el paso siguiente del anlisis es la
cuantificacin. La cuantificacin utiliza el rea o la altura de pico para deter-
minar la concentracin de un compuesto en una muestra.
Un anlisis cuantitativo incluye varios pasos que se resumen a continuacin:
Conocimiento del compuesto que se analiza.
Establecimiento de un mtodo para analizar muestras que contengan este
compuesto.
Anlisis de una o varias muestras que contengan una o varias concentracio-
nes conocidas del compuesto para obtener la respuesta debida a dicha con-
centracin.
Alternativamente, se puede analizar una serie de estas muestras con distin-
tas concentraciones de los compuestos de inters si el detector genera una
respuesta no lineal. Este proceso se conoce como calibracin multinivel.
Anlisis de la muestra que contiene una concentracin desconocida del
compuesto para obtener la respuesta debida a la concentracin descono-
cida.
Comparacin de la respuesta de la concentracin desconocida con la res-
puesta de la concentracin conocida para determinar la cantidad del com-
puesto que est presente.
Para obtener una comparacin vlida para la respuesta de muestra descono-
cida a la de la muestra conocida, se deben adquirir y procesar los datos en
condiciones idnticas.
Clculos de cuantificacin
Factores de correccin
Multiplicador
El multiplicador se utiliza en cada frmula de clculo para multiplicar el resul-
tado de cada componente. El multiplicador se puede utilizar para convertir
unidades en cantidades expresadas.
Factor de dilucin
El factor de dilucin es un nmero por el que se multiplican todos los resulta-
dos calculados antes de imprimir el informe. Se puede utilizar para cambiar la
escala de los resultados o corregir los cambios de una composicin de muestra
durante el trabajo previo al anlisis. Tambin se puede utilizar el factor de
dilucin para cualquier otra finalidad que requiera la utilizacin de un factor
constante.
Cantidad de muestra
Si se seleccionan los clculos % de ESTD o % de ISTD, los informes de ESTD e
ISTD ofrecen valores relativos en lugar de absolutos, es decir, la cantidad de
cada componente se expresa como un porcentaje de la cantidad de muestra.
La cantidad de muestra se utiliza en los informes de % de ESTD y % de ISTD
para convertir la cantidad absoluta de los componentes analizados en valores
relativos dividiendo por el valor especificado.
% de rea y % de altura
El procedimiento de clculo de % de rea proporciona el rea de cada pico del
anlisis como un porcentaje del rea total de todos los picos del anlisis. El %
de rea no requiere una calibracin previa y no depende de la cantidad de
muestra inyectada dentro de los lmites del detector. No se utiliza ningn fac-
tor de respuesta. Si todos los componentes responden del mismo modo al
detector y son eluidos, el % de rea ofrecer una aproximacin adecuada de
las cantidades relativas de los componentes.
El % de rea se utiliza por rutina cuando los resultados cualitativos son de
inters y para obtener informacin a fin de crear la tabla de calibracin nece-
saria para otros procedimientos de calibracin.
El procedimiento de clculo de % de altura proporciona la altura de cada pico
del anlisis como un porcentaje de la altura total de todos los picos del anlis-
is.
El multiplicador y el factor de dilucin del cuadro de dilogo Calibration Set-
tings o Sample Information, o bien de Sequence Table no se aplican en el clculo
del % de rea o de altura.
Clculo ESTD
donde:
Responsex es la respuesta del pico x
RFx es el factor de respuesta del componente x, que se calcula del modo
siguiente:
M es el multiplicador.
D es el factor de dilucin.
GZhejZhiV
G;m
GZhejZhiVm
8Vci^YVYm 8Vci^YVY
donde:
La cantidad absoluta de x se calcula tal como se muestra ms arriba en el
clculo de ESTD.
Clculo de % Norm
donde:
(Respuesta RF) es el total de todos los productos (Respuesta RF) para todos los
picos, incluido el pico x,
M es el multiplicador,
D es el factor de dilucin.
Clculo ISTD
Ventajas Inconvenientes
La variacin del tamao de la muestra no es Se debe aadir el estndar interno a todas las
crtica. muestras.
Anlisis 1: Calibracin
1 Los puntos de calibracin se crean calculando una relacin de cantidad y
una relacin de respuesta para cada nivel de un pico determinado de la
tabla de calibracin.
La relacin de cantidad es la cantidad del compuesto dividida por la canti-
dad del estndar interno a este nivel.
La relacin de respuesta es el rea del compuesto dividida por el rea o la
altura del estndar interno a este nivel.
2 Una ecuacin para la curva que pasa por los puntos de calibracin se cal-
cula utilizando el tipo de ajuste de curva especificado en el cuadro de dilo-
go Configuracin de calibracin o Curva de calibracin.
GZaVX^cYZgZhejZhiV
G;m
GZaVX^cYZXVci^YVY
donde:
RFx es el factor de respuesta para el compuesto x.
6
Identificacin de picos
Definicin de la identificacin de picos 138
Reglas de asignacin de picos 139
Tipos de identificacin de picos 140
Tiempo de retencin o migracin absoluto 140
Tiempo de retencin o migracin corregido 140
Cualificadores de pico 140
Lmites de cantidad 141
Tiempo de retencin o migracin absoluto 142
Tiempos de retencin/migracin corregidos 144
Picos de referencia sencillos 144
Picos de referencia mltiples 145
Cualificadores de pico 146
Correlacin de la seal 147
Verificacin del cualificador 147
Clculo de la relacin de cualificadores 147
El proceso de identificacin 149
Bsqueda de los picos de referencia 149
Bsqueda de los picos ISTD 149
Bsqueda de los picos calibrados restantes 150
Clasificacin de picos no identificados 150
Cualificadores de pico
Adems de identificar picos por su tiempo de retencin o migracin, pueden
utilizarse cualificadores de picos para obtener resultados ms precisos. Si ms
de un pico aparece en una ventana de tiempo de retencin o migracin, deben
utilizarse los cualificadores para identificar el compuesto correcto.
Lmites de cantidad
Los lmites de cantidad que se definen en el cuadro de dilogo Detalles de
compuesto se utilizan para cualificar la identificacin de los picos. Si la canti-
dad del compuesto identificado est dentro de los lmites, la identificacin del
pico se indica en el informe.
KZciVcVeVgVe^Xd'
ventana de picos que no son de referencia, que se aplican a todos los dems
picos calibrados, y
valores de ventana especficos para componentes individuales que se esta-
blecen en el cuadro de dilogo Compound Details.
Los valores por defecto de estas ventanas se introducen en el cuadro de dil-
ogo Configuracin de calibracin. La anchura a ambos lados del tiempo de
retencin o migracin que define la ventana de asignacin de picos es la suma
de las ventanas absoluta y porcentaje.
Una ventana del 5% significa que el pico debe tener un tiempo de retencin o
migracin por debajo del 2,5% y por encima del 2,5% del tiempo de retencin
calibrado para ese pico. Por ejemplo, un pico con un tiempo de retencin o
migracin de 2,00 en el anlisis de calibracin debe aparecer entre 1,95 y 2,05
minutos en los anlisis siguientes.
Por ejemplo, una ventana absoluta de 0,20 minutos y una relativa del 10% pro-
ducen una ventana de tiempo de retencin o migracin de entre 1,80 y 2,20
minutos.
1,80 min = 2,00 min - 0,10 min (0,20 min/2) - 0,10 min (10% de 2,00 min).
2,20 min = 200 min + 0,10 min (0,20 min/2) + 0,10 min (10% de 2,00 min).
El algoritmo de correccin del tiempo puede fallar si los tiempos de retencin de varios
N O TA picos de referencia estn demasiado prximos entre s y no se distribuyen en el tiempo
total del anlisis.
Cualificadores de pico
Las otras dos longitudes de onda adquiridas como seales pueden utilizarse
como cualificadores de pico. En la figura, son lambda2 y lambda3.
Adc\^ijYYZdcYVYZae^Xdeg^cX^eVa
GZhejZhiV
Adc\^ijYYZdcYVYZ
e^XdXjVa^[^XVYdg
Adc\^ijYYZdcYV
Figura 31 Cualificadores de pico
Correlacin de la seal
Correlacin de la seal significa que dos picos medidos en seales de detector
diferentes en una ventana de tiempo definido estn asignados al mismo com-
puesto. La ventana de correlacin de la seal se puede controlar con el parm-
etro SignalCorrWin en la tabla QuantParm del registro _DaMethod. La correlacin
de seales se desactiva cuando se ajusta la ventana de correlacin a 0,0 minu-
tos (consulte la Gua de Programacin de Macros para ms informacin).
Cuando est desactivada la correlacin de la seal, los picos que eluyen al
mismo tiempo de retencin/migracin se tratan como componentes diferen-
tes.
La ventana de correlacin de la seal por defecto para datos LC, CE, CE/MS y
LC/MS es 0,03 minutos y para datos GC es 0,0 minutos.
Los picos del cualificador pueden calibrarse del mismo modo que los com-
puestos objetivo. El usuario no necesita especificar la relacin de cualificador
esperada. La relacin de cualificador esperada se calcula de forma automt-
ica:
ambos se miden en el tiempo de retencin del compuesto.
El parmetro QualTolerance define el rango aceptable de la relacin del cuali-
ficador, por ejemplo, 20%.
La tolerancia es un porcentaje absoluto y puede ajustarse en la interfase de
usuario de la tabla de calibracin (Detalles de identificacin).
Para calibraciones multinivel, ChemStation calcula una tolerancia de cualifi-
cador mnima basada en las relaciones del cualificador medidas en cada nivel
de calibracin. La tolerancia mnima del cualificador se calcula con la ecua-
cin siguiente:
El proceso de identificacin
7
Calibracin
Definicin de trminos 152
Tabla de calibracin 153
Curva de calibracin 154
Muestras desconocidas 156
Tipos de calibracin 157
Calibracin de un nico nivel 157
Calibracin multinivel 158
Rangos de calibracin 160
Ajustes de la curva de calibracin 160
Tratamiento del origen 160
Calibracin de grupo 164
Suma de picos 165
Recalibracin 166
Definicin de la recalibracin 166
Por qu recalibrar? 166
Recalibracin manual 166
Recalibraciones con suma de picos 167
Opciones de recalibracin 167
Formas de recalibrar 168
Recalibracin de picos no identificados 168
Definicin de trminos
Tabla de calibracin
Curva de calibracin
GZhejZhiV GZhejZhiV
I^Zbedb^c 8Vci^YVYc\$a
Para cada nivel de calibracin, se muestra el resto relativo. que se calcula con
la siguiente frmula:
donde:
relRES = porcentaje de resto relativo
La respuesta calculada representa el punto de la curva de calibracin.
La desviacin estndar residual, que se imprime en algunos informes y
cuando se calculan las curvas y tabla de calibracin de la impresin utiliza la
siguiente frmula:
donde:
rResSTD = desviacin estndar residual
Respcalibratedi = respuesta calibrada del punto i
Respcalculatedi = respuesta calculada del punto i
n = nmero de puntos de calibracin
Muestras desconocidas
Una muestra desconocida es una muestra que contiene una cantidad descono-
cida de un compuesto para cuantificar.
Para descubrir qu cantidad de compuesto hay en la muestra desconocida, es
necesario:
crear una curva de calibracin para el compuesto,
inyectar una porcin alcuota de la muestra desconocida y analizarla del
mismo modo que la muestra de calibracin,
determinar la respuesta a partir de la seal, es decir, el rea o la altura del
pico causada por la cantidad desconocida de compuesto y
utilizar la curva de calibracin para calcular la cantidad de compuesto exis-
tente en la muestra desconocida.
Por ejemplo, si el rea del pico de la muestra desconocida es 500, se puede
determinar que la cantidad es 5 ng/l utilizando la curva de calibracin que se
muestra en Figura 33 en la pgina 156.
GZhejZhiV GZhejZhiV
gZV2*%%
GZhejZhiVYZ 8Vci^YVYYZ
YZhXdcdX^Yd YZhXdcdX^Yd
2*%% 2c\$a
I^Zbedb^c 8Vci^YVYc\$a
Figura 33 Seal de muestra desconocida y curva de calibracin
Tipos de calibracin
GZhejZhiV
&%% 8jgkVYZXVa^WgVX^c
&%
8dcXZcigVX^cPc\$aR
GZhejZhiV
&%%% 8jgkVYZXVa^WgVX^c
&%%
& &%
8dcXZcigVX^cPc\$aR
Lmites de cantidad
ChemStation le permite definir los rangos de cuantificacin vlidos en trmi-
nos de cantidades absolutas de cada compuesto.
Calibracin multinivel
Se puede utilizar la calibracin multinivel cuando no sea lo suficientemente
exacta como para asumir que un componente tiene una respuesta lineal o con-
firmar la linealidad del rango de calibracin. Cada nivel de calibracin corres-
ponde a una muestra de calibracin con una concentracin particular de
componentes. Las muestras de calibracin se prepararn de forma que la con-
centracin de cada componente vare dentro del rango de concentraciones
GZhejZhiV
8jgkVYZXVa^WgVX^c
&%%%
*%%
&%%
& * &%
8dcXZcigVX^cPc\$aR
1 1 100
2 5 500
3 10 1000
En este ejemplo, las muestras de calibracin utilizadas para generar los tres
niveles se han identificado como 1, 2 y 3.
Rangos de calibracin
Cada calibracin multinivel es vlida para el rango de concentraciones utiliza-
das en las muestras de calibracin. La mejor aproximacin es la extrapolacin
de una curva de calibracin, especialmente si no es lineal. El rango de calibra-
cin de cada componente puede definirse en el cuadro de dilogo Detalles de
compuesto. Cada entrada de ese compuesto puede expresarse como lmites
inferiores y superiores. Si se exceden estos lmites, se anota en el informe.
Ajuste no lineal
En algunos casos, la respuesta del detector a los cambios en la concentracin
de muestra no es lineal. Para estos tipos de anlisis, no es apropiado el mtodo
de calibracin de regresin lineal y habra que utilizar un clculo de la calibra-
cin multinivel.
incluir el origen,
forzar el origen, o
conectar el origen.
Para forzar la inclusin del origen en la curva de calibracin, los puntos de
calibracin se reflejan sobre el origen desde el primer cuadrante hasta el ter-
cero. La utilizacin de todos los puntos para el clculo de la regresin asegura
que la curva de calibracin resultante pase por el origen. Esto tambin se des-
cribe en Figura 37 en la pgina 161.
GZhejZhiV
8jgkVYZXVa^WgVX^c
8Vci^YVYc\$a
Figura 37 Forzar el origen para incluirlo
Peso Descripcin
Lineal (Ctd.) Un punto de calibracin con la cantidad x tiene una ponderacin 1/x
normalizada a la cantidad ms pequea, de forma que el factor de peso mayor
es 1. La normalizacin se calcula multiplicando el peso por la cantidad ms
pequea. Por ejemplo, el peso de un punto de calibracin con la cantidad x es
(1/x) a donde a es la cantidad menor del compuesto calibrado preparado en
los estndares de calibracin.
Si se incluye el origen se asigna la media de las ponderaciones de otros puntos
de calibracin.
Lineal (Rpta.) Un punto de calibracin con la respuesta x tiene una ponderacin 1/y
normalizada a la respuesta ms pequea, de forma que el factor de peso mayor
es 1. La normalizacin se calcula multiplicando el peso por la respuesta ms
pequea. Por ejemplo, el peso de un punto de calibracin con la cantidad y es
(1/y) b donde b es la respuesta correspondiente a la cantidad menor del
compuesto calibrado preparado en los estndares de calibracin.
Si se incluye el origen se asigna la media de las ponderaciones de otros puntos
de calibracin.
Cuadrtico (Ctd.) Un punto de calibracin con la cantidad x tiene una ponderacin 1/x2
normalizada a la cantidad ms pequea de forma que el factor de peso mayor
es 1. La normalizacin se calcula multiplicando el peso con la cantidad ms
pequea. Por ejemplo, el peso de un punto de calibracin con la cantidad x es
(1/x) a donde a es la cantidad menor del compuesto calibrado preparado
en los estndares de calibracin.
Cuadrtico (Rpta.) Un punto de calibracin con la respuesta x tiene una ponderacin 1/y2
normalizada a la respuesta ms pequea de forma que el factor de peso mayor
es 1. La normalizacin se calcula multiplicando el peso con la respuesta ms
pequea. Por ejemplo, el peso de un punto de calibracin con la respuesta y es
(1/y) b donde b es la respuesta correspondiente a la cantidad menor del
compuesto calibrado preparado en los estndares de calibracin.
Calibracin de grupo
donde:
ConcAB es la concentracin del grupo de compuestos formada por un com-
puesto A y uno B
RespuestaA es el rea o altura de un compuesto A
Suma de picos
Es necesario crear una tabla de calibracin para un anlisis antes de crear la tabla de suma
N O TA de picos.
Recalibracin
Definicin de la recalibracin
La recalibracin es el proceso utilizado para actualizar un nivel de una curva
de calibracin. Cuando se recalibra se analiza otra muestra que contiene los
mismos compuestos de calibracin que la original y, lo ms importante, la
misma cantidad de stos. Cuando se analiza la muestra de calibracin, se
obtienen los factores de respuesta y los tiempos de retencin/migracin actua-
lizados. Puede elegirse realizar la media de los factores de respuesta de un
nmero determinado de anlisis de calibracin de forma que los factores de
respuesta se ponderen por igual.
Por qu recalibrar?
La mayora de las calibraciones tienen una vida limitada debido a los cambios
en la cromatografa. La recalibracin es necesaria para mantener la exactitud
de los anlisis. Por ejemplo, se ha creado una tabla de calibracin para el com-
puesto cafena que se usa cuando es necesario cuantificar muestras que con-
tienen cafena. En algn momento ser necesario reemplazar la
columna/capilar. Aunque la columna/capilar se reemplace con una exacta-
mente del mismo tipo, no se comportar exactamente de la misma manera que
la columna/capilar anterior cuando se cre por primera vez la tabla de calibra-
cin para la cafena. Por tanto, para asegurar la coherencia, se deben recali-
brar los niveles de la tabla de calibracin antes de utilizar la nueva
columna/capilar para analizar las muestras que contengan cantidades desco-
nocidas de cafena. De este modo se cuantifican muestras analizadas bajo las
mismas condiciones de sistema.
Recalibracin manual
Puede introducir manualmente la informacin de calibracin del pico y nor-
malizar la tabla de calibracin con la opcin Configuracin manual del cuadro
de dilogo Nueva tabla de calibracin. Generalmente, se produce un nuevo
Opciones de recalibracin
Existen diferentes formas de actualizar las respuestas en la tabla de calibra-
cin con los nuevos datos de calibracin.
Promedio
El promedio de los anlisis de calibracin se calcula con la siguiente frmula:
Promedio flotante
Se calcula la media ponderada de los anlisis de calibracin. El peso actuali-
zado se fija en el cuadro de dilogo Configuracin de recalibracin.
Sustituir
Los nuevos valores de respuesta reemplazan a los anteriores.
Formas de recalibrar
La recalibracin se puede efectuar de dos formas con el software ChemSta-
tion. Puede recalibrar de forma interactiva o automtica durante una secuen-
cia de anlisis automatizados. En la recalibracin interactiva el proceso de
recalibracin se realiza utilizando el software ChemStation despus de inyec-
tar una o varias muestras de calibracin. En la recalibracin con secuencia se
debe especificar cundo se llevar a cabo el proceso, pero la recalibracin en
s la sigue realizando el software de automatizacin. Para obtener ms infor-
macin, consulte Recalibracin automtica en la pgina 192.
Si desea informacin sobre cmo realizar la recalibracin con el software, con-
sulte el apartado Cmo... de la ayuda.
Sin recalibracin
Si un pico de la tabla de calibracin no se puede identificar en los resultados
de integracin, se aborta la calibracin. Si esto sucede en una secuencia, tam-
bin se aborta la secuencia.
Recalibracin parcial
Esta funcin permite la recalibracin slo de los picos identificados. Si faltan
picos, no se aborta la calibracin pero se anota en el informe que faltan picos.
8
Automatizacin
Definicin de la automatizacin 173
Definicin de una secuencia o plantilla de secuencia 174
Preferencias: ficha Secuencia 175
Parmetros de secuencia 177
Tabla de secuencias 178
Creacin de secuencias(Secuencias y plantillas de secuencias) 179
Utilizacin del editor de tablas de secuencias 179
Utilizacin del botn de insercin de rango de viales 179
Utilizacin del botn de adicin de lneas 179
Utilizacin del botn de campos personalizados 180
Uso de secuencias (secuencias y plantillas de secuencias) 181
Muestras prioritarias 181
Secuenciacin con muestras de control 181
Interrupcin de una secuencia 181
Cancelacin de una secuencia 182
Pausa de una secuencia 182
Anlisis de una secuencia parcial 182
Archivo de registro de secuencias 184
Qu ocurre cuando se analiza una secuencia? 185
Estructura del fichero de datos de la secuencia (Activar creacin de car-
peta nica) 187
Asignacin de nombres a ficheros de datos en una secuencia 188
Asignacin automtica de nombre al fichero de datos durante una
secuencia 188
Introduccin manual de nombres de ficheros de datos 189
Operacin postsecuencia 190
Tiempo de espera para instrumento no listo (slo LC y CE) 190
Definicin de la automatizacin
Parmetros de secuencia
Tabla de secuencias
La tabla de secuencias determina los mtodos que se utilizan para analizar los
viales de muestra y el orden en el que se analizan. Esta tabla tambin contiene
informacin de cada muestra, incluyendo el nombre, los parmetros de cuanti-
ficacin y los parmetros de recalibracin.
El cuadro del grupo de inyectores se muestra en los instrumentos que admiten
muestreo doble (GC). Si selecciona Delante o Atrs se muestran las lneas de la
tabla de secuencia y el estado del inyector en ese momento.
Para describir las columnas de la tabla y el modo en que interactan con la
informacin almacenada con el mtodo, consulte la ayuda en lnea.
Muestras prioritarias
Se puede pausar una secuencia que est siendo analizada cuando se haya fina-
lizado el mtodo actual para permitir el anlisis de una muestra prioritaria
por el mismo o por otro mtodo. Despus, la secuencia se puede reanudar y
contina con la muestra en la que se paus.
:hiVYdYZ8]ZbHiVi^dc
BVXgdedhiZg^dgVaVc{a^h^h >cnZXX^c
:kVajVX^cYZYVidh
>cnZXX^cn
[jcX^dcVb^ZcidYZa^chigjbZcid
:hiVYd
BVXgdegZk^VVaVc{a^h^h c^kZaZh
8Vg\VgbidYd
;^X]ZgdYZYVidhh^cegdXZhVg
>c^X^VghZXjZcX^V XZggVYd
BidYdhji^a^oVYdhZc
aVhZXjZcX^V
BidYdYZVYfj^h^X^c
BidYdYZVc{a^h^hYZYVidh
8dciZcZYdgYZYVidhYZhZXjZcX^V
;^X]ZgdYZadiZh
GZ\^higdYZhZXjZcX^V
EaVci^aaVYZhZXjZcX^V
Anlisis en blanco
Por ejemplo NV--0499.D
donde:
NV no se refiere a ningn vial.
- es un guin de separacin.
0499 es el anlisis en blanco 99 de la lnea 4 de la secuencia.
Tabla 15
testwithalongna 1 testwithalongna1
Operacin postsecuencia
Recalibracin automtica
Especificacin de recalibraciones
Sustituir Sustituir
Agrupar
% Delta
No actualizar
No cambia el factor de respuesta ni el tiempo de retencin/migracin.
Sustituir
Sustituye los tiempos de retencin/migracin y la respuesta previos (reas o
alturas) por aqullos slo del anlisis actual. No se cambia la respuesta de
picos que no se hayan encontrado en el anlisis de recalibracin.
Promedio
Promedia los tiempos de retencin/migracin y las respuestas (reas o altu-
ras) para cada pico, basndose en el anlisis de calibracin original y todas las
recalibraciones promediadas desde entonces. Si falta un pico de una de las
recalibraciones, la respuesta promedio del pico no se ver afectada.
Agrupar
Las muestras se agrupan en calibraciones previas y posteriores a la muestra.
La evaluacin se efecta cuando la ltima muestra de calibracin del grupo de
cierre se ha analizado. Los datos de calibracin existentes se reemplazan por
los datos del resultado del anlisis de calibracin del grupo de apertura. Las
calibraciones del grupo de cierre se promedian en la tabla de calibracin.
Intervalo
El intervalo determina la frecuencia con la que se realiza una calibracin
durante una secuencia. La frecuencia de calibracin corresponde al nmero
de inyecciones de muestras que se realizan antes de proceder con el siguiente
grupo de calibracin. Al inicio del anlisis, se realiza una calibracin y los
resultados (factores de respuesta) se introducen en la tabla de calibracin.
Estos resultados se utilizan en clculos cuantitativos siguientes. Despus de
haberse aplicado el nmero de inyecciones especificado, se realiza otra cali-
bracin y los resultados se introducen en la tabla de calibracin sobrescri-
biendo los resultados de los anlisis de calibracin anteriores.
% Delta
El clculo % delta permite comparar los factores de respuesta de un anlisis
con los factores de respuesta que se introducen de forma manual en la tabla
de calibracin. El % delta se aplica entonces a todos los picos calibrados de la
tabla. Puede identificar varios estndares internos, y las mediciones de sus
factores de respuesta se utilizarn para calcular los nuevos factores de res-
puesta de otros picos. Identifique qu estndar interno va a utilizarse para el
clculo de % delta de cada pico en la tabla de calibracin.
Tipos de secuencia
4 11 Mtodo A 1
5 12 Mtodo A 1
6 13 Mtodo A 1
7 14 Mtodo A 1
10 20 Mtodo B 1
11 21 Mtodo B 1
12 22 Mtodo B 1
13 23 Mtodo B 1
14 24 Mtodo B 1
Ejemplo
La siguiente tabla de secuencia ilustra un mtodo calibrado de un nico nivel
denominado SimpReg. La tabla est truncada para simplificar el ejemplo.
3 2 SimpRe 1
g
4 3 SimpRe 1
g
5 4 SimpRe 1
g
6 5 SimpRe 1
g
7 6 SimpRe 1
g
Tabla de secuencia
La tabla de secuencia contiene siete lneas. La primera lnea especifica la
muestra de recalibracin cclica. La segunda lnea especifica la recalibracin
explcita que se realiza slo una vez al principio de la secuencia. Las lneas de
la tercera a la sptima especifican las muestras que hay que analizar.
El orden de las entradas en la tabla de secuencia es muy importante. Las
entradas del vial de recalibracin cclica que especifican la recalibracin cc-
lica deben aparecer antes que las entradas de muestras o de recalibraciones
explcitas para el mtodo.
Ejemplo
Considere la situacin siguiente:
La respuesta del instrumento deriva.
Se especifican tres inyecciones con idntica mezcla de dos componentes.
Dos inyecciones estn especificadas como muestras de calibracin, y la ter-
cera como una muestra.
La primera y la tercera son ejemplos de calibracin.
La segunda inyeccin es una muestra.
Para obtener un resultado cuantitativo preciso para la inyeccin dos (la mues-
tra), deben interpolarse las dos muestras de calibracin (consulte la figura). El
proceso se conoce como agrupamiento.
9Zg^kVYZa I^Zbed
^chigjbZcid
Figura 41 Agrupamiento
Ejemplo
En esta seccin se explica un ejemplo de agrupamiento de secuencia que com-
prende un mtodo llamado Brack.M. El mtodo Brack.M es un mtodo estn-
dar interno de dos niveles que utiliza calibracin cclica.
Tabla de secuencia
La tabla de secuencia de Brack.M (pgina siguiente) se ha truncado para sim-
plificar el ejemplo. Consta de siete lneas. Las dos primeras lneas definen las
condiciones de recalibracin de cada nivel. Las lneas restantes corresponden
a las muestras que hay que analizar.
Ms concretamente, la tabla de secuencia del mtodo Brack.M tiene:
Una entrada Agrupamiento en la columna Actualizar factor de respuesta
que especifica el agrupamiento de muestras con las muestras de calibra-
cin.
Una entrada Sustituir en la columna Actualizar tiempos de reten-
cin/migracin que especifica una sustitucin de los tiempos de retencin.
Una entrada de 3 en la columna Recalibrar intervalo que especifica la reca-
libracin cada tres muestras.
3 10 BRACK-M 1
4 11 BRACK-M 1
5 12 BRACK-M 1
6 13 BRACK-M 1
7 14 BRACK-M 1
Tabla 23 Secuencia de recalibracin cclica con 3 viales definidos para cada nivel
Vial n Nombre de la Tipo de Nombre del N de iny. Nvl Act. RT Act. RF Intervalo
muestra muestra mtodo
Vial 6 (Cal2b)
etc.
Vial n Nombre de la Tipo de Nombre del N de iny. Nvl Act. RT Act. RF Intervalo
muestra muestra mtodo
9
Revisin de datos, reprocesamiento y
revisin por lotes
Tabla de navegacin de Anlisis de datos 216
Configuracin de la tabla de navegacin 216
Barra de herramientas de la tabla de navegacin 217
Revisin de datos con la tabla de navegacin 218
Reprocesamiento de secuencias con la tabla de navegacin 219
Definicin de la revisin por lotes 221
Habilitacin de la funcin de revisin por lotes con la opcin ChemStation
OpenLAB instalada 222
Configuracin de lotes 223
Tabla de lotes 223
Tabla de compuestos 224
Informe de lotes 224
Interfase de usuario 224
Funciones de revisin 226
Calibracin en la revisin por lotes 226
Informes de lotes 227
Historial de lotes 227
Este apartado describe las opciones para revisar datos y cmo reprocesar datos
de secuencia. Asimismo, se detallan los conceptos de Revisin por lotes, Confi-
guracin de lotes, funciones de revisin e informes de lotes.
Superposicin Superposicin
Fecha/hora Lnea
Vial Vial
Dilucin Multiplicador
--- Dilucin
Para sistemas LC, CE, LC/MS y CE/MS, la opcin Individual Method from Data File
N O TA (DA.M) est seleccionada por defecto.
Para sistemas GC, la opcin Current Method est seleccionada por defecto.
Para reprocesar con la tabla de navegacin de Data Analysis, todos los ficheros
necesarios estn en el contenedor de datos de la secuencia:
ficheros de datos de secuencia (*.d)
todos los ficheros de mtodos (*.m) que se utilizan en la secuencia
copia de la plantilla de secuencias original (*.s)
fichero de lotes relacionados con la secuencia (*.b)
fichero de libro de registro relacionado con la secuencia (*.log)
Durante el reprocesamiento, se actualizan los mtodos individuales DA.M de
los ficheros de datos, as como el fichero de lotes (*.b).
Con las funciones de reprocesamiento de Data Analysis es posible modificar la
plantilla de secuencias (*.s) del contenedor de datos para cambiar el multipli-
cador, la dilucin, etc. o utilizar un mtodo de reprocesamiento diferente. Por
defecto, el parmetro de secuencia de reprocesamiento de anlisis de datos
parts of method to run est fijado en Reprocessing only y la opcin Use Sequence
Table Information est activada. Los valores predefinidos por defecto le permi-
ten cambiar los parmetros de la plantilla de secuencia y ejecutar un repro-
ceso sin necesidad de volver a editar los parmetros de la secuencia de Data
Analysis.
Si no ha cambiado explcitamente el mtodo en la plantilla de secuencias, el
sistema utiliza los mtodos de secuencias almacenados en el contenedor de
datos de secuencias para reprocesar la secuencia. Estos mtodos son los origi-
nales utilizados durante la adquisicin de datos. Tenga en cuenta que, incluso
si se selecciona la opcin load DA method from data file en las Preferences / Sig-
nal/Review Options, el sistema utiliza el mtodo del contenedor de secuencias
para reprocesar y no el mtodo DA.M de los distintos ficheros de datos.
Si es necesario cambiar los parmetros de un mtodo concreto (por ejemplo,
especificar la impresin en un fichero *.xls), hay que modificar y guardar los
mtodos del contenedor de secuencias. Este cambio general se aplica a todos
los ficheros de datos durante el reprocesamiento.
Si desea utilizar el mtodo del contenedor de secuencias actualizado para la
adquisicin de ms datos, es necesario copiar este mtodo del contenedor de
datos de secuencias a una de las rutas de mtodos definidas. El mtodo nuevo
o actualizado estar disponible en ChemStation Explorer, en la ventana de
mtodos, como mtodo maestro.
La revisin por lotes es una funcionalidad del anlisis de datos diseada para
ayudar a un analista a realizar rpida y fcilmente la primera revisin de los
resultados de una secuencia o una seleccin de anlisis. Esta funcionalidad le
permitir ahorrar tiempo, especialmente con el reprocesamiento de grandes
cantidades de muestras. Cuando se analiza una secuencia, se genera de forma
automtica un archivo de lotes (con extensin.b) y se coloca en el directorio de
datos junto con los ficheros de datos. Este fichero de datos contiene indicado-
res de los ficheros de datos de la revisin del lote. Cuando se carga un lote, el
analista slo tiene que seleccionar el mtodo que vaya a utilizar con el lote y
despus seleccionar uno por uno los ficheros de datos que quiere analizar en
el lote. Antes de aprobar los resultados, es posible comprobar la exactitud de
la calibracin, el rendimiento del instrumento y las diferentes integraciones
Cualquier parmetro de integracin especfico del cromatograma que se modi-
fique, puede almacenarse con el fichero de datos para la trazabilidad de datos.
Este entorno interactivo permite tambin acceder a todas las funciones de
anlisis de datos como pureza del pico, bsqueda de libreras, etc.
La revisin por lotes utiliza los mismos registros de anlisis de datos
(ChromReg y ChromRes) que los anlisis de datos estndares y no debera uti-
lizarse en sesiones en lnea que estn analizando en ese momento.
Configuracin de lotes
Tabla de lotes
Los anlisis se muestran en una tabla de lotes que el usuario puede configu-
rar:
puede especificarse el nmero y el contenido de las columnas de la tabla;
los anlisis pueden clasificarse por
ndice de anlisis (el orden en el que se adquieren los anlisis) indepen-
dientemente de otros criterios,
tipo de muestra (muestras de control primero, luego muestras de calibra-
cin, despus muestras normales) y por ndice de anlisis dentro de cada
tipo,
mtodo (si se utiliz ms de un mtodo para adquirir los anlisis) y por
ndice de anlisis dentro de cada mtodo,
muestras, muestras de calibracin y muestras de control que se visualizan
en la tabla o estn ocultas.
Cada anlisis seleccionado ocupa una lnea en la tabla de lotes. Puede excluir
un anlisis en la tabla de lotes (por ejemplo, desde la calibracin) cambiando
el tipo de muestra a Retirada.
Tabla de compuestos
Los resultados de compuestos se muestran en la tabla de compuestos, que el
usuario puede configurar, aunque su contenido depende del tipo de muestras
de la tabla de lotes:
La lista de compuestos contiene todos los compuestos del mtodo cargado
para la revisin por lotes.
Si en la tabla de lotes slo se visualizan las muestras de calibracin (se ocul-
tan las muestras y las muestras de control), la tabla de compuestos muestra
columnas adicionales con informacin relacionada con la calibracin (can-
tidad esperada, error relativo y error absoluto).
Si en la tabla de lotes slo se muestran los anlisis de control (se ocultan las
muestras y las muestras de calibracin), la tabla de compuestos muestra
columnas adicionales de los lmites de control definidos).
Para las columnas que contengan informacin especfica del compuesto, es
posible incluir el nombre del compuesto en el ttulo de la tabla aadiendo %s a
las especificaciones de la columna.
Informe de lotes
El informe de lotes contiene dos tablas generalmente anlogas a la tabla de
lotes y a la de compuestos; el usuario puede configurar estas tablas.
Para las columnas que contengan informacin especfica del compuesto, es
posible incluir el nombre del compuesto en el ttulo de la tabla aadiendo %s a
las especificaciones de la columna. Se permiten ttulos multilnea; inserte el
carcter | para introducir un salto de lnea.
Interfase de usuario
La revisin por lotes le permite elegir entre dos interfaces de usuario:
la interfase estndar incluye una barra con los botones que representan la
mayora de las opciones del men Lote, junto con las tablas de lotes y com-
puestos.
Funciones de revisin
Informes de lotes
Historial de lotes
La revisin por lotes mantiene un registro de todas las acciones relacionadas
con el lote actual. Cualquier accin que cambie el lote (como por ejemplo, cam-
biar el cromatograma de la pantalla, el tipo de muestra o cargar y guardar el
lote) aade una lnea al historial de lotes con el nombre y la fecha, el nombre
del operador y una descripcin de la accin.
Tambin puede aadir sus propios comentarios al historial de lotes. No se
pueden editar las entradas del historial de lotes existentes y no se puede acce-
der a la lista del historial excepto a travs de la opcin de men Historial de
lotes.
10
Utilizacin de los informes de
ChemStation
Definicin de un informe 230
Elaboracin de informes de resultados 231
Informes no calibrados 231
Informes calibrados 231
Informe estndar externo 231
Informe estndar interno 232
Informe de los grficos de control 232
Resultados cuantitativos 233
Informes de valores de campos personalizados 235
Estilos de informe 236
Adicin de un informe personalizado a los estilos de informe 238
Otros parmetros de estilo del informe 239
Tabla de picos sumados 239
Diseo del informe de picos no calibrados 239
Destino del informe 240
Formatos del fichero de informes 240
Elaboracin de informes de resumen de secuencias 242
Introduccin 242
Configuracin de un informe de resumen de secuencias 242
Definicin de un informe
Informes no calibrados
Entre los informes no calibrados se incluyen informes de Area% y Height%.
Estos informes se utilizan principalmente para preparar informes calibrados.
Pueden resultar de utilidad como informe final si las cantidades de compuesto
necesarias para generar el rea de una unidad o la respuesta de altura de los
compuestos de inters son similares.
Informes calibrados
Los informes calibrados corrigen la diferencia en la respuesta del detector a
los compuestos informados. Una o varias muestras de calibracin que conten-
gan cantidades conocidas de los compuestos informados deben analizarse en
las mismas condiciones que la muestra desconocida. Los datos de integracin
de estas muestras de calibracin se utilizan para preparar una tabla de cali-
bracin. sta no es ms que una lista de los tiempos de retencin/migracin,
cantidades y respuestas que se utilizan en la generacin del informe. Los infor-
mes calibrados se basan en dos procedimientos de calibracin llamados
estndar interno y estndar externo.
Resultados cuantitativos
Estilos de informe
Todos los informes, excepto los de rendimiento, enumeran las anchuras de picos
N O TA calculadas con una frmula ms compleja por el integrador (para obtener ms detalles
sobre el clculo de la anchura del pico, consulte Anchura de pico en la pgina 85).
Introduccin
ChemStation puede imprimir una variedad de informes estndar para el anl-
isis de muestras individuales. La elaboracin de informes de resumen de
secuencias es una forma adicional de elaborar informes que le permite calcu-
lar e informar de los parmetros de un nmero de anlisis diferentes. Es til,
por ejemplo, comprobar la estabilidad de un instrumento y la robustez de un
mtodo nuevo.
Un informe de resumen de secuencias incluye:
Una pgina de ttulo
La configuracin del instrumento, incluyendo los nmeros de revisin del
instrumento y detalles acerca de la columna/capilar empleada
Las listas de la tabla de secuencia que describen lo que hara una secuencia
automatizada de anlisis
Descripciones del libro de registros de lo que hizo la secuencia y de los
resultados inesperados que ocurrieron en la secuencia
Listas de mtodos
Informes individuales de cada ejemplo
Estadsticas de los anlisis basadas en los criterios seleccionados (slo se
calculan las estadsticas de los compuestos calibrados) y
Un ndice general con las referencias del nmero de pginas de las seccio-
nes detalladas del informe.
Configuration
Seleccione Configuration si desea incluir la configuracin del instrumento y las
especificaciones de la columna/capilar en el informe.
Sequence Table
Seleccione Sequence Table para incluir una lista de las secuencias, parmetros
de cuantificacin de muestras y nombres de los mtodos en el informe. La lista
muestra los anlisis efectuados por el sistema.
Logbook
Seleccione Logbook para obtener una lista de los anlisis que ha realizado el
sistema, incluyendo las condiciones del instrumento y los hechos inusuales
que ocurrieron mientras se analizaban las muestras.
Methods
Seleccione Methods para realizar una lista de los mtodos analticos que se uti-
lizaron en la serie de anlisis automatizados.
Analysis Reports
Seleccione Analysis Reports para realizar informes de los diferentes anlisis con
el estilo de informe que configur para el mtodo.
Los informes de anlisis individuales pueden imprimirse despus de cada
anlisis segn el estilo de informe que especific para el mtodo en cuestin y
las secciones de informe especificadas en Sequence Summary Reporting. Con-
sulte "Salida de secuencias" a continuacin.
SUILabel Type = Application > Statistics for Calibrated and Sample Runs
Si selecciona Anlisis estadsticos de calibracin se realizarn anlisis de ten-
dencias estadsticas de las muestras de calibracin. Si selecciona Anlisis
Statistics de muestras, se realizarn anlisis de tendencias estadsticas de los
anlisis de muestras (desconocidas). Para estas selecciones estn disponibles
los estilos de plantilla Estadstica estndar y Estadstica ampliada. Extended
Statistics imprime las estadsticas de los anlisis como grficos, mientras que
si selecciona Standard Statistics se imprime slo el texto. Las selecciones que
realice en los cuadros de dilogo Items and Limits for Extended Statistics se utili-
zan slo cuando elija la opcin Extended Statistic en el cuadro de dilogo
Sequence Summary Parameters.
Si selecciona la opcin Standard Statistic en el cuadro de dilogo Sequence Sum-
mary Parameters, las estadsticas de las que se informa son:
tiempo de retencin/migracin,
rea,
altura,
cantidad,
anchura de pico (basada en el estilo del informe; consulte Estilos de
informe en la pgina 236)
y simetra.
El clculo de estadsticas no distingue entre niveles de calibracin diferentes
en una secuencia que utiliza mtodos de calibracin multinivel. Esto significa
que las opciones dependientes de la concentracin como, por ejemplo, el rea,
la altura o la cantidad (consulte el cuadro de dilogo Elementos y Lmites de
estadstica ampliada) se anan, independientemente del nivel de calibracin.
Los valores de las Statistics for Calibration Runs no son tiles para los mtodos
de calibracin multinivel en secuencias.
Resumen
La seleccin Summary imprimir una introduccin de la serie de muestras ana-
lizada y de los mtodos utilizados. Si se selecciona la opcin Resumen junto
con otras selecciones de resumen de secuencias, se incluyen los nmeros de
pgina con informacin de otras partes del informe de resumen de secuencias.
Existen dos estilos de resumen disponibles:
Salida de secuencias
Puede definir tambin en el cuadro de dilogo Sequence Output donde va a
imprimir el informe de resumen.
Seleccione Report to file e introduzca en nombre del fichero para imprimir el
informe en el fichero seleccionado. Viene configurado por defecto que los
datos se guarden en el fichero GLPrprt.txt. En sistemas GC con inyeccin dual
los datos se guardan en GLPrptF.txt y GLPrptB.txt, para el inyector delantero
y el inyector trasero respectivamente.
Seleccione Report to PDF para guardar el informe como un documento PDF. El
informe se guarda en la carpeta de secuencias con el nombre CLPrprt.PDF
Seleccione Report to HTM para imprimir el informe en formato HTML. El
informe se guarda en un directorio HTM en el directorio de datos especificado
en Sequence Parameters. El informe HTM se compone de un fichero de ndice
(index.htm) y, al menos, dos otros ficheros, un fichero de contenido (con-
tents.htm) y un fichero GIF (Graphics Interchange Format) para cada pgina
del informe (p. ej. page1.gif). Para ver el informe html, abra el fichero de ndice
con el navegador.
Si selecciona Report to printer, el informe se imprime en la impresora del sis-
tema. Si imprime uno por uno los informes de los anlisis se activa tambin la
impresin de los informes de muestras de cada anlisis. Estos informes se
imprimen junto con los especificados en el informe de resumen de secuencias
que se crean al final de la secuencia entera. Puede especificar un destino
nuevo para esos informes en el cuadro de dilogo Sequence Output o utilizar el
destino especificado en los mtodos.
11
Evaluacin de la idoneidad del sistema
Determinacin del ruido 251
Clculo del ruido utilizando seis veces la desviacin estndar 251
Clculo del ruido con la frmula pico a pico 252
Clculo del ruido con el mtodo ASTM 253
Clculo seal-ruido 255
Deriva y desviacin 255
Clculo de la simetra de picos 256
Frmulas y clculos de idoneidad del sistema 258
Definiciones generales 259
Volumen nulo 259
Tiempo de retencin del compuesto no retenido t (m) [minutos] 259
Definiciones del test de rendimiento 260
Momentos estadsticos 260
Momentos estadsticos, sesgo y exceso 261
Achura verdadera de pico Wx [min] 262
Factor de capacidad (USP), ndice de capacidad (ASTM) k' 262
Factor de cola USP (USP) t 262
Nmero de platos tericos por columna (USP, ASTM) n 263
Nmero de platos tericos por metro N [1/m] 264
Retencin relativa (USP, ASTM), selectividad alpha 264
Resolucin (USP, ASTM) R 265
Definiciones de reproducibilidad 266
Media de muestra M 266
Desviacin estndar de la muestra S 266
Desviacin estndar relativa RSD[%] (USP) 267
Desviacin estndar de la media SM 267
Intervalo de confianza CI 268
Anlisis de regresin 269
a^cZVa
GZ\gZh^c
gj^Yd2 eZcY^ZciZ2YZg^kV
+mHY
HY29Zhk^VX^cZhi{cYVg
]dgV
Figura 42 Clculo del ruido utilizando seis veces la desviacin estndar
donde
N es el ruido segn el mtodo de desviacin estndar por seis y
Std es la desviacin estndar de la regresin lineal de todos los puntos de
datos en el rango de tiempo.
gj^Yd2
{ e^Xdb{m#
bZcdhe^Xd
bc#
]dgV
Figura 43 El ruido va del pico mximo al pico mnimo (distancia)
donde
N es el ruido pico a pico,
Imax es el pico de intensidad ms alta (mxima) y
gj^Yd2 YZhk^VX^c
e^Xdb{m#
bZcdhbc#
Yi ]dgV
El clculo del ruido ASTM (ASTM E 685-93) se basa en una prctica estndar
para comprobar los detectores fotomtricos de la longitud de onda variable
que se utilizan en cromatografa de lquidos, segn define la Sociedad Ameri-
cana para Ensayos y Materiales (American Society for Testing and Materials).
Se pueden distinguir tres tipos diferentes de ruido en funcin del tamao del
rango de tiempo. La determinacin del ruido se basa en las mediciones pico a
pico en los rangos de tiempo definidos.
Clculo seal-ruido
Para el clculo seal-ruido, ChemStation utiliza seis veces la desviacin
estndar (sd) de la regresin lineal de la deriva para calcular el ruido. El rango
ms cercano al pico se selecciona de los rangos que se especifican en la confi-
guracin de idoneidad del sistema. El clculo seal-ruido se realiza con la
frmula:
Deriva y desviacin
La deriva se calcula por la pendiente de la regresin lineal (consulte la figura
Clculo del ruido utilizando seis veces la desviacin estndar) y la desviacin
se determina por el ruido pico a pico y los valores de los datos medios en los
ciclos de ruido ASTM (consulte Ruido determinado con el mtodo ASTM).
=g
=[
^c^X^dYZ [^cVa^oVX^cYZ
e^Xd V& V' V( V) e^Xd
AcZVWVhZ
i& i' i( i) I^Zbed
donde:
ai = rea de corte
ti = tiempo de corte
Definiciones generales
Volumen nulo
donde:
d = dimetro de columna [cm]
= constante, relacin de circunferencia al dimetro de un crculo.
l = longitud de columna [cm]
f = fraccin del volumen de la columna que no ocupa la fase estacionaria pero
que estn disponibles para la fase mvil; valor por defecto de f = 0,68 (para
Hypersil)
donde:
F = velocidad de flujo de LC [ml/min]
Momentos estadsticos
donde:
W5,0 anchura al 5% de altura (anchura de pico con cola), para el factor de cola USP
W50,0 anchura al 50% de altura (anchura de pico a media altura verdadera o sigma 2,35).
donde:
TR = tiempo de retencin del pico [min]
donde:
tw = distancia en minutos entre el frente del pico y TR, medida al 5% de la
altura de pico
W5.0 = anchura del pico al 5% de la altura del pico [min]
L
MOFBCBTFJOJDJBM
)
53 IPSB
UX
8
8#
donde:
WB = anchura de base [min]
donde:
W50 = anchura de pico a media altura [min]
Mtodo 5 sigma:
donde:
W4.4 = anchura del pico al 4,4% de la altura del pico [min]
Mtodo de varianza:
donde:
donde:
n = nmero de platos tericos
l = longitud de columna [cm]
donde:
k'(x) = factor de capacidad del pico x
Mtodo 5 sigma:
Mtodo estadstico:
donde:
M1(x) = tiempo de retencin medio del pico x (momento estadstico 1) [min]
Definiciones de reproducibilidad
Media de muestra M
El valor medio M de una muestra aleatoria consistente en N medidas, se cal-
cula a partir de un nmero limitado de valores Xi nicos observados de N
indexados con un contador consecutivo y segn la frmula:
donde:
N = nmero de observaciones discretas
Xi = valor de observaciones discretas indexadas por i
Intervalo de confianza CI
El intervalo de confianza se calcula para proporcionar informacin sobre si es
bueno el valor medio de clculo, cuando se aplica a todos los datos y no slo a
la muestra.
El intervalo de confianza en 100 (1 -) % para la media global se calcula con
donde:
Anlisis de regresin
Dada
Funcin lineal:
Coeficientes:
donde:
Coeficiente de regresin
donde:
12
Verificacin del sistema
Ventanas de verificacin y diagnstico 276
Verificacin del sistema 276
Registro GLPsave 279
Funcin del test del DAD 281
Funcin de revisin del test del DAD 281
Cuantificacin de compuestos
Se cuantifican de nuevo los compuestos del fichero de datos. Se comparan los
resultados con los resultados de cuantificacin originales que se guardan en el
registro de verificacin. Si no coinciden, el test fracasa.
Impresin de informes
Se imprime de nuevo el informe original.
En la pgina siguiente se muestra un ejemplo del test de verificacin comple-
tado con xito.
Registro GLPsave
volver a cargar e imprimir el anlisis de datos con parte del mtodo utili-
zado en el momento de anlisis de la muestra para probar que la evaluacin
de datos, presentada como resultados de los anlisis, no se ha modificado
de ninguna forma y
revisar sin volver a calcular los resultados de integracin y cuantificacin
para probar la autenticidad del informe.
Se pueden utilizar los test del detector como un paso en la validacin del sis-
tema rutinario de un instrumento analtico en un laboratorio regulado.
El test del DAD evala el rendimiento del detector de diodo-array. Cuando
selecciona el test del DAD del men Instrument (slo para LC3D y CE) se com-
prueba la intensidad y calibracin de la longitud de onda del instrumento. Si
presiona Save, los resultados del test se guardan de forma automtica en la
base de datos DADTest, en un fichero de registro llamado DADTest.Reg en el
directorio de instrumentos predeterminados.
Glosario UI
A current method F
mtodo actual
access level Full
Current Method
nivel de acceso Completo
Mtodo actual
Analysis Reports
Informes de anlisis H
Apply Manual Events from Method
D
Header
Aplicar eventos manuales del mtodo Data Analysis
Cabecera
Area reject Anlisis de datos
height reject
Rechazo por rea Data Analysis Navigation table
Rechazo por altura
Area% Navegacin de anlisis de datos
Height reject
% de rea Data File
Rechazo por altura
Autointegrate Fichero de datos
Height%
Integracin automtica Delete Peak(s)
% de altura
Eliminar pico(s)
B Description
I
Descripcin
Batch Individual Method from Data File (DA.M)
Detail
Lote Mtodo individual de fichero de datos
Detalle
(DA.M)
Draw Baseline
C Initial peak width
Dibujar lnea base
Calibration Settings Anchura de pico inicial
Configuracin de calibracin Integration
E
Character Integracin
ESTD% Integration Events Table
Carcter
% ESTD tabla Eventos de integracin
Compound Details
Extended ISTD%
Detalles de compuesto
Ampliado % ISTD
Compound Summary
Extended Performance Items and Limits for Extended Statistics
Resumen compuesto
rendimiento ampliado Elementos y Lmites de estadstica
Configuration
Extended Statistic ampliada
Configuracin
Estadstica ampliada
Contents
Contenido
Extended Statistic Parameters L
Parmetros de estadstica ampliada
Control Chart Library Search
Extended Statistics
diagramas de control Bsqueda en bibliotecas
Estadstica ampliada
load DA method from data file parts of method to run Report to HTM
Cargar mtodo DA desde fichero de parte del mtodo que analizar Informe en HTM
datos Path Report to PDF
Load DA method from data file Ruta Informe en PDF
Cargar mtodo DA de fichero de datos Paths Report to printer
Logbook Rutas Informe a impresora
Libro de registro peak width reprocess
Anchura de pico reproceso
M Performance Reprocessing only
Manual Events rendimiento Slo reprocesar
Eventos manuales Performance and Noise Review DAD Test
Manual Integration rendimiento y ruido Revisar test del DAD
integracin manual Preference Run Time Checklist
Method and Run Control preferencias Lista de control del anlisis
Mtodo y Control de anlisis Preferences
Methods Preferencias S
Mtodos Preferences / Signal/Review Sample Information
preferencias/seal/revisin Informacin de muestra
N Preferences / Signal/Review Option Sample Summary
Opciones de preferencias/seal/revi- Resumen de muestra
Navigation Table
sin
tabla de navegacin save as
Preferences / Signal/Review Options Guardar como
Negative Peaks
Opciones de preferencias/seal/revi-
Picos negativos Save as New Database
sin
Noise Guardar como nueva base de datos
Print
Ruido Save Current Sequence
Imprimir
None Guardar secuencia actual
Print Current Sequence
Ninguno Sequence
Imprimir secuencia actual
Norm% Secuencia
% Norm Sequence Method
Q Mtodo de secuencia
O Quantification Parameters Sequence Output
Parmetros de cuantificacin Salida de secuencias
One Page Header
Una pgina de cabecera Sequence Parameters
R Parmetros de secuencia
P Remove Manual Events from Method Sequence Summary Parameters
Quitar eventos manuales del mtodo Parmetros de resumen de secuencias
page x of y
Report to file Sequence Summary Reporting
pgina x de y
Informe en fichero Informes de resumen de secuencias
Partial Sequence
Secuencia parcial
ndice
% B picos 122
cuantificacin
% de altura buenas prcticas de laboratorio 29
definicin 122
clculo 126
procedimiento de ESTD 128
% de rea C
curva de calibracin
clculo 126 clculo de porcentaje 126 definicin 154
% Norm clculo descripcin de 154
clculo 131 % Norm 131 forzada a travs de cero
informe 131 ESTD 128, 128 (origen) 161
simetra de picos 256 multinivel 158
A calibracin cclica ponderacin del punto de
adquisicin de datos agrupamiento 206 calibracin 161
definicin 64 calibracin multinivel 158 nico nivel 157
agrupamiento calibracin curva de
calibracin cclica 206 cclica multinivel 199 calibracin 154
ajustes de curva de multinivel 158, 158 curva
calibracin 161 ChemStation calibracin 154
ajustes de descripcin general 11
curva de calibracin 161 CI 268 D
curva 161, 161 compuesto de Da.M 59
anlisis de datos 46 calibracin 152 derivada 86
informes especializados 24 compuesto 152 desviacin estndar
anchura de pico inicial 111 conectar el de media 267
anchura de pico origen 161 muestra 266
a altura x% 262 configuracin de relativa 267
tangencial 262 calibracin 135 residual 155
tabla de lotes 223 desviacin 261
configuracin 15 deteccin de hombros 111
rea de pico 108 construccin de la lnea base 95 Determinacin de ruido ASTM 253
control instrumental 46 determinacin de ruido 253
A trabajo en red 33 directorio
asignacin de la lnea base 79, 95 cualificadores de mtodo 54
picos 146 distribucin t 268
automatizacin 171
cualificadores 146 divisin tangencial 100
cuantificacin de
En este manual
*G2070-95126*
*G2070-95126*
G2070-95126
Agilent Technologies