Manuales Departamentales

Programa Acadmico, objetivos del curso, contenido temtico y

manual de prcticas de laboratorio

Bioqumica y
Biologa Molecular
Primer ao

Departamento de Bioqumica
Facultad de Medicina
Universidad Nacional Autnoma de Mxico
Cd. Universitaria, D.F. agosto de.

1
FACULTAD DE MEDICINA
MANUALES DEPARTAMENTALES

Obra general ISBN: 968-36-2767-6

Este volumen ISBM: 970-32-1866-0

2004
Nueva edicin revisada y estructurada.

2005 primera reimpresin.

2006 primera reimpresin.

Derechos reservados conforme a la ley.

Facultad de medicina, UNAM.

Folio CAPES: 008/2005

El contenido de este Manual esta protegido por la Ley de

Derecho de Autor y no puede ser reproducido, total o
parcialmente, por ningn medio mecnico, electrnico o
cualquier otro, sin el permiso escrito del Comit Asesor de
publicaciones de la Facultad de Medicina de la Universidad
Autnoma de Mxico.

El cuidado editorial estuvo a cargo del Comit Asesor de

Publicaciones de la Facultad de Medicina, UNAM.

El contenido de este Manual es responsabilidad de sus

Autores ya que constituye un auxiliar en la enseanza.

2
 FACULTAD DE MEDICINA

Dr. Enrique Luis Graue Wiechers Director

Dra. Rosalinda Guevara Guzmn
Dr. Pelayo Vilar Puig
Dr. Juan Jos Mazn Ramrez Secretaria de Enseanza Clnica, Internado
Dra. Irene Durante Montiel
Dr. Melchor Snchez Mendiola
Dr. Ricardo Valdivieso Calderon
Dr. Luis Felipe Abreu Hernndez
Lic. Ral A Aguilar Tamayo
Dr. Guillermo Robles Daz
Dra. Teresa Fortoul vG
Dr. Arturo Ruz R.
C.P. Francisco Cruz Ugarte
Secretario General
Jefe de la Divisin de Estudios de Posgrado
e Investigacin
y Servicio Social
Secretaria Tcnica del H. Consejo Tcnico
Secretario de Educacin Mdica
Secretario de Servicios Escolares
Secretario de Planeacin
Secterara Jurdica y de Control Administrativo
Coordinador de Investigacin
Coordinadora de Ciencias Bsicas
Coordinador de Servicios a la Comunidad
Secretario Administrativo

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA
Dr. Edgar Zenteno Galindo Jefe del Departamento de Bioqumica

M. en C. Alicia Cea Bonilla Coordinadora de Enseanza de Bioqumica

y Biologa Molecular
Dr. Ral Chvez Snchez Coordinador de Enseanza de Inmunologa
Dr. Guillermo Mendoza Hernndez Coordinador de Investigacin
M. en C. Rebeca Miln Chvez Coordinadora del Laboratorio de Prcticas

3
 Colaboradores

OBJETIVOS DEL CURSO metabolismo del colesterol, estructura y metabolismo

Guillermo lvarez Llera de las lipoprotenas, regulacin del metabolismo de
Patricia del Arenal Mena lpidos).
Alicia Cea Bonilla
Hayde Torres Guerrero (modificaciones
Leonor Fernndez Rivera Ro
postraduccionales).
Rebeca Miln Chvez
Sara Morales Lpez Ada Uribe Medina (caractersticas de la materia viva).
Celia Virginia Snchez Meza Alejandro Zentella Dehesa (virus, oncogenes y
transformacin).
SYLLABUS
Guillermo lvarez Llera (agua, ciclo de Krebs, oxidacin de
los aminocidos, qumica y metabolismo de INTRODUCCIN AL MANUAL DE PRCTICAS
carbohidratos, qumica y metabolismo de lpidos). DE LABORATORIO Y CASOS DE CORRELACIN
BIOQUMICA Y PRCTICA MDICA
Patricia del Arenal Mena (ciclo celular).

Alicia Cea Bonilla (fundamentos del metabolismo, Alicia Cea Bonilla (potenciometra y electroforesis).
protenas, enzimas y coenzimas, estructura de Rebeca Miln Chvez (gota).
carbohidratos, metabolismo de carbohidratos, Celia Virginia Snchez Meza.
regulacin de la glucemia, regulacin del metabolismo
de lpidos, sntesis y degradacin de fosfolpidos, ELABORACIN O REVISIN DE LAS PRCTICAS
regulacin e integracin metablica, biologa DE LABORATORIO
molecular).

Leonor Fernndez Rivera Ro (nucletidos).
scar Flores Herrera (figuras: ciclo energtico, vas que
siguen los protones en las levaduras, ciclo de Krebs y
esquema de un potencimetro).
Alberto Hamabata Nishimuta (aspectos bsicos de
fisicoqumica, niveles de regulacin de la expresin
gentica).
Noem Meraz Cruz (sntesis y degradacin de fosfolpidos,
regulacin del metabolismo de lpidos).
Rebeca Miln Chvez (equilibrio hidroelectroltico).
Sara Morales Lpez (agua, qumica y metabolismo de
carbohidratos, qumica y metabolismo de lpidos).
Celia Virginia Snchez Meza (tabla peridica, enlaces,
fundamentos del metabolismo, equilibrio
hidroelectroltico, protenas, radicales libres,
descarboxilacin del piruvato, regulacin de la
glucemia, sntesis y degradacin de fosfolpidos,
1. Soluciones. Celia Virginia Snchez Meza y Rebeca
Miln Chvez.
2. Regulacin del equilibrio cido-base despus de
ejercicio muscular intenso y de la ingestin de
bicarbonato de sodio. Concepcin Gonzlez Lpez,
Celia Virginia Snchez Meza y Juan Luis Rendn
Gmez.
3. Titulacin de un aminocido con una base y aplicacin
de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch. Leonor
Fernndez Rivera Ro y Celia Virginia Snchez Meza.
4. Estudio general de las protenas corporales. Celia
Virginia Snchez Meza y Rebeca Miln Chvez.
5. Cintica enzimtica. Efecto de la concentracin del
sustrato en la velocidad de la reaccin enzimtica.
Celia Virginia Snchez Meza, Rebeca Miln Chvez y
Jess Antonio Oria Hernndez.

4
6. Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto
de los inhibidores de la cadena de transporte de
electrones y de los desacoplantes. Juan Pablo Pardo
Vzquez y Federico Martnez Montes.
7. Efecto de la insulina sobre la glucemia de la rata.
Leonor Fernndez Rivera Ro.
8. Radicales libres (lipoperoxidacin). Jos Gutirrez y
Celia Virginia Snchez Meza.
9. Estudio general del metabolismo de los carbohidratos.
Celia Virginia Snchez Meza y Rebeca Miln Chvez.
10. Determinacin de lpidos y lipoprotenas plasmticas.
Celia Virginia Snchez Meza.
11. Determinacin de la transaminasa glutmico-pirvica
srica. Ma. Eugenia Garca Salazar y Celia
Virginia Snchez Meza.
12. Estudio general del metabolismo de los compuestos
nitrogenados. Celia Virginia Snchez Meza y Rebeca
Miln Chvez.13. Huella gnica. Rebeca Miln Chvez
y Eugenia Flores Robles
14. Determinacin de glucosa en sangre total. Rebeca
Miln Chvez y Eugenia Flores Robles
15. Integracin Metablica. Rebeca Miln Chvez y
Eugenia Flores Robles.
La revisin y la actualizacin de los Objetivos del curso se
realiz en colaboracin con el proyecto: Mejoramiento de la
Enseanza de la Bioqumica y Biologa Molecular (EN-
206603) del Programa de Apoyo a Proyectos
Institucionales para el Mejoramiento de la Enseanza
(PAPIME), siendo el responsable del proyecto el doctor
Federico Martnez Montes.
Correccin y cuidado de la edicin: Edgar Zenteno
Galindo, Alicia Cea Bonilla, Rebeca Miln Chavez y
Eugenia Flores Robles.
5
 CONTENIDO
PROGRAMA ACADMICO
B.1. Estructura 48
I. Misin de la Facultad de Medicina 8I B.2. Digestin y absorcin 48
C. Metabolismo energtico 50
II. Introduccin 10 C.1. Gluclisis 51
III. Datos generales de la asignatura 12 ----- C.2. Papel de la mitocondria en las funciones
oxidativas 51
IV. Objetivos de aprendizaje 12 C.3. Descarboxilacin del piruvato 52
V. Metodologa educativa 12 C.4. Ciclo de los cidos tricarboxlicos (ciclo
de Krebs) 52
VI. Estructura del curso 13 C.5. Cadena de transporte de electrones
VII. Lineamientos de evaluacin 18 (cadena respiratoria) 54
C.6. Fosforilacin oxidativa 55
VIII. Obligaciones de los profesores y C.7. Radicales libres 56
alumnos 25 D. Otras vas metablicas de los carbohidratos.
58
IX. Bibliografa 25 D.1. Gluconeognesis 58
D.2. Glucogenlisis y glucognesis 59
D.3. Va del fosfogluconato (ciclo de las
pentosas) 60
D.4. Regulacin de la glucemia 60
Unidad Temtica 1: Estructura molecular E. Lpidos 62
E.1. Estructura 62
I. Lgica molecular de la vida E.2. Digestin, absorcin y transporte 62
A. Caractersticas de la materia viva 27 F. Metabolismo de lpidos 64
B. Niveles de la organizacin celular 27 F.1. Oxidacin de los cidos grasos (-
B.1 Bioelementos 27 oxidacin) 65
B.2 Molculas precursoras y F.2. Sntesis y utilizacin de los cuerpos
macromolculas 27 cetnicos 65
B.3 Estructuras, orgnulos, clulas, tejidos y F.3. Sntesis de cidos grasos 66
Organismos 29 F.4. Sntesis y degradacin de triacilgliceroles
66
II. Aspectos fisicoqumicos del funcionamiento F.5. Sntesis y degradacin de fosfolpidos 67
celular F.6. Metabolismo del colesterol 68
A. Aspectos bsicos de fisicoqumica aplicados F.7. Estructura y metabolismo de las
a la bioqumica 31 lipoprotenas 69
B. Agua 33 F.8. Regulacin y alteraciones del
C. Equilibrio hidroelectroltico y cido-base 35 metabolismo de lpidos 70
D. Aminocidos y protenas 37 G. Metabolismo de los compuestos
D.1. Aminocidos 37 nitrogenados . 72
D.2. Protenas 37 G.1. Aminocidos y protenas 72
E. Enzimas y coenzimas 40 G.2. Nucletidos 74
E.1. Caractersticas de un sistema enzimtico40 H. Regulacin e integracin metablica 76
E.2. Cintica enzimtica 40
E.3. Aspectos mdicos de la Unidad Temtica III: Biologa Molecular
enzimologa 40
IV Biologa Molecular
Unidad Temtica II: Metabolismo A. Organizacin del genoma 80
B. Flujo de la informacin gentica 83
III. Metabolismo y bioenergtica B.1. Flujo de la informacin gentica 83
A. Fundamentos del metabolismo celular 46 B.2. Sntesis del DNA (duplicacin) 83
B. Carbohidratos 48 B.3. Transcripcin 85

VI
 B.4. Traduccin 86 concentracin del sustrato en la velocidad
C. Mutaciones y reparacin del DNA 89 de la reaccin enzimtica 148
D. Niveles de regulacin de la expresin Prctica 6. Efecto de la insulina sobre la Glucemia
gentica 90 de la rata. 152
E. Virus, oncogenes y transformacin 93 Prctica 7. Estudio del bombeo de protones
F. Tcnicas de manipulacin del DNA 95 por levaduras; efecto de los inhibidores
de la cadena de transporte de electrones
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO y de los desacoplantes 153
Prctica 8. El efecto del etanol sobre la lipoperoxi-
I. Conceptos tericos iniciales dacin 156
El mtodo cientfico 79 Prctica 9. Estudio general del metabolismo
El Sistema Internacional de Unidades (SI) 81 de carbohidratos 157
Matemticas para el laboratorio 85 Prctica 10. Determinacin de lpidos y lipopro-
Notacin cientfica o exponencial 85 tenas plasmticas 162
El mtodo del factor unitario en los clculos 86 Prctica 11. El efecto del tetracloruro de carbono
Logaritmos 86 sobre las transaminasas 170
Grficas 88 Prctica 12. Estudio de los productos finales
Algunos mtodos utilizados en bioqumica 89 del metabolismo nitrogenado 171
Centrifugacin 89 Prctica 13. Huella gnica 178
Potenciometra 91 Prctica 14. Determinain de glucosa en sangre
Electroforesis 93 total. 183
Soluciones 96
Manejo de material biolgico 101 Prctica 15. Integracin metablica 186
Medidas de seguridad 103
III. Casos de correlacin bioqumica y prctica
II. Experimentos
mdica
Caso 1. Clera 195
Prctica 1. Soluciones 133
Caso 2. Oclusin intestinal. Acidosis metablica.
Prctica 2. Regulacin del equilibrio cido-base
Deshidratacin grave 196
despus de ejercicio muscular intenso y de la
Caso 3. Hipoglucemia secundaria a intoxicacin
ingestin de bicarbonato de sodio 137
Alcohlica 198
Prctica 3. Titulacin de un aminocido
Caso 4. Cetosis por inanicin. Obesidad 199
con una base y aplicacin de la ecuacin
Caso 5. Hipercolesterolemia y aterosclerosis 200
de Henderson y Hasselbalch. Determinacin
Caso 6. Gota 202
del pK1 y del pK2 140
Prctica 4. Estudio de las protenas corporales 142
Prctica 5. Cintica enzimtica. Efecto de la

VII
 PROGRAMA ACADMICO
I. Misin de la Facultad de Medicina
Formar a los lderes de las prximas
generaciones de mdicos mexicanos y contribuir a
establecer un sistema de salud capaz de preservar
y desarrollar las capacidades fsicas y mentales de
nuestra poblacin y colaborar en la preparacin de
investigadores en el campo de las ciencias
mdicas.
Para ello, ser necesario fortalecer el compromiso
social de sus estudiantes y su vocacin
humanstica para tener a la vida humana y a la
dignidad del hombre como valores supremos, por
lo que ser necesario que los alumnos adquieran
los conocimientos cientficos ms avanzados para
responder cabalmente a las necesidades de salud
de la sociedad mexicana.
La educacin y la formacin mdica en la Facultad
debern ser factores de cambio e innovacin en
las instituciones de salud y contribuir a incrementar
las aportaciones de la medicina mexicana al
conocimiento universal.
El apego a la prestacin de servicios de la ms
alta calidad, la curiosidad cientfica y el
compromiso irrestricto con los principios
fundamentales de la tica mdica debern ser la
caracterstica de sus egresados. Para ello ser
necesario organizarse en un ambiente de libertad
intelectual, en el que se conjuguen el talento de
profesores y alumnos, fomentando la creatividad y
la productividad individual y colectiva.
En suma, la Facultad de Medicina deber
caracterizarse por su calidad acadmica, su
vitalidad, su compromiso decidido con la
investigacin original y los principios humansticos
de la profesin para poder consolidar el liderazgo
que legtimamente le corresponde.
Calidad acadmica. Que significa
favorecer la formacin ms all de la
simple informacin en sus estudiantes,
fortaleciendo su preparacin en las
ciencias bsicas de la medicina que les
permita seguir el ritmo de los avances en
el conocimiento y sus aplicaciones en la
clnica.
Vitalidad. Para poder enfrentar el futuro
en el contexto del cambio cientfico y
tecnolgico y de las modificaciones que
experimenten las condiciones
socioeconmicas de nuestra poblacin.
Para ello, ser necesario rescatar la
enseanza tutorial orientada a la solucin
de problemas de manera original e
innovadora y capaz de inducir en el
estudiante una conciencia clara de sus
necesidades de actualizacin permanente
y educacin continua.
Investigacin original. Por cuanto que es
un elemento indispensable para alcanzar
un sistema de salud de alta calidad y
eficiencia, y porque es la nica va para
atender cabalmente los complejos
fenmenos que inciden en el proceso de la
salud y la enfermedad en medicina,
educacin e investigacin son
inseparables.
Humanismo. Porque el fin ltimo del
mdico es el hombre mismo. Para ello
habr de desarrollar una sensibilidad
singular ante el dolor y la angustia de los
enfermos, ante su ignorancia y sus
problemas, para que pueda ayudar a
superarlos. Para poder servir a la sociedad
y los individuos con plena conciencia de
sus valores y potencialidades habr que
inducir en nuestros estudiantes una actitud
humanitaria.
8
 Liderazgo. Entendiendo ste como la
capacidad para mantener una actitud de
vanguardia y compartir conocimientos y
experiencia; para orientar la educacin
mdica nacional y fortalecer tanto la
investigacin en salud como nuestro
sistema de educacin superior; para
transformar la medicina mexicana y
responder cada vez mejor a una sociedad
que se esfuerza en superarse y demanda,
con razn, una mayor calidad a todo el
sistema de salud.
Congruente con la Misin de la Facultad de
Medicina, la funcin del mdico se caracteriza de
la siguiente manera:
El mdico es un profesional comprometido a
preservar, mejorar y restablecer la salud del
ser humano; sus acciones se fundamentan en
el conocimiento cientfico de los fenmenos
biolgicos, psicolgicos y sociales. Su
ejercicio profesional se orienta
primordialmente a la prctica clnica, la cual
debe ejercer con conocimiento, diligencia,
humanismo, prudencia y juicio critico,
guindose por un cdigo tico que considera a
la vida humana como valor supremo.
EL PERFIL PROFESIONAL DEL EGRESADO DE
LA CARRERA DE MDICO CIRUJANO
El egresado de la Facultad de Medicina de la
Universidad Nacional Autnoma de Mxico que
cumple satisfactoriamente los objetivos y adquiere
los conocimientos, habilidades, destrezas y
actitudes que integran el Plan nico de Estudios:
Es un profesional capacitado para ofrecer
servicios de medicina general de alta
calidad y, en su caso, para referir con
prontitud y acierto aquellos pacientes que
requieren cuidados mdicos
especializados.
En la atencin de los pacientes, adems
de efectuar las acciones curativas, aplica
las medidas necesarias para el fomento a
la salud y la prevencin de las
enfermedades, apoyndose en el anlisis
de los determinantes sociales
ambientales, especialmente el estilo de
vida.
Se conduce segn los principios ticos y
humanistas que exigen el cuidado de la
integridad fsica y mental de los pacientes.
Como parte integral de su prctica
profesional examina y atiende los
aspectos afectivos, emocionales y
conductuales de los pacientes bajo su
cuidado.
Conoce con detalle los problemas de
salud de mayor importancia en nuestro
pas y es capaz de ofrecer tratamiento
adecuado a los pacientes que los
presentan.
Promueve el trabajo en equipo con otros
mdicos y profesionales de la salud y
asume la responsabilidad y el liderazgo
que le corresponden, segn su nivel de
competencia y papel profesional.
Dispone de conocimientos slidos acerca
de las ciencias de la salud, lo que le
permite utilizar el mtodo cientfico como
herramienta de su prctica clnica habitual
y lo capacita para optar por estudios de
posgrado, tanto en investigacin como en
alguna especialidad mdica.
Tiene una actitud permanente de
bsqueda de nuevos conocimientos, por lo
que cultiva el aprendizaje independiente y
autodirigido, lo que le permite actualizarse
en los avances de la medicina y mejorar la
calidad de la atencin que otorga.
Se mantiene actualizado en relacin a los
avances cientficos y tecnolgicos ms
recientes; utiliza la informacin y la
tecnologa computacional para la
adquisicin de nuevos conocimientos y
como una herramienta de trabajo dentro
de su prctica profesional.
y
9
II. INTRODUCCIN:
1. Mapa curricular:
ANATOMA

BIOLOGA CELULAR Y TISULAR

BIOLOGA DEL DESARROLLO

PRIMER AO

BIOQUMICA Y BIOLOGA MOLECULAR

PSICOLOGA MEDICA I

SALUD PBLICA I

ASIGNATURAS DE LIBRE
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIN*** ELECCIN***

CIRUGA I

FARMACOLOGA
SEGUNDO AO

FISIOLOGA

INMUNOLOGA

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

SALUD PBLICA II

ASIGNATURAS DE LIBRE
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIN*** ELECCIN***

PROPEDUTICA Y
FISIOPATOLOGA*
PATOLOGA

MEDICINA GENERAL I*
TERCER AO

PSICOLOGA MDICA II**

SALUD PBLICA III*** GENTICA CLNICA*

SEMINARIO CLNICO*

ASIGNATURAS DE LIBRE
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIN*** ELECCIN***

HISTORIA Y FILOSOFA DE LA
CUART
O AO

SALUD PBLICA IV** MEDICINA

10
 MEDICINA GENERAL II*

CIRUGA II*

ASIGNATURAS DE LIBRE
ASIGNATURAS DE LIBRE ELECCIN*** ELECCIN***

INTERNADO MDICO*
QUINTO AO

GINECOLOGA Y
OBSTETRICIA

COMUNIDAD

URGENCIAS

PEDIATRA

INTERNA

CIRUGA

MEDICINA
SEXTO AO

S E R V I C I O S O C I A L

* Estas asignaturas son la base del entrenamiento en el rea clnica, en llas el alumno
adquirir los conocimientos acerca de la patologa de los diversos aparatos y sistemas,
as como las habilidades y destrezas necesarias para el manejo de los problemas de
salud ms frecuentes.
** Estas asignaturas corresponden al rea sociomdica.
*** Su propsito es permitir que el alumno profundice o complemente de acuerdo a sus
preferencias algunos contenidos del plan de estudios; tenga la posibilidad de capacitarse
en ciertas reas no consideradas en dicho plan, as como tambin dar flexibilidad al
currculo.

reas de rotacin bimestral.

11
 2. Importancia de la asignatura en la carrera.
La segunda mitad del siglo XX fue el marco
temporal de una expansin acelerada de nuestro
entendimiento del mundo y del Universo en
general y, como consecuencia, la orientacin de
una mayor cantidad de recursos humanos y
materiales hacia la investigacin en todas las
reas de la ciencia. El campo de la medicina ha
tenido grandes avances, particularmente en las
reas del conocimiento de la Bioqumica y de la
Biologa Molecular. La informacin generada por
estas disciplinas ha sido fundamental para
comprender mejor el fenmeno de la vida y para
abordar el estudio de las enfermedades.
Los conocimientos aportados por la Bioqumica y
la Biologa Molecular no slo permiten entender
mejor la manera en la que estn estructuradas las
clulas y los tejidos, el funcionamiento del
organismo y cules son las fundamentos de la
patognesis existente, sino que proporcionan las
bases para el uso racional de las estrategias
teraputicas, principalmente en el campo del
descubrimiento de frmacos efectivos con un
mnimo de efectos indeseables.
Si bien es cierto que los avances son
extraordinarios, an quedan muchas interrogantes
por contestar. Da con da se avanza en la
bsqueda de tales respuestas. En consecuencia,
la Bioqumica y la Biologa Molecular forman parte
de esa gran plataforma de los programas actuales
de formacin acadmica de los mdicos cirujanos.
El Departamento de Bioqumica ofrece a los
estudiantes de la carrera de mdico cirujano el
programa de contenidos de este curso, el cual est
dirigido e integrado con un enfoque mdico,
adaptado a las necesidades de una modernidad
inquisitiva, demandante de conocimientos cada
vez ms aproximados a un contexto que permita
esa aspiracin superior de contar con una
medicina de alta calidad.
Por otro lado, ahora que inicias tus estudios
profesionales es importante que sepas que el
aprendizaje es una
experiencia activa de descubrimiento, por lo que
no slo debers esperar que tus maestros te
guen a lo largo de tus estudios.
Entre las habilidades que debers adquirir durante
tu formacin profesional estn la bsqueda de
informacin y la autoenseanza.
Los conocimientos mnimos necesarios para
aprobar el curso de Bioqumica y Biologa
Molecular se encuentran descritos en este Manual
de objetivos del curso y prcticas de laboratorio,
por lo que te sugerimos que los revises
cuidadosamente; en caso de que algn concepto
no se estudie en la clase, es tu responsabilidad
buscar la informacin correspondiente y
aprenderla. Te deseamos que el aprendizaje de
esta disciplina te resulte grato y que lo lleves a
feliz trmino.
III DATOS GENERALES DE LA ASIGNATURA
1. Coordinacin: Departamento de
Bioqumica
2. Tipo de Asignatura: Terica y prctica
3. Ubicacin Primer ao
4. Duracin Anual
5. N de horas Teora: 160 h
Prctica: 120 h
6. N de crditos 22
7. Clave 1115
8. Requisitos acadmicos Cubrir los
requisitos de ingreso a la licenciatura
IV OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
1. Que el estudiante entienda los fenmenos
biolgicos desde el punto de vista molecular y
que sea capaz de integrar este conocimiento
en la estructura fisiolgica de la clula, del
tejido y del organismo.
2. Que el estudiante conozca los mecanismos
moleculares del funcionamiento del organismo
humano de una manera dinmica e integral y,
al mismo tiempo, comprenda cmo esos
mecanismos se encuentran alterados en la
enfermedad.
3. Que el estudiante demuestre, mediante
actividades ex profeso, que ha podido integrar
el conocimiento a nivel molecular como una
herramienta fundamental para la comprensin
de los procesos fisiolgicos y de la
fisiopatologa y con ello entienda los principios
en los que se apoya la tecnologa empleada
en el diagnstico de enfermedades.
4. Que el estudiante aplique el mtodo cientfico
como una herramienta en la identificacin, el
anlisis y la solucin de problemas mdicos.
12
V. METODOLOGA EDUCATIVA II. Aspectos fisicoqumicos del
Con base en lo descrito en el Plan nico de funcionamiento celular
Estudios respecto a este tema en los puntos A. 1, A. Aspectos bsicos de fisicoqumica aplicados
2, 4, 6, 7, 8 y 9 y B. 1 y 2, el profesor utilizar, en a la bioqumica
la medida de lo posible, algunos procedimientos y B. Agua
tcnicas que impliquen una metodologa centrada C. Equilibrio hidroelectroltico y cido-base
en la solucin de problemas, la vinculacin terico- D. Aminocidos y protenas
prctica de los conocimientos (el desarrollo y D.1. Aminocidos
discusin de prcticas de laboratorio de inters D.2. Protenas
mdico), la aplicacin de tcnicas de enseanza E. Enzimas y coenzimas
que favorezcan la participacin activa de los E.1. Caractersticas de un sistema
estudiantes (como seminarios, discusin de casos, enzimtico
las semanas de integracin bsica-clnica), as E.2. Cintica enzimtica
como la bsqueda y anlisis crtico de la E.3. Aspectos mdicos de la enzimologa
informacin, sea de libros como de fuentes
automatizadas, para lograr los objetivos de
aprendizaje. UNIDAD TEMTICA II: Metabolismo

III. Metabolismo y bioenergtica

VI. ESTRUCTURA DEL CURSO A. Fundamentos del metabolismo celular
B. Carbohidratos
1. ACTIVIDADES PROPUESTAS: B.1. Estructura
Inicio del curso 25 de agosto de 2008 y termino el B.2. Digestin y absorcin
20 de mayo de 2009. C. Metabolismo energtico
C.1. Gluclisis
El curso se divide en TRES UNIDADES C.2. Papel de la mitocondria en las funciones
TEMTICAS: oxidativas
a) Estructura molecular (correspondiente al 25% C.3. Descarboxilacin del piruvato
de la calificacin). C.4. Ciclo de los cidos tricarboxlicos (ciclo
b) Metabolismo (correspondiente al 50% de la de Krebs)
calificacin). C.5. Cadena de transporte de electrones
c) Biologa molecular (correspondiente al 25% de (cadena respiratoria)
la calificacin). C.6. Fosforilacin oxidativa
C.7. Radicales libres
El contenido educativo del curso consiste en: D. Otras vas metablicas de los carbohidratos
D.1. Gluconeognesis
a) Teora. D.2. Glucogenlisis y glucognesis
b) Trabajo de laboratorio y programas de D.3. Va del fosfogluconato (ciclo de las
aprendizaje de la bioqumica asistida por pentosas)
computadora. D.4. Regulacin de la glucemia
c) Revisin de casos de correlacin bioqumica- E. Lpidos
prctica mdica. E.1. Estructura
d) Solucin de problemas. E.2. Digestin, absorcin y transporte
e) Semanas de Integracin bsica-clnica F. Metabolismo de lpidos
F.1. Oxidacin de los cidos grasos (-
2. UNIDADES TEMTICAS Y CONTENIDO oxidacin)
TEMTICO: F.2. Sntesis y utilizacin de los cuerpos
cetnicos
UNIDAD TEMTICA I: Estructura molecular F.3. Sntesis de cidos grasos
F.4.Sntesis y degradacin de triacilgliceroles
I. Lgica molecular de la vida F.5. Sntesis y degradacin de fosfolpidos
A. Caractersticas de la materia viva F.6. Metabolismo del colesterol
B. Niveles de la organizacin celular F.7. Estructura y metabolismo de las
B.1 Bioelementos lipoprotenas
B.2 Molculas precursoras y F.8. Regulacin y alteraciones del
macromolculas metabolismo de lpidos
B.3 Estructuras, orgnulos, clulas, tejidos y
organismos

13
G. Metabolismo de los compuestos B. Flujo de la informacin gentica
nitrogenados B.1. Flujo de la informacin gentica
G.1. Aminocidos y protenas B.2. Sntesis del DNA (duplicacin)
G.2. Nucletidos B.3. Transcripcin
H. Regulacin e integracin metablica B.4. Traduccin
C. Mutaciones y reparacin del DNA
D. Niveles de regulacin de la expresin
UNIDAD TEMTICA III: Biologa gentica
Molecular E. Virus, oncogenes y transformacin
F. Tcnicas de manipulacin del DNA
IV Biologa Molecular
A. Organizacin del genoma

14
 3. CALENDARIO DE ACTIVIDADES:
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA PRIMERA UNIDAD TEMTICA
(BLOQUE 1)
Semana Fecha
1 25 al 29 de agosto
2 1 al 6 de septiembre
3 8 al 13 de septiembre
4 15 al 20 de septiembre**
5 22 al 27 de septiembre
6 29 de septiembre al 4 de
octubre
7 6 al 11 de octubre
8 13 al 18 de octubre/
9 24 octubre
* da de asueto
/ Exmenes departamentales
Tema
Lgica molecular de la vida: Caractersticas de la materia viva y
jerarqua de la organizacin celular.
A. Aspectos bsicos de Fisicoqumica aplicados a la
Bioqumica.
B. Agua
Prctica: Soluciones
B. Agua
Amortiguadores
C. Equilibrio hidroelectroltico y cido-base
Prctica: Soluciones
Revisin del caso clnico: CLERA
C. Equilibrio hidroelectroltico y cido-base
Revisin del caso clnico: OCLUSIN INTESTINAL
D. Aminocidos
Prctica: Titulacin de un aminocido
D. Aminocidos y Protenas
Prctica: Titulacin de un aminocido
Prctica: Determinacin de protenas plasmticas
E. Enzimas y coenzimas
Prctica: Determinacin de protenas plasmticas
Prctica Cintica Enzimtica
E. Enzimas y coenzimas
Prctica: Determinacin de protenas plasmticas
Prctica: Cintica enzimtica
PRIMER EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 HRS.
15
 CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA SEGUNDA UNIDAD TEMTICA
(BLOQUE 2)
Semana Fecha
1 25 de octubre
2 27 de octubre al 1 de noviembre/*
3 3 al 8 de noviembre/
4 10 al 15 de noviembre
5 17 al 22 de noviembre*/
6 24 al 29 de noviembre /
7 1 al 4 de diciembre/
5 de diciembre
7 11:00 HRS.
* Da de asueto
/ Exmenes departamentales
Tema
A. Fundamentos del metabolismo
A. Fundamentos del metabolismo
B. Estructura y Digestin de carbohidratos
C. Gluclisis
C.Gluclisis.
C. Descarboxilacin del piruvato
Ciclo de los cidos tricarboxlicos
Prctica: Efecto de la insulina sobre la Glucemia
de la rata
C.Ciclo de los cidos tricarboxlicos
C Cadena de transporte de electrones
Prctica: Efecto de la insulina sobre la Glucemia
de la rata.
Prctica: Bombeo de Protones
C Cadena de transporte de electrones
C. Fosforilacin oxidativa
Prctica: Bombeo de Protones
C. Fosforilacin oxidativa
C.Radicales libres
1. Semana de Integracin Bsica-Clnica
Revisin del caso clnico: HIPOGLUCEMIA E
INTOXICACIN ALCOHLICA
SEGUNDO EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-
16
CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA SEGUNDA UNIDAD TEMTICA
(BLOQUE 3)
Semana Fecha Tema
8 al 11 de diciembre// D. Va del fosfogluconato
1 D. Gluconeognesis
2 15 de diciembre 2008
al 3 de enero de 2009 Vacaciones de Navidad
D. Glucognesis y glucogenlisis
3 5 al 10 de enero D. Regulacin de la glucemia
Prctica : Estudio General del metabolismo de
carbohidratos
B. Estructura y Digestin de lpidos
3 12 al 17de enero C.Prcticas comunitarias en los grupos asignados
4 F. Oxidacin de los cidos grasos
19 al 24 de enero/ F. Sntesis y utilizacin de cuerpos cetnicos
F. Sntesis de cidos grasos
5 26 al 31 de enero/ F. Sntesis y degradacin de triacilgliceroles
Prctica: El efecto del etanol sobre la
Lipoperoxidacin
Prctica: El efecto del etanol sobre la
6 2 al 7 de febrero* Lipoperoxidacin
Revisin del caso clnico CETOSIS POR INANICIN Y OBESIDAD
F. Metabolismo del colesterol
7 9 al 14 de febrero Metabolismo de Lipoprotenas
Prctica: Determinacin de lpidos y lipoprotenas
F. Regulacin y alteraciones del metabolismo de lpidos
8 16 al 21 de febrero Revisin del caso clnico: HIPERCOLESTEROLEMIA Y
ATEROSCLEROSIS
Prctica: Determinacin de lpidos y lipoprotenas
G. Metabolismo de los compuestos nitrogenados
1. Aminocidos y protenas
G. Metabolismo de los compuestos nitrogenados
9 23 al 28 de febrero// 1. Aminocidos y protenas
2. Ciclo de la urea
2. Semana de integracin bsica-clnica
Prctica: El efecto del tetracloruro de carbono sobre las
Transaminasas
10 G. Nucletidos
2 al 7 de marzo/ 1. Purinas
Prctica: El efecto del tetracloruro de carbono sobre las
Transaminasas
11 9 al 14 de marzo// G. Nucletidos
2. Pirimidinas
Revisin del caso clnico: GOTA
Prctica: Determinacin de productos finales del metabolismo
12 16 al 21 de marzo* H. Regulacin e integracin metablica
Prctica: Determinacin de productos finales del
Metabolismo nitrogenado
23 al 25 de marzo H. Regulacin e integracin metablica
13 TERCER EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 HRS.
26 de marzo

Da de asueto
/ Exmenes departamentales

17
 CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA TERCERA UNIDAD TEMTICA
(BLOQUE 4)

Semana Fecha Tema

1 27 al 28 de marzo A. Flujo de la informacin gentica

B. Estructura de los cidos nucleicos y sus funciones

2 30 de marzo al 4 de abril C. y G Organizacin del DNA

3
6 al 11 de abril
4 13 al 17 de abril
5 20 al 24 de abril
G. Organizacin del genoma
Semana Santa
D. Mecanismos de sntesis del DNA
E. Mecanismos de transcripcin
Prcticas comunitarias en los grupos asignados
Modificacin postranscripcional
F. Mecanismos de traduccin

F. Modificacin postraduccional
6 27 de abril al 2 de mayo* H. Mutaciones y reparacin del DNA

7 4 al 9 de mayo* I. Niveles de regulacin de la expresin gentica

Prctica: Huella Gnica
J. Virus, oncogenes y transformacin
8 11 al 16 de mayo*///
K. Tcnicas de manipulacin del DNA
Prctica: Huella Gnica
18 al 22 de mayo*// K. Tcnicas de manipulacin del DNA
9
20 de mayo CUARTO EXAMEN DEPARTAMENTAL: 9:00-11:00 hrs.

* Da de asueto
/ Exmenes departamentales

Los contenidos especficos correspondientes a este programa, tanto tericos, como las prcticas de
laboratorio y los casos clnicos a que hace referencia esta calendarizacin de actividades se encuentran en el
manual de objetivos y prcticas de laboratorio de la Asignatura de Bioqumica y Biologa Molecular.

18
VII. LINEAMIENTOS DE EVALUACIN
A. Lineamientos Generales para la Evaluacin de
los Alumnos en las Asignaturas de la Carrera de
Mdico Cirujano
Los presentes lineamientos tienen su
fundamento en el Reglamento General de
Exmenes de la UNAM y en el Plan nico de
Estudios de la carrera, considerando adems
las caractersticas especficas de las diferentes
asignaturas.
1. Cada departamento o secretara responsable
de una asignatura establecer en el
programa acadmico correspondiente las
unidades temticas en que se dividir y el
nmero de evaluaciones parciales con que
se calificar a los alumnos.
2. Los programas acadmicos de las
asignaturas incluirn, entre otras, la
definicin de:
a) La composicin y ponderacin de la
forma en que se evaluar a los alumnos
en la calificacin del profesor.
b) Si se entrega o no a los alumnos el
examen y su clave de respuestas.
c) El nmero de reactivos y el tiempo para
resolver los diferentes exmenes.
3. En todas las asignaturas se contar con dos
calificaciones: la del profesor y la
departamental.
a) Para cada asignatura se definir la
ponderacin de cada una de ellas, la que
podr variar entre el 40 y 60% y cuya
suma deber representar el 100%.
b) Para cada unidad temtica se contar
con una calificacin que permitir
determinar si el alumno est o no exento
de presentar el examen ordinario en su
totalidad, o si deber presentar alguna o
algunas de las unidades temticas del
curso.
4. La evaluacin del profesor incluir una
calificacin por cada unidad temtica del
curso. El profesor informar al departamento
o secretara correspondiente y a sus
alumnos, la forma en que los evaluar, la que
podr ser compuesta, entre otras, por los
resultados de los exmenes que aplique, la
presentacin de trabajos, participacin en
clase, ejercicios de integracin y de
laboratorio, prcticas obligatorias, talleres y
actitud asumida por el alumno en el curso.
5. La evaluacin departamental corresponder
a la calificacin obtenida por el alumno en los
exmenes tericos y prcticos parciales. Los
exmenes sern elaborados colegiadamente
y aplicados por los profesores del curso, bajo
la coordinacin de los departamentos o
secretara correspondientes.
6. Los exmenes se integrarn a partir de
bancos de reactivos elaborados por cada
departamento o secretara, con la
participacin de los profesores. Tendrn las
caractersticas que permitan evaluar de
forma homognea, el grado de aprendizaje y
dominio de los conocimientos, habilidades y
competencias definidos en el programa de la
asignatura. Para ello, los bancos contarn
con la definicin del grado de dificultad de los
reactivos, su capacidad discriminatoria y los
contenidos evaluados.
7. El Consejo Tcnico definir el calendario de
exmenes departamentales con base en la
propuesta que formule la Secretara de
Servicios Escolares, previa consulta con los
departamentos y representantes de alumnos.
8. Con los resultados de las evaluaciones del
profesor y del examen departamental se
definir si el estudiante exenta o no la
totalidad del examen ordinario, o si deber
presentar alguna, algunas o todas las
unidades temticas del curso, bajo los
siguientes criterios:
a) El alumno quedar exento de presentar
la totalidad del examen ordinario, si el
promedio de las calificaciones
aprobatorias obtenidas en las unidades
temticas es de 8.5 o mayor, y tiene un
mnimo de 80% de asistencias.
b) El alumno podr exentar la presentacin,
en el examen ordinario, de una o varias
unidades temticas en las que haya
obtenido un promedio mnimo de 8.5.
c) En relacin con el inciso que antecede, la
calificacin obtenida por el alumno en la
unidad temtica exenta, sin redondeo, se
har equivalente al nmero de aciertos
que corresponda en el examen ordinario
y esta cifra se sumar a los aciertos
19
 obtenidos en las unidades temticas
presentadas en dicho examen, siempre y
cuando stas ltimas sean aprobatorias.
d) La calificacin as obtenida, ser la que
se asiente en el acta correspondiente.
9. Los exmenes ordinarios sern elaborados
colegiadamente y aplicados por los
profesores de la asignatura, bajo la
coordinacin de los departamentos o
secretara correspondientes, a los alumnos
que no hubieran alcanzado la exencin total
del examen.
Podrn presentar examen ordinario, los
alumnos que habiendo cursado la materia no
hayan quedado exentos de conformidad con
lo arriba sealado. Se considerar cursada
la materia cuando se cuente con al menos el
80% de asistencia al curso, se hayan
presentado los exmenes parciales y
realizado los ejercicios, trabajos y prcticas
obligatorias que el programa acadmico de la
asignatura determine.
Los exmenes ordinarios podrn incluir la
evaluacin de aspectos tericos y prcticos
segn corresponda. En caso de ser as, para
acreditar la asignatura se requiere obtener
una calificacin aprobatoria en ambos
aspectos.
De acuerdo a la legislacin universitaria
habr dos periodos de exmenes ordinarios,
los cuales debern tener condiciones
semejantes, pudiendo presentarse el alumno
en cualquiera de ellos, o en ambos. Si el
alumno acredita la materia en alguno, la
calificacin obtenida ser definitiva.
10. Los exmenes extraordinarios sern
elaborados colegiadamente y aplicados de
forma similar a los ordinarios. En el caso de
un alumno que hubiera alcanzado la
exencin parcial de una o varias unidades
temticas, no se seguir el procedimiento
sealado con anterioridad, es decir, el
alumno que presente examen extraordinario
ser evaluado en la totalidad de la
asignatura.
Podrn presentar examen extraordinario los
alumnos que: a) habiendo estado inscritos en
la asignatura no la hayan acreditado, b)
siendo alumnos de la Facultad no hayan
estado inscritos en la asignatura o no la
hayan cursado, c) habiendo estado inscritos
dos veces en la asignatura no puedan
inscribirse nuevamente a ella, o d) hayan
llegado al lmite de tiempo en que pueden
estar inscritos en la carrera.
El examen extraordinario abarcar la
totalidad del programa y podr incluir la
evaluacin de aspectos tericos y prcticos
segn corresponda. En caso de ser as, para
acreditar la asignatura se requiere obtener
una calificacin aprobatoria en cada uno de
estos aspectos.
La calificacin obtenida en el examen no ser
promediada con ninguna calificacin
precedente.
11. La calificacin obtenida con decimales se
expresar con base en lo siguiente:
a) En calificaciones finales aprobatorias con
fraccin de 0.5 a 0.9, stas se
redondearn al nmero entero inmediato
superior, las fracciones de 0.1 a 0.4 se
redondearn al entero inmediato inferior;
entendiendo por calificacin final
aprobatoria, a la alcanzada en el caso de
la exencin total o a la obtenida en los
exmenes ordinarios o extraordinario.
b) La calificacin mnima aprobatoria ser 6
(seis). Las calificaciones menores a este
entero sern expresadas en los
documentos correspondientes como 5
(cinco), que significa No Acreditada.
c) Las calificaciones parciales se
expresarn con un decimal, y en relacin
con el inciso arriba sealado, las
calificaciones no aprobatorias no se
expresarn como 5 (cinco), sino con la
calificacin que corresponda.
12. En todos los tipos de exmenes parciales, el
profesor realizar la realimentacin con sus
alumnos, dndoles a conocer las
calificaciones en un plazo no mayor de 10
das una vez realizada la evaluacin
correspondiente. Las rectificaciones que
sean necesarias en caso de error, se
realizarn en los siguientes 15 das a partir
de la fecha en que se informen los
resultados.
En caso de revisin de examen, se estar a
lo dispuesto por el artculo 8 del Reglamento
General de Exmenes que seala que a
peticin de los interesados, los directores de
20
 las facultades y escuelas de la Universidad
acordarn la revisin de las pruebas dentro
de los 60 das siguientes a la fecha en que se
den a conocer las calificaciones finales para
que, en su caso, se modifiquen las
calificaciones, siempre que se trate de
pruebas escritas, grficas o susceptible de
revisin. Para tal efecto, el director
designar una comisin formada
preferentemente por dos profesores de la
asignatura de que se trate, la que resolver
en un plazo no mayor de 15 das.
13. El proceso de calificacin se ajustar a lo
siguiente:
a) La Secretara de Servicios Escolares
realizar la lectura ptica y anlisis
estadstico de los resultados de los
exmenes, los cuales entregar al
departamento o secretara
correspondiente dentro de los cinco das
posteriores a la presentacin de los
exmenes.
b) La calificacin que se asentar en las
actas como resultado de la exencin, de
los exmenes ordinarios o del examen
extraordinario, segn sea el caso, ser
de acuerdo a la escala 10, 9, 8, 7, 6
(Acreditado), 5 (No Acreditado) o NP (No
Presentado).
c) En un plazo no mayor de cinco das
despus de presentado el
correspondiente examen ordinario, los
profesores debern remitir las actas
revisadas y firmadas a la Secretara de
Servicios Escolares.
14. Los titulares de los departamentos o
secretara correspondientes, revisarn y
analizarn con los profesores los resultados
de los exmenes, con el propsito de
reorientar los programas y los procedimientos
de enseanza-aprendizaje de las
asignaturas.
15. La participacin de los profesores en la
elaboracin de reactivos que conformarn el
banco de la asignatura, ser considerada
para su evaluacin acadmica y la de los
diferentes programas de estmulos al
desempeo.
16. Anualmente, la Direccin de la Facultad
deber presentar al Consejo Tcnico un
informe de los resultados alcanzados en la
evaluacin del aprendizaje en todas las
asignaturas, en el examen profesional y en
los resultados obtenidos por los alumnos en
el Examen Nacional de Aspirantes a
Residencias Mdicas (ENARM).
17. Los asuntos no previstos sern resueltos por
el Director siguiendo principios de equidad y
justicia. De sus decisiones y de la necesidad
de ajustar los presentes Lineamientos,
deber informar al Consejo Tcnico para que
se determine lo conducente.
B. Lineamientos especficos de la asignatura
de Bioqumica y Biologa Molecular
El programa de la asignatura consta de dos partes
impartidas simultneamente: Teora y Prctica.
Cada una de ellas representa un porcentaje tanto
de las calificaciones parciales como de la
calificacin final del alumno, integrndose de la
siguiente manera:
Calificacin Terica 85%
Calificacin Prctica 15%
As, la evaluacin del aprovechamiento escolar
tanto de la parte terica como de la prctica, se
efectuar mediante evaluaciones parciales y, en
su caso, mediante examen ordinario o
extraordinario.
1. Evaluaciones Parciales
Para evaluar el aprovechamiento escolar de los
alumnos, se programarn cuatro evaluaciones
parciales, una para la primera Unidad Temtica
(25% de la calificacin final), dos para la segunda
Unidad Temtica (50% de la calificacin final) y
una para la tercera (25% de la calificacin final).
Cada una de las evaluaciones parciales ser
expresada en una calificacin, la cual se integrar
por la calificacin terica y la calificacin prctica
de la siguiente manera:
Calificacin Terica: 85% de la
calificacin parcial
a) Examen Departamental 50%
b) Calificacin del Profesor 50%
Calificacin Prctica: 15% de la
calificacin parcial
21
 a) Examen Departamental de Laboratorio
50%
b) Calificacin del Profesor 50%
1. 1 Exmenes Departamentales:
Los exmenes departamentales contendrn 70
reactivos de opcin mltiple, de los cuales 60
estarn relacionados con la Unidad Temtica
terica correspondiente y los restantes sern
preguntas relacionadas con aspectos de las
prcticas de laboratorio realizadas en el periodo a
evaluar. En las unidades temticas en las que se
revisen los casos de integracin Bsica clnica, se
incluirn 5 preguntas correspondientes al caso
revisado, en cada uno de los exmenes
departamentales correspondientes. El tiempo
correspondiente para resolver dichos exmenes
ser de dos horas. Una vez realizada la
retroalimentacin de los exmenes con el profesor,
ste los devolver a la coordinacin de
enseanza.
Los temas a explorar en cada examen
departamental sern de la siguiente manera:
Primer Examen Departamental (Unidad Temtica
I):
a) Aspectos Tericos: Captulos I y II; Casos
de correlacin bsico clnicos 1 y 2
b) Aspectos Prcticos: Prcticas de la 1-5:
Segundo Examen Departamental (Unidad
Temtica II):
a) Aspectos Tericos: Capitulo III A-D; Caso de
correlacin bsico clnico 3; 1. Semana de
Integracin Bsica-clnica
b) Aspectos Prcticos: Prcticas de la 6-9
Tercer Examen Departamental (Unidad Temtica
II):
a) Aspectos Tericos: Capitulo III E-H; Casos
de correlacin bsico clnicos 4-6; 2. Semana de
Integracin Bsica-clnica
b) Aspectos Prcticos: Prcticas de la 9-12
Cuarto Examen Departamental (Unidad Temtica
III)
a) Aspectos Tericos: Captulo IV; 3. Semana
de Integracin Bsica-clnica
b) Aspectos Prcticos: Prctica 13
1.2 Calificacin del Profesor:
El profesor estimar la competencia de los
estudiantes a travs de la apreciacin de los
conocimientos y aptitudes adquiridos durante el
curso, mediante su participacin en clases y su
desempeo en los ejercicios, prcticas, trabajos
obligatorios y evaluaciones aplicadas en el periodo
correspondiente.
En todos los casos, la evaluacin ser expresada
en la escala de 0 a 10 de conformidad con lo
sealado anteriormente en los lineamientos
generales de evaluacin, y deber ser asentada
por el profesor en el lector ptico el da del
examen departamental correspondiente.
1.3 Calificacin Prctica:
Las actividades del laboratorio sern evaluadas
peridicamente y se verificar la adquisicin de
habilidades y destrezas por parte del alumno,
mediante su participacin y desempeo en cada
una de las diferentes prcticas que se realizarn
en cada Unidad Temtica.
Esta evaluacin permitir identificar:
a) La capacidad del alumno para integrar
conocimientos y para aplicarlos a un problema
especfico.
b) Las habilidades y destrezas del alumno para
desarrollar y ejecutar las maniobras sealadas en
el programa acadmico del laboratorio.
c) La capacidad del alumno para generar
estrategias que le permitan identificar y proponer
soluciones a problemas especficos mediante
procesos inducto-deductivos.
La evaluacin sobre las habilidades y destrezas
adquiridas por los alumnos en cada una de las
prcticas se realizar de acuerdo a los siguientes
criterios:
Protocolo
Desarrollo experimental
Reporte
De esta manera se integrar un promedio de
calificaciones de las prcticas realizadas en cada
Unidad Temtica que tendr el valor porcentual
que ya fue definido. El resultado ser expresado
en la escala de 5 a 10 y deber ser considerado
por el profesor en su evaluacin del estudiante,
entregada el da del examen Departamental
correspondiente.
2. Exmenes Ordinarios:
El examen ordinario en su primera o, en su caso,
segunda vuelta, abarcar la totalidad del programa
terico-prctico de la asignatura y estar dividido
en dos secciones.
22
Contendr 80 reactivos de opcin mltiple
relacionados con todas las Unidades Temticas
que integran el programa terico de la asignatura
(68 reactivos) y el resto (12) relacionados con los
aspectos de laboratorio. La duracin de cada
examen ser de dos horas y se realizar la
retroalimentacin correspondiente con el profesor.
Los exmenes se devolvern, despus de
realizada dicha retroalimentacin, a la
coordinacin de enseanza.
La evaluacin de cada examen ordinario ser
expresada en una calificacin que resultar de las
calificaciones correspondientes a las secciones
terica y prctica, integrndose de la siguiente
manera:
Examen terico 68 preguntas
(85%)
Examen de laboratorio 12 preguntas
(15%)
3. Examen Extraordinario
El examen abarcar la totalidad del programa, de
acuerdo a los objetivos educativos de la asignatura
y estar dividido en 2 secciones: Terica y prctica
El examen contendr 80 reactivos de opcin
mltiple: 68 reactivos correspondientes a aspectos
relacionados con las dos Unidades Temticas que
integran el programa terico de la asignatura y 12
reactivos que evaluarn los contenidos
correspondientes al total de las prcticas
planteadas en el Programa Acadmico de la
Asignatura. El examen durar 2 horas y la
coordinacin organizar la retroalimentacin
correspondiente. Los exmenes se entregarn a la
coordinacin.
La evaluacin del examen extraordinario ser
expresada en una calificacin que resultar de las
calificaciones correspondientes a las secciones
terica y prctica, integrndose de la siguiente
manera:
Examen terico 85%
Examen prctico 15%
4. Calificacin en actas
La calificacin en actas se asentar segn lo
descrito en los Lineamientos generales para la
evaluacin de los alumnos en las asignaturas de la
carrera de mdico cirujano en el numeral 13.
Las actas sern firmadas por uno o dos profesores
que hayan impartido diferente Unidad Temtica al
mismo grupo y debern hacerlo en la oficina de la
Coordinacin de Enseanza en la fecha y hora
que se indique en la misma Coordinacin.
5. Miscelneos
5.1 Publicacin de calificaciones:
Todas las calificaciones a que hace referencia este
Programa se harn del conocimiento de los
alumnos a travs de sus profesores, o
consultando una lista publicada por el
Departamento en lugares visibles.
6. Lineamientos del Laboratorio
6.1 Generales
a) No habr cambios de grupo o seccin de
laboratorio que no sean realizados en el periodo
estipulado para ello, mediante el trmite
administrativo correspondiente ante Servicios
Escolares.
b) Habr una tolerancia de 10 minutos en la hora
de entrada para cada horario de laboratorio.
c) Los alumnos debern utilizar bata blanca
durante todas y cada una de las sesiones de
laboratorio
d) El estudiante slo podr realizar las prcticas
en el horario y grupo que le corresponda. No se
podrn realizar prcticas en otros horarios o
grupos.
e) Los alumnos que se encuentran repitiendo el
curso de Bioqumica y Biologa Molecular debern
volver a realizar las actividades correspondientes
al laboratorio, ya que el curso es terico-prctico.
f) Para tener derecho a exentar o a presentar
examen final, el alumno deber cubrir al menos el
80% de asistencias de laboratorio y haberlo
acreditado.
g) En todas y cada una de las sesiones de
laboratorio, los alumnos debern de respetar todas
las indicaciones y restricciones que les sean
mencionadas por su profesor, por el personal del
Departamento adscrito a los laboratorios, o a
travs de avisos. La persona que transgreda este
lineamiento se har acreedor a la sancin
correspondiente, de conformidad con la
Legislacin Universitaria.
6.2 Evaluacin del Laboratorio
El curso de laboratorio consta de tres Unidades
Temticas, la primera de las cuales consta de una
seccin, la segunda de dos secciones y la tercera,
de una seccin. En cada una de ellas el alumno
23
obtendr una calificacin, la cual estar integrada
de la siguiente manera:
6.2.1 Calificacin del profesor. Representa el
promedio de las prcticas realizadas durante la
seccin a evaluar y equivale al 50% de la
calificacin de laboratorio correspondiente a dicha
Seccin.
6.2.2. Examen Departamental. Todo examen
departamental contar con 10 preguntas
concernientes a las prcticas de laboratorio y
representarn el 50% de la calificacin de
laboratorio de dicha Seccin
Como se indic anteriormente, la calificacin del
Laboratorio corresponde al 15% de la calificacin
final de la Seccin a evaluar y, por lo tanto, de la
calificacin final del curso
6.3 Criterios de calificacin del laboratorio
El Profesor evaluar los siguientes puntos:
6.3.1 Protocolo
6.3.2 Desarrollo Experimental
6.3.3 Reporte
6.3.1 Protocolo (35% de la calificacin de la
prctica)
Deber ser revisado en la sesin de discusin
correspondiente. Para su evaluacin se
considerarn los siguientes apartados:
a) Ttulo.
b) Antecedentes. Constar de la solucin del
cuestionario correspondiente y de las referencias
encontradas en la bibliografa respecto al
problema a revisar en la prctica.
c) Planteamiento del problema. ste definir el
estudio a realizar.
d) Hiptesis. sta dar la solucin tentativa del
problema planteado y ser susceptible de
someterse a prueba durante el desarrollo
experimental (la hiptesis no se demuestra, sino
que se acepta o se descarta una vez sometida a
prueba). En la mayora de las prcticas estos
puntos aparecen en el Manual de Prcticas de
Laboratorio.
e) Referencias. Sern citadas especficamente
con relacin a los antecedentes y tendrn un
formato estandarizado para trabajos cientficos.
6.3.2 Desarrollo Experimental (25%)
a) Comportamiento personal. ste se refiere a la
conduccin general de las actividades del
estudiante dentro del laboratorio de prcticas
(tales como asistencia puntual, traer bata, no salir
del laboratorio durante la prctica, no fumar, no
comer, no interferir en el trabajo de otros equipos,
etctera).
b) Organizacin de las actividades
experimentales. Saber qu se va a hacer y cmo,
a fin de disponer adecuadamente del equipo de
trabajo.
c) Observacin. Descripcin de las maniobras
experimentales realizadas y los registros
obtenidos; anotacin cuidadosa de maniobras
realizadas.
d) Razonamiento metodolgico. El estudiante
propondr un cambio especfico en la variable
dependiente y no har un experimento solamente
para ver qu pasa (tendr una hiptesis en la que
identificar las variables involucradas y el
argumento que las relaciona).
6.3.3 Reporte (40%):
ste comprender las actividades que el
estudiante realiz durante la sesin de laboratorio
y cmo las realiz. Los primeros cuatro puntos se
reportarn siguiendo las caractersticas ya
descritas para el Protocolo (donde se seal lo
que se realizara y en este caso se debe sealar lo
que se logr), esto es:
a) Resultados. Presentacin y descripcin de
registros y datos obtenidos (en este punto queda
fuera de lugar mezclar comentarios e impresiones
sobre los mismos).
b) Anlisis de resultados. Descripcin del mtodo
utilizado en el anlisis (de qu manera fueron
analizados) y los resultados del anlisis
(promedios, porcentajes, tablas, grficas, entre
otros).
c) Interpretacin de resultados. Confrontar los
datos obtenidos con aquellos ya publicados e
indicar la concordancia o discordancia de los
mismos a manera de discusin. De ser necesario,
proponer posibles alternativas. Sealar el apoyo
bibliogrfico, cuya cita aparecer en la seccin de
referencias.
d) Conclusin. El estudiante evaluar la hiptesis
en funcin de los resultados obtenidos y
argumentar sobre la validez de la misma.
e) Referencias. Contendr las citas bibliogrficas
utilizadas en la seccin de antecedentes y
discusin (dentro de interpretacin). Existen casos
particulares en que es obligado citar el mtodo
utilizado. Estas citas se escribirn siguiendo lo
descrito para el Protocolo.
El promedio de las calificaciones de las prcticas
corresponder al 50% de la calificacin de este
24
rubro en la seccin correspondiente, sin olvidar
que la calificacin de las prcticas representa el IX BIBLIOGRAFA
15% de la calificacin global de la seccin a
evaluar.
BSICAS

VIII OBLIGACIONES DE LOS PROFESORES Y
ALUMNOS
Profesores
Con base en el artculo 56 y 61 del Estatuto de
Personal Acadmico de la UNAM, el profesor de
Bioqumica y Biologa Molecular:
1. Impartir sus clases tericas y/o prcticas con
puntualidad, segn el horario que le haya asignado
el Departamento, en el calendario escolar
correspondiente.
2. Impartir su enseanza y calificar los
conocimientos de sus estudiantes sin hacer
ninguna distincin entre ellos. Para realizar dicha
evaluacin considerar diversos aspectos como
asistencia, desempeo en teora y laboratorio,
como aparece en los lineamientos de evaluacin
de la seccin previa de este programa acadmico.
3. Cumplir con el programa de la asignatura de
Bioqumica y Biologa Molecular aprobado por el
Consejo Tcnico de la Facultad y se los dar a
conocer a sus estudiantes el primer da de clases,
as como la bibliografa correspondiente al curso.
4. Aplicar los exmenes departamentales en las
fechas y lugares indicados por la Coordinacin de
Enseanza de la asignatura. Har la retro-
alimentacin de sus estudiantes despus de los
exmenes departamentales y/o finales.
5. Se abstendr de impartir clases particulares
remuneradas o no a sus propios alumnos.
Alumnos
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2004.
2. Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna.
5a.ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno;
2002.
3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005.
4. McKee T, McKee RJ. Bioqumica. 3a. ed.
Espaa: McGraw-Hill Interamericana Editores;
2003.
5. Murray KR, Granner DK, Mayes PA, Rodwell
VW. Bioqumica de Harper. 16a. ed. Mxico:
IPN/Editorial El Manual Moderno; 2004.
6. Stryer L. Bioqumica. 5a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2003.
COMPLEMENTARIAS
1. Alberts B, Bray D, Lewis J. Biologa molecular
de la clula. 3a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 1992.
2. Bloomfield MM.Qumica de los organismos
vivos. Mxico: Editorial Limusa; 1997.
3. Holum JR. Fundamentos de qumica general,
orgnica y bioqumica para ciencias de la
salud. Mxico: Editorial Limusa Wiley; 2001.

Los alumnos de la asignatura de Bioqumica y

Biologa Molecular:
1. debern cumplir con el 80% de asistencias al
curso terico y al laboratorio y aprobar este ltimo
para tener derecho a la calificacin final.
2. debern presentar los exmenes, tareas y
trabajos que el profesor considere indispensables
para tener derecho a calificacin final (Juicio del
Profesor).
3. debern adquirir y utilizar el Manual de objetivos
y de laboratorio en el aula, tanto de teora como de
laboratorio.
4. No podrn realizar la prctica del laboratorio si
no traen el manual correspondiente y una bata
blanca.
5. Se abstendrn de introducir alimentos a las
aulas y/o laboratorios de enseanza.

25
CONTENIDO TEMTICO

Primera Unidad Temtica

ESTRUCTURA MOLECULAR

26
 I
LGICA MOLECULAR DE LA VIDA

Al finalizar esta unidad, el alumno conocer la naturaleza qumica de los seres vivos y
su organizacin. La unidad se divide en:

A. Caractersticas generales de la materia viva.

B. Niveles de la organizacin celular.

A. Caractersticas generales de la
materia viva

Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer las

caractersticas de la materia viva.

A.1 Discutir la organizacin de los seres vivos

(procariotos, eucariotos, auttrofos y
hetertrofos) con base en la complejidad de
las estructuras que los constituyen y la
funcin especfica que tienen.
A.2 Discutir con base en la figura I.1 la
capacidad de los seres vivos para obtener,
transformar y utilizar la energa, as como su Fig. I.1. Ciclo del CO2 y del O2 en los seres vivos.
capacidad de autorregulacin y de Modificada de: Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
autoduplicacin. bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 2005.

Los sistemas vivientes son organizaciones en
extremo complejas que operan bajo principios
fisicoqumicos. Esta organizacin de la vida hace
posible un elevado nmero de procesos
fundamentales que se llevan a cabo en forma
organizada y regulada en todos los sistemas
vivientes. Se ha propuesto que la vida est limitada
por los principios de la fsica y la qumica, pero lo
cierto es que logra trascender hasta los ms
elevados principios biolgicos.
Todos los seres vivos son sistemas organizados y
funcionando en forma coordinada, constituidos
fundamentalmente por molculas de carbohidratos,
lpidos, protenas y cidos nucleicos. Estos sistemas
intercambian materia y energa con su entorno, del
cual estn separados por una membrana. Las
funciones bsicas de transformacin y utilizacin de
la energa realizadas por estos sistemas, as como su
reproduccin se llevan a cabo con un alto grado de
precisin por protenas catalticas especficas
llamadas enzimas. Estas enzimas estn presentes en
las clulas y actan como catalizadores que hacen
posible que se lleven a cabo reacciones sin que la
clula sufra dao alguno.
La materia evoluciona aumentando su
complejidad debido al incremento en la variedad de
unidades que la constituyen y a la especializacin
que stas alcanzan. Cuanto ms complejo es un

27
sistema ms especializadas son sus partes y, por
ello, ms dependen unas de otras.
Las caractersticas universales de los
sistemas se encuentran a nivel bioqumico. Todas las
clulas obtienen energa, ya sea de la luz del sol o de
las molculas de alimento ricas en energa y la
almacenan en una molcula con un alto contenido
energtico: el ATP. Las clulas han desarrollado
fundamentalmente tres vas para generar ATP:
fermentacin, respiracin y fotosntesis.
Todas las clulas tienen la capacidad de
autoduplicarse: las molculas en las que se
almacena esta propiedad son el DNA y el RNA. La
universalidad de estas molculas en todos los
organismos vivos revela que todas las formas de vida
sobre la Tierra tienen un origen comn.
La importancia del DNA en la reproduccin y
el crecimiento de las clulas reside en la informacin
contenida en los genes. Las molculas de DNA son
polmeros de unidades, llamadas nucletidos,
constituidos por un azcar, un fosfato y una base
nitrogenada de cuatro tipos diferentes. La secuencia
precisa de bases en el DNA constituye la informacin
gentica. La funcin clave de esta informacin es la
de especificar la composicin de las protenas. Ms
que ninguna otra molcula, las protenas hacen que
un organismo sea lo que es.
El copiado exacto del DNA, aunque esencial
para el desarrollo individual, no es suficiente para
permitir los cambios evolutivos; tiene que existir una
fuente de variacin que proviene, fundamentalmente,
de la aparicin de mutaciones o de la recombinacin
del material gentico. Las mutaciones surgen por un
Hay dos principales clases de clulas: las
procariticas y las eucariticas. Las clulas
procariticas tienen un solo cromosoma que ocupa
un espacio dentro de la clula denominado nucleoide
y se halla en contacto directo con el citoplasma. Las
clulas eucariticas poseen varios cromosomas
contenidos en un ncleo verdadero con una
envoltura nuclear. Adicionalmente presentan una
serie de orgnulos que realizan funciones
especializadas como por ejemplo, las mitocondrias
que son potentes generadoras de ATP.
Se ha propuesto en la teora de la
endosimbiosis que, desde el punto de vista evolutivo,
las clulas procariticas son antecesoras de las
eucariticas.
Con base en el mecanismo que utilizan para
obtener la energa necesaria para realizar sus
funciones vitales podemos agrupar a todas las
clulas y organismos en otras dos clases principales:
los auttrofos, que utilizan el proceso de fotosntesis
para transformar molculas inorgnicas en glucosa, a
partir de la cual se construyen molculas ms
complejas, y los hetertrofos, que obtienen la energa
de molculas complejas que han sido sintetizadas
por organismos auttrofos. La energa que contienen
estas molculas complejas es liberada
principalmente por su oxidacin hasta CO2 y agua en
un proceso llamado respiracin.
H He
Li Be B C N O F Ne
Na Mg Al Si P S Cl Ar

error en el proceso de copiado. K Ca Sc Ti V Cr Mn Fe Co Ni Cu Zn Ga Ge As Se Br Kr

Los organismos ms complejos a nuestro Rb Sr Y Zr Nb Mo Tc Ru Rh Pd Ag Cd In Sn Sb Te I Xe
alrededor son multicelulares. La clula es la unidad
estructural y funcional de los seres vivos, as como el Cs Ba Hf Ta W Re Os Ir Pt Au Hg Tl Pb Bi Po At Rn

tomo es la unidad fundamental de las estructuras Fr Ra

qumicas.
Resumiendo, la diversidad de los organismos
depende de un programa gentico codificado por los Figura I.2. Elementos que forman parte de la materia viva. Los
cidos nucleicos, ejecutado por medio de complejos ms abundantes o macroelementos (negritas), los presentes en
reguladores que controlan las actividades pequeas cantidades en todos los organismos o
bioqumicas de las clulas, lo que da como resultado microelementos(cursivas), y los que son necesarios en algunos
diferentes niveles estructurales en la organizacin organismos en cantidades mnimas o elementos traza
molecular y celular de dicho organismo. (subrayados).

28
Se llama metabolismo al total de reacciones que que hacen que estos elementos
ocurren en la clula. Hay reacciones catablicas por sean apropiados como
las cuales las sustancias complejas se degradan constituyentes de la materia viva.
a sustancias ms simples y reacciones anablicas B.1.3 Describir los tipos de enlace (tabla
que realizan el proceso inverso. I.1, pg. 4) y funciones qumicas que
En resumen, las clulas tienen las siguientes aparecen en las molculas biolgicas
caractersticas: (alcohol, carboxilo, carbonilo, ster,
1) Un programa gentico especfico que permite la amida, amino, ter y tiol).
reproduccin de nuevas clulas del mismo tipo. 2)
Una membrana celular que establece un lmite que B.2 Molculas precursoras y macromolculas.
regula todos los intercambios de materia y energa.
3) Una maquinaria biolgica que puede utilizar la B.2.1 Conocer los aminocidos,
energa adquirida por la clula a partir de la energa nucletidos, monosacridos y cidos
luminosa o de los alimentos. grasos como precursores de
4) Una maquinaria para la sntesis de protenas y protenas, cidos nucleicos,
todas las dems molculas que integran a las clulas polisacridos y lpidos, as como las
de un organismo. diversas funciones que llevan a cabo
en el organismo.
B. Niveles de la organizacin celular
B.3 Estructuras, orgnulos, clulas, tejidos y
Al finalizar esta subunidad, el alumno analizar y organismos.
discutir los diferentes niveles de la organizacin B.3.1 Describir la manera cmo se
celular. ensamblan las macromolculas para
B.1 Bioelementos. obtener un nivel mayor de
B.1.1 Identificar en una tabla peridica organizacin.
(figura I.2) los elementos que forman B.3.2 Describir la estructura de las
parte de la materia viva. membranas biolgicas.
B.1.2 Conocer las caractersticas B.3.3 Definir a la clula como la unidad
fisicoqumicas (configuracin mnima de organizacin de la
electrnica, electronegatividad e materia viva.
hibridacin) del carbono, nitrgeno,
oxgeno, hidrgeno, azufre y fsforo,

29
Tabla I.1 CARACTERSTICAS DE LOS ENLACES QUMICOS

Tipo de enlace Descripcin general Energa de enlace

INICO Es la fuerza de atraccin entre iones con signos 10-20 kcal/mol
contrarios que se forman por la transferencia completa 42-84kJ/mol
de electrones desde el tomo con mayor tendencia a
perderlos, al que tiene mayor afinidad por ellos.
COVALENTE Resulta de compartir electrones entre dos o ms Para la unin:
tomos que tienen una afinidad electrnica semejante CC
Simple Se forma mediante la donacin de un electrn por parte 83 kcal/mol
de cada tomo que participa en el enlace. 348 kJ/mol
Coordinado Ambos elctrones los da uno solo de los tomos que ___
participan en la formacin del enlace.
Polar Se establece cuando los electrones del enlace OH
covalente se encuentran ms cerca del elemento de 111kcal/mol
mayor electronegatividad. En el enlace se forma un 464kJ/mol
polo relativamente positivo y otro relativamente
negativo.
Mltiple En algunos compuestos de los tomos comparten ms CC
de un par electrnico (enlaces dobles o triples). 146kcal
611kJ/mol
Enlaces Fuerzas de atraccin dbiles entre diferentes ___
intermoleculares molculas y iones
PUENTE DE Interaccin dipolo-dipolo. Se establece cuando un 2.5kcal/mol
HIDRGENO tomo de hidrgeno sirve como puente entre dos 8-21kJ/mol
tomos electronegativos, unido a uno con un enlace
covalente, y al otro, con fuerzas de naturaleza
electrosttica.
FUERZAS DE Son fuerzas electrostticas transitorias. La atraccin se 1kcal/mol
VAN DER WAALS establece entre los extremos de dipolos momentneos 4kJ/mol
con cargas opuestas.
INTERACCIONES Enlaces polares. Las molculas se reunen 1-2kcal/mol
HIDROFBICAS conjuntamente asocindose entre s en el seno del 4-8kJ/mol
agua debido a que las interacciones agua-agua son
muy fuertes y rodean a las molculas apolares
INTERACCIN Es la atraccin de un in positivo por el extremo 0.01 kcal/mol
IN DIPOLO negativo de las molculas de un disolvente polar 0.04kJ/mol
(solvatacin). Cuando el disolvente es el agua, se dice
que las partculas de soluto se hidratan.

30
 II
ASPECTOS FISICOQUMICOS
DEL FUNCIONAMIENTO CELULAR

Al finalizar esta unidad, el alumno deber conocer y aplicar los conceptos

fundamentales de fisicoqumica a la comprensin de la estructura y comportamiento de
las molculas biolgicas en la clula y en su interaccin con el ambiente; adems,
conocer algunos aspectos mdicos de ellos. La unidad se divide en:

A. Aspectos bsicos de fisicoqumica aplicados a la bioqumica.

B. Agua.
C. Equilibrio hidroelectroltico y cido-base.
D. Aminocidos y protenas.
E. Enzimas y coenzimas.

A. Aspectos bsicos de fisicoqumica A.4 Identificar los procesos exergnicos y

aplicados a la bioqumica
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer los
conceptos bsicos de fisicoqumica necesarios para
la comprensin de la bioqumica.
A.1 Definir el concepto de sistema y conocer
sus diferentes tipos con base en su
capacidad de intercambiar materia y energa
con su ambiente (sistemas abiertos y
cerrados).
A.2 Conocer las leyes de la termodinmica y
definir el concepto de entropa, entalpa as
como energa interna.
A.3 Definir el concepto de energa libre de
Gibbs y de energa libre estndar de una
reaccin y su empleo como criterio de
espontaneidad de un proceso.
endergnicos y los relacionar con procesos
reversibles e irreversibles.
A.5 Analizar la estrategia de las reacciones
acopladas. Se sugiere usar como ejemplo
una reaccin catalizada por una cinasa.
A.6 Definir los conceptos de energa de
activacin y de estado energizado de una
reaccin.
En termodinmica un sistema se define como la parte
del Universo en estudio. Por lo tanto, un sistema
puede ser un tubo de ensayo, una mquina, una
planta o el hombre.
El resto del Universo se conoce como
ambiente. El organismo humano es un sistema
abierto porque es capaz de intercambiar materia y
energa con el ambiente que lo rodea; toma los
nutrimientos, oxgeno y agua del ambiente; elimina
productos de desecho, y genera trabajo y calor.

31
 La primera ley de la termodinmica, o ley de
la conservacin de la energa, dice que la energa no
se crea ni se destruye, slo se transforma.
U = U final U inicial = q w (1)
Esta expresin matemtica muestra que el
cambio de energa, prdida o ganancia que sufre un
sistema (U) corresponde a la diferencia entre el
contenido de energa al principio (U inicial) y al trmino
(U final) del estudio.
La segunda relacin matemtica: (U = q
w) significa que parte de ese cambio de energa se
utiliza para hacer trabajo (w) sobre el ambiente y el
resto se libera en forma de calor (q). Los procesos en
los cuales el sistema libera calor se llaman
exotrmicos (q con signo negativo por convencin), y
a los que absorben calor se les llama endotrmicos
(q con signo positivo).
La medida de este intercambio de calor,
liberado o absorbido con el ambiente, se llama
entalpa (H):
H = qp (2)
donde qp se lleva a cabo a presin constante.
La segunda ley de la termodinmica dice que
el Universo tiende hacia el mximo desorden. Esta
ley provee un criterio para determinar si un proceso
es espontneo. Un proceso espontneo ocurre en
una direccin que aumentara el desorden del
sistema y del ambiente. La medida del desorden del
sistema se llama entropa (S) y el cambio puede ser
en el sentido de aumentar el desorden (S con signo
positivo) o de disminuir el desorden (S con signo
negativo).
La tercera ley de la termodinmica o ley cero
dice que a una temperatura de 0K (-273 C) la
entropa de un sistema es igual a cero.
J. Willard Gibbs (1878) formul el concepto
de energa libre (G) que engloba los dos indicadores
de espontaneidad de un proceso a temperatura y
presin constantes:
G = H TS (3)
y los cambios quedaran indicados como:
G = H TS (4)
De esta manera, un cambio en la energa
libre sera la suma algebraica del cambio de la
entalpa y el cambio de la entropa multiplicada por la
temperatura (K).
Un proceso con G negativo (espontneo y
exergnico) puede darse por una disminucin en la
entalpa (liberacin de calor) o por un aumento en la
entropa (aumento de desorden). Por el contrario, un
proceso endergnico, no espontneo, tiene un G
positivo, caracterizado por un aumento en la entalpa
(absorcin de calor) o por una disminucin en la
entropa. El G representa la energa que se emplea
para ejercer un trabajo.
En muchos sistemas, entre ellos los
biolgicos, un valor negativo grande predice que la
reaccin se puede llevar a cabo de manera
espontnea, pero no dice nada acerca de la
velocidad del proceso, ni del camino que ste sigue.
Por ejemplo, en algunas reacciones qumicas, el G
puede ser negativo, y esto predice que la reaccin
ser espontnea, pero como el camino ocurre a
travs de un estado energizado (de mayor contenido
de energa) de los reactivos, el proceso no se lleva a
cabo a menos que se introduzca energa al sistema
para que se alcance ese estado energizado (energa
de activacin); entonces, el proceso se realizara de
manera espontnea. La introduccin de enzimas
para realizar una reaccin, tiene el efecto de
disminuir la energa de activacin de dicha reaccin
(debido a la formacin del complejo enzima-sustrato).
Una estrategia que se sigue en los sistemas
biolgicos para lograr que las reacciones no
espontneas, con G positivo, se lleven a cabo,
consiste en acoplarlas a otras reacciones
relacionadas que tengan un G muy negativo. De
esta manera, en las vas metablicas las reacciones
exergnicas empujan o jalan a las reacciones
endergnicas y desplazan el equilibrio qumico. Por
ejemplo, la fosforilacin de la glucosa por ATP
catalizada por la hexocinasa:
32
Ecuacin:
; G
(kcal/mol)
Glucosa + Pi = Glucosa 6 fosfato + H2O +3.3
ATP + H2O = ADP + Pi + H+ 7.3
+
Glucosa + ATP = Glucosa 6 fosfato + ADP + H 4.0
B. Agua
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer las
propiedades fisicoqumicas del agua y los conceptos
de reaccin qumica, pH, cido, base y amortiguador.
B.1 Conocer las siguientes propiedades
fisicoqumicas del agua: su composicin, sus
enlaces qumicos, densidad electrnica,
caractersticas de dipolo, puentes de
hidrgeno, estructura en sus estados fsicos,
calor latente de vaporizacin, calor
especfico, tensin superficial, conductividad
trmica, constante dielctrica y su papel
como solvente.
B.2 Soluciones acuosas.
B.2.1 Definir qu es una solucin y los
diferentes tipos de soluciones que
existen.
B.2.2 Explicar los clculos y los
procedimientos para preparar
soluciones porcentuales molares,
osmolares y normales, as como las
diferentes diluciones de estas.
Conocer la composicin de las
siguientes soluciones utilizadas en
medicina: solucin istonica, de
Ringer, de Darrow, de Hartman.
B.2.3 Revisar las propiedades coligativas
de las soluciones y su importancia en la
medicina.
B.2.4 Definir los conceptos de
osmolaridad, osmolalidad, hiper e de las molculas vecinas.
hipoosmolaridad, as como el de isotonicidad.
Realizacin de la prctica 1 "Soluciones" (ver pg.
133)
B.3 Analizar el concepto de pH.
B.3.1 Definir lo que es una reaccin
qumica y sus componentes.
Describir la ley de accin de masas
y definir la constante de equilibrio y
su significado.
B.3.2 Conocer la reaccin de ionizacin
del agua, su constante de equilibrio y
el producto inico del agua.
B.3.3 Conocer el concepto de pH y
establecer su escala de medicin.
Aplicar dicho concepto para calcular
los valores de pH a partir de la
concentracin de iones hidronio y de
la concentracin de H+ a partir de los
valores de pH.
Uno de los compuestos ms abundantes en nuestro
planeta es el agua. Se cree que fue en los ocanos
primitivos donde se originaron los primeros indicios
de vida. El agua constituye el medio en el cual se
realizan la mayora de los procesos celulares (de
hecho podra decirse que la conformacin que toman
las molculas dentro de las clulas depende del
agua). Es por ello que el agua es una molcula muy
importante para sostener la estructura de las clulas
y los organismos.
Las caractersticas peculiares del agua
derivan de su estructura qumica particular, en la cual
los dos hidrgenos y el oxgeno se encuentran
formando un tetraedro irregular en el que el oxgeno
ocupa el centro y los hidrgenos, junto con los dos
orbitales del oxgeno no compartidos, estn dirigidos
hacia los vrtices. La diferencia de electronegatividad
entre el oxgeno y los hidrgenos hace que los
enlaces entre ellos sean covalentes polares, dando
cargas parciales positivas y negativas a la molcula
que la constituyen como un dipolo. Esta
caracterstica permite que exista una fuerza de
atraccin entre los extremos cargados opuestamente
La atraccin entre las molculas de agua
permite que se establezcan enlaces dbiles llamados
puentes de hidrgeno que configuran redes
transitorias cuya existencia continuada confiere al
33
agua sus propiedades fisico-qumicas caractersticas:
ser lquida a temperatura ambiente, alto punto de
fusin, alto punto de ebullicin, elevada tensin
superficial, alta constante dielctrica, alta capacidad
calorfica y baja tensin de vapor.
Todas esas propiedades permiten que el
agua desempee muy variadas funciones en los
seres vivos; por ejemplo, servir como medio universal
de solucin, de suspensin y de reaccin para todas
las molculas, o intercambiar cantidades importantes
de calor sin mucha variacin de su temperatura, lo
cual le permite mantener constante la temperatura
del organismo y controlarla mediante los fenmenos
de vasoconstriccin y de sudoracin. El transporte de
sustancias entre los diversos rganos y tejidos del
cuerpo humano se hace por el plasma y los lquidos
extracelulares, ambos de naturaleza acuosa. Las
interacciones del agua con las diversas molculas
permiten el mantenimiento de las estructuras
celulares. La presencia de partculas en solucin va a
modificar las propiedades caractersticas del agua y
da origen a lo que se conoce como propiedades
coligativas de las soluciones (propiedades que
dependen del nmero de partculas en la solucin y
no de su naturaleza). Entre stas, la ms notable es
la aparicin de la presin osmtica.
Una molcula de agua tiene la capacidad de
ceder un protn a la molcula vecina y esto ocasiona
que la molcula que cedi su protn quede con una
carga neta negativa y la molcula de agua que lo
acepta quede con una carga positiva. Esto indica que
el agua se ioniza, ya que acta como un cido al
donar protones (H+) y como una base al aceptarlos,
segn la teora de Brnsted y Lowry. As, el agua
puede encontrarse en dos especies inicas: el
hidronio H3O+, que funcionara como cido, y el
hidroxilo OH, que es la especie que queda al ceder
la molcula de agua su protn, y que funciona como
una base, ya que puede aceptar protones. Para
facilitar la expresin de la ionizacin del agua se
simplifica as:
H2O H+ + OH
A las sustancias que tienen esta capacidad
se las llama anfteras o anfolitos.
La velocidad de las reacciones qumicas
depende de la concentracin de las molculas
implicadas en ellas, as como de una constante de
velocidad de la reaccin (k), que es una medida
indirecta de la capacidad intrnseca de las molculas
para reaccionar entre s. En la reaccin:
A+B C+D
la velocidad (v) es igual a k [A][B].
Como la mayora de las reacciones son
reversibles, existen dos constantes de velocidad, una
correspondiente a la reaccin directa y una
correspondiente a la reaccin inversa. Cuando la
velocidad de la reaccin directa es igual a la
velocidad de la reaccin inversa se establece una
condicin de equilibrio en la que hay una relacin
particular del producto de las concentraciones de los
productos entre el producto de las concentraciones
de los reactivos. Esta relacin es lo que se conoce
como constante de equilibrio (Keq) y es igual a ki/kd
o [C] [D] / [A] [B]. La constante de equilibrio es
caracterstica para cada reaccin y permite conocer
si la reaccin es ms favorable hacia los productos (a
la derecha), en cuyo caso el valor ser siempre
mayor a la unidad, o ms favorable a la aparicin de
los reactantes (a la izquierda) cuando el valor de la
constante ser menor a la unidad. Si el valor es igual
a uno no hay una tendencia clara en ninguna de las
direcciones.
En el caso del agua, la Keq tiene un valor de
1.8 X 1016 mol/l, que es mucho menor a la unidad, lo
cual indica que la molcula tiende a estar asociada;
la concentracin del agua sin disociar es tan elevada
que puede considerarse constante. Cuando el valor
de esta concentracin se multiplica por la Keq se
obtiene el valor del producto de la concentracin de
ambos iones H+ y OH, lo que se conoce como Kw o
producto inico del agua, donde Kw = [H+] [OH] = 1
X 1014mol2/l2. Aqu la concentracin de ambos iones
es de 1 X 107. A partir de esta constante (Kw) se
puede deducir el carcter de una solucin diluida
respecto a su grado de acidez o basicidad; se ha
elegido al ion hidronio (H3O+), simplificado como H+,
como valor numrico para expresarla. Como las
concentraciones que se manejan son tan pequeas,
aun expresadas matemticamente como
submltiplos de 10 (potencias negativas de 10), su
34
manejo puede resultar complicado por lo que se C.2 Definir los conceptos de cido y base, su
utiliza el -log de base 10 para expresarlo. Esto es lo fuerza, y analizar los cambios del pH de una
que se conoce como p y referido a la concentracin solucin al agregar un cido o una base
+
de H se denomina pH. El pH, entonces, corresponde explicando el porqu de este fenmeno.
al -log de la concentracin de hidrogeniones, o sea:
+ +
pH = log [H ] o bien pH = log 1/[H ] C.3 Analizar el concepto de sistema
amortiguador.
Ntese que la p es minscula, ya que se C.3.1 Definir el concepto de
trata de una sigla que indica potencial. amortiguador, de pK y explicar la
Si se considera que el valor de la importancia de los sistemas
7
concentracin de protones es de 1 x 10 , se tiene biolgicos de amortiguacin.
que: C.3.2 Aplicar la ecuacin de Henderson-
pH = log 1/ (1 x 107) = log 1 log 1 x 107 = 0 (7) Hasselbalch al clculo del pH y de la
=7 concentracin de sal o de cido de
Es a partir del agua que se define la escala diferentes soluciones.
de pH, por lo cual se habla de soluciones cidas C.3.3 Identificar los sistemas
cuando tienen valores de concentracin de amortiguadores ms importantes en
hidrogeniones mayores de 1 X 107 o pH menores de los medios intra y extracelular.
7 y de soluciones alcalinas con concentraciones de C.4 Explicar cmo se regula el pH de los
hidrogeniones menores de 1 X 107 y pH mayores a lquidos orgnicos y la participacin de los
7. sistemas amortiguadores, el intercambio
Cuando la concentracin de hidrogeniones inico, as como los mecanismos
en solucin acuosa es de 1.0 M, el valor del pH es 0, respiratorios y renales.
ya que el log10 1 es 0. En el otro extremo, cuando la C.4.1 Revisar las principales alteraciones
concentracin de H+ es (1 X 1014) el pH es de 14. El del equilibrio cido-base en el
punto de neutralidad es de pH = 7 o en concentracin organismo y los mecanismos para su
de H+ de 1 X 107. El intervalo de pH para indicar la control.
acidez de una solucin va del 0 al 7, mientras que el
correspondiente a la basicidad o alcalinidad de una Realizacin de la prctica 2 "Regulacin del equilibrio
solucin va del 7 al 14. cido-base despus del ejercicio muscular intenso y
de la ingestin de bicarbonato de sodio" (ver pg.
C. Equilibrio hidroelectroltico 137).
y cido-base
Discusin de los casos clnicos 1 "Clera" y 2
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer los "Oclusin intestinal. Acidosis metablica.
conceptos de electrlito, cido, base y amortiguador; Deshidratacin grave" (ver pgs. 195-196).
as como la composicin de los compartimientos
lquidos del organismo, el balance del agua y de los Es importante recordar que un in es una especie
electrlitos. qumica (tomo o conjunto de tomos) con carga
elctrica positiva (catin) o negativa (anin) por
C.1 Definir los conceptos de anin, catin, ganancia o prdida de electrones; los iones disueltos
electrlito, anfolito y conocer la en agua pueden conducir la electricidad. El paso de
composicin electroltica de los la electricidad a travs de una solucin con iones se
compartimentos lquidos del organismo llama electrlisis. Los solutos que pueden liberar
(plasma, lquidos intracelular e intersticial, iones en el agua por disociacin o ionizacin y que
jugo gstrico, jugo pancretico y bilis).

35
forman una solucin conductora de electricidad se
llaman electrlitos.
El agua es el mayor constituyente de los
seres vivos; su cantidad debe mantenerse dentro de
un margen estrecho ya que tanto su carencia como
su exceso producen problemas clnicos que se
conocen como desequilibrios hdricos.
El agua corporal la encontramos en
diferentes compartimentos y su cantidad en stos,
depende de las concentraciones de ciertos
electrlitos como Na+, K+, Cl, HCO3-, Mg2+ y Ca2+,
fosfatos y proteinatos. Las concentraciones de estos
electrlitos se mantiene dentro de ciertos lmites que
al alterarse, producen desequilibrios que pueden
llegar hasta la muerte.
En la prctica mdica est indicada la
cuantificacin de electrlitos en cualquier paciente
con sntomas neuromusculares. El tratamiento de las
alteraciones hidroelectrolticas se basa en la
evaluacin del agua corporal total y su distribucin,
as como en las concentraciones de electrlitos y en
la osmolaridad del suero.
Agua corporal
El agua en el cuerpo humano ocupa cerca de 70%
del peso corporal dependiendo de la edad, el sexo y
la grasa corporal. La cantidad de agua puede variar
desde alrededor de un 40% en personas mayores a
ms de un 75% en nios recin nacidos. Su
porcentaje tambin es mayor en personas delgadas
que en obesas, as como un hombre tendr mayor
cantidad de agua que una mujer. La cantidad de
agua presente en los diferentes tejidos vara de
acuerdo con las funciones y caractersticas de cada
uno, siendo ms abundante en clulas
metablicamente muy activas (~ 90%) y de menos
del 10% en el tejido adiposo o an menor, en
estructuras relativamente inactivas como el
esqueleto.
El agua se encuentra distribuida en el lquido
intracelular (30-40% del peso corporal total) y el
lquido extracelular que, a su vez, est conformado
por el lquido intersticial y la linfa (15%), el plasma
(4.5%) y los fluidos transcelulares que incluyen los
fluidos gastrointestinales, peritoneal, sinovial, lquido
cefalorraqudeo, entre otros.
Electrlitos
La composicin electroltica del lquido intracelular
(LIC) y del lquido extracelular (LEC) difiere en forma
sustancial. Para fines prcticos el LIC tiene al K+
como el principal catin y como aniones al fosfato y a
las protenas, mientras que en el LEC, el Na+ es el
catin ms importante y el cloruro como anin.
La concentracin total de cationes presentes
en el plasma es aproximadamente de 150 mmol/l,
siendo la concentracin de sodio de 140 mmol/l. Los
aniones presentes en el plasma ms abundantes son
el cloruro, con una concentracin aproximada de 100
mmol/l y el bicarbonato, con una concentracin de 25
mmol/l. Dado que en cualquier sistema biolgico la
suma de los cationes debe ser igual a la suma de los
aniones, el resto de los aniones que constituyen la
diferencia o brecha aninica del plasma son el
fosfato, el sulfato, las protenas y los cidos
orgnicos como son el lactato, el citrato, el piruvato,
el acetoacetato y el 3--hidroxibutirato.
En la prctica, esta brecha aninica se
calcula de acuerdo a la siguiente ecuacin:
Brecha aninica = {[Na+] + [K+]} {[Cl-] + [HCO3-]}
Calculada de esta forma, la brecha aninica
es de aproximadamente 12 mmol/l. Puede aumentar
muchas veces en ciertos desrdenes como cuando
los cidos inorgnicos y los aniones orgnicos se
acumulan, por ejemplo, en la cetoacidosis diabtica y
en la insuficiencia renal.
El potasio es el principal catin en el LIC,
cuya concentracin es de 110 mmol/l, es
aproximadamente 30 veces ms alta que la que se
encuentra en el LEC. La concentracin de sodio y
cloruro en el LIC es de 10 mmol/l y 4 mmol/l,
respectivamente.
La movilizacin y el metabolismo de los
principales cationes extra e intracelulares depende
de la actividad celular as como de transportadores
especficos, entre los cuales se encuentra la bomba
36
 + +
de Na /K . Los cambios en la concentracin de iones D. Aminocidos y protenas
conlleva a cambios en la osmolaridad del medio. Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer las
caractersticas ms importantes de los aminocidos y
Osmolaridad de las protenas, as como sus funciones generales.
Las diferentes molculas disueltas en el agua D.1 Aminocidos.
corporal contribuyen a la presin osmtica, la cual es D.1.1 Identificar en la frmula de un
proporcional a la concentracin molar de la solucin. aminocido los grupos funcionales
Un cambio en la concentracin inica en cualquiera carboxilo y amino.
de los compartimentos celulares crea un gradiente de D.1.2 Relacionar las cadenas laterales de
presin y como consecuencia, existe un cambio en la los aminocidos con sus
cantidad de agua que fluye del compartimiento que propiedades y los clasificar en
presenta una menor osmolaridad hacia el de mayor. grupos.
Para determinar la concentracin osmolar de D.1.3 Reconocer a los aminocidos como
una solucin que contiene una mezcla de electrlitos cidos dbiles e identificar los
y no electrlitos hay que tener en cuenta las valores de sus pKs y su punto
concentraciones individuales de todos sus isoelctrico.Usar como modelos
componentes. Una frmula sencilla para cuantificar la glicina, fenilalanina, cido asprtico,
osmolaridad del suero y que ofrece una utilidad lisina e histidina.
clnica es: D.1.4 Identificar la carga elctrica de los
+
Osmolaridad =2(Na mmol/l) + glucosa mmol/l + BUN amino-cidos en soluciones de
mmol/l diferentes valores de pH y su
= 280 a 320 mOsm movilidad en un campo elctrico.
D.1.5 Conocer las frmulas de los
Osmolaridad = 2(Na+ meq/l) + glucosa mg/dl + BUN mg/dl aminocidos presentes en las
---- ----- protenas.
18 2.8 D.1.6 Conocer las funciones generales
de los aminocidos proteicos y no
donde el factor 2 se debe a que se consideran los proteicos en los seres vivos.
aniones asociados al Na+ (Cl y HCO3); 1 mOsm de
glucosa equivale a 180 mg/l (18 mg/dl) y 1 mOsm de Realizacin de la prctica 3 "Titulacin de un
nitrgeno ureico (NUS o BUN de sus siglas en ingls) aminocido con una base. Determinacin del pK1 y
a 28 mg/l (2.8 mg/dl) que corresponde a la masa pK2" (ver pg. 140).
molecular de 2 tomos de nitrgeno en la urea.
Los electrlitos Na+, Cl y HCO3, contribuyen D.2 Protenas.
con ms del 92% a la osmolaridad del suero; los D.2.1 Identificar los productos de
otros electrlitos, junto con las protenas sricas, hidrlisis de las protenas.
glucosa y urea son responsables del restante 8%. D.2.2 Clasificar a las protenas con base
El mantenimiento del agua extracelular en su composicin, funcin y
depende bsicamente de la concentracin del Na+. localizacin.
El organismo mantiene esta concentracin por medio D.2.3 Conocer las caractersticas ms
de la hormona antidiurtica. Cambios de hasta 2 meq importantes de la unin peptdica.
de sodio en sangre estimulan los receptores Describir qu es un pptido y
osmolares y causan retencin renal de agua cuando mencionar algunos de los
aumenta y su eliminacin cuando la osmolaridad polipptidos importantes en
disminuye. medicina.

37
 D.2.4 Describir el estado nativo de las
protenas y sus diferentes niveles de
organizacin: estructuras primaria,
secundaria, terciaria y cuaternaria y
mencionar las fuerzas que las
estabilizan. Describir el proceso
general de la desnaturalizacin.
D.2.5 Relacionar la funcin de las
protenas con su estructura:
Globulares (albmina y aromticos o heterocclicos que contienen por lo
hemoglobina).
Fibrosas (colgena, miosina y
actina).
De reconocimiento (receptores de
insulina o complejo mayor de
histocompatibilidad).
De membrana (porina, ATPasa de
sodio/potasio).
D.2.6 Describir los diferentes mtodos de
purificacin de las protenas con
base en sus propiedades:
ultracentrifugacin, precipitacin por
sales, electroforesis y cromatografa
por peso molecular, por intercambio
inico y por afinidad.
D.2.7 Conocer el propsito de estudiar las
protenas plasmticas en medicina.
Realizacin de la prctica 4 "Determinacin de las
protenas plasmticas" (ver pgs. 142).
Las protenas estn formadas por una o varias
cadenas polipeptdicas, cada una de las cuales est
constituida por 20 diferentes aminocidos unidos por
enlaces tipo amida (enlaces peptdicos) en una
secuencia especfica para cada protena. La masa
molecular de una protena vara desde cerca de 6
000 (>50 aminocidos) hasta 1 000 000 Da o ms.
(Da o Dalton es la unidad de masa atmica y es igual
a 1.6605655 X 1027 kg).
Las protenas pueden dividirse, segn su
composicin, en dos grupos principales: protenas
simples y protenas conjugadas. Las protenas
simples estn constituidas slo por aminocidos,
mientras que las protenas conjugadas presentan,
adems de los aminocidos, otro componente, que
puede ser de diferente naturaleza qumica y en
ciertos casos es llamado grupo prosttico. Algunos
ejemplos de protenas conjugadas son las
glucoprotenas (contienen azcares como grupo
prosttico), las lipoprotenas (contienen
triacilglicridos, fosfolpidos y colesterol), las
nucleoprotenas (asociadas a cidos nucleicos) y las
metaloprotenas (que pueden unir iones metlicos
como en el grupo hemo).
Los aminocidos son compuestos alifticos,
menos un grupo amino y un grupo carboxilo. En los
aminocidos biolgicamente activos, el grupo amino
se encuentra en el tomo de carbono alfa con
respecto al grupo carboxilo. Este carbono alfa es un
carbono asimtrico (con excepcin de la glicina)
porque presenta cuatro grupos funcionales
diferentes:el grupo amino, el grupo carboxilo, un
hidrgeno y una cadena lateral. Los aminocidos
proteicos pueden clasificarse en funcin de las
cadenas laterales que presentan. As, tenemos
aminocidos no polares, aminocidos polares sin
carga y aminocidos polares con carga, la que puede
ser negativa o positiva a pH neutro. Todos los
aminocidos (con excepcin de la glicina) son
pticamente activos y pertenecen a la serie L en los
organismos superiores. Los aminocidos tienen por
lo menos dos grupos ionizables: el grupo alfa amino y
un carboxilo. Cada aminocido en solucin tiene un
pH caracterstico en el que no se mueve en un
campo elctrico, es decir, tiene un pH en el que se
presenta en forma de ion dipolo o zwitterion, donde
tanto el grupo alfa amino como el grupo carboxilo se
encuentran ionizados y, por lo tanto, tiene el mismo
nmero de cargas positivas y negativas (punto
isoelctrico). Junto a los grupos ionizables
principales, algunos aminocidos contienen otros
grupos que pueden ionizarse: grupos amino,
carboxilo, sulfhidrilo, hidroxilo o imidazol. A pH
fisiolgico, estos grupos pueden estar ionizados y
confieren al aminocido que los contiene cargas
positivas o negativas, segn sea la naturaleza del
grupo ionizado. Las protenas, como los
aminocidos, se encuentran cargadas en solucin; la
magnitud de la carga depende del tipo de protena y
del pH. Cada protena posee un punto isoelctrico
caracterstico; a pH por arriba del punto isoelctrico
38
presenta carga negativa, mientras que a pH por
abajo del punto isoelctrico tiene carga positiva.
Organizacin estructural de las protenas
La funcin de las protenas slo puede entenderse
en trminos de la estructura de la protena, es decir,
de las relaciones tridimensionales entre los tomos
que componen las protenas. Se han descrito cuatro
niveles de organizacin:
1. La estructura primaria es la secuencia de
aminocidos en la cadena polipeptdica unidos
mediante enlaces peptdicos.
2. La estructura secundaria es el arreglo espacial
local de los tomos del esqueleto de un polipptido
sin considerar la conformacin de sus cadenas
laterales. La estructura secundaria es mantenida
por puentes de hidrgeno entre el oxgeno y el
nitrgeno involucrados en los enlaces peptdicos
de aminocidos. El enlace peptdico tiene una
estructura plana, rgida, que es consecuencia de
interacciones de resonancia (a) que le dan 40% de
carcter de doble enlace entre los tomos de C y
N (b), esta ltima estructura es la que le permite
establecer puentes de hidrgeno.
a) b)
O O
C C N C C N+
H H
Pauling y Corey determinaron que los grupos
peptdicos asumen una configuracin trans, es
decir, los carbonos alfa sucesivos estn en lados
opuestos del enlace peptdico que los une.
Pueden existir varios tipos de estructura
secundaria; entre ellos destacan dos: la alfa hlice,
en la que los aminocidos de la cadena
polipeptdica se presentan formando una especie
de cilindro orientado a la derecha y la lmina beta
plegada, en la que los aminocidos se acomodan
de manera paralela o antiparalela, uno respecto al
otro y se conectan entre s por puentes de
hidrgeno.
3. La estructura terciaria se refiere al arreglo
tridimensional de un polipptido y est determinada
por las estructuras primaria y secundaria. Se forma
espontneamente y depende del tamao, forma y
polaridad de los aminocidos que forman la
protena, los que interactan entre s y con el
medio en el que se encuentran. Esta estructura
puede estar estabilizada por enlaces de hidrgeno,
enlaces inicos, interacciones hidrofbicas, los
enlaces covalentes disulfuro, etctera. Por ejemplo,
las cadenas peptdicas de las protenas globulares
se organizan en una forma muy compacta en la
que los aminocidos hidroflicos se encuentran en
la superficie externa mientras que los residuos
hidrofbicos permanecen enterrados en el interior
de la molcula.
4. La estructura cuaternaria es el arreglo espacial de
las diversas subunidades polipeptdicas que
componen algunas protenas.
Desnaturalizacin
Se dice que una protena se desnaturaliza cuando
pierde sus diversos niveles de organizacin
estructural. Algunos agentes que desnaturalizan las
protenas son: el calor, los pH extremos, los rayos X,
la luz UV, o la agitacin vigorosa. La
desnaturalizacin es causada por un colapso de la
estructura original con la ruptura de los enlaces de
hidrgeno, de los enlaces inicos y de las
interacciones hidrofbicas, sin cambios en la
estructura primaria. La desnaturalizacin va
acompaada de la disminucin de la solubilidad,
cambios en la rotacin ptica, prdida de la funcin
biolgica y una mayor susceptibilidad al ataque de
las enzimas digestivas. En algunos casos, al eliminar
los agentes que causan la desnaturalizacin, la
protena recupera su conformacin original; a este
fenmeno se le conoce como renaturalizacin.
Una mezcla de protenas puede separarse a
partir de las diferentes movilidades en un campo
elctrico (electroforesis), por cromatografa de
distintos tipos o por su diferente solubilidad.
Clasificacin de las protenas
Las protenas pueden ser clasificadas en funcin de
aspectos tan diversos como su composicin, su
39
disposicin espacial, su funcin biolgica y su
localizacin.
Atendiendo a su composicin la protenas pueden
ser:
Simples: aquellas compuestas nicamente de
aminocidos.
Conjugadas: cuando adems de aminocidos
poseen un componente no proteico, el que puede ser
de origen orgnico o inorgnico y que se denomina
grupo prosttico. Algunos ejemplos son:
nucleoprotenas, formadas por la asociacin de la
cadena polipeptdica con cidos nucleicos; las
glucoprotenas, cuyo grupo prosttico son
carbohidratos; las fosfoprotenas, asociadas con
fsforo o como las metaloprotenas, cuando un in
metlico est enlazado directamente a la protena,
entre otras.
Con base en su disposicin espacial, las protenas
pueden clasificarse en globulares y fibrosas. Las
protenas globulares son de forma esfrica y solubles
en agua. La mayor parte de las enzimas, hormonas y
anticuerpos tienen estructura globular.
Las protenas formadas por cadenas polipeptdicas
dispuestas paralelamente a un eje, reciben el nombre
de protenas fibrosas, como la colgena y la fibrina.
Estas protenas son de forma alargada, baja
solubilidad en agua y resistentes a la traccin.
Clasificacin de las protenas de acuerdo a su
funcin. Las protenas desempean una amplia
variedad de funciones muy importantes en el
organismo. La lista siguiente, aunque no es
exhaustiva, da una idea de la diversidad de las
funciones biolgicas en las cuales se sabe que
intervienen las protenas:
Cataltica: las enzimas catalizan casi todas las
reacciones que se efectan en los organismos vivos.
Estructural: las protenas proporcionan a las
clulas forma y soporte mecnico (como la colgena
y las protenas contrctiles).
Reguladora: algunas protenas son hormonas o
sirven como receptores de las hormonas (insulina y
glucagn).
Protectora: por ejemplo las inmunoglobulinas que
defienden al organismo contra las infecciones virales
y bacterianas.
Transporte: las protenas se pueden unir a otras
molculas a fin de transportarlas en el organismo
(albmina, transferrina).
Trabajo mecnico: por ejemplo la contraccin de
los msculos, el movimiento de los flagelos y la
separacin de cromosomas en la mitosis (miosina y
actina).
Entre las funciones que son comunes a todas las
protenas encontramos:
Capacidad amortiguadora: debido a que las
protenas son compuestos anfteros y poseen
muchos grupos ionizables (con valores diferentes de
pK), funcionan como amortiguadores para reducir al
mnimo cambios sbitos en el pH.
Energtica: liberan 4 kcal/g de protena oxidada
hasta CO2 y H2O. Los aminocidos pueden ser
desaminados para formar cetocidos, los cuales
pueden movilizarse para producir energa calrica o
transformarse en carbohidratos y lpidos.
Participan en el mantenimiento del equilibrio
osmtico entre los diferentes compartimentos del
organismo. Las protenas, por ser grandes molculas
coloidales, no son difusibles, esto es, no pueden
atravesar las membranas y ejercen una presin
osmtica coloidal, la cual sirve para mantener un
volumen normal de sangre y un contenido normal de
agua en el lquido intersticial y los tejidos.
Fuente de nutricin para los tejidos (sobre todo, la
albmina): por constituir una fuente de los
aminocidos indispensables para el organismo, las
protenas son una forma de almacenamiento de
aminocidos.
Por ltimo, en funcin de su localizacin, las
protenas pueden clasificarse en:
Hsticas o tisulares: son las protenas de los
tejidos.
Plasmticas o hemticas: son las protenas de la
sangre.
Las protenas de la sangre (la hemoglobina en los
eritrocitos y las protenas plasmticas), por su gran
40
accesibilidad, son muy utilizadas en el laboratorio
clnico.
E. Enzimas y coenzimas
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer qu
es una enzima y cmo acta; podr calcular sus
principales parmetros cinticos y el efecto de
algunas molculas que modifican su accin y
describir ciertas aplicaciones mdicas de las
enzimas.
E.1 Caractersticas de un sistema enzimtico.
E.1.1 Conocer qu son las enzimas y su
clasificacin de acuerdo con su
funcin.
E.1.2 Identificar los componentes de un
sistema enzimtico y mencionar las
coenzimas y cofactores que
participan.
E.1.3 Analizar el papel de vitaminas
hidrosolubles como precursores de
las coenzimas e identificar al
magnesio, al manganeso y al fierro
como ejemplos de cofactores
metlicos.
E.1.4 Definir los conceptos de zimgeno
e isoenzima.
E.1.5 Conocer el modo de accin de las
enzimas y en qu consiste su
especificidad.
E.2 Cintica enzimtica.
E.2.1 Analizar una reaccin enzimtica
para identificar al sustrato, al
complejo enzima-sustrato y al
producto.
E.2.2 Definir lo que es la velocidad de
una reaccin enzimtica y conocer
cmo se calcula su constante de
equilibrio; mencionar el significado
de dicha constante.
E.2.3 Analizar las ecuaciones de
Michaelis Menten y de Lineweaver-
Burk; describir sus usos e
identificar el significado de los
valores de Vmx y de Km.
E.2.4 Conocer las estrategias de control
de la actividad de las enzimas: disponibilidad
de sustrato, modificacin covalente,
alosterismo, retroalimentacin y
concentracin de la enzima.
E.2.5 Describir la accin de los
inhibidores competitivos y no
competitivos y de los moduladores
alostricos sobre la actividad de las
enzimas.
E.2.6 Conocer el efecto del pH y de la
temperatura sobre la actividad
enzimtica.
E.3 Aspectos mdicos de la enzimologa.
E.3.1 Conocer que el uso de la
determinacin de la actividad de
algunas enzimas en el diagnstico
contribuye al seguimiento de ciertas
enfermedades (transaminasas,
lactato deshidrogenasa, creatina
cinasa, fosfatasas y amilasa).
E.3.2 Describir la etiologa de algunos
padecimientos congnitos del
metabolismo y la actividad
enzimtica empleada para su
diagnstico (fenilcetonuria,
albinismo, anemia hemoltica,
glucogenosis).
E.3.3 Describir el uso de ciertas enzimas
como reactivos de laboratorio en la
cuantificacin de algunos metabolitos
(determinacin de glucosa, de
colesterol y de cido rico).
Realizacin de la prctica 5 "Cintica enzimtica.
Efecto de la concentracin de sustrato sobre la
velocidad de una reaccin enzimtica" (ver pg.148).
Las enzimas son protenas especializadas de
actividad cataltica. Algunas de ellas estn formadas
nicamente de aminocidos mientras que otras
presentan algn otro componente de naturaleza no
aminocida. La parte proteica se denomina
apoenzima, mientras que la parte no proteica se
denomina coenzima; cuando se encuentran aisladas,

41
ambas son no funcionales, pero juntas forman una
protena funcional denominada holoenzima.
Las coenzimas funcionan a menudo en la
transferencia de electrones o de grupos funcionales.
Generalmente son derivados de vitaminas, las cuales
no pueden ser sintetizadas en las clulas de los
organismos superiores, por lo que deben ser
adquiridas en la dieta.
Las enzimas presentan algunas caractersticas que
las diferencian de los catalizadores qumicos, como:
1. Mayor velocidad de reaccin, ya que las
reacciones catalizadas enzimticamente alcanzan
velocidades de reaccin de 106 a 1 012 veces
mayores que las reacciones no catalizadas y de
varios rdenes de magnitud mayor que las
catalizadas qumicamente.
2 .Condiciones de reaccin ms suaves, ya que
trabajan a temperaturas relativamente bajas, a
presin atmosfrica y en condiciones de pH neutro.
3. Mayor especificidad de reaccin, ya que presentan
una gran selectividad por la identidad de los grupos
qumicos de sus sustratos y productos, de tal
manera que rara vez se obtienen productos
colaterales o secundarios.
4. Capacidad de regulacin, es decir, que sus
actividades varan de acuerdo con la concentracin
de otras molculas diferentes de sus sustratos. Los
mecanismos de regulacin incluyen la inhibicin,
control alostrico, modificacin covalente de la
enzima y variacin en la cantidad de enzima
sintetizada.
Las enzimas aceleran las reacciones biolgicas al
disminuir la energa de activacin de una reaccin
dada sin alterar su equilibrio. Su mecanismo de
accin consiste en la formacin de un complejo entre
la enzima y el sustrato (ES), el cual realiza la
reaccin qumica adecuada y permite la recuperacin
de la enzima original en el momento en que el
complejo enzima-producto se rompe para liberar al
producto.
El sustrato se une a la enzima en el sitio activo, el
cual consiste en un arreglo espacial de algunos
aminocidos de la protena donde se encuentran
generalmente el grupo prosttico o la coenzima y que
tienen la capacidad de interactuar con el sustrato.
Hay algunas enzimas que se sintetizan directamente
en su forma activa, otras se sintetizan en forma de
proenzimas inactivas o zimgenos y deben ser
activadas por procesos especiales para llegar a ser
funcionales. Algunas otras enzimas presentan sitios
diferentes del sitio activo donde se asocian molculas
que modulan su actividad. Estas enzimas se conocen
como enzimas alostricas y el sitio donde interactan
con el modulador se llama sitio alostrico.
La velocidad de las reacciones enzimticas
depende de:
a) La concentracin y la actividad de la enzima.
La velocidad de las reacciones enzimticas se
ve modificada por la cantidad de enzima y por
su capacidad de interactuar con su sustrato.
Una enzima puede atacar, dado que interacta
con su sustrato, por un reconocimiento
espacial, tridimensional o estereoespecfico. Si
la especificidad es absoluta, la enzima puede
actuar sobre un nico compuesto, mientras
que, si es relativa, puede usar como sustrato
varios compuestos relacionados. La
estereoespecificidad indica que una enzima
acepta slo un cierto estereoismero (L D).
Un sustrato puede ser transformado por una o
varias reacciones tericamente posibles
catalizadas por diferentes enzimas. Esto es
importante en algunos procesos de control
metablico.
Las unidades con que se mide la velocidad de
una enzima se determinan como unidades
internacionales (UI). Una UI es la cantidad de
enzima en miligramos que convierte un
micromol de sustrato por minuto, en katales
(kat), que es la cantidad de enzima que
convierte un mol de sustrato por segundo. La
actividad especfica de una enzima se expresa
en unidades por mg de protena.
b) La concentracin del sustrato. A bajas
concentraciones de sustrato la reaccin
enzimtica sigue una cintica de primer orden,
es decir, la velocidad de la reaccin es
proporcional a la concentracin del sustrato. A
altas concentraciones de sustrato, la reaccin
es de orden cero, es decir, la enzima est
saturada por su sustrato y, por lo tanto, se
encuentra en su velocidad mxima. Cada
42
 enzima tiene su caracterstica constante de mientras que los moduladores negativos hacen ms
Michaelis o Km, que define la concentracin de pronunciado el efecto sigmoidal (fig. II.2).
sustrato a la que la reaccin enzimtica Otra manera de estudiar el comportamiento
alcanza la mitad de la velocidad mxima. cintico de las enzimas, es graficar la inversa de la
c) El pH y la composicin de la solucin en que se velocidad inicial contra la inversa de la concentracin
lleve a cabo la reaccin. Toda reaccin de sustrato, lo que genera una lnea recta, descrita
catalizada enzimticamente tiene su pH ptimo. matemticamente por la ecuacin de Lineweaver-
d) La temperatura. Toda reaccin catalizada Burk. En la figura II.3 se observa este
enzimticamente tiene una temperatura ptima. comportamiento lineal de la enzima con y sin
e) La presencia de activadores e inhibidores. La inhibidores.
actividad enzimtica puede ser modificada
positiva o negativamente por algunos
compuestos. Los activadores aumentan la
reaccin enzimtica propiciando la formacin de
un sitio activo funcional y a menudo son iones
metlicos como Mg2+, Zn2+, etctera. La
activacin de las enzimas alostricas que estn
compuestas por subunidades es de gran
importancia en el control de los sistemas
multienzimticos y se realiza generalmente por
varias molculas orgnicas.
Los inhibidores enzimticos pueden ser de varios
tipos; los ms importantes son los competitivos y los
no competitivos. Los inhibidores competitivos
interactan con el sitio activo de la enzima y se
parecen al sustrato en su estructura, por lo que
compiten con l para unirse al sitio activo. En
general, se remueven con un exceso de sustrato.
Los inhibidores no competitivos reaccionan con
otra estructura importante de la molcula.enzimtica.
La inhibicin puede ser reversible o irreversible en el
caso de que el inhibidor realice un cambio
permanente de un grupo funcional de la enzima. El
efecto de un inhibidor no competitivo no puede
revertirse por un exceso de sustrato.
El comportamiento cintico de las enzimas, as
como el efecto de los diferentes tipos de molculas
sobre la actividad enzimtica, puede ser estudiado
mediante diversas tcnicas cinticas y grficas. As,
al graficar la velocidad de la reaccin enzimtica
contra la concentracin de sustrato se obtiene una
hiprbola rectangular (fig. II.1), descrita
matemticamente por la ecuacin de Michaelis-
Menten. Las enzimas alostricas presentan un
comportamiento sigmoidal y los moduladores
positivos desplazan la curva hacia la izquierda,

43
In vivo, la mayora de las enzimas se organiza en
sistemas multienzimticos, los cuales se unen a
estructuras celulares o estn libres en diversos
compartimientos celulares y son una forma de hacer
ms eficiente la accin de las enzimas involucradas
en una va, as como su regulacin.
Las enzimas pueden clasificarse en seis grandes
grupos segn el tipo de reaccin que llevan a cabo:

OXIDORREDUCTASAS. Transfieren electrones o

hidrgenos.

TRANSFERASAS. Transfieren grupos funcionales

entre dos molculas.

HIDROLASAS. Realizan reacciones de ruptura de

enlaces con entrada de la molcula de agua.

LIASAS. Realizan reacciones de adicin a dobles

enlaces y ruptura no hidroltica del sustrato.

ISOMERASAS. Realizan interconversiones de

ismeros.

LIGASAS. Realizan reacciones de formacin de

enlaces con gasto de ATP.

44
 CONTENIDO TEMTICO

Segunda Unidad Temtica

METABOLISMO

45
 III
METABOLISMO Y. BIOENERGTICA
Al finalizar esta unidad, el alumno conocer en forma integral las rutas metablicas de las diversas
molculas biolgicas en las clulas y las alteraciones que aparecen asociadas a su disfuncin en algunas
enfermedades. La unidad se compone de:

A. Fundamentos del metabolismo celular.

B. Carbohidratos.
C. Metabolismo energtico.
D. Otras vas metablicas de los carbohidratos.
E. Lpidos.
F. Metabolismo de los lpidos.
G. Metabolismo de los compuestos nitrogenados.
H. Regulacin e integracin metablica.

A. Fundamentos del metabolismo celular en nutrimientos y las vas metablicas a las

que entran para satisfacer las demandas de
Al finalizar esta unidad, el alumno conocer los energa y mantenimiento de los tejidos
principios generales del metabolismo intermediario (homeostasis) con base en el esquema
de una clula normal. general del metabolismo

A.1 Conocer las funciones generales del A.6 Conocer los diferentes niveles de regulacin
metabolismo. del metabolismo: sntesis de enzimas
(induccin-represin), compartimentalizacin,
A.2 Definir los conceptos de va metablica, actividad enzimtica (activacin, inhibicin y
complejo multienzimtico y encrucijada enzimas alostricas).
metablica.
El metabolismo puede definirse como el conjunto de
A.3 En un esquema general del metabolismo
todas las reacciones qumicas que ocurren en el
identificar, con base en sus caractersticas,
organismo. Los organismos se caracterizan por
las vas anablicas, catablicas y anfiblicas.
poseer miles de reacciones catalizadas por enzimas,
constituyendo las vas metablicas. El objetivo del
A.4 Describir el papel central del piruvato, la
+
metabolismo es mantener las funciones vitales del
acetil CoA, el par NAD(P) /NAD(P)H y el
organismo tales como el trabajo mecnico, el
ciclo del ATP en el metabolismo
transporte activo de molculas contra gradientes de
intermediario. Definir los conceptos de
concentracin y la biosntesis de molculas
fosforilacin oxidativa y fosforilacin a nivel
complejas, entre otras.
de sustrato.
Las rutas o vas metablicas son secuencias
de reacciones en donde un precursor o sustrato se
A.5 Conocer la transformacin de los diferentes
convierte en un producto final a travs de una serie
componentes de la dieta
de intermediarios metablicos. El trmino

46
metabolismo intermediario se aplica a las actividades
combinadas de todas las vas
metablicas que interconvierten sustratos,
metabolitos y productos. Por ejemplo, la secuencia
consecutiva de A > B > C > D > E tiene el
mismo efecto neto que
A > E.
Toda esta actividad celular muy coordinada y
dirigida tiene como objetivo el que los sistemas
multienzimticos cooperen para cumplir cuatro
funciones bsicas:
1. Obtener energa qumica a partir de la energa
solar en los organismos fottrofos o de la energa
contenida en los nutrientes obtenidos del ambiente
en los organismos quimitrofos.
2. Convertir las molculas nutrientes en las
molculas caractersticas de la propia clula,
incluidos los precursores macromoleculares.
3. Transformar los precursores monomricos en
polmeros (protenas, cidos nucleicos, lpidos,
polisacridos y otros componentes celulares).
4. Sintetizar y degradar las biomolculas requeridas
en las funciones celulares especializadas.
El metabolismo se divide en catabolismo
anabolismo
El catabolismo, del griego kat, "abajo" es la fase
degradativa del metabolismo en la que nutrientes
orgnicos como carbohidratos, lpidos y protenas se
convierten en productos ms pequeos y sencillos
(H2O, CO2, NH3). Las rutas catablicas generan
transportadores electrnicos reducidos (NADH,
FADH2 y NADPH) y liberan energa, parte de la cual
se conserva en la molcula del ATP.
En el anabolismo, del griego an, "arriba",
tambin llamado biosntesis, los precursores
pequeos y sencillos se transforman en molculas
ms grandes y complejas propias de cada clula
(polisacridos, lpidos, protenas y cidos nucleicos).
Las reacciones anablicas requieren un aporte
energtico, que proviene generalmente de la
hidrlisis del ATP y del poder reductor del NAD(P)H.
En el siguiente cuadro aparece el resumen
de las caractersticas de estos dos tipos de procesos.
Catabolismo Anabolismo
Biodegradativa. Biosinttica.
Oxidativa. Reductora.
Generador de energa. Consumidor de energa.
Variedad de materiales Materiales iniciales bien
iniciales, pero productos definidos y variedad en
finales bien definidos los productos
(convergente) (divergente)
Dentro de la gran complejidad del
metabolismo es posible distinguir algunos puntos de
convergencia:
1. La mayora de las vas metablicas son
irreversibles y exergnicas.
2. Cada va tiene una etapa obligada. Generalmente,
al principio de cada va existe una reaccin
exergnica irreversible que permite que el
intermediario que produce contine a lo largo de la
y va.
3. Todas las vas metablicas estn reguladas. La
regulacin tiene el objeto de ejercer un control
enzimtico sobre el flujo de metabolitos a travs de
una va metablica. En toda va existe una reaccin
enzimtica que funciona tan lentamente que impide
que sus sustratos y productos se equilibren. Dado
que la mayora de las otras enzimas funcionan
prximas al equilibrio, esta reaccin enzimtica es
la que determina la velocidad de la va, y por lo
tanto, su regulacin. Esta es la forma ms eficaz
de ejercer el control porque evita la sntesis
innecesaria de metabolitos de la va.
Una manera de controlar la actividad de la
enzima limitante es regulando su actividad cataltica,
mediante interacciones alostricas (como en la
inhibicin por producto) o por modificaciones
covalentes. Otra manera sera controlando la
velocidad de la sntesis de enzimas particulares.
47
 El hecho de que las vas de sntesis y
degradacin de molculas sean diferentes,
contribuye tambin a la regulacin metablica.
4. En las clulas eucariticas, la
compartimentalizacin permite la localizacin
especfica de las vas metablicas y su control.
B. Carbohidratos
Al finalizar esta subunidad, el alumno explicar la
estructura qumica de los carbohidratos, sus fuentes,
su digestin, su absorcin y la funcin que
desempean en la clula.
B.1 Estructura.
B.1.1 Definir qu son los carbohidratos y
cul es su importancia biolgica.
B.1.2 Conocer la clasificacin de los
carbohidratos con base en el nmero
de unidades sacridas que los
componen (mono, di, tri, oligo y
polisacridos) y con base en su
composicin (homo
heteropolisacridos).
B.1.3 Conocer la estructura qumica de
los monosacridos con base en su
grupo carbonilo, en su estructura
lineal o cclica y en el nmero de
tomos de carbono. Sealar las
siguientes caractersticas
fisicoqumicas: solubilidad
propiedades pticas. Definir el
concepto de carbono asimtrico y los
diferentes tipos de ismeros pticos:
epmero, enantimero y anmero.
B.1.4 Describir la estructura de los
carbohidratos de importancia
fisiolgica: ribosa, glucosa, fructosa,
manosa, galactosa, sacarosa,
lactosa, maltosa, almidn, glucgeno
y celulosa.
B.1.5 Describir la estructura
caractersticas de los principales
heteropolisacridos (quitina,
heparina, sulfato de dermatan,
condroitin sulfato,
glicosaminoglucanos,
peptidoglicanos). Reconocer los
carbohidratos como componentes de
las glicoprotenas y de los
glicolpidos y conocer su funcin
como receptores y molculas de
reconocimiento.
B.2 Digestin y absorcin.
B.2.1 Sealar las fuentes dietticas de los
carbohidratos y el papel de la celulosa
en la dieta de los mamferos.
B.2.2 Conocer el proceso de la digestin y
la absorcin de los carbohidratos de la
dieta.
B.2.3 Conocer los cinco principales
transportadores de glucosa (GLUT 1 a
GLUT 5) y su distribucin en los
diferentes tejidos.
Realizacin de la prctica 6 "Efecto de la insulina
sobre la glucemia de la rata" (ver pg.152).
y
Lecturas recomendadas
1. Daz HD, Burgos HLC. Cmo se
transporta la glucosa a travs de la
membrana celular? IATREA. 2002; 15 (3):
179-189.
2. Maeder T. Sweet Medicine. Scientific
y American. 2002; 287(1): 24-31.
Los carbohidratos, o sacridos, son las biomolculas
ms abundantes en la naturaleza y son
indispensables en los organismos vivos. Se les llama
carbohidratos debido a que su estructura qumica
semeja formas hidratadas del carbono y se
representan con la frmula (CH2O)n; qumicamente
se definen como derivados aldehdicos y cetnicos
de alcoholes polivalentes y no puede haber menos
de 3C para constituir un carbohidrato.
y
48
Transportador Distribuidor Propiedades unidades monosacridas, como la sacarosa, la
GLUT 1 Eritrocitos, Ingreso basal maltosa, la lactosa y la celobiosa; oligosacridos, con
barrera de glucosa. 3 a 10 unidades de monosacrido y polisacridos,
hematoencefli Km 1.6 mM. con ms de 10 unidades de monosacrido, que
ca, tienen alto peso molecular, como el almidn, el
placenta, glucgeno y la celulosa.
retina, Los carbohidratos provienen de la dieta; se
rin y cerebro. encuentran en los cereales (maz, trigo y arroz),
GLUT 2 Hgado, Transportador hortalizas (bulbos, races, verduras), legumbres (frijol,
pncreas de glucosa, garbanzo, lenteja), tubrculos (papa, yuca), frutas,
e intestino galactosa y leche y productos lcteos, as como en algunos
delgado fructosa. productos procesados como dulces, jaleas,
Sensor de mermeladas y pastas. Los carbohidratos son los
glucosa en componentes ms abundantes de la dieta del
pncreas. humano, aportan aproximadamente el 55% de las
Km de 15 mM o caloras de la dieta.
ms. Los carbohidratos tienen diversas funciones
GLUT 3 Cerebro, Ingreso basal en el organismo son: a) La fuente principal de
placenta, de glucosa. energa (1 g de carbohidrato produce 4 Cal); b)
hgado, rin KM 2 mM. Precursores en la bio-sntesis de cidos grasos y
y corazn. Transportador algunos aminocidos; c) Constituyentes de molculas
de glucosa y complejas importantes como glucolpidos,
galactosa. glucoprotenas, cidos nucleicos y nucletidos.

GLUT 4 Tejido Dependiente Estructura de los monosacridos

adiposo, de insulina.
corazn y Km de 5 mM. Los alcoholes y los aldehdos o cetonas pueden
msculo reaccionar entre s para producir hemiacetales y
esqueltico. hemicetales. Cuando existen estos grupos hidroxilo y
GLUT 5 Yeyuno, Transportador carbonilo en una misma molcula provocan que la
espermatozoi de molcula se ciclice. La naturaleza del ciclo depende
des, rin, fructosa. de la posicin del grupo hidroxilo que participa. Si el
cerebro. compuesto es una aldosa y tiene 5 carbonos ser el
C 4 el que reaccione y el anillo formado es un furano.
De la misma manera, si el compuesto tiene 6
Se clasifican segn el nmero de unidades carbonos, ser el C 5 el que reaccione y se formar
sacridas en monosacridos y polisacridos. Los un anillo de pirano. La transferencia de un protn del
monosacridos, segn el nmero de carbonos en su grupo hidroxilo al oxgeno del carbonilo ocasiona un
molcula, se dividen en triosas (3C), tetrosas (4C), nuevo carbn asimtrico. La posicin del hidroxilo en
pentosas (5C), hexosas (6C), heptosas (7C), este carbono determina dos formas isomricas alfa o
etctera. Segn su funcin carbonilo pueden ser beta que, en solucin, guardan un equilibrio con la
aldosas o cetosas, por ejemplo, la glucosa es una forma lineal (forma carbonilo).
aldohexosa y la fructosa una cetohexosa. Los
polisacridos son carbohidratos que resultan de la Glucsidos
unin de varias molculas de monosacridos. Este Son los compuestos resultantes de la unin
grupo se puede clasificar en disacridos, con dos covalente de azcares con varias molculas. Se

49
clasifican en homoglucsidos, si se unen
exclusivamente carbohidratos (osas) mediante
enlaces glucosdicos, y en heteroglucsidos, si
forman enlaces con otro tipo de molculas como
protenas o lpidos. Los homoglucsidos pueden
clasificarse segn el nmero de unidades en:
disacridos, oligosacridos y polisacridos. Los
polisacridos, tambin llamados polisidos, pueden
clasificarse en homopolisacridos, que pueden ser de
reserva, como el almidn, el glucgeno, la inulina, o
estructurales, como la celulosa, la lignina y la quitina,
y en heteropolisacridos, que pueden dividirse en no
nitrogenados, como las pectinas, el agar y la goma
arbiga, o nitrogenados, como los
glucosaminoglucanos.
Muchos de los alimentos que se ingieren a
diario contienen almidn y glucgeno que son
polisacridos de reserva. El almidn forma grnulos
en las clulas de las plantas y el glucgeno se
encuentra en el citoplasma de las clulas musculares
y hepticas de los animales. El azcar que constituye
la unidad estructural de estas molculas es la
glucosa, la cual se encuentra formando dos tipos de
enlaces: los enlaces  1 4 se encuentran en la
amilosa (formada por unidades de maltosa) y el
enlace  1 6 conecta a la estructura llamada
amilopectina. La estructura del glucgeno es similar a
la del almidn, pero con una mayor cantidad de
ramificaciones. El almidn est compuesto por 3 000
residuos de glucosa y tiene un peso molecular
cercano a 5 X 105; el glucgeno tiene un peso
molecular de 1 a 4 X 106. La degradacin de estos
polisacridos es diferente si se realiza en el aparato
digestivo o en el interior de las clulas; es hidroltico
en el primer caso y fosforoltico en las clulas.
Durante la digestin, la amilosa es
hidrolizada por una alfa amilasa, la cual rompe los
enlaces  1 ; 4. Los productos primarios son
oligosacridos con 6 a 7 residuos; los ltimos
productos son una mezcla de maltosa y glucosa. En
la cadena de amilopectina, la alfa amilasa rompe los
enlaces  1 4, pero no los  1 6; stos son
hidrolizados por una  1 6 glucosidasa. El
resultado de la accin de las dos enzimas es la
hidrlisis de la amilopectina hasta glucosa y maltosa.
Existe tambin otra enzima llamada maltasa
(alfa amilasa), que hidroliza los enlaces 1 4
glucosdicos de la malto-sa; la accin de esta enzima
facilita la formacin de la dextrina lmite. Esta
partcula est constituida por molculas de
amilopectina que tienen una gran cantidad de
ramificaciones. Las dextrinas lmite son degradadas
por la  1 6 glucosidasa y se obtiene una mezcla
de glucosa y maltosa.
Los productos de la digestin de los
carbohidratos se absorben en el intestino a travs de
GLUT2 y GLUT5 o por cotransporte con sodio y
pasan a la circulacin portal.
C. Metabolismo energtico
Al finalizar esta subunidad, el alumno conocer las
vas involucradas directamente en la generacin de
la energa de la clula.
C.1 Gluclisis.
C.1.1 Describir las reacciones de la va
glucoltica, indicando las reacciones
irreversibles y aquellas que generan
NADH o ATP por fosforilacin a nivel
de sustrato.
C.1.2 Sealar los productos de la va y su
destino en presencia y en ausencia
de oxgeno; discutir la importancia
fisiolgica de la formacin de lactato.
C.1.3 Conocer el balance energtico y la
regulacin de la va glucoltica; har
nfasis en el papel de las siguientes
molculas: ATP, ADP, AMP, fructosa
2,6-bisfosfato, alanina y citrato.
C.1.4 Sealar la importancia de la
gluclisis en los eritrocitos, en las
clulas musculares, en las clulas
nerviosas y en los hepatocitos.
Las clulas de los organismos hetertrofos obtienen
su energa de reacciones oxidativas en las cuales los
electrones de un sustrato donador se transfieren a un
aceptor. Bajo condiciones anaerbicas, un
compuesto orgnico sirve como aceptor de
50
electrones; bajo condiciones aerbicas, el oxgeno es
el aceptor final.
Los sustratos preferidos por la clula para
obtener la energa requerida para sus funciones
vitales son los azcares (mono, di
homopolisacridos). Asimismo, las clulas son
capaces de usarlos tambin como intermediarios
para la formacin de otros compuestos importantes
en biologa.
La gluclisis es la va metablica por la que
se degrada la glucosa; filogenticamente, es la va
ms antigua y consiste en una secuencia de
reacciones enzimticas en las cuales se degrada la
glucosa. La gluclisis puede dividirse en dos fases:
una de activacin y una oxidativa. La fase de
activacin consiste en la transferencia de fosfatos a
la glucosa con gasto de dos ATP y en su ruptura en
dos molculas de gliceraldehdo 3 fosfato; en la fase
oxidativa, el gliceraldehdo 3 fosfato es transformado
en piruvato con la obtencin de cuatro molculas de
ATP por fosforilacin a nivel de sustrato.
Las reacciones de la gluclisis ocurren en el
citoplasma y no estn ligadas a estructuras celulares.
El producto de la va es el piruvato, el cual
puede seguir diversos destinos segn las
condiciones de la clula. En condiciones
anaerbicas, el piruvato se transforma en lactato por
accin de la lactato deshidrogenasa en presencia del
NADH + H+ obtenido en la oxidacin del
gliceraldehdo 3 fosfato. En las levaduras, el piruvato
se descarboxila a acetaldehdo y se forma etanol por
la reduccin del acetaldehdo con el NADH mediante
la accin de la deshidrogenasa alcohlica. Bajo
condiciones aerobias, el piruvato se descarboxila en
las mitocondrias y produce NADH y acetil CoA, la
cual es el sustrato principal del ciclo de Krebs.
Slo una pequea parte de la energa
almacenada en la molcula de la glucosa se libera en
la gluclisis (2 ATP netos por cada molcula de
glucosa). En estricta anaerobiosis, la gluclisis es la
nica fuente de energa de la clula.
La regulacin de la va glucoltica se realiza a
nivel de la transformacin de la fructosa 6 fosfato en
fructosa 1,6 bisfosfato. Esta reaccin es catalizada
por la fosfofructocinasa I, la que es una enzima
alostrica cuya actividad se estimula por AMP, ADP y
fructosa 2,6 bisfosfato y se inhibe por ATP y citrato.
La deshidrogenasa de gliceraldehdo 3 fosfato
tambin desempea un papel importante en la
regulacin de la gluclisis.
y
C.2 Papel de la mitocondria en las funciones
oxidativas.
C.2.1 Conocer la biognesis de la
mitocondria.
C.2.2 Sealar la estructura de la
mitocondria y describir las
caractersticas de su matriz,
membrana externa, membrana
interna y espacio intermembranal;
har nfasis en su papel en la
transduccin de energa.
C.2.3 Reconocer que en la mitocondria se
realizan, entre otras, las siguientes
vas: sntesis de algunas protenas,
descarboxilacin del piruvato, -
oxidacin, ciclo de Krebs, cadena de
transporte de electrones y
fosforilacin oxidativa.
La respiracin celular es una secuencia de
reacciones de xidorreduccin de la que los
organismos obtienen energa para formar
compuestos como el ATP. La base molecular de este
proceso es una oxidacin, paso a paso, de los
compuestos orgnicos hasta CO2 y la transferencia
de hidrgeno (protones ms electrones) al oxgeno
con la formacin de una molcula de agua. La
energa obtenida por la respiracin celular es, por
tanto, una parte de la energa liberada en la reaccin
del hidrgeno con el oxgeno. Todos estos procesos
se realizan en las mitocondrias de los organismos
eucariotos y en las membranas plasmticas de los
organismos procariotos.
Las mitocondrias son orgnulos
relativamente autnomos cuya estructura est
adaptada a su funcin principal, es decir, a la
conversin de la energa de oxidacin en aquella de
los compuestos de reserva con un alto contenido
energtico. Una mitocondria est constituida por dos
membranas separadas: una membrana externa lisa y
muy permeable y una membrana interna con

51
plegamientos irregulares (crestas) y selectivamente
permeable. El interior de la mitocondria est
constituido por la matriz. Cada compartimiento tiene
un contenido caracterstico de enzimas y molculas
de acuerdo con los procesos que se realizan en ellos.
La cadena de transporte de electrones (cadena
respiratoria) y la generacin de enlaces de alta
energa asociada a esta transferencia de electrones
tiene lugar en la membrana interna. La mitocondria
contiene adems un DNA circular especfico y todos
los componentes necesarios para la sntesis de
protenas, lo que podra indicar que el origen de la
mitocondria pudo ser una bacteria que estableci una
simbiosis con una clula eucaritica a la que infect.
C.3 Descarboxilacin del piruvato.
C.3.1 Conocer las reacciones de la
descarboxilacin oxidativa del
piruvato e indicar sus productos y el
destino de los mismos.
C.3.2 Analizar el carcter irreversible de
la descarboxilacin del piruvato y su
regulacin por producto, por
alosterismo y por modificacin
covalente.
En los organismos aerbicos el piruvato, producto de
la gluclisis, entra a la mitocondria para ser oxidado a
acetil CoA y CO2. Este proceso oxidativo irreversible
es realizado por la piruvato deshidrogenasa, un
complejo de tres enzimas y cinco diferentes
coenzimas o grupos prostticos: pirofosfato de
tiamina (TPP), lipoato, flavin adenin dinucletido
(FAD), CoA y nicotin adenin dinucletido (NAD).
En la primera reaccin se forma CO2 y un
grupo -hidroxietilo derivado del piruvato, el cual se
une covalentemente al TPP de la piruvato
deshidrogenasa (E1). En el siguiente paso el grupo
-hidroxietilo es oxidado a acetato y se transfiere al
lipoato unido covalentemente a la dihidrolipoil
transacetilasa (E2). El TPP se regenera en este
paso.
La siguiente reaccin consiste en transferir el
grupo acetato del lipoato a la CoA para formar acetil
CoA. El lipoato permanece reducido. Los siguientes
pasos tienen como finalidad regenerar la forma
oxidada de este lipoato. Para ello, el FAD unido a la
dihidrolipoil deshidrogenasa (E3) remueve los
+
electrones del lipoato y los entrega al NAD
+.
reducindolo a NADH + H
La actividad del complejo de la piruvato
deshidrogenasa es regulada por tres mecanismos:
1. Inhibicin por producto: tanto el acetil CoA como el
+
NADH + H actan como moduladores alostricos
negativos.
2. Por disponibilidad de sus sustratos: deben existir
concentraciones adecuadas de piruvato, CoA y
NAD+.
3. Por modificacin covalente: la piruvato
deshidrogenasa (E1) existe en dos formas: una
fosforilada (inactiva) y otra desfosforilada, que es
activa. La fosforilacin es llevada a cabo por una
protena cinasa dependiente de Mg2+ y ATP,
mientras que la desfosforilacin la realiza una
fosfoprotena fosfatasa, cuya actividad es
estimulada por altas concentraciones de Ca2+. Este
ltimo evento ocurre cuando existe una
concentracin elevada de ADP, el cual es indicador
de carencia energtica.
Los individuos que tienen deficiencia de
tiamina, como ocurre en el beriberi, presentan
problemas a nivel neurolgico debido a que el
cerebro obtiene toda su energa por oxidacin
aerbica de la glucosa.
C.4 Ciclo de los cidos tricarboxlicos (ciclo de
Krebs).
C.4.1 Definir el concepto de
xidorreduccin, par redox y
potencial de xidorreduccin.
C.4.2 Sealar la localizacin subcelular
de la va en funcin de sus
alimentadores y precisar el papel
del ciclo en la generacin de la
energa celular.
C.4.3 Describir las reacciones
enzimticas involucradas en el ciclo,
sus sustratos y productos, as como
las sustancias que intervienen en la
regulacin de la va.
C.4.4 Conocer el papel anfiblico de la
va y los diferentes destinos de sus
52
 intermediarios: citrato, isocitrato, -
cetoglutarato, succinil CoA, malato y
oxaloacetato.
C.4.5 Definir el concepto de reaccin
anaplertica y conocer las enzimas
involucradas en estas reacciones
para el ciclo de Krebs.
C.4.6 Conocer el balance energtico de la
va y har nfasis en el nmero y tipo
de coenzimas reducidas producidas
en la oxidacin de una molcula de
acetil CoA.
La mayor parte del ATP generado en los organismos
aerobios se produce en el proceso de la fosforilacin
oxidativa en el cual, los hidrgenos extrados de los
metabolitos mediante las reacciones de
deshidrogenacin son cedidos a la cadena
respiratoria, en donde se genera el potencial
protonmotriz que sirve de fuerza impulsora para la
sntesis del ATP. La mayora de las
deshidrogenaciones de los metabolitos se llevan a
cabo en una secuencia cclica de reacciones
conocida como ciclo de Krebs, ciclo del cido ctrico
o ciclo de los cidos tricarboxlicos. El ciclo de Krebs
se lleva a cabo por enzimas solubles (a excepcin de
la succinato deshidrogenasa que es parte integral de
la membrana interna) de la matriz mitocondrial y
durante l se oxidan los residuos de acetato activo
(acetil CoA) provenientes de la glucosa, los cidos
grasos y los aminocidos, hasta CO2 y coenzimas
reducidas. Aproximadamente dos tercios del ATP
utilizado por los organismos aerobios se genera
como resultado de la oxidacin de los restos de
acetato en el ciclo de Krebs.
El ciclo de Krebs es una va de confluencia
para el catabolismo celular (fig. III.1) que, en una
secuencia de ocho reacciones oxida al residuo
acetato de la acetil CoA conforme a la ecuacin
siguiente:
CH3 COOH + 2H2O 2CO2 + 4(2H+)
En el ciclo ocurren dos reacciones en las que
se desprende CO2 y hay cuatro deshidrogenaciones,
de las cuales tres donan sus hidrgenos al NAD+ y
una al FAD.
a) La oxidacin de la Acetil CoA derivada de la
glucosa, los cidos grasos y los aminocidos es
la funcin primaria del ciclo de Krebs, el cual la
procesa en una serie de reacciones que se
inician y terminan con el oxaloacetato; en cada
vuelta del ciclo de Krebs se produce un GTP por
fosforilacin a nivel del sustrato y se liberan
cuatro pares de hidrgeno que alimentan la
cadena respiratoria con la produccin de 9 ATP
en la fosforilacin oxidativa.
Adems de su papel central en la oxidacin de la
acetil CoA, el ciclo de Krebs participa en los
siguientes procesos metablicos:
b) Gluconeognesis. Rene numerosos sustratos que
se convierten en oxaloacetato. Este compuesto
sale de la mitocondria en forma de malato, citrato
o aspartato y se transforma en el citosol, primero
en fosfoenol piruvato y despus en glucosa.
c) Biosntesis de las cidos grasos. Aporta la molcula
de citrato que, al salir de la mitocondria, es
transformada con gasto de un ATP por la citrato
liasa en oxaloacetato y acetil CoA, que es el
alimentador inicial de la biosntesis de los cidos
grasos. El oxaloacetato se reduce a malato, el
cual es oxidado por la enzima mlica para la
produccin de NADPH, coenzima indispensable
en la biosntesis de los cidos grasos.
d) Interconversin de Aminocidos. Numerosos
aminocidos entregan sus carbonos al ciclo de
Krebs al transformarse, por reacciones
sucesivas, en alguno de los metabolitos clave del
ciclo: -cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato y
oxaloacetato; una vez ah, mediante las
reacciones del ciclo de Krebs, pueden
transformarse en algn otro aminocido que se
derive de otro intermediario del ciclo.
e) Biosntesis de Purinas y Pirimidinas. El ciclo de
Krebs alimenta la sntesis de bases pricas y
pirimdicas aportando, de manera indirecta,
aspartato y glutamina.
f) Biosntesis de Porfirinas. El ciclo de Krebs aporta
uno de los sustratos iniciales necesarios para
que se lleve a cabo esta va: la succinil-CoA.
53
 deshidrogenasa y -cetoglutarato deshidrogenasa
Regulacin del ciclo de Krebs son las enzimas reguladoras del ciclo.
C.5 Cadena de transporte de electrones (cadena
Por el hecho de que entrega NADH y FADH2 a la respiratoria).
cadena respiratoria y recibe de ella las mismas C.5.1 Describir la naturaleza de los
coenzimas oxidadas, el ciclo de Krebs funciona bajo componentes de la cadena de
el control de la cadena respiratoria y depende en transporte de electrones y sealar
ltima instancia de la fosforilacin oxidativa. Sin su secuencia con base en los
embargo, el ciclo de Krebs responde a moduladores potenciales de oxidorreduccin.
Calcular la energa generada en
cada paso del transporte de
electrones.
C.5.2 Identificar los alimentadores de la
va, as como su sitio de entrada a
sta y el ltimo aceptor de los
electrones.
C.5.3 Sealar el sitio de accin de los
siguientes inhibidores de la cadena
respiratoria: amital, rotenona,
antimicina, cianuro, NaN3, CO y H2S.
C.5.4 Describir los sistemas de transporte
de los equivalentes reductores a la
mitocondria (lanzaderas).
C.5.5 Citar algunos ejemplos de
alteraciones en los componentes
mitocondriales, como las isoenzimas
e isoformas de la citocromo c
oxidasa, entre otras.

Lecturas recomendadas
1. Schon EA. Mitochondrial genetics and disease.
TIBS. 2000; 25(11): 555-5560.
2. Raha S, Robinson BH. Mitochondria, oxygen free
radicals, disease and aging. TIBS. 2000; 25(10):
502-508.
3. Cardellach F, Casademont J. Enfermedades
mitocondriales: un diagnstico todava difcil.
Medicina Clnica. 2000; 114 (4): 139-140.
4. Rubio JC, Matn MA, del Hoyo P, Bustos F,
Campos Y, Arenas J. Dficits de los complejos
alostricos generados en el propio ciclo y tambin en enzimticos de la cadena respiratoria
otras vas del metabolismo; son moduladores mitocondrial. Rev Neurol. 1998; 26 (supl 1): S15-
negativos NADH, ATP, citrato, succinil CoA y S20.
oxaloacetato y moduladores positivos ADPy Ca2+. 5. Castro-Gago M, Novo MI, Eirs J. Tratamiento de
Las enzimas citrato sintasa, isocitrato las enfermedades mitocondriales durante la

54
 infancia y adolescencia. Rev Neurol. 1998; 26
(supl 1): S92-S98.
C.6 Fosforilacin oxidativa.
C.6.1 Describir brevemente la hiptesis
quimiosmtica propuesta para
explicar la sntesis de ATP y los
datos que existen en favor de ella.
Definir los conceptos de
vectorialidad, impermea-bilidad,
fuerza protonmotriz e ionforo,
empleados en esta hiptesis.
C.6.2 Con base en el clculo de energa
libre de Gibbs, sealar el nmero
de ATP que se genera al reoxidarse
las coenzimas NADH y FADH2 en la
cadena respiratoria. Definir el
concepto de control respiratorio
indicando el papel del ADP, del
transportador de adenin nucletidos
y del acarreador de fosfatos y su
efecto sobre la sntesis de ATP.
C.6.3 Sealar el sitio de accin de los
inhibidores de la ATP sintasa
(oligomicina y venturicidina), de los
desacoplantes sintticos y naturales
(dinitrofenol y termogenina) de los
procesos de transporte de electrones
y la fosforilacin oxidativa y el
inhibidor del translocador de adenin
nucletidos (atractilsido) y har
nfasis en su efecto sobre la sntesis
de ATP.
Realizacin de la prctica 7 "Estudio del bombeo de
protones por levaduras; efecto de los inhibidores de
la cadena de transporte de electrones y de los
desacoplantes" (ver pg.153).
Lectura recomendada
1. Hinkle PC. Cmo fabrican ATP las clulas?
Investigacin y Ciencia 1978; 20: 58-75.
Mientras que el CO2 se forma por la oxidacin del
sustrato durante el ciclo del cido ctrico en la matriz
mitocondrial, la secuencia de las reacciones que
participan en la transferencia de hidrgenos y
electrones (la cadena respiratoria) se localiza en la
membrana interna de la mitocondria. La cadena se
puede dividir en cuatro complejos: el complejo I o
NADH deshidrogenasa (que cede sus electrones a la
coenzima Q); el complejo II o las deshidrogenasas
que ceden sus electrones al FADH2 (como la
succinato deshidrogenasa) y a travs de l a la
misma coenzima Q; el complejo III o citocromo c
reductasa, y el complejo IV o citocromo c oxidasa,
que transfiere los electrones al oxgeno, que es el
aceptor final.
Los componentes de la cadena respiratoria
estn arreglados de acuerdo con potenciales de
oxidorreduccin crecientes (de valores negativos a
positivos). La energa liberada en el curso de la
transferencia de hidrgeno y electrones a travs de la
cadena respiratoria se utiliza para la formacin de
ATP por la llamada fosforilacin oxidativa. La energa
requerida para la formacin de un ATP a partir de un
ADP es equivalente a una diferencia de potencial
redox de 0.15 V. En promedio, la oxidacin de una
molcula de NADH da origen a 2.5 molculas de
ATP, mientras que se forman 1.5 molculas de ATP
cuando se oxida FADH2 va succinato (no involucra
NADH). El rendimiento de energa de la fosforilacin
oxidativa es alrededor de 40% del valor terico de la
energa liberada en la reaccin del hidrgeno con el
oxgeno.
El transporte de los electrones entre los
diferentes componentes de la cadena respiratoria
puede ser inhibido por diversos compuestos, entre
ellos: los barbituratos, la rotenona, la antimicina, el
CO, las azidas, el H2S y el cianuro, los que actan en
distintos sitios de la cadena respiratoria.
Las reacciones de la cadena respiratoria y la
fosforilacin oxidativa estn acopladas; si se
desacoplan, la energa se pierde como calor y no hay
sntesis de ATP. Pueden desacoplarse in vitro por 2,4
dinitrofenol o compuestos similares e, in vivo, por la
termogenina presente en tejido adiposo pardo, el que
es abundante en recin nacidos.
La membrana interna de la mitocondria debe
estar intacta para generar ATP. Las molculas de
ATP formadas en el interior de la mitocondria son
translocadas al exterior en intercambio con molculas
55
de ADP presentes fuera de la mitocondria por medio
de un acarreador altamente especfico presente en la
membrana mitocondrial: la translocasa de los adenin-
nucletidos.
Hay otro mecanismo de sntesis de ATP no
asociado al transporte de electrones en el que los
donadores de la energa y del fosfato final del ATP
son compuestos con enlaces fosfato de alta energa.
Este tipo de fosforilacin se conoce como
fosforilacin a nivel de sustrato.
Los sustratos metabolizados dentro de la
mitocondria son transportados al exterior por
mecanismos especficos (transporte de cidos
dicarboxlicos, de aminocidos, de iones, etctera).
Este transporte, como el del ATP, se convierte en
uno de los factores de control en la funcin
mitocondrial.
Dado que la membrana interna de la
mitocondria es impermeable para el NAD+ y el NADH
y a que una forma eficiente, energticamente
hablando, de reoxidar al NADH que se obtiene en la
gluclisis es un proceso mitocondrial, existen
lanzaderas que son sistemas de transporte de los
hidrgenos citoplasmticos (equivalentes reductores)
a travs de la membrana mitocondrial. Las dos
lanzaderas ms importantes son la del glicerol fosfato
y la del malato.
C.7 Radicales libres.
C.7.1 Definir el concepto de radicales
libres y cules son derivados del
oxgeno.
C.7.2 Describir cmo y dnde se generan
los radicales superxido, hidroxilo y
otras molculas reactivas: perxido
de hidrgeno y singulete de oxgeno.
C.7.3 Describir el efecto de estos
radicales y molculas reactivas sobre
otras molculas, clulas y permiten la deslocalizacin del electrn desapareado.
organismos y su contribucin en las
siguientes condiciones: fagocitosis,
inflamacin, lipoperoxidacin y de una molcula ().
perfusin postisquemia.
C.7.4 Describir las condiciones en las que
se genera el radical NO y su relevancia
fisiolgica.
C.7.5 Describir los mecanismos protectores
del organismo contra las especies
reactivas de O2: superxido dismutasa,
catalasa, glutatin peroxidasa,
vitaminas E y C y -carotenos.
Realizacin de la prctica 8 "El efecto del etanol
sobre la lipoperoxidacin" (ver pg.156).
Lecturas recomendadas
1. Pia GE, Huberman A, Chvez R, Lascurain
R, Zenteno E, Frenk S. Los radicales libres.
Beneficios y problemas. Gac Md Mx 1996;
132 (2): 183-203.
2. Fernndez AA, Abudara V, Morales FR. El
xido ntrico como neurotransmisor y
neuromodulador. Actas de Fisiologa. 1999;
5: 39-77.
3. Raha S, Robinson BH. Mitochondria, oxygen
free radicals, disease and aging. TIBS. 2000;
25 (10): 502-508.
Un gran nmero de enfermedades, como el
Parkinson, aterosclerosis, enfisema pulmonar y
cncer, entre otras, tienen su origen en una
produccin excesiva o anormal de derivados del
oxgeno, qumicamente muy activos: los radicales
libres.
Un radical libre es cualquier especie qumica,
molcula o tomo, portadora de uno o ms
electrones desapareados. Se llama electrn
desapareado al electrn que se encuentra solo en un
orbital. La presencia de un electrn desapareado
hace que los radicales libres sean muy reactivos,
pues buscan con avidez completar su par electrnico.
No obstante, existen radicales libres relativamente
estables, como las molculas con estructuras
resonantes (con mltiples enlaces dobles), que
La colocacin de un punto, generalmente al final de
la frmula qumica, indica el carcter de radical libre
Los radicales libres son capaces de alterar
reversible o irreversiblemente compuestos
bioqumicos de todo tipo y pueden modificar en forma
importante su estructura y, como consecuencia,
56
alterar la capacidad funcional de las sustancias
atacadas. El principal blanco de los radicales libres
son las insaturaciones de los lpidos de membrana en
los cuales provocan una peroxidacin. La presencia
de lpidos peroxidados en las membranas biolgicas
disminuye su fluidez, lo que se traduce en
alteraciones de la permeabilidad a sustancias o,
incluso, su integridad, lo que provoca la lisis celular.
Los radicales libres tambin son capaces de inactivar
o destruir enzimas y otras protenas y atacar a los
cidos nucleicos. El dao al DNA puede causar
mutaciones y dar origen a cnceres. La accin sobre
los carbohidratos puede alterar su funcin como
receptores (de hormonas o neurotransmisores). Es
decir, los radicales libres influyen sobre actividades
celulares tanto a nivel de la membrana como en las
vas metablicas y en la expresin gentica.
Una de las caractersticas ms importantes
de las reacciones de los radicales libres es que se
forman por reacciones en cadena; esto significa que
un radical libre puede dar lugar a la formacin de
otro, de manera que este mecanismo permite que la
actividad se propague y que el dao se generalice.
Los radicales derivados del oxgeno
Las especies reactivas del oxgeno son el anin
superxido, el perxido de hidrgeno, el hidroxilo y el
singulete de oxgeno.
Anin superxido. La transformacin del
oxgeno en radical libre puede efectuarse cuando el
oxgeno acepta un electrn que transforma este
elemento en un radical con carga negativa, el anin
superxido: O2 .
Probablemente la fuente ms importante de
produccin de radicales superxido sea el estallido
respiratorio (aumento sbito del consumo de
oxgeno) de los macrfagos y de los leucocitos
polimorfonucleares en respuesta a una seal
inmunitaria provocada por alguna infeccin.
Perxido de hidrgeno. El anin superxido
sufre espontneamente, o bajo la accin de la
enzima superxido dismutasa (SOD), una reaccin
de dismutacin: dos radicales libres reaccionan entre
s, uno de ellos perdiendo electrones y el otro
ganndolos. Esta dismutacin produce agua
oxigenada, que no es realmente un radical libre, pero
este compuesto por captacin de un electrn y de un
protn, puede dar lugar a la formacin de especies
oxigenadas muy activas, especialmente al radical
hidroxilo.
Radical hidroxilo. El OH es un oxidante
extremadamente reactivo que interacta con casi
todas las molculas a velocidades slo limitadas por
su difusin. El radical hidroxilo es formado por la
ruptura de una molcula de agua bajo el efecto de
una radiacin gamma o en el ciclo de Haber-Weiss:
+
1. 2 O2 + 2 H O2 + H2O2
2+
2. H2O2 + Fe Fe3+ + OH + OH
3. Fe3+ + O2 2+
Fe + O2
el ciclo global se expresa:
2+
Fe /Fe
3+
O2 + H2O2 O2 + OH + OH
1. La dismutacin del radical anin superxido
produce perxido de hidrgeno.
2. El perxido de hidrgeno se descompone en el
radical hidroxilo con intervencin del Fe2+ (reaccin
de Fenton).
3. La regeneracin del Fe2+ por medio del radical
anin superxido.
Singulete de oxgeno. El singulete de
oxgeno, representado grficamente como 1O2*, se
caracteriza por tener un par electrnico antiparalelo
en su ltima rbita; no es realmente un radical, sin
embargo, es incluido aqu por ser un derivado muy
oxidante del oxgeno. Se forma principalmente en
reacciones en las que los pigmentos biolgicos,
como el retinal, las flavinas o las porfirinas, son
expuestos a la luz en presencia de oxgeno.
Antioxidantes
Para controlar los efectos devastadores de los
radicales libres existen mecanismos protectores.
Estos sistemas tienen la funcin de neutralizar el
efecto de los radicales libres o evitar su aparicin. El
nivel primario de defensa lo constituyen tres enzimas
especializadas.
1. Superxido dismutasa. Existe en las mitocondrias
(SOD de Mn2+) y en el citosol (SOD de Cu2+ y de
Zn2+). Cataliza la dismutacin del radical anin
57
 superxido para dar oxgeno molecular y perxido
de hidrgeno:
+
2 O2 + 2 H O2 + H2O2
2. Glutatin peroxidasa. Existe principalmente en el
citosol y contiene selenio. Cataliza la siguiente
reaccin:
2GSH + H2O2 GSSG + 2H2O
(donde: GSH-glutatin reducido y GSSG-glutatin
oxidado).
3. Catalasa. Existe principalmente en los
peroxisomas y su funcin es destruir el agua
oxigenada por dismutacin:
H2O2 + H2O2 2H2O + O2
Otro tipo de proteccin contra los radicales
libres es la que prestan unas sustancias capaces de
neutralizar a los radicales o limitar su reactividad,
llamadas atrapadoras. Entre ellas cabe mencionar:
Vitamina E (tocoferol) y beta caroteno.
Reaccionan con los radicales perxido y suspenden
la cadena de reacciones radicalares. Son liposolubles
y por eso pueden proteger las membranas.
Vitamina C. Reacciona directamente con los
superxidos, con el singulete de oxgeno y con el
radical hidroxilo; regenera la vitamina E al reaccionar
con el radical tocoferilo y lo convierte en radical
ascorbilo, tambin muy estable.
Algunos minerales como el selenio, el cinc, el
cobre y el manganeso, constituyentes de las enzimas
antes mencionadas; protenas y pptidos como el
glutatin, la albmina, la ceruloplasmina, la ferritina,
la transferrina, etctera y, por ltimo, sustancias
quelantes que evitan que el hierro, cobre y otros
metales de transicin catalicen reacciones de
oxidacin.
D. Otras vas metablicas de los
carbohidratos
Al finalizar esta subunidad, el alumno podr analizar
en forma integral el metabolismo de los
carbohidratos, identificar su papel como combustible
celular y como generador de intermediarios de otras
vas metablicas y podr explicar en forma integral la
regulacin de la glucemia.
D.1 Gluconeognesis.
D.1.1 Sealar en qu consiste la
gluconeognesis, los sustratos
gluconeognicos, los
compartimentos celulares de la va y
los tejidos con mayor actividad
gluconeognica.
D.1.2 Comparar y analizar las
reacciones de esta va con las de la
gluclisis desde el punto de vista
energtico y describir los
mecanismos empleados para evitar
las barreras energticas.
D.1.3 Indicar el destino metablico del
producto de la gluconeognesis
heptica.
D.1.4 Describir el ciclo de Cori y el ciclo
de la alanina y el significado
fisiolgico de ambos.
D.1.5 Elaborar el balance energtico y
explicar la regulacin de la
gluconeognesis y har nfasis en
el papel de la
fructosa 2,6 bisfosfato.
Es el proceso por el cual se sintetiza la glucosa a
partir de diversos sustratos como son:
a) Lactato o piruvato.
b) Aminocidos glucognicos (Ala, Arg, Cys, Asp,
Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser, Tre, Val).
c) Cualquier otro intermediario que pueda ser
metabolizado va piruvato (o que entre al ciclo de
Krebs).
La gluconeognesis no puede verse como la
va en sentido contrario de la gluclisis ya que
algunas de las reacciones de esta ltima son muy
exergnicas, lo que las hace irreversibles. Tal es el
caso de las reacciones catalizadas por la
piruvatocinasa (transforma al fosfoenolpiruvato en
piruvato), la fosfofructocinasa (paso de fructosa 6
58
fosfato a fructosa 1,6 bisfosfato) y la hexocinasa
(glucosa a glucosa 6 fosfato). Estas reacciones se
evitan por medio de las siguientes alternativas:
1. La formacin del fosfoenolpiruvato a partir de
oxaloacetato. El oxaloacetato se forma en la
mitocondria por carboxilacin del piruvato con una
enzima dependiente de biotina y ATP llamada
carboxilasa del piruvato. Tambin se puede
obtener el oxaloacetato en el citoplasma por
carboxilacin del piruvato y reduccin con NADPH
para formar el malato, el cual se deshidrogena para
producir el oxaloacetato.
Estas reacciones son llevadas a cabo por la enzima
mlica. La fosforilacin del oxaloacetato con GTP o
ITP y su descarboxilacin simultnea por la
fosfoenolpiruvato carboxicinasa producen el
fosfoenolpiruvato.
2. La degradacin hidroltica de la fructosa 1,6
bisfosfato a fructosa 6 fosfato catalizada por la
fructosa 1,6 bisfosfatasa.
3. La degradacin de la glucosa 6 fosfato a glucosa
por la glucosa 6 fosfatasa.
La sntesis de una molcula de glucosa a
partir de dos molculas del piruvato requiere seis
molculas de ATP.
La posibilidad de que la gluconeognesis
proceda completamente (es decir, que su producto
final sea glucosa) depende de la presencia de todas
las enzimas clave en un tejido determinado. Se lleva
a cabo con facilidad en el hgado y en los riones; no
ocurre en el cerebro ni en el msculo esqueltico ya
que la glucosa 6 fosfatasa se encuentra ausente en
estos tejidos. Es por esto que el producto de la
degradacin del glucgeno muscular (glucosa 6
fosfato) no puede servir como una fuente para
mantener el nivel de la glucosa sangunea. En el
msculo, el glucgeno se degrada hasta lactato que
sale a la circulacin sangunea y se transfiere al
hgado donde se transforma en glucgeno heptico o
en glucosa libre por la va de la gluconeognesis.
Esta contribucin indirecta del lactato del msculo a
la glucosa sangunea se conoce como el ciclo de
Cori. El msculo tambin contribuye a mantener la
glucemia, al transformar el piruvato en alanina, la que
sale a la circulacin y en el hgado se convierte otra
vez en piruvato para entrar a la gluconeognesis.
D.2 Glucogenlisis y glucognesis.
D.2.1 Conocer la distribucin tisular del
glucgeno.
D.2.2 Describir las reacciones de la
glucogenlisis y de la glucognesis e
indicar los sustratos y los
productos, as como la localizacin
subcelular de las vas.
D.2.3 Discutir el balance energtico y la
regulacin de ambas vas por
alosterismo (glucosa, glucosa 6
fosfato, AMP y Ca2+). Revisar el
papel de las las hormonas epinefrina,
glucagn e insulina en la regulacin
de estas vas.
D.2.4 Indicar las diferencias del
metabolismo del glucgeno en el
msculo y en el hgado.
D.2.5 Mencionar los defectos enzimticos
de las siguientes glucogenosis: von
Gierke, McArdle y Andersen.
El glucgeno es un polisacrido de reserva localizado
en forma de grnulos en el citoplasma de las clulas;
es osmticamente inactivo y facilita la rpida y
reversible transformacin de la glucosa en una
molcula de reserva, segn la situacin energtica
de la clula. La degradacin del glucgeno se
conoce como glucogenlisis y su sntesis como
glucognesis (glucogenognesis).
La glucogenlisis se inicia por una ruptura
fosforoltica del glucgeno por la fosforilasa. En
presencia de fosfato, se separa una glucosa del
glucgeno como glucosa 1 fosfato y sta, por accin
de una fosfoglucomutasa, se transforma en glucosa 6
fosfato, la que puede entrar entonces a la va
glucoltica. La energa invertida para la inclusin de
una molcula de glucosa en el glucgeno y su
regreso a glucosa 6 fosfato es de dos molculas de
ATP.
La sntesis de glucgeno se inicia con la
fosforilacin de la glucosa para formar glucosa 6
fosfato que se transforma posteriormente en glucosa
1 fosfato por accin de la fosfoglucomutasa. Esta
59
molcula reacciona con UTP por accin de la UDP-
glucosa pirofosforilasa y origina UDP-glucosa, que es
el sustrato de la glucgeno sintetasa. Las numerosas
ramificaciones presentes en el glucgeno son
introducidas por la accin de una enzima ramificante.
La degradacin y la sntesis de glucgeno
estn finamente reguladas por el AMP cclico a
travs de la actividad de la protena cinasa. En una
secuencia de reacciones, este compuesto se
involucra en la conversin de la fosforilasa b
(inactiva, no fosforilada) en fosforilasa a (activa,
fosforilada).Inversamente, la glucgeno sintetasa que
est en su forma activa (no fosforilada o forma I)
cambia a su estado inactivo (fosforilado o forma D).
La concentracin intracelular de AMP cclico (AMPc)
es regulada por las hormonas epinefrina y glucagon,
las que aumentan la concentracin de AMPc, y por la
insulina, que la disminuye.
D.3 Va del fosfogluconato (ciclo de las
pentosas).
D.3.1 Indicar la distribucin tisular de
esta va.
D.3.2 Sealar las reacciones de la fase
oxidativa y de la no oxidativa e
indicar sus productos y su destino
metablico.
D.3.3 Mencionar las relaciones de la va
del fosfogluconato con otras vas
metablicas como la gluclisis, la
sntesis de nucletidos, la sntesis de
cidos grasos, la sntesis de
colesterol y los sistemas oxidantes
de las clulas fagocticas.
D.3.4 Discutir la regulacin de la actividad
de la va y har nfasis en su
importancia para las sntesis
reductoras.
D.3.5 Mencionar la consecuencia de la
deficiencia de la glucosa 6 fosfato
deshidrogenasa en eritrocitos.
El ciclo de las pentosas es una va colateral a la
gluclisis. Presenta dos fases: una oxidativa y una no
oxidativa. En la fase oxidativa, una molcula de
glucosa es gradualmente degradada y se forma el
NADPH; en la fase no oxidativa, la ribosa 5-fosfato y
la eritrosa 4 fosfato son formadas por una
interconversin de steres fosfricos de azcares de
3C, 4C, 5C, 6C y 7C.
En el sentido biosinttico, las reacciones del
ciclo de las pentosas sirven para la fijacin de bixido
de carbono durante la fotosntesis.
Algunos de los intermediarios de esta va
estn relacionados con la gluclisis como la glucosa
6 fosfato, la fructosa 6 fosfato y el gliceraldehdo 3
fosfato. Las enzimas del ciclo de las pentosas, al
igual que las de la gluclisis, son solubles en el
citoplasma.
El ciclo de las pentosas no es una va
principal para el metabolismo de la glucosa y sus
relaciones con la gluclisis pueden variar de acuerdo
con el tipo de tejido y sus funciones biolgicas.
Las reacciones de este ciclo no pueden ser
utilizadas en la obtencin de energa, ya que la
oxidacin del NADPH no forma ATP directamente.
El ciclo de las pentosas es importante en
todas las clulas ya que es la principal forma de
obtener el NADPH necesario en los procesos de
sntesis (reductoras); asimismo, es la fuente de la
ribosa 5-fosfato, la cual es precursora de la
biosntesis de nucletidos y cidos nucleicos.
D.4 Regulacin de la glucemia.
D.4.1 Explicar el significado de los trminos:
glucemia, hipo e hiperglucemia.
D.4.2 Discutir la importancia biolgica de
mantener una glucemia normal.
D.4.3 Discutir el papel de las siguientes
hormonas: epinefrina, glucagon,
cortisol e insulina en la regulacin de la
glucemia normal indicando las vas
metablicas, los tejidos involucrados y
las fuentes endgenas y exgenas de
los carbohidratos.
D.4.4 Reconocer la glucosilacin no
enzimtica de las protenas
(hemoglobina glucosilada y
fructosaminas) como consecuencia de
una hiperglucemia prolongada.
60
Realizacin de la prctica 9 "Estudio general del
metabolismo de los carbohidratos" (ver pg.157).
Discusin del caso clnico no. 3 Hipoglucemia
secundaria a intoxicacin alcohlica (ver pg. 198).
Lecturas recomendadas
1. Beisswenger PJ, Szwergold BS, Yeo KT.
Glycated proteins in diabetes. Clin Lab Med.
2001; 21 (1): 53-78.
2. Cohen MP. Intervention strategies to prevent
pathogenetic effects of glycated albumin.
Arch Biochem Biophys. 2003; 419 (1): 25-30.
3. Desmond A. Glicosilacin no enzimtica de
protenas: su rol en las complicaciones
crnicas de la diabetes y el envejecimiento.
Acta Bioqum Cln Latinoamer. 1995; 29 (2):
173-190.
La concentracin sangunea de la glucosa o glucemia
debe mantenerse dentro de lmites muy estrechos
debido a que algunas clulas como las nerviosas y
los eritrocitos utilizan a la glucosa como nica fuente
de energa, lo que las hace especialmente sensibles
a la disminucin de la glucemia. Por otro lado, el
aumento de las concentraciones de glucosa en
sangre se asocia a problemas de hiperosmolaridad y
a la aparicin de protenas glucosiladas que se
asocian a algunas patologas, como la diabetes y sus
consecuencias.
La concentracin normal de glucosa en
sangre en ayunas es de 80-100 mg/dl, y sus lmites
extremos son 65 y 120 mg/dl. Los niveles superiores
a los valores normales se conocen como
hiperglucemia, mientras que los inferiores se
designan como hipoglucemia.
La glucosa sangunea puede provenir de dos
fuentes: una exgena (la dieta) y una endgena
(glucogenlisis y gluconeognesis heptica). En el
primer caso, despus de una comida que contenga
carbohidratos, la glucemia se incrementa para volver
en unas dos horas a los niveles basales. Si por el
contrario, el individuo est en ayunas la glucosa
desciende pero nunca por debajo de 60 mg/dl. Esto
hace un contraste notable con las grandes
variaciones en la concentracin de los cidos grasos
que pueden aumentar hasta 10 veces y en el caso de
los cuerpos cetnicos hasta 100 veces.
La principal regulacin de la glucemia se
realiza por hormonas. Las principales son: glucagon,
insulina, epinefrina, gluco-corticoides y las hormonas
tiroideas.
Cuando la concentracin de glucosa
disminuye, como en el ayuno, el pncreas secreta
glucagn El resultado neto es que en el hgado se
detienen las vas de utilizacin de la glucosa
(glucognesis y gluclisis) y se activan las vas
productoras de glucosa (glucogenlisis y
gluconeognesis). Por otra parte, la disminucin en el
consumo de glucosa por los tejidos insulino-
dependientes (msculo y tejido adiposo), causada
por la disminucin en los niveles de esta hormona,
contribuye a preservar la glucosa para que pueda ser
utilizada por el cerebro, ya que la glicemia inferior a
los 60 mg/dl, provoca que este rgano no reciba las
cantidades de glucosa suficientes para obtener la
energa necesaria para realizar adecuadamente sus
funciones, por lo que, si esta situacin se prolonga,
pueden sobrevenir el coma y la muerte. Otras
hormonas que intervienen para aumentar la glucemia
en el caso de ayunos prolongados son los
glucocorticoides, quienes provocan la hidrlisis de
protenas musculares a fin de proveer de sustratos
gluconeognicos al hgado, mientras que las
hormonas tiroideas estimulan la glucogenlisis
heptica.
Por otro lado, cuando la glucemia aumenta,
como despus de una dieta rica en carbohidratos, los
islotes de Langerhans detectan este aumento y
secretan insulina. Esta hormona produce un
incremento en el transporte de glucosa al interior del
msculo y del tejido adiposo, por los receptores
GLUT 4 y, activa la glucgeno sintasa, tanto
muscular como heptica. De esta manera, la
glucemia disminuye y los depsitos de glucgeno
heptico y muscular aumentan.
El aumento de los valores de glucosa en
sangre presenta algunos efectos fisiolgicos que
pueden explicarse por las propiedades osmticas y
qumicas de la glucosa. Entre dichos efectos se
encuentran la deshidratacin de los tejidos y el
envejecimiento de protenas. En el primer caso, la
61
salida del agua al torrente circulatorio causa que los E.1.3 Clasificar a los lpidos con base en
tejidos pierdan, adems del agua, algunos iones su composicin, en su grado de
importantes, como el potasio. En el segundo caso, complejidad y en su grado de
las concentraciones altas de glucosa sangunea polaridad.
(superiores a 120 mg/dl) aceleran el envejecimiento E.1.4 Identificar a los lpidos como los
protenico por glucosilacin no enzimtica o glicacin. componentes principales de las
La glucosa reacciona con los grupos amino membranas celulares y relacionar el
expuestos de las protenas y cambia las propiedades contenido y las caractersticas
catalticas y estructurales de las mismas. La qumicas de los lpidos con la
hemoglobina, la colgena, las protenas del cristalino impermeabilidad y fluidez de la
y muchas ms sufren glicacin en proporcin a la membrana.
concentracin de glucosa en la circulacin. Este E.1.5 Mencionar las diferencias en cuanto
efecto permite comprender el origen de algunas de a la asimetra y la composicin de las
las complicaciones que aparecen en el caso de los membranas celulares (citoplasmtica
diabticos, como la aparicin de cataratas por la y mitocondrial).
glicacin irreversible de las protenas del cristalino, o
los elevados niveles de hemoglobina glicada E.2 Digestin, absorcin y transporte.
(hemoglobina A1c), que en los diabticos llegan a ser
de dos a tres veces mayores que en los individuos E.2.1 Sealar la fuente diettica de los
normales. El nivel de hemoglobina A1c revela la lpidos.
concentracin de glucosa en sangre durante un E.2.2 Conocer el mecanismo por el cual
perodo de varias semanas, por lo que su el organismo realiza la digestin y
determinacin puede ser muy til para comprobar si absorcin de los lpidos.
los pacientes diabticos han sido tratados E.2.3 Conocer el transporte de los lpidos
adecuadamente. de la dieta en el organismo
(quilomicrones).

E. Lpidos
Los lpidos son sustancias biolgicas solubles en
Al finalizar esta subunidad, el alumno explicar las solventes orgnicos, pero escasamente solubles en
caractersticas principales de los lpidos, sus el agua. Pertenecen a este grupo molculas tan
estructuras, el papel que desempean en los seres diversas como las grasas, los aceites, algunas
vivos, as como su digestin y absorcin. vitaminas y hormonas, as como todos los
componentes no proteicos de las membranas.
E.1 Estructura. Los lpidos pueden clasificarse en dos
E.1.1 Definir qu son los lpidos, cul es grandes grupos: los saponificables y los no
su importancia biolgica. saponificables. Los primeros tienen la caracterstica
E.1.2 Conocer las propiedades de que, en soluciones alcalinas, se hidrolizan
fisicoqumicas de los lpidos: produciendo steres de cidos grasos, mientras que
solubilidad, naturaleza qumica, los segundos no son objeto de hidrlisis alcalina. A
apolaridad. los lpidos saponificables pertenecen los
E.1.2 Reconocer las frmulas de los acilgliceroles, los fosfoacilgliceroles, los esfin-
lpidos que emplea la clula: cidos golpidos y las ceras, mientras que en el grupo de los
grasos, triacigliceroles, lpidos insaponificables encontramos los terpenos,
fosfoglicridos y glicolpidos, los esteroides y las prostaglandinas, as como los
terpenos y esteroides. compuestos relacionados con stos. Asimismo,

62
existen lpidos con un grupo extremo polar y otro
grupo opuesto no polar. Este grupo se conoce como
lpidos anfipticos y son los responsables de
estabilizar las emulsiones o forman parte de la bicapa
lipdica de las membranas.
Los cidos grasos biolgicamente
importantes son cidos monocarboxlicos con
cadenas alifticas de diverso tamao, con un nmero
par de tomos de carbono, que pueden ser saturados
o insaturados. En el caso de los insaturados, los de
origen natural son ismeros geomtricos cis; pueden
ser monoinsaturados o poliinsaturados y son lquidos
a temperatura ambiente. Los cidos grasos
poliinsaturados no son sintetizados en el organismo
por lo que se consideran esenciales. En soluciones
fisiolgicas se encuentran en forma ionizada
formando sales o "jabones". Los cidos grasos de
cadena larga son insolubles en agua, pero los
jabones forman micelas. Los cidos grasos forman
steres con alcoholes y tiosteres con la coenzima A.
Las prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos son
derivados de cidos grasos poliinsaturados de 20
carbonos, especialmente del cido araquidnico.
Los acilgliceroles son compuestos en los que
uno o ms de los grupos hidroxilo del glicerol estn
esterificados. Pueden dividirse en monoacilgliceroles,
diacilgliceroles y triacilgliceroles. En
triacilgliceroles los tres grupos hidroxilo estn
esterificados con cidos grasos, que pueden o no ser
iguales. Las propiedades de los triacilgliceroles estn
determinadas por la naturaleza de sus cidos grasos
componentes y se dividen en aceites (lquidos) o
grasas (slidos) de acuerdo con la longitud de sus
cadenas o con su grado de saturacin. Los
triacilgliceroles son hidrofbicos y no forman micelas.
Los fosfoacilgliceroles o fosfoglicridos son
derivados del cido fosfatdico, es decir, del L-
glicerolfosfato esterificado con dos cidos grasos. El
cido fosfatdico se esterifica, a su vez, a travs de
su grupo fosfato, con un alcohol y forma las diversas
familias de fosfoglicridos, las cuales poseen un
carcter anfiptico.
Los plasmalgenos son glicerofosfolpidos en
los que la posicin 1 del glicerol fosfato est
combinado con un alcohol de cadena larga mediante
una unin tipo ter.
Los esfingolpidos son lpidos complejos
derivados de un alcohol insaturado llamado
esfingosina, el que se une con un cido graso de
cadena larga por medio de un enlace amida para
formar una ceramida. Las esfingomielinas contienen
una ceramida esterificada con fosforilcolina o
fosforiletanolamina. Cuando la ceramida se combina
con un azcar forma los glucoesfingolpidos, que
pueden subdividirse en cerebrsidos (si slo
contienen una unidad de azcar), sulftidos
(contienen un sulfato esterificado en la unidad de
azcar) y ganglisidos (contienen oligosacridos con
uno o ms cidos N-acetilneuramnicos).
Los esteroides son derivados del
ciclopentanoperhidrofenantreno. El ncleo esteroide
es una estructura rgida, casi plana, no polar. Los
esteroides ms importantes son el colesterol y sus
derivados (los cidos biliares, las hormonas
esteroidales estrgenos, progestgenos,
glucocorticoides, mineralcorticoides y andrgenos y
la vitamina D que, aunque no es propiamente un
esteroide, deriva del colesterol).
Los terpenos son polmeros de dos o ms
unidades de isopreno, que pueden ser lineales o
cclicos, con dobles enlaces trans en su mayora. Las
vitaminas A y K, as como el escualeno, pertenecen a
los este grupo.
En la dieta, la grasa constituye cerca de 60 g,
de los cuales 90% son triacilgliceroles. Es de todos
conocida la dificultad para digerir la grasa, que en
mucho est determinada por su casi nula solubilidad
en agua. Esto ocasiona que se aglomere la grasa y
que forme vacuolas, lo que impide que sea atacada
fcilmente por las enzimas digestivas. Para facilitar
su hidrlisis, durante el proceso digestivo que se
inicia en la boca la lipasa lingual hidroliza algunos
triacilglicridos y produce cidos grasos libres y
monoacilglicridos que, junto con otros cidos grasos
libres, posibilitan que las vacuolas de grasa se hagan
ms pequeas y formen gotitas. Tanto los
monoacilglicridos como los fosfolpidos funcionan
como factores tensoactivos. La accin de esta lipasa
lingual es muy breve ya que, al llegar al estmago, es
inhibida por el pH cido y es hasta llegar al duodeno
donde se contina el proceso de digestin. Puede
considerarse que la dificultad de la digestin de los
63
lpidos se supera si se aumenta el rea entre la fase
acuosa y la lipdica y se logra un aumento en la
solubilizacin de los productos de hidrlisis con
detergentes (sales biliares). El aumento del rea y la
solubilizacin suceden cuando en el duodeno, por
efecto de la colecistocinina, que es una hormona
secretada por la llegada de los lpidos al duodeno, se
estimula la contraccin de la vescula biliar con la
consecutiva salida de sales biliares y otros lpidos,
que forman agregados que reciben el nombre de
micelas mixtas; stas son diferentes a las gotitas
emulsionadas. La accin de las sales biliares es
romper la tensin superficial de la gotita de grasa
favoreciendo la interaccin con el agua y su
fragmentacin; as se origina la micela. Este proceso
tambin recibe el nombre de emulsificacin. Al
mismo tiempo, la lipasa pancretica, que es
secretada como proenzima, hidroliza, al igual que la
lingual, la unin alfa ster de los triacilglicridos y
deja libres dos cidos grasos y un monoacilglicrido
que tambin sern emulsificados por las sales
biliares.
Adems de la lipasa, el jugo pancretico
contiene otras esterasas que actan sobre los
steres de colesterol, monoacilglicridos y los
steres de vitamina A. Los fosfolpidos son
hidrolizados por fosfolipasas especficas, pero la ms
abundante en el jugo pancretico es la fosfolipasa A2
que hidroliza la unin ster beta del cido graso. La
presencia de sales biliares es necesaria para la
absorcin de otros lpidos, como el colesterol y las
vitaminas A y K.
Se ha calculado que una persona sana
absorbe cerca de 70 a 90% de los lpidos, tanto
exgenos como endgenos; otro de los productos
derivados de la hidrlisis de los acilglicridos, el
glicerol, se absorbe por difusin facilitada. Las sales
biliares son absorbidas en forma muy eficaz por el
intestino y son llevadas por la vena porta
nuevamente al hgado, de ah a la bilis y una vez ms
al intestino; a esta circulacin de las sales biliares se
le llama circulacin enteroheptica.
En la clula intestinal los lpidos son
resintetizados formando triacilglicridos por efecto de
una enzima que activa a los cidos grasos y los une
a los monoacilglicridos; tambin se forman
fosfolpidos y steres de colesterol. La absorcin de
los lpidos y la actividad del retculo endoplsmico
liso de la clula intestinal dan como resultado la
formacin de vesculas que se enriquecen con
protenas (apoprotenas), lo que genera los
quilomicrones, partculas ricas en triacilglicridos.
F. Metabolismo de los lpidos
Al finalizar esta subunidad, el alumno podr definir en
forma integral el metabolismo de los lpidos en
relacin con su funcin como combustibles. Analizar
la regulacin del metabolismo de los lpidos en
algunos estados fisiolgicos.
F.1 Oxidacin de los cidos grasos (-oxidacin).
F.1.1 Describir la reaccin de activacin
de los cidos grasos en el citoplasma
y el mecanismo de transporte al
interior de la mitocondria.
F.1.2 Describir las reacciones de la -
oxidacin e identificar sus sustratos
y productos.
F.1.3 Conocer las reacciones adicionales
necesarias para la oxidacin de los
cidos grasos insaturados y de
cadena impar.
F.1.4 Calcular el nmero de molculas de
ATP generadas en la oxidacin
completa del cido palmtico y
sealar los tejidos que dependen
energticamente de esta va.
Los cidos grasos almacenados en los tejidos son
utilizados por la clula para la produccin de energa
en magnitudes que varan de tejido a tejido, as como
del nivel metablico del organismo. Son los
msculos, principalmente el cardiaco y el esqueltico,
los que ms dependen de los cidos grasos como
fuente de energa.
La mayora de los cidos grasos que se
oxidan en los tejidos provienen de los triacilglicridos
del tejido adiposo, desde donde son liberados por la
accin de la enzima lipasa sensible a hormonas y
transportados en la circulacin como complejos
64
albmina-cidos grasos. Al llegar al hgado y a las
clulas de otros tejidos, el cido graso es activado en
el citosol mediante la accin de la acil coenzima A
sintetasa (tiocinasa) con gasto de ATP, en esta
reaccin se produce un acil coenzima A (acil CoA) y
AMP. El proceso de oxidacin del cido graso se
realiza dentro de la mitocondria; sin embargo, su
membrana es impermeable a los cidos grasos y
derivados del acil CoA, por lo que se requiere de un
transportador: la molcula de carnitina es la
encargada de llevar al cido graso al interior de la
mitocondria. Una vez dentro de la mitocondria, el acil
CoA sufre una serie de cambios que permiten
obtener un fragmento de dos carbonos, la acetil CoA.
Los cambios preparan al acilo para quedar
nuevamente activado y stos son realizados por: a)
Una deshidrogenasa que requiere de FAD y
transforma al grupo acilo en uno enoilo (molcula con
un doble enlace entre el carbono alfa y beta); b) Una
hidratasa que elimina la doble ligadura y deja un
hidroxilo en el carbono beta. Esta molcula se llama
-hidroxiacil-CoA; c) Otra deshidrogenasa especfica,
cuya coenzima es el NAD+, transforma el grupo
hidroxilo de la posicin beta en un grupo ceto; d) Una
tiolasa que requiere de una coenzima A (HSCoA)
para unirla al carbono que tiene la nueva funcin
cetona y romper entre el carbono beta y alfa para
producir una molcula de acetil-CoA. Estas cuatro
enzimas siguen trabajando con el acil CoA que en
cada vuelta pierde dos carbonos como acetil CoA. Al
mismo tiempo, el FADH2 y el NADH obtenido en cada
ciclo de la oxidacin generan 4 ATP en la cadena
respiratoria y las acetil CoA entran al ciclo de Krebs
para ser totalmente oxidadas con la ganancia de 10
ATP netos por cada acetil CoA que entra al ciclo. As
tenemos que, por ejemplo, un palmitato (16C) genera
108 ATP al oxidarse hasta CO2 y H2O. Si
consideramos el gasto de la fase de activacin del
cido graso, obtenemos una ganancia neta de 106
ATP.
F.2 Sntesis y utilizacin de los cuerpos
cetnicos.
F.2.1 Describir la estructura de los
cuerpos cetnicos: acetoacetato, -
hidroxibutirato y acetona.
F.2.2 Conocer las vas de sntesis y de
utilizacin de los cuerpos cetnicos e
indicar sus sustratos y sus
productos.
F.2.3 Sealar los tejidos involucrados en
la sntesis y utilizacin de los
cuerpos cetnicos.
F.2.4 Analizar la importancia fisiolgica
de los cuerpos cetnicos en el
ayuno, la diabetes y dietas
deficientes en carbohidratos.
Cuando bajan los niveles de glucosa se estimula la
gluconeognesis a partir del oxaloacetato y se
incrementa la va de oxidacin de los cidos grasos,
lo que provoca el aumento concomitante de los
niveles de acetil CoA. En el hgado, el exceso de
acetil CoA se transforma en un grupo de molculas
conocidas genricamente como cuerpos cetnicos.
La va de sntesis de los cuerpos cetnicos
(cetognesis) se inicia con la condensacin de dos
molculas de acetil coenzima A; al producto de la
reaccin, acetoacetil CoA, se le une una tercera
molcula de acetil CoA para formar el -hidroxi--
metil glutaril CoA. Esta molcula, al romperse por
una liasa (HMGCoA liasa), produce una acetil CoA y
un cido acetoactico o acetoacetato. Este producto
se reduce con NAD+ y forma el -hidroxi-butirato; el
acetoacetato, por una descarboxilacin no
enzimtica, produce la acetona.
El acetoacetato es utilizado por otros
rganos, como el msculo cardiaco y el cerebro,
donde, por accin de una transferasa en presencia
de succinil coenzima A, se transforma en acetoacetil-
CoA, molcula que se rompe por una tilisis, en
presencia de otra CoA para formar dos acetil CoA; la
enzima responsable de esta reaccin es una tiolasa.
Las dos acetil CoA resultantes son oxidadas para la
obtencin de energa en los rganos mencionados.
Al incremento de acetoacetato en la sangre
se le llama cetonemia. Puede deberse a una
deficiencia en el metabolismo de los carbohidratos
con el consiguiente aumento en el catabolismo de las
65
grasas y la desviacin de la acetil CoA a la sntesis
de cuerpos cetnicos. Algunos ejemplos de
situaciones en las que ocurre lo anterior son: la
diabetes, el ayuno prolongado y la dieta deficiente en
carbohidratos.
F.3 Sntesis de cidos grasos.
F.3.1 Indicar las fuentes de los
alimentadores de la -reduccin:
acetil CoA y NADPH. Mencionar el
papel del citrato y de las lanzaderas
(malato-aspartato y citrato) como
transportadores del acetil-CoA
mitocondrial.
F.3.2 Describir la sntesis de novo de un
cido graso e indicar las enzimas
involucradas, sustratos, coenzimas y
productos.
F.3.3 Describir las reacciones necesarias
para el alargamiento e insaturacin
de los cidos grasos, as como la
localizacin subcelular de los
sistemas involucrados en este
proceso.
F.3.4 Sealar la fuente de los carbonos
del cido palmtico y calcular el
gasto energtico de la sntesis de
dicho cido.
F.3.5 Conocer la funcin de los cidos
grasos poliinsaturados como
precursores de prostaglandinas,
tromboxanos, leucotrienos y
lipoximas e indicar la funcin de
estos eicosanoides en el organismo
humano.
Cuando el requerimiento de energa en la clula ha
sido satisfecho y existen suficientes sustratos
oxidables, procede su almacenamiento bajo la forma
de triacilglicridos que constituyen la reserva de
energa a largo plazo ms importante de las clulas y
del organismo. El primer paso de este proceso es la
biosntesis de los cidos grasos, la cual se realiza en
el citoplasma celular a partir de la acetil CoA, el ATP
y el NADPH proveniente del ciclo de las pentosas y
de otros sistemas generadores de poder reductor.
La biosntesis de los cidos grasos se inicia
con la salida de la acetil-CoA desde la mitocondria en
forma de citrato y su transformacin en malonil CoA
mediante la fijacin del CO2 por una sintetasa
dependiente de biotina, que utiliza ATP. Tanto la
acetil CoA como la malonil-CoA se unen a un
complejo multienzimtico llamado sintetasa de los
cidos grasos. Este complejo est formado por un
conjunto de protenas enzimticas dispuestas
alrededor de la protena transportadora de acilos
(PTA). En pasos sucesivos ocurre la condensacin
de la acetil y la malonil CoA con desprendimiento de
CO2 y el resto del acetoacetilo de cuatro carbonos es
llevado por el brazo central de la PTA a los sitios
activos de las enzimas del complejo para
transformarlo, sucesivamente, en hidroxiacilo, enoilo
y acilo saturado, mediante el gasto de dos NADPH.
El ciclo se repite al incorporar dos carbonos del
malonil-CoA en cada vuelta, hasta que se completa
el cido palmtico, un cido graso saturado de 16 C.
El citrato desempea un papel muy
importante en la sntesis de los cidos grasos ya que
al salir al citoplasma se convierte en acetil CoA y
oxaloacetato. Este proceso alimenta con carbonos a
la sntesis de los cidos grasos y aporta NADPH por
la accin de la enzima mlica sobre el sistema
oxaloacetato-malato-piruvato. Por otra parte, el
citrato es un modulador positivo de la malonil CoA
sintetasa (tambin llamada acetil CoA carboxilasa),
que es la principal enzima reguladora de la sntesis
de los cidos grasos.
F.4 Sntesis y degradacin de triacilgliceroles.
F.4.1 Conocer la estructura qumica y la
distribucin tisular de los
triacilglicridos en funcin de su
carcter de combustible con
importancia fisiolgica.
F.4.2 Describir la va de degradacin de
los tri-acilglicridos (liplisis) e
identificar sus enzimas, sustratos,
productos y funcin en el organismo.
F.4.3 Sealar las fuentes de sustratos
para la sntesis de triacilglicridos:
acil CoA y glicerol fosfato.
66
 F.4.4 Describir la sntesis de los
triacilglicridos (lipognesis) e sustratos, intermediarios, enzimas y
identificar sus intermediarios y
enzimas.
F.4.5 Explicar tanto la regulacin
hormonal como la metablica de la
liplisis y de la lipognesis e indicar
el papel de la concentracin de
sustratos y productos de las vas, as
como el estado energtico celular.
Una vez formados los cidos grasos procede la
lipognesis o sntesis de los triacilglicridos: dos
cidos grasos activados como acil CoA reaccionan
con una molcula del glicerol fosfato para formar el
cido fosfatdico. Esta ltima molcula es precursora
de los triacilglicridos y de los fosfolpidos. Para
sintetizar los primeros se hidroliza el fosfato, con
produccin del diacilglicerol, el cual recibe enseguida
otra molcula de acil CoA, con la cual se completa el
triacilglicrido. La mayora de las enzimas
participantes en este proceso son aciltransferasas y
tiocinasas.
En el organismo humano la accin de la
insulina estimula todo el proceso de la lipognesis al
favorecer la entrada de la glucosa a los adipocitos, el
ciclo de las pentosas, la descarboxilacin del
piruvato, la biosntesis de los cidos grasos y la
acumulacin de los triacilglicridos.
La hidrlisis de los triacilglicridos en el tejido
adiposo, llamada tambin liplisis, es estimulada a
nivel de la triacilglicrido lipasa en una accin
mediada a travs de AMP cclico, por numerosas
hormonas entre las cuales se cuentan: la epinefrina,
el glucagn, los glucocorticoides, la tiroxina y el
ACTH; mientras que es inhibida por la insulina y por
el incremento de la concentracin de cidos grasos
libres. La hidrlisis se completa por la accin de la
diacilglicrido lipasa y la monoacilglicrido lipasa que
en conjunto liberan un glicerol y tres cidos grasos de
cada triacilglicrido.
F.5 Sntesis y degradacin de fosfolpidos.
F.5.1 Describir la sntesis de novo de los
fosfoglicridos y de los
esfingolpidos, indicando los
productos de las vas.
F.5.2 Describir la degradacin de los
fosfoglicridos y de los
esfingolpidos.
La sntesis de los fosfoglicridos es similar en los
pasos iniciales a la sntesis de los TAG: el glicerol 3-
fosfato se esterifica con dos acil CoA para formar
cido fosfatdico. Este compuesto es el precursor de
todos los fosfoglicridos. Existen dos estrategias para
la obtencin de los fosfolpidos que contienen
glicerol, segn la naturaleza de la cabeza polar.
En la formacin de fosfatidilinositoles y de
cardiolipina, el cido fosfatdico reacciona con CTP
para formar CDP-diacilglicerol, el cul reacciona con
la cabeza polar (inositol o fosfatidilglicerol) para
formar el fosfoglicrido correspondiente.
El fosfatidilinositol puede ser fosforilado para
formar la familia de los fosfatidilinositol 4,5 bisfosfato.
Estos compuestos son hidrolizados por la fosfolipasa
C en respuesta al estmulo de algunas hormonas y
producen dos segundos mensajeros muy potentes:
IP3 y el diacilglicerol, los cuales causan movilizacin
de Ca2+ del retculo endoplsmico y proveen de cido
araquidnico para la sntesis de prostaglandinas,
tromboxanos y leucotrienos.
En la sntesis de fosfadiletanolamina y de
fosfatidilcolina, el cido fosfatdico pierde su fosfato y
el diacilglicerol resultante reacciona con CDP-colina o
CDP-etanolamina.
La fosfatidiletanolamina tambin puede
obtenerse por descarboxilacin de fosfatidilserina y la
fosfatidilcolina por metilacin de fosfatidiletanolamina,
utilizando S-adenosil metionina como donador de
metilos. La fosfatidilserina se obtiene por recambio
de la cabeza polar de la fosfatidiletanolamina por una
serina.
Las fosfatidilcolinas proporcionan cidos
grasos para la sntesis de los steres de colesterol de
las HDL por la reaccin de LCAT, mientras que la
dipalmitoilfosfa-tidilcolina es el principal componente
del surfactante pulmonar.
Degradacin de fosfoglicridos
Los fosfoglicridos son hidrolizados por diversos
tipos de fosfolipasas que se clasifican segn su sitio
67
de accin: la fosfolipasa A1 libera los cidos grasos
de la posicin de 1; la fosfolipasa A2 los libera de la
posicin 2. La fosfolipasa C libera la cabeza polar
fosforilada que se encuentra en la posicin 3 del
glicerol, mientras que, la fosfolipasa D libera la
cabeza polar.
Sntesis de esfingolpidos
Los esfingolpidos contienen una molcula de
esfingosina en lugar del glicerol. Sus precursores son
serina y palmitoil CoA. Los cidos grasos activados
(acil CoA) reaccionan con el grupo amino de la
esfingosina para formar las ceramidas, quienes son
las precursoras de esfingomielinas, cerebrsidos y
ganglisidos.
Las esfingomielinas se obtienen de la reaccin de la
ceramida con CDP-colina.
Los cerebrsidos se obtienen por la unin
directa de galactosa o glucosa a la ceramida. El
donador del azcar es UDP-galactosa o UDP-
glucosa.
Los ganglisidos se forman por la adicin
secuencial y ordenada de residuos de azcar a la
ceramida. Los donadores de estos azcares son
UDP-azcares o el CMP-NeuAc (cido N-
acetilneuramnico o cido silico).
Los esfingolpidos son degradados por
enzimas lisosomales (hexosaminidasas, -
galactosidasa, la sialidasa o la esfingomielinasa)
hasta dar ceramidas y los azcares
correspondientes. Existen una serie de defectos
genticos en los que faltan estas enzimas lo que
conduce a una acumulacin de ganglisidos que
causan graves consecuencias a la salud.
F.6 Metabolismo del colesterol.
F.6.1 Mencionar la importancia fisiolgica
del colesterol.
F.6.2 Describir la va de sntesis del
colesterol e identificar sus
sustratos, intermediarios y enzimas.
F.6.3 Conocer la regulacin de la
colesterognesis a nivel enzimtico,
a nivel de la sntesis de las enzimas,
as como por modificacin covalente
inducida por hormonas (glucagon,
insulina y ACTH).
F.6.4 Describir las modificaciones que
sufre el colesterol para la sntesis de
sales biliares, hormonas esteroidales
y vitamina D.
El colesterol es una molcula muy importante por su
inters clnico y el gran nmero de compuestos que a
partir de l se sintetizan, como las hormonas
esteroidales, las sales biliares y la vitamina D.
La sntesis del colesterol (colesterognesis)
es una va citoplsmica que se inicia a partir de la
unin de tres molculas de acetil CoA, las que
forman el -hidroxi--metilglutaril-CoA, precursor del
mevalonato. La enzima que produce este ltimo
compuesto en la colesterognesis es la -hidroxi--
metil glutaril-CoA reductasa, dependiente de NADPH.
Despus de tres fosforilaciones para activar la
molcula, el mevalonato se descarboxila para formar
el isopentenil pirofosfato, unidad isoprenoide de
todos los terpenos. El isopentenil pirofosfato se une
con uno de sus ismeros para formar el geranil
pirofosfato, de 10 tomos de carbono que, por
combinacin con otra molcula de isopentenil
pirofosfato, forma el farnesil pirofosfato, de 15
carbonos. Dos molculas de farnesil pirofosfato se
unen por un enlace especial (cabeza-cabeza) para
formar el escualeno, de 30 carbonos.
El escualeno se cicliza y, por cambios
sucesivos de oxidacin, descarboxilacin y
reacomodo de electrones y grupos qumicos, forma el
lanosterol, el zimosterol y finalmente el colesterol. La
va de la colesterognesis se regula principalmente
por colesterol endgeno o el que se obtiene a partir
de la dieta a nivel de la enzima -hidroxi--
metilglutaril-CoA reductasa.
El colesterol puede seguir diversos caminos:
a) Migra a la membrana, donde regula la fluidez de la
misma; b) Se transforma qumicamente para producir
cidos biliares por oxidacin de su cadena lateral; c)
Pierde una cadena de seis tomos de carbono para
producir la pregnenolona, el precursor de todas las
hormonas esteroidales, sean progestgenos (como la
progesterona), mineralcorticoides (como la
aldosterona), glucocorticoides (como el cortisol),
68
andrgenos (testosterona) y estrgenos (estrona y
estradiol); d) El colesterol tambin es precursor de la
vitamina D, que se obtiene por la ruptura del anillo B.
El colesterol se excreta principalmente como
sales biliares, aunque una parte puede eliminarse en
las heces como coprostanol, producto de la
degradacin bacteriana del colesterol en el intestino
grueso.
F.7 Estructura y metabolismo de las
lipoprotenas.
F.7.1 Describir los mecanismos de
transporte de los cidos grasos
provenientes de la liplisis y el de los
otros lpidos (TAG, steres de
colesterol y fosfolpidos) en el
organismo.
F.7.2 Conocer la composicin y la funcin
de las lipoprotenas (quilomicrones,
LDL, VLDL, HDL y Lp[a]).
F.7.3 Describir el metabolismo de las
diferentes lipoprotenas.
Los lpidos son compuestos prcticamente insolubles
en agua que se transportan en el torrente circulatorio
mediante las lipoprotenas.
Las lipoprotenas son partculas globulares
de alto peso molecular con un ncleo formado por
lpidos hidrofbicos TAG y steres de colesterol, dentro de sus funciones se cuenta el intercambio de
los cuales aportan la mayor parte de la masa de la
partcula, y por una sola capa superficial de
molculas de fosfolpidos, colesterol y protenas o
polipptidos que rodean al ncleo y estabilizan la
partcula para que permanezca en solucin dentro
del plasma.
La fraccin proteica de las lipoprotenas se
conoce como apolipoprotena o apoprotena, de las
que se han aislado y caracterizado seis clases
principales: A, B, C, D, E y (a). Algunas de stas son
integrales y no pueden ser removidas, en tanto que
otras pueden ser transferidas a otras lipoprotenas.
Las lipoprotenas principales que circulan en
el plasma humano se clasifican con base en su
densidad en quilomicrones, lipoprotenas de muy
baja densidad (LMBD o segn la sigla inglesa
VLDL), las lipoprotenas de baja densidad (LBD o
LDL) y las lipoprotenas de alta densidad (LAD o
HDL). La densidad de las lipoprotenas refleja la
relacin existente entre la cantidad de lpidos y de
protenas.
Los quilomicrones transportan los lpidos de
la dieta desde el enterocito al tejido adiposo, la
glndula mamaria, el msculo y el hgado. Los lpidos
endgenos, principalmente los triacilglicridos y el
colesterol se transportan desde el hgado a los
tejidos mediante las lipoprotenas VLDL. Las
apoprotenas caractersticas de las VLDL son la apo
B-100, apo-C y apo-E, de las cuales las dos ltimas
son compartidas con los quilomicrones, los que
tienen adems la apo-B48 y la apo-A. Tanto los
quilomicrones como las VLDL son llevados hasta los
capilares de los tejidos en donde su apo-CII activa a
la lipoprotena lipasa, quien hidroliza la mayor parte
de los triacilgliceroles de estas lipoprotenas hasta
glicerol y cidos grasos, los que son tomados por los
tejidos para ser oxidados o almacenados en el tejido
adiposo.
Los restos de VLDL, que han perdido la
mayor parte de sus triacilgliceroles y algunas
apoprotenas y fosfolpidos, se convierten en LDL.
Las LDL contienen apo B-100 y transportan
colesterol a los tejidos.
Las lipoprotenas ms pequeas son las
HDL; stas son ricas en fosfolpidos y protenas y
apoprotenas A, C y E con las dems lipoprotenas y
el transporte del colesterol extraheptico al hgado
(transporte inverso del colesterol).
El colesterol es transportado en la sangre por
tres diferentes lipoprotenas: las LDL (60 a 75%), las
HDL (15 a 35%) y las VLDL (10%). Las LDL y las
HDL tienen una funcin combinada en la
conservacin del equilibrio del colesterol; las LDL
llevan el colesterol hacia las clulas y regulan la
sntesis de novo del colesterol en ellas; las HDL lo
eliminan de las clulas, es decir, captan el colesterol
liberado en el plasma procedente del recambio de
membranas y de clulas que mueren y lo llevan al
hgado para su metabolismo o excrecin.
Adems de las clases ya mencionadas de
lipoprotenas existe la lipoprotena (a) [Lp(a)], la cual
tiene una composicin lipdica muy similar a la LDL,
69
contiene apoB-100 y una glucoprotena llamada
apo(a). La apo(a) es polimrfica (de longitud y
secuencia) y tiene una gran homologa con el
plasmingeno. Esta homologa es importante porque
la Lp(a) se asocia con el bloqueo de la activacin del
plasmingeno y la consiguiente lisis de los cogulos
de fibrina, as como con la estimulacin de la
proliferacin de clulas musculares lisas, procesos
que pueden estar en el origen de lesiones
aterosclerticas. Adems, la apo(a) dificulta el
catabolismo mediado por el receptor de LDL al que
se fija e interfiere, de esta manera, con el
metabolismo y transporte del colesterol. La
concentracin de Lp(a) en sujetos normales es de ~5
mg/dl; las cifras >30 mg/dl constituyen otro valor de
prediccin de un alto riesgo de aterosclerosis y
trombosis.
F.8 Regulacin y alteraciones del metabolismo
de lpidos.
F.8.1 Describir el estado del metabolismo
lipdico y sus alteraciones en el
estrs, obesidad, dislipoprotei-
nemias, hgado graso e de la dieta del organismo y responden liberando
hipercolesterolemias, quienes son
factores de riesgo de aterosclerosis.
F.8.2 Identificar el papel de la leptina en
la regulacin del peso corporal y del
apetito.
Realizacin de la prctica 10 "Determinacin de
lpidos y lipoprotenas plasmticas" (ver pg.162).
Discusin de los casos clnicos 4 Cetosis por
inanicin. Obesidad y 5 Hipercolesterolemia y
aterosclerosis ver pg. (199 y 200).
Lecturas recomendadas
1. Libby P. Atherosclerosis the new view.
Scientific American. 2002; 286( 5): 28-37.
2. NIH (National Institutes of Health) consensus
conference. Triglyceride, HDL, and coronary
heart disease. JAMA. 1993; 269 (4): 505-510.
3. Alba ZayasL, Pereira RG, Aguilar BA.
Lipoprotena (a): estructura, metabolismo,
gentica y mecanismos patognicos. Rev
Cub Invest Biomed. 2003; 22(1): 32-40.
4. Martnez AE, Gonzlez MO. La leptina, una
hormona novedosa. Investigadores Mdicos.
2003; IV (5):1097-1103.
5. Sabath EFS. Leptina. Rev Inv Cln. 2002; 54
(2): 161-165.
6. Villaseor A. El papel de la leptina en el
desarrollo de la obesidad. Rev Endocrin
Nutr. 2002; 10 (3):135-139.
Los lpidos son compuestos que se han relacionado
con varias patologas.
La regulacin del metabolismo lipdico se
ejerce en respuesta a las diferentes necesidades
energticas y los estados de la dieta de un
organismo (ayuno-alimentacin). La sntesis y la
degradacin de los TAG y del colesterol son
procesos que afectan a todo el organismo, con sus
rganos y tejidos formando una red interdependiente
conectada por la corriente sangunea. La sangre
transporta los TAG en forma de quilomicrones y
VLDL, los cidos grasos en forma de complejos con
albmina y el colesterol asociado a VLDL, LDL y
HDL. Las clulas pancreticas perciben los estados
hormonas (insulina o glucagon) que regulan la
velocidad de las rutas opuestas del metabolismo de
lpidos y controlan si se han de degradar o sintetizar
los cidos grasos, los TAG, los fosfolpidos o el
colesterol.
La regulacin metablica se puede ejercer a
corto plazo (disponibilidad de sustratos, interacciones
alostricas y modificaciones covalentes) o a largo
plazo (control de la sntesis y degradacin de las
enzimas). Otro nivel de regulacin se relaciona con el
transporte de los lpidos de un tejido a otro.
Los lpidos ms abundantes del organismo
son los TAG almacenados en el tejido adiposo, los
cuales se hidrolizan por la accin de una lipasa
sensible a hormonas como el glucagon, la epinefrina
y los glucocorticoides, obteniendo glicerol y cidos
grasos que salen a la circulacin. Estos ltimos se
asocian a albmina y se transportan al hgado,
corazn y msculo para ser oxidados hasta CO2 y
H2O, con la produccin consecuente de ATP. Las
condiciones fisiolgicas y metablicas que
determinan la movilizacin de grasas del tejido
70
adiposo pueden ser alteradas por situaciones de
estrs (dolor, fiebre, infecciones, miedo, hemorragia,
hipoglucemia) en las que se estimula la
adenohipfisis, que secreta ACTH, induciendo la
secrecin de glucocorticoides. La ACTH y los
glucocorticoides aceleran la hidrlisis de los TAG.
La concentracin de los TAG almacenados
en los adipocitos depende de la velocidad de su
recambio (sntesis e hidrlisis). Cuando el
almacenamiento de energa en forma de TAG en el
tejido adiposo es excesivo, se establece una
condicin llamada obesidad, la cual correlaciona con
un promedio de vida menor y con un aumento en
problemas de salud, principalmente de tipo
cardiovascular. Muchos factores conducen a ella,
pero la causa bsica es una ingesta calrica por
encima de los requerimientos energticos estndar.
El apetito se regula por la presencia de
compuestos antianorxicos. La sntesis de estos
compuestos se ve afectada por la presencia de una
protena pequea que se libera por las clulas
adiposas: la leptina. La ausencia de esta protena o
de su receptor en las clulas del hipotlamo
implicadas en la regulacin del apetito se asocia con
la aparicin de obesidad en ratones. Su papel est
actualmente en estudio en humanos.
Existen otras alteraciones de los lpidos
asociadas al metabolismo de las lipoprotenas. Estas
alteraciones se conocen en general como
dislipoproteinemias, en las que hay modificaciones
de los niveles de colesterol y/o TAG en sangre.
En las hipercolesterolemias familiares, los
receptores celulares para lipoprotenas de baja
densidad (LDL) son deficientes. Por lo tanto las LDL
no pueden ser captadas por las clulas y degradadas
por las enzimas lisosomales. El consecuente
incremento de LDL en sangre se asocia con
xantomas (depsitos de lpidos, frecuentemente
encontrados bajo la piel) y enfermedades de arterias
coronarias. En las hipertriacilgliceridemias se
encuentran bajos niveles de lipoprotena lipasa (LPL)
o apo CII (el activador de LPL) y TAG aumentados.
Estas deficiencias se asocian con xantomas
caractersticos e intolerancia a comidas ricas en
grasas. El tratamiento involucra dietas bajas en
cidos grasos saturados y colesterol y el uso de
agentes hipolipemiantes como las resinas
secuestradoras de cidos biliares, la niacina y los
inhibidores de la 3-hidroxi-3 metilglutaril- CoA (HMG-
CoA) reductasa.
En condiciones de estrs metablico, la
capacidad para secretar VLDL no es suficiente para
la sntesis aumentada de TAG. Esto ocasiona que el
depsito de AG y TAG en el tejido heptico se vuelva
excesivo establecindose una condicin txica
llamada hgado graso. Sin embargo, el hgado graso
ocurre especialmente en condiciones txicas graves,
cuando la sntesis de las apolipoprotenas,
requeridas para la formacin de VLDL, es inferior a la
disponibilidad de cidos grasos, ocasionando su
acumulacin. Esta situacin se observa
frecuentemente en las personas que ingieren
constantemente grandes cantidades de etanol y una
dieta hipoproteica. La oxidacin del etanol
proporciona la energa necesaria para mantener las
funciones celulares, pero tambin favorece la sntesis
de cidos grasos debido a un aumento en la
disponibilidad de NADH y al aumento en la actividad
de la fosfatidato fosfohidrolasa.
Finalmente la obesidad, sobre todo el patrn
masculino de depsito centrpeto o visceral de la
grasa, favorece una dislipidemia aterognica que se
caracteriza por el aumento de los TAG plasmticos,
la disminucin de HDL y la intolerancia a la glucosa.
La aterosclerosis involucra la formacin de placas
ricas en lpidos en la ntima de las arterias. Las
placas empiezan como rayas grasas conteniendo
clulas espumosas, las cuales son inicialmente
macrfagos llenos de lpidos, particularmente steres
de colesterol. Estas lesiones primarias desarrollan
placas fibrosas que pueden ocluir la arteria y causar
un infarto cerebral o al miocardio. La formacin de
estas placas est frecuentemente asociada como se
mencion anteriormente, con anormalidades en el
metabolismo de lipoprotenas plasmticas. En
contraste con estas lipoprotenas, las lipoprotenas
de alta densidad (HDL) tienen un efecto protector.
Como parte de la estrategia general para limitar la
aterosclerosis hay que controlar la hipertensin, si
fuera necesario con farmacoterapia. La mayora de
los enfermos con diabetes mellitus fallece a
consecuencia de aterosclerosis o sus
71
complicaciones. El control riguroso de la glucemia en
estos enfermos disminuye las complicaciones
microvasculares de la diabetes, por lo que se
recomienda prestar atencin al control de la
glucemia.
La leptina es una hormona de naturaleza
proteica constituida por 167 aminocidos que circula
en el plasma sanguneo y regula el peso corporal y
los depsitos de grasa, a travs de sus efectos en el
metabolismo y el apetito. En general, induce una
disminucin en el apetito y un incremento en el gasto
energtico.
La leptina es producida y liberada por el
tejido adiposo blanco fundamentalmente como una
seal de saciedad, aunque se ha visto tambin que
se produce en tejido adiposo marrn, en la placenta y
en algunos tejidos fetales, como el corazn, hueso y
cartlago.
La sntesis y la secrecin de leptina estn
directamente relacionadas con la cantidad de grasa
corporal y el tamao del adipocito. Aunque factores
como la edad, el sexo, el ndice de masa corporal, la
actividad fsica, el fumar, la hipertensin, el colesterol
en HDL, la concentracin plasmtica en ayuno de
triacilgliceroles, de glucosa y de insulina tambin
afectan la secrecin de leptina. As por ejemplo, la
concentracin de la hormona es hasta cuatro veces
mayor en mujeres que en hombres. El fumar puede
traer cambios en el peso corporal, al modificar la
sensibilidad de los receptores del hipotlamo a la
leptina y en consecuencia modular la sntesis de
hormona, reduciendo el peso corporal.
El hipotlamo es el sitio de mayor accin de
leptina. La accin ms importante de la leptina en
este rgano es la disminucin en la produccin del
neuropptido Y (NPY). Las implicaciones de estos
cambios son las siguientes:
Incremento en el NPY Incremento en la leptina
(disminucin de leptina) (diminucin en el NPY)
Se presenta hiperfagia Hipofagia
Aumento en la secrecin de Incremento en el
insulina mayor respuesta a la energtico
insulina en tejido adiposo
Aumento de peso Prdida de peso
En general podemos decir que la concentracin de la
leptina aumenta despus de la ingesta de alimento y
disminuye durante el ayuno y la diabetes. La insulina
y los glucocorticoides aumentan la sntesis de esta
hormona, mientras que las catecolaminas, los
andrgenos y los cidos grasos de cadena larga la
inhiben.
G. Metabolismo de los compuestos
nitrogenados
Al finalizar esta subunidad, el alumno describir los
procesos ms importantes del metabolismo de los
compuestos nitrogenados.
G.1 Aminocidos y protenas.
G.1.1 Conocer de manera general cmo
se realiza en el organismo la
digestin de las protenas y la
absorcin de los aminocidos.
G.1.2 Identificar las fuentes nutricionales
de los aminocidos.
G.1.3 Describir las reacciones de
transaminacin y desaminacin e
identificar la localizacin subcelular,
sustratos, enzimas y productos de la
actividad de estas enzimas.
G.1.4 Identificar el papel de la glutamina y
del cido glutmico en el
metabolismo de los compuestos
nitrogenados. Describir el papel de
la glutamino sintetasa, de la
glutamato deshidrogenasa, de las
transaminasas y de la glutaminasa
en el metabolismo de los
compuestos nitrogenados.
G.1.5 Sealar las causas de la toxicidad
del in amonio y los mecanismos del
organismo para combatirla.
G.1.6 Describir el proceso de sntesis de
la urea e indicar la localizacin
gasto subcelular, sustratos, enzimas y
productos de la va. Describir la
regulacin de la sntesis de urea, as
como los defectos en el metabolismo
que producen alteraciones en este

72
 proceso; sealar sus
consecuencias fisiolgicas.
G.1.7 Identificar a los aminocidos
precursores de -cetoglutarato,
piruvato, acetoacetato, fumarato y
oxaloacetato.
G.1.8 Identificar a los aminocidos
precursores de las siguientes
aminas: acetilcolina, catecolaminas,
serotonina, carnitina, poliaminas y
creatinina.
G.1.9 Conocer las bases metablicas de las
siguientes alteraciones congnitas
del metabolismo: acidemia
propinica, acidemia metilmalnica,
hipervalinemia, fenilcetonuria y la calidad de la dieta; ellos son: ARGinina, LISina,
alcaptonuria.
Realizacin de la prctica 11 "El efecto del
tetracloruro de carbono sobre las transaminasas (ver
pg. 170).
Los aminocidos son el sustrato ms importante del
metabolismo nitrogenado en los organismos
superiores pues de ellos derivan protenas, purinas,
pirimidinas, porfirinas, pptidos y hormonas, entre
otros compuestos y, adems, sus esqueletos
carbonados se oxidan para liberar energa.
Todos los aminocidos de los sistemas vivos
se encuentran como parte de un pool o poza
(reserva) metablica cuya magnitud se mantiene
constante mediante un equilibrio entre la entrada y la
salida de aminocidos. Desde la poza, los
aminocidos son llamados hacia sus diferentes
destinos metablicos:
1. Participar en el proceso de la nutricin por medio
de la sntesis de nuevas protenas.
2. La sntesis de compuestos nitrogenados no
proteicos.
3. Su entrada a la gluconeognesis para sintetizar
glucosa.
4. Su degradacin oxidativa para la produccin de
energa.
1. Nutricin. Los aminocidos son oxidados
constantemente en los animales y el nitrgeno
excretado tiene que ser repuesto para mantener un
balance nitrogenado que, en los adultos normales,
se encuentra en equilibrio; en los jvenes, las
embarazadas y los convalecientes es positivo y en
los ancianos, los enfermos y los desnutridos el
balance nitrogenado es negativo.
Los aminocidos ingresan al organismo
humano formando parte de las protenas de la
dieta que, por lo general, aportan alrededor de 10%
de las kilocaloras diarias; sin embargo, el valor
principal de los aminocidos recibidos reside en el
aporte de las estructuras moleculares que el
organismo humano no puede sintetizar por s
mismo y que son los aminocidos indispensables o
esenciales cuya presencia determina en gran parte
METionina, HIStidina, TREonina, VALina,
FENilalanina, LEUcina, IsoLEucina y TRIptofano
(ALM-HTV-FLIT).
2. Compuestos nitrogenados. Los aminocidos
participan en la sntesis de numerosos compuestos
nitrogenados que no son protenas, por ejemplo,
los oligopptidos glutatin y carnosina; las bases
nitrogenadas de los cidos nucleicos y los
fosfolpidos; las hormonas derivadas de
aminocidos como la epinefrina, tiroxina y
serotonina; las hormonas peptdicas como el
glucagn, la ACTH y la oxitocina; los
neurotransmisores como la dopamina y el
aminobutirato gamma; los neuropptidos como las
endorfinas y los factores liberadores; las porfirinas
como el grupo hemo; los pigmentos como la
melanina; las aminas como la histamina y varios
compuestos ms.
3. Gluconeognesis. Una porcin considerable de la
sntesis diaria de glucosa que se realiza en el
hgado se hace a partir de los aminocidos que
reciben, por esto, el nombre de aminocidos
glucognicos. Con la excepcin de la leucina y la
lisina, todos los aminocidos tienen la capacidad
de aportar todo o parte de su esqueleto carbonado
para que se incorpore a la sntesis de la glucosa y
esto se logra, en un primer paso, mediante la
prdida del grupo amino por transaminacin, lo
73
 cual deja libre la cadena carbonada bajo la forma
de un cetocido.
Los cetocidos mitocondriales resultantes:
alfa-cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato,
oxaloacetato y piruvato confluyen hacia la
formacin del oxaloacetato citoplsmico que
ingresa al eje central del metabolismo y se
transforman en fosfoenol piruvato que alimenta la
gluconeognesis. Dos molculas de este ltimo
siguen el reverso de la va glucoltica hasta su
transformacin en glucosa.
4. Oxidacin. Para la oxidacin de su esqueleto
carbonado los aminocidos pierden primero al
grupo amino, lo cual se lleva comnmente a cabo
mediante la transaminacin acoplada a la
desaminacin oxidativa (transdesaminacin),
proceso reversible en el cual un aminocido
transamina primero con el alfa-cetoglutarato y le
transfiere su grupo amino para formar glutamato y
ste es desaminado enseguida por la glutamato
deshidrogenasa con produccin de NADH y
liberacin de amonio. El metabolismo del esqueleto
de carbono se aparta entonces de la ruta seguida
por el grupo amino ya que, para el primer caso, los
carbonos pueden ser llevados hacia la oxidacin
en el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria, o
bien, incorporarse a la gluconeognesis en el
hgado para la sntesis de glucosa; en tanto que el
ion amonio ser transportado hasta el hgado en
donde ser tomado por la va metablica del ciclo
de la urea.
La oxidacin del esqueleto carbonado de
los aminocidos procede mediante su agrupacin
en familias o grupos de aminocidos que, al
transformarse en el metabolismo, confluyen hacia
alguno de los intermediarios de la gluclisis, la
descarboxilacin del piruvato o del ciclo de Krebs.
Los glucognicos son de la familia del:
Piruvato:Tre, Gli, Ser, Ala, Met, Cis y Tri
Alfa-cetoglutarato: Pro, His, Arg, Gln y Glu
Succinil-CoA: Ile, Val, Met
Fumarato: Tir, Fen, Asp
Oxaloacetato: Asn, Asp
Y los cetognicos son de la familia del:
Acetoacetato:Leu, Tir, Fen
Acetoacetil-CoA: Tri, Lis
Acetil-CoA: Tre, Leu, Ile
El ciclo de la urea
El mecanismo de la transdesaminacin permite el
acopio de los grupos amino de los diferentes
aminocidos en la molcula del glutamato, la cual, al
ser desaminada oxidativamente por la
deshidrogenasa del glutamato, libera el ion amonio.
Dado que este compuesto es muy txico para el
sistema nervioso central, se elimina mediante la
sntesis de urea. Esta sntesis se lleva a cabo en el
hgado mediante un proceso metablico denominado
el ciclo de la urea, la primera parte del cual se realiza
en la mitocondria y el resto en el citoplasma de la
clula heptica.
El ciclo de la urea (fig. III.2) que permite
mantener una muy baja concentracin de amonio
libre, se inicia con la sntesis del carbamil fosfato a
partir del amonio y el CO2 con un gasto de 2 enlaces
de alta energa. El carbamil fosfato entrega el grupo
carbamino a la molcula de ornitina, la cual acta
como portadora de grupos en las cuatro reacciones
del ciclo:
1. Transferencia del carbamino a la ornitina para
formar citrulina: ornitina transcarbamilasa.
2. Condensacin de la citrulina con el aspartato. Se
forma el arginino-succinato con gasto de 2ATP:
arginino-succinato sintetasa.
3. Ruptura del arginino-succinato. Se desprende
fumarato y se produce arginina: arginino-succinato
liasa.
4. Hidrlisis de la arginina para regenerar a la ornitina
y liberar urea: arginasa.
En resumen, para formar una molcula de urea se
requiere de un ion amonio, un CO2 y un aspartato. Se
produce una molcula de fumarato y una de urea,
con gasto de cuatro enlaces de alta energa
provenientes del ATP.
G.2 Nucletidos.
G.2.1 Conocer las caractersticas
generales de las bases nitrogenadas,
74
 los nuclesidos y nucletidos:
estructura qumica y funciones.
G.2.2 Con base en un esquema general de
la sntesis de las bases pricas y
pirimdicas describir sus
mecanismos de regulacin.
G.2.3 Identificar los sustratos y productos
de las vas de ahorro en la sntesis
de purinas.
G.2.4 Identificar las causas y desoxirribonucleicos.
consecuencias fisiolgicas de la
sobreproduccin de cido rico.
G.2.5 Describir el efecto del alopurinol
sobre la xantina oxidasa y el que
ejercen algunas drogas
anticancergenas, como la
mercaptopurina, el 5-fluorouracilo, el
metotrexato y la tioguanosina sobre
la sntesis de purinas y pirimidinas.
Realizacin de la prctica 12 "Estudio de los
productos finales del metabolismo nitrogenado" (ver
pg. 171).
Discusin del caso clnico 6 "Gota" (ver pg. 202).
Los nucletidos estn formados por ribosa o
desoxirribosa, una base nitrogenada que puede ser
una purina o una pirimidina, y una, dos o tres
molculas de cido fosfrico. Dependiendo del
nmero de grupos de fosfato presentes, los
nucletidos pueden ser mono, di, o trifosforilados.
cido fosfricoRibosaBase nitrogenada
Los nuclesidos se diferencian de los
nucletidos en que no tienen cido fosfrico.
Ribosa Base nitrogenada
Las bases nitrogenadas pueden ser purinas o
pirimidinas. Las purinas estn formadas por dos
anillos heterocclicos (formados por diferentes tipos
de tomos), uno con seis miembros y otro con cinco
miembros, y son la adenina y la guanina. Las
pirimidinas estn formadas por un anillo heterocclico
de seis miembros y las ms importantes son: uracilo,
timina y citosina.
Los nucletidos y nuclesidos pricos tienen
funciones muy variadas en los seres vivos; entre las
ms importantes estn la de servir como sustratos
acarreadores de energa, segundos mensajeros,
neurotransmisores, coenzimas, etctera.
Los nucletidos pirimdicos intervienen como
acarreadores en la biosntesis de polisacridos y de
fosfolpidos. Los nucletidos pricos y pirimdicos
forman parte de los cidos nucleicos y
La sntesis de purinas se lleva a cabo en el
citoplasma celular y comprende las siguientes tres
fases:
1. Activacin, en la que la ribosa 5 fosfato adquiere
dos molculas de fosfato que se asocian al
carbono 1 de la molcula; esta reaccin es llevada
a cabo por la fosforribosil pirofosfato sintetasa, la
cual es una de las enzimas reguladoras de la
sntesis de purinas y de pirimidinas.
2. Formacin de los anillos heterocclicos, en donde
varias enzimas intervienen aadiendo los
75
 diferentes tomos que componen al anillo purnico
hasta formar inosina monofosfato.
La primera reaccin, catalizada por la enzima
fosforribosilglicinamida sintetasa, es reguladora de la
sntesis de purinas y su velocidad depende de las
concentraciones de sus sustratos.
3. A partir de la inosina monofosfato se sintetizan la
guanosina monofosfato y la adenosina monofosfato
por medio de dos vas metablicas que se regulan
mutuamente. Las altas concentraciones de GTP
estimulan la sntesis de AMP y las altas
concentraciones de ATP estimulan la sntesis de
GMP.
La sntesis de pirimidinas tambin se lleva a
cabo en el citoplasma y se inicia con la sntesis de
carbamilfosfato a partir de glutamina, CO2 y ATP en
una reaccin catalizada por la enzima carbamilfosfato
sintetasa citoplasmtica que es una reaccin
parecida a la que ocurre en la mitocondria para la
biosntesis de la urea; posteriormente, se adiciona
cido asprtico para producir cido ortico al cual se
une una molcula de fosforribosilpirofosfato y se
descarboxila para dar la uridina monofosfato. A partir
de sta se sintetizan la citidina monofosfato y la
timidina monofosfato.
Las purinas se catabolizan por dos caminos
metablicos:
1. En la va del ahorro de las purinas, la adenina, la
hipoxantina o la guanina son reaprovechadas y,
por medio de la enzima fosforribosiltransferasa
correspondiente, se vuelve a formar el AMP, IMP o
GMP.
2. En una secuencia de reacciones cuyo producto
final es el cido rico, que es la forma en la que se
excretan las bases pricas.
El catabolismo de las pirimidinas se lleva a
cabo por una serie de reacciones cuyos productos
finales son la malonil-CoA y la metilmalonil CoA;
estos dos productos se catabolizan hasta CO2 y
agua. El exceso en el catabolismo de purinas genera
una sobreproduccin de cido rico que tiende a
acumularse en las articulaciones distales, lo que
produce el sndrome de gota. Esto se debe a que el
cido rico es insoluble en ambientes con un pH
menor a 6.0, lo que hace que no se pueda eliminar
por la orina. Este sndrome se produce cuando las
concentraciones de purinas son altas, ya sea por
aporte elevado o por exceso en el catabolismo de las
mismas.
Los anlogos de los nucletidos se han
utilizado como inhibidores de algunas enzimas; por
ejemplo, la azaserina y la acivicina, anlogos de la
glutamina, se usan como inhibidores de la enzima
glutamina amino transferasa que interviene en la
sntesis de purinas. El metotrexato y el 5-fluorouracilo
se usan como inhibidores de la sntesis de dTMP. La
aplicacin de estos inhibidores en pacientes con
procesos neoplsicos da como resultado la
disminucin de la sntesis del DNA y del crecimiento
celular.
El alopurinol se usa en el tratamiento del
sndrome de gota porque es un anlogo de la
hipoxantina y acta como inhibidor de la enzima
xantina oxidasa y de la produccin de cido rico.
H. Regulacin e integracin metablica
Al finalizar esta subunidad, el alumno ser capaz de
analizar los mecanismos de regulacin del
metabolismo y de su integracin en algunas
condiciones fisiolgicas.
H.1 Conocer cmo se lleva a cabo la regulacin
del metabolismo.
H.2 Analizar los cambios adaptativos que
ocurren en las siguientes condiciones
normales y patolgicas: ejercicio intenso,
embarazo-lactancia, vejez, ayuno, obesidad,
desnutricin, diabetes mellitus y gota.
H.3 Conocer los mecanismos de accin
hormonal e identificar los receptores
membranales y las cascadas de
amplificacin: la adenilato ciclasa (AMP
cclico), la fosfolipasa C (fosfoinostidos,
calcio) y la GMPc fosfodiesterasa (GMP
cclico).
Lecturas recomendadas
1. Scott JD, Pawson T. Cell communication the
inside story. Scientific American. 2000; 282
(6): 54-61.
76
2. Kholodenko BN, Westerhoff HU. The
macroworld versus microworld of
biochemical regulation and control. TIBS.
1995; 20: 52-54.
Las clulas y los organismos son sistemas
relativamente aislados en un estado casi
estacionario. Las funciones de los organismos vivos
como un todo o como sus partes estn reguladas con
el objetivo de asegurar un mximo de supervivencia.
Ya que los sistemas vivos reaccionan en el espacio y
el tiempo, se emplea tanto una regulacin en el
espacio y en el tiempo.
La regulacin espacial se expresa a travs
del grado de organizacin de las estructuras; el
mantenimiento de la estabilidad estructural de las
protenas, en la asociacin de las enzimas que
cooperan en los complejos multienzimticos, su
localizacin en compartimentos definidos
(mitocondria, retculo endoplsmico) y por la
especializacin de clulas y tejidos mediante
procesos de diferenciacin.
El tiempo est involucrado en la regulacin
principalmente en trminos de modificacin de las
velocidades de reaccin (metablica, de transporte y
otras). En la prctica, se utilizan ambas dimensiones
simultneamente.
En bioqumica una de las principales seales
para regular los procesos metablicos es la
concentracin de molculas. Los mecanismos
regulatorios son efectivos a diferentes niveles de
organizacin pero sus bases son siempre
moleculares. Las funciones de un organismo pueden
regularse a travs de reacciones que se realizan en
las clulas (regulacin metablica) y a nivel de todo
el organismo (control hormonal y nervioso). En una
clula, los procesos metablicos estn controlados
principalmente por regulacin de la actividad de las
enzimas individuales.
Las enzimas pueden regularse de varias
maneras:
1. Cambiando la concentracin de los sustratos
(como una seal metablica) lo que resulta en
cambios en la actividad enzimtica, permaneciendo
constante la cantidad de enzima involucrada. Los
cambios en la concentracin de un compuesto
seal se logran muchas veces a travs de la
compartimentalizacin, es decir, a travs de
membranas que separan la clula del medio
extracelular y por los pequeos compartimentos en
el interior de la clula, stas siendo separadas
espacialmente (por membranas) o funcionalmente
(por acarreadores).
2. Cambiando la concentracin de los efectores
(activadores o inhibidores) en las enzimas
alostricas. Al interactuar con el sitio alostrico de
la enzima, estos efectores pueden aumentar o
disminuir la actividad enzimtica con base en los
cambios cooperativos de la conformacin de las
subunidades que componen a la enzima. La
cantidad de la enzima alostrica no cambia durante
el proceso.
3. Por induccin o por represin cuando, en
contraste con los dos mecanismos anteriores, la
cantidad de enzima y, por tanto, su actividad total
en el sistema cambian. La cantidad de enzima por
clula depende de la presencia de una protena
represora que es codificada por un gen regulador y
que, en su forma activa, se une a una regin del
DNA (operador) e impide la unin de la RNA
polimerasa al promotor. De esta manera, inhibe la
sntesis de algunas enzimas (represin). Algunos
compuestos de bajo peso molecular (inductores)
pueden interactuar con el represor y cambiarlo a
una forma inactiva que no puede inhibir la sntesis
de una enzima dada ; esto es la induccin de su
sntesis; Fundamentalmente, no se abren nuevas
vas metablicas, simplemente se liberan o se
bloquean las ya existentes, principalmente por el
principio de retroalimentacin, en el que la
regulacin se ejerce sobre la actividad de la
enzima en una forma prcticamente instantnea y
reversible.
Los sistemas multienzimticos son aquellos
en los cuales las enzimas individuales estn
organizadas de tal manera que el producto de una
reaccin sirva como sustrato de la siguiente enzima.
Aqu, la regulacin por retroalimentacin juega un
papel importante, ya que el producto de una
secuencia de reacciones controla la actividad de una
de las enzimas precedentes, generalmente la primera
de la secuencia. El control por retroalimentacin
77
generalmente es negativo, es decir, un aumento en la
concentracin del producto inhibe a la enzima
regulatoria. En los sistemas multienzimticos, una de
las reacciones parece ser la reaccin limitante de la
velocidad, es decir, procede a su velocidad mxima
posible. Otra manera de regular los procesos es a
travs de isoenzimas.
La regulacin al nivel de un organismo
requiere la existencia de clulas y de estructuras
diferenciadas especiales con una funcin de control
(clulas nerviosas, glndulas endcrinas). Se sabe
que estas clulas producen ciertos compuestos que
pueden ser considerados como portadores de
informacin, seales que se transportan de una parte
del organismo a otra.
La regulacin del metabolismo celular puede
llevarse a cabo por las hormonas, molculas de
diversa naturaleza qumica que pueden alcanzar a
algunas clulas del organismo ; quienes presentan
receptores para ellas (tejidos blanco); y afectar su
funcin, Para aumentar la eficiencia de la regulacin,
las hormonas se transportan a menudo de la clula
que las origina hasta el tejido blanco en asociacin
con una protena especfica. Se ha asumido que el
proceso bsico de la regulacin hormonal es la unin
de la hormona a su receptor, el que puede
encontrarse en la superficie celular o en el
citoplasma.
En el primer caso la hormona no penetra en
la clula sino que, en algunos casos, reacciona con
una protena asociada a la adenilato ciclasa, que a
su vez cataliza la formacin de AMP cclico a partir
de ATP. Por eso el AMP cclico se conoce a menudo
como el "segundo mensajero" porque afecta a un
gran nmero de reacciones intracelulares (por
ejemplo, la activacin de la protena cinasa A). La
fosforilacin de protenas produce cambios en la
actividad de algunas enzimas claves en el
metabolismo de los carbohidratos y de los lpidos.
Otras hormonas, al interactuar con su receptor
extracelular activan a la fosfolipasa C, produciendo
los segundos mensajeros Inositol trifosfato y
diacilglicerol, los cuales regulan la concentracin de
calcio citoplsmico, quien es una nueva seal de
regulacin metablica. Una tercera molcula que
acta como segundo mensajero intracelular es el
GMP cclico.
Existe otro mecanismo por el que actan las
hormonas cuyo receptor se encuentra en la
membrana. En este caso, la interaccin de la
hormona con el receptor, provoca que ste se
autofosforile y una vez ocurrido este evento, el
receptor fosforila a otras protenas blanco. El proceso
secuencial fosforilacin de protenas, se convierte en
la manera en la que la seal se transmite a las
molculas implicadas en la regulacin de algunas
vas. La hormona insulina acta mediante este
mecanismo.
Otras hormonas como las esteroidales y las
tiroideas cruzan la membrana celular y reaccionan
con una protena receptora en el citoplasma. El
complejo viaja entonces hasta el ncleo donde, a
nivel del DNA, aumenta la produccin del RNAm y
del RNAr especficos. stos controlan entonces la
sntesis de las enzimas que intervienen en la
regulacin de los procesos metablicos.
78
 CONTENIDO TEMTICO

Tercera Unidad Temtica

BIOLOGA MOLECULAR

79
 IV
Biologa molecular

Al finalizar esta unidad, el alumno ser capaz de identificar las diferentes molculas
informacionales de la clula y su organizacin; los mecanismos por los que fluye la
informacin gentica; los mecanismos por los que se regula la expresin gentica en los
diferentes estadios del ciclo celular, y el empleo de algunas tcnicas de manipulacin del
DNA tiles en medicina. La unidad se divide en:

A. Organizacin del genoma.

B. Flujo de la informacin gentica.
C. Mutaciones y reparacin del DNA.
D. Niveles de regulacin de la expresin gentica.
E. Virus, oncogenes y transformacin.
F. Tcnicas de manipulacin del DNA.

A. Organizacin del genoma A.1.3 Describir las estructuras

primaria, secundaria y terciaria
Al finalizar esta unidad el alumno conocer la de los cidos nucleicos y har
estructura de los cidos nucleicos y sus nfasis en lo dinmico de estas
diferentes niveles de organizacin. molculas.

La informacin gentica es el conjunto de

A.1 Estructura de los cidos nucleicos.
datos que determinan la estructura y
A.1.1 Identificar los diversos
propiedades funcionales en las clulas. La
componentes de los cidos
informacin gentica es almacenada en el
nucleicos y sealar las
ncleo de los eucariotos en estructuras
diferencias que existen entre el
llamadas cromosomas. En el caso de los
DNA y los diversos tipos de RNA.
procariotos, el cromosoma se encuentra
Conocer el significado de los
disperso en el citosol. El ncleo es un
patrones de metilacin del DNA
orgnulo separado del citoplasma por la
como mecanismo de
membrana nuclear, que de hecho, es una
identificacin de su origen.
doble membrana que presenta poros con un
A.1.2 Reconocer las diferentes dimetro de 30 a 100 nm, a travs de los
conformaciones del DNA (A, B y cuales las macromolculas pueden
Z). intercambiarse entre el citoplasma y el
ncleo. La membrana nuclear, adems,
participa directamente en la duplicacin del

80
DNA y permite la comunicacin directa del
ncleo con el medio que lo rodea. La mayora
del material nuclear est formado por
nucleoprotenas cuyo principal componente
es el cido desoxirribonucleico (DNA); en un
ncleo en interfase las nucleoprotenas
forman filamentos de grosor variable (30 nm
en promedio). El grosor de estos filamentos
depende de la presencia o la ausencia de
protenas que interactan con la doble hlice
del DNA, mientras que su longitud depende
del peso molecular de las cadenas del DNA.
As, un cromosoma contiene olculas del
DNA de varios centmetros de longitud y
10
tiene aproximadamente 10 de peso
molecular.
Adems del cido
desoxirribonucleico, existe otro tipo de cido
nucleico: el RNA. Se conocen tres tipos
diferentes del RNA: los RNA mensajeros
(RNAm), que llevan la informacin para una
cadena polipeptdica; los RNA ribosomales
(RNAr), que forman parte de la estructura de
los ribosomas y que son de diferente tamao
(16S, 5S y 23S, en el caso de procariotos;
18S, 5S, 5.8S y 28S, en el caso de
eucariotos; los RNA 16S y 18S se
encuentran en la subunidad pequea de los
ribosomas, mientras que los otros se
encuentran en la subunidad grande de los
mismos) y los RNA de transferencia (RNAt),
que sirven de adaptadores en el proceso de
sntesis de protenas porque traducen el
mensaje codificado en nucletidos a un
lenguaje de aminocidos. En los organismos
eucariotos, los cidos ribonucleicos (RNA) se
sintetizan en el ncleo.
Las molculas del DNA son
polinucletidos, o sea, cadenas compuestas
de mononucletidos en las que la parte
externa de la estructura est constituida por
los esqueletos de desoxirribosa fosfato
unidos entre s por enlaces fosfodister, de
tal manera que el grupo 5'-fosfato de la
desoxirribosa de un nucletido est
esterificado con el grupo 3'-OH de la
desoxirribosa del nucletido vecino. Las
molculas de DNA contienen dos tipos de
bases nitrogenadas, dos bases pirimdicas
(timina T y citosina C) y dos bases pricas
(adenina A y guanina G). Estas bases se
1 1
unen entre el C de la desoxirribosa y el N
9
de las pirimidinas o el N de las purinas por
enlaces N-glucosdicos. La secuencia de
bases es altamente especfica para cada
molcula del DNA.
Las molculas del DNA en solucin
presentan la estructura de una doble hlice
que gira a la derecha alrededor de un eje
comn. Las dos cadenas son
complementarias, corren de manera
antiparalela entre ellas. Se conectan entre s
a travs de puentes de hidrgeno que se
forman entre bases yuxtapuestas A-T (dos
puentes de hidrgeno) y C-G (tres puentes
de hidrgeno); las bases se mantienen
perpendicularmente al eje longitudinal de la
molcula del DNA. Adems, se estabilizan
por interacciones hidrofbicas entre bases
vecinas de la misma hebra.
Las bases son hidrofbicas y estn
colocadas en forma muy empaquetada y
prcticamente no entran en contacto con el
agua. El agua interacciona con la parte
hidroflica de la molcula formada por
residuos de azcar y grupos fosfato cargados
negativamente. Dependiendo del contenido
de agua del medio, las molculas de DNA
pueden existir en tres formas: A, B y Z. Las
diferentes formas difieren en el nmero de
nucletidos por vuelta y en sus
caractersticas estructurales. Se supone que
la forma B es la predominante de las
molculas del DNA in vivo.
Aparte del DNA lineal, existen
molculas de DNA en forma de crculos
cerrados que pueden arreglarse en
estructuras similares a eslabones de una
cadena (en mitocondrias, bacterias y virus).
A.2 Organizacin del DNA.
81
 A.2.1 Identificar los distintos niveles
de organizacin del DNA;
reconocer al nucleosoma, la
fibra de 30 nm (solenoide), el su-
perenrollamiento de 300 nm
(dominios estructurales en bucle)
y el cromosoma en metafase.
A.2.2 Reconocer a las histonas y a
otras protenas no histonas como
responsables del
empaquetamiento del DNA.
Reconocer la importancia de los
siguientes dominios proteicos:
hlice-vuelta-hlice, cremalleras
de leucina, dedos de cinc, en su
interaccin con el DNA y entre
protenas que interactan con el
DNA.
A.2.3 Relacionar los cambios en el
empaquetamiento del
cromosoma con la funcin del
DNA. Definir el significado de
los siguientes conceptos:
cromatina, centrmero, telmero,
eucromatina y heterocromatina.
Lecturas recomendadas
1. Collins FS, Jegalian KG.
Deciphering the code of the life.
Scientific American. 1999;
281(6): 86-91.
2. Kornberg RD, Lorch Y. Twenty-
five years of the nucleosome,
fundamental particle of the
eukaryote chomosome. Cell.
1999; 98: 285-294.
Dado que el tamao del ncleo impedira la
existencia de los cromosomas en forma
extendida, el DNA se compacta formando
estructuras superenrolladas que se asocian
a protenas bsicas (histonas) para formar
superestructuras cada vez ms complejas
como son: los nucleosomas, el solenoide o
fibra de 30 nm, las fibras de 300, 700 y 1
400 nm y, finalmente, las macroestructuras
de los cromosomas mitticos en donde se
alcanza la mxima condensacin posible,
como se ve en el microscopio electrnico.
Las protenas nucleares pueden
dividirse, en general, en protenas del tipo de
las histonas y protenas no histonas. Las
histonas son protenas de peso molecular
entre 10 000 y 25 000 con un alto contenido
de aminocidos bsicos como arginina y
lisina, los cuales pueden representar de 23 a
30% de todos los aminocidos que
componen a la protena.
Las histonas pueden clasificarse en
cinco diferentes grupos segn su tamao y
su composicin de aminocidos. La funcin
de las histonas consiste en organizar los
largos filamentos de DNA en formas ms
compactas que permitan su
empaquetamiento en el ncleo. Esto se lleva
a cabo a travs de las interacciones
electrostticas de las histonas con las cargas
negativas de los grupos fosfato del DNA.
Adems de las histonas existen protenas no
histonas que interactan con el DNA.
Las no histonas son una gran
variedad de protenas que difieren en
abundancia, tamao y composicin de
aminocidos. Algunas de ellas presentan
dominios que son muy comunes como los
dedos de cinc y los zippers o cremalleras de
leucina. Estas protenas son responsables de
la selectividad e inhibicin transitoria en la
transcripcin del RNA a travs de su unin a
ciertos segmentos de DNA implicados en su
regulacin o a travs de la modificacin de la
organizacin del DNA. Adems, regulan la
transcripcin de los genes de las mismas
histonas.
A.3 Organizacin del genoma.
A.3.1 Discutir el concepto de gen y
sealar el nmero aproximado
de genes contenidos en el
genoma humano.
A.3.2 Sealar las caractersticas ms
importantes de los genes nicos
82
 y redundantes, de mantenimiento
y tejido especficos, estructurales
y reguladores, dominantes,
recesivos y ligados al sexo
(conocer las Leyes de Mendel).
A.3.3 Sealar las regiones
hiperconservadas y las regiones
hipervariables del DNA (intrones
y exones).
A.3.4 Conocer las diferentes clases
de DNA: genes que codifican
protenas, genes que codifican
para RNA de transferencia y
ribosomales, seudogenes, DNA
repetitivo y DNA espaciador.
A.3.5 Sealar las caractersticas del
DNA mito-condrial y la
informacin contenida en l.
Realizacin de la prctica 13 Huella gnica
(ver pg. 183).
Cuando se analiza el contenido del DNA que
se expresa como preRNAm, RNAr, RNAt y
otros tipos de RNA, se observa que ste
constituye slo 10% del DNA total (este DNA
se conoce como DNA informativo); el
restante 90% contiene seudogenes, DNA
espaciador y DNA repetitivo. Todo esto
constituye el genoma. De todo el DNA, el
repetitivo constituye 30 a 40% y est
compuesto de secuencias de longitud
variable que pueden estar repetidas diez, mil
o ms veces. Las secuencias repetidas
pueden agruparse, como el caso del DNA
satlite asociado al centrmero del
cromosoma, o presentarse disperso, como la
secuencia ALU, de la cual existen 500 000
copias dispersas en todos los cromosomas y
que est posiblemente relacionada con los
orgenes de la duplicacin.
Del DNA celular, 0.1% es mitocondrial. En l
hay 13 genes que codifican para protenas
de gran importancia para la bioenergtica
celular. Este DNA es de origen materno y
constituye la llamada "herencia de Eva".
La mayora de los genes para
preRNA (RNAhn) son genes nicos, pero
pueden ser transcritos miles de veces. Los
RNAm resultantes de la maduracin de estos
preRNA pueden traducirse cientos de veces,
lo que provoca la aparicin de una gran
cantidad de protena codificada en dichos
genes.
B. Flujo de la informacin gentica
Al finalizar esta subunidad el alumno
conocer los procesos inv olucrados
en el f lujo de la inf ormacin gentica.
B.1. Flujo de la informacin gentica.
B.1.1 Conocer las funciones de los
cidos nucleicos y los flujos de la
informacin gentica (dogma
central de la Biologa Molecular).
B.2 Sntesis del DNA (duplicacin).
B.2.1 Describir el ciclo celular con sus
fases y conocer las diferentes
molculas que se generan en
cada una de stas.
B.2.2 Examinar qu es la duplicacin
del DNA y en qu fase del ciclo
celular ocurre.
B.2.3 Identificar los sucesos ms
importantes catalizados por el
replicosoma.
Lecturas recomendadas
1. Hbscher U. Eukaryotic DNA
polymerases a growing family.
TIBS. 2000; 25 (3): 143-147.
2- Collins FS, Jegalian KG.
Deciphering the code of the life.
Scientific American. 1999; 281
(6): 86-91.
83
 Las molculas del DNA son
sintetizadas a partir de desoxirribonucletidos
en presencia de un molde de DNA y de
varios tipos de enzimas, entre las que se
encuentran dos DNA polimerasas, con
diferente funcin en el proceso: una RNA
polimerasa (primasa), una topoisomerasa de
tipo II denominada DNA girasa y una serie de
protenas que catalizan la separacin de las
dos hebras del DNA, entre las que destacan
las helicasas.
Las DNA polimerasas son enzimas
que pueden unir desoxirribonucletidos slo
en la direccin 5 3, aunque tambin
tienen actividad de exonucleasas en la
direccin 5 3y en la direccin
3 5. Esta capacidad de polimerizacin
slo en la direccin 5 3 se conoce
como direccionalidad de la duplicacin y es la
responsable de algunas peculiaridades del
proceso.
Dado que las DNA polimerasas no
pueden iniciar la sntesis del DNA a menos
que posean un extremo 3OH terminal al que
puedan aadir el desoxirribonucletido
entrante, se hace necesaria la actividad de
una RNA polimerasa (primasa) que genere
dicho extremo 3 OH terminal. Tomando
como molde una de las hebras, la primasa
cataliza la formacin de un pequeo
segmento (5-20 ribonucletidos) de RNA que
sirve como cebador" para la sntesis de la
nueva cadena de DNA por la DNA
polimerasa III. Las cadenas formadas de
novo son antiparalelas a la cadena que les
sirve de molde. Despus de la sustitucin del
"cebador" del RNA a cargo de la DNA
polimerasa I, los segmentos de la cadena
formada de DNA son unidos por la DNA
ligasa. El papel de la DNA polimerasa I,
adems de la funcin de sustitucin de los
"cebadores" del RNA, se encarga de la
reparacin de las hebras del DNA.
Diversos experimentos han
demostrado que una de las cadenas del DNA
resultante provienen del progenitor y la otra
es la que se sintetiz de novo, la cual indica
que la duplicacin del DNA es
semiconservativa. Este mecanismo permite
la transmisin de la informacin gentica de
una generacin a la siguiente.
A consecuencia de la direccionalidad
de la actividad de la DNA polimerasa III se
descubri que hay una diferencia en la
velocidad de sntesis entre las dos cadenas
del DNA, encontrndose que hay una cadena
lder y una retardada. Esto permiti
determinar que la duplicacin de la cadena
retardada se realiza en forma discontinua,
apareciendo una serie de secciones
pequeas de DNA (entre 100 y 1 000 pares
de bases), conocidas como fragmentos de
Okazaki, y que son posteriormente unidas
por la DNA ligasa para formar la hebra
completa.
Durante su vida, las clulas realizan
diversas funciones, a veces se dedican
principalmente a crecer, otras a dividir su
material gentico, o a repartirlo en lo que
sern, dos nuevas clulas hijas. Estas
diferentes etapas constituyen lo que se
conoce como el ciclo celular, integrado por 4
fases bien definidas: M (mitosis), G1 (unin
1), S (sntesis) y G2 (unin 2).
Morfolgicamente slo se han definido dos
etapas de divisin e interfase, en esta ltima
estn incluidas G1, S y G2.
Durante la etapa G1, la clula crece,
lo que implica un gran gasto energtico y
sntesis de sus componentes. El paso a la
etapa S, requiere de seales precisas para
que se inicie la sntesis del DNA, de tal forma
que, al terminar esta etapa, la clula tiene ya
un contenido equivalente al doble de DNA.
Para poder distribuir este DNA entre dos
clulas hijas y dividirse (fase M), la clula
pasa por una etapa de preparacin para la
mitosis llamada G2. Numerosos genes se
prenden y apagan durante cada etapa del
ciclo celular en forma especfica y altamente
precisa.
84
 Cuando una clula se diferencia,
como es el caso de las neuronas, al llegar a
la etapa G1, la clula toma un camino
alternativo a S, dejando de dividirse para
estacionarse en una etapa llamada G0.
Durante esta etapa, un gran nmero de
genes tejido-especfico se prenden dando a
la clula la identidad de acuerdo a la estirpe
a la cual pertenece.
B.3 Transcripcin.
B.3.1 Identificar en qu consiste, en
qu compartimiento subcelular y
en qu fase del ciclo celular se
lleva a cabo la transcripcin.
B.3.2 Identificar las enzimas,
sustratos y los sucesos ms
importantes del proceso de
transcripcin.
B.3.3 Describir en qu consisten los
procesos de modificacin
postranscripcional que sufren el
RNAm, el RNAt y el RNAr y har
nfasis en el papel de las
ribozimas.
B.3.4 Revisar el efecto de la
rifamicina, de la actinomicina D y
de la -amanitina sobre la
transcripcin.
Lectura recomendada
1- Proudfoot N. Connecting
transcription to messenger RNA
processing. TIBS 2000; 25 (6):
290-293.
Todas las molculas del RNA son
sintetizadas en el ncleo mediante
transcripcin de la informacin gentica
codificada en la secuencia de las bases del
DNA mediante la accin de una RNA
polimerasa dependiente de DNA.
La RNA polimerasa dependiente del
DNA es una enzima que est compuesta de
6 subunidades: 2, , ,  y una protena
acdica designada como  que se requiere
para la identificacin y unin al promotor, es
decir, el sitio donde debe iniciarse la
transcripcin. Esta enzima utiliza un molde
de DNA para sintetizar una cadena de RNA,
la cual crece en la direccin 5 3' hasta
llegar a una seal de terminacin en el DNA,
lo que provoca la entrada de la protena rho
la cual separa la RNA polimerasa de la
cadena molde del DNA.
En el caso de los organismos
eucariotos, sus RNA polimerasas son
diferentes, aunque el proceso es
bsicamente el mismo. Una de las
diferencias en la transcripcin entre
procariotos y eucariotos es que los RNAm de
los procariotos suelen ser policistrnicos, es
decir, llevan la informacin para ms de una
cadena polipeptdica, mientras que los de
eucariotos son monocistrnicos.
Los productos de la transcripcin en
eucariotos sufren, a su vez, una serie de
modificaciones postranscripcionales. Los
RNA mensajeros adquieren en su extremo 5
terminal un "casquete", es decir, un
nucletido poco comn con un enlace
especial (7 metilguanosina unida por un
enlace 5 5) que lo protege de la
accin de las nucleasas. Asimismo,
adquieren una cola de poli A en el extremo 3
terminal y pierden algunas secuencias que
no llevan informacin para ninguna cadena
polipeptdica (intrones). El producto de este
proceso de edicin es el que ser ledo en
los ribosomas durante la traduccin o sntesis
de protenas.
Los RNA ribosomales se sintetizan
principalmente en el nucleolo, se asocian a
las protenas ribosomales y las
nucleoprotenas formadas son transportadas
al citoplasma donde llevan a cabo su funcin.
Los RNA de transferencia tambin
son editados, es decir, se modifican hasta
adquirir la estructura funcional. Pierden
secuencias o algunas de sus bases sufren
modificaciones (por ejemplo, se reducen para
producir dihidrouridina, se metilan para
85
producir ribotimina, etctera) lo que les
confiere resistencia a las nucleasas.
B.4 Traduccin.
B.4.1 Proceso de la traduccin.
B.4.1.1 Describir en qu consiste
y en qu compartimiento
subcelular se realiza la
traduccin, tanto de
protenas intracelulares,
como de protenas de
secrecin.
B.4.1.2 Conocer el alfabeto del
cdigo gentico y el
concepto de codn y
anticodn.
B.4.1.3 Identificar las molculas
que intervienen en el
proceso de traduccin.
B.4.1.4 Conocer las fases del
proceso y la funcin que
desempea el ribosoma
en el mismo.
B.4.1.5 Conocer el efecto de los
siguientes inhibidores
sobre la sntesis de
protenas: tetraciclinas,
estreptomicina,
cloranfenicol, eritromicina,
puromicina,
dehidroemetina,
cicloheximida y la toxina
diftrica.
La sntesis de protenas es un proceso
complejo en el que intervienen de manera
coordinada ms de cien macromolculas
para unir los residuos de los 20 aminocidos
en una secuencia codificada en el RNA
mensajero. Asimismo, la sntesis de
protenas requiere de grandes cantidades de
energa y se regula rigurosamente. En este
proceso participan los tres diferentes tipos de
RNA (el mensajero, el ribosomal y el de
transferencia); cada uno contribuye, de
manera especfica, a la obtencin de una
protena funcional.
El lenguaje codificado en nucletidos
en los cidos nucleicos es traducido a un
lenguaje de aminocidos mediante una serie
de RNAs de transferencia (RNAt) cargados
cada uno con un aminocido determinado, el
que es especificado por el asa del anticodn,
segn un cdigo de lectura: el cdigo
gentico. Este cdigo presenta cuatro
caractersticas:
1. Est basado en tripletas, es decir, una
secuencia de 3 nucletidos determina un
aminocido.
2. El cdigo no se sobrepone y no tiene
espacios, es decir, que la informacin se
almacena en tripletas de bases seguidas.
3. El cdigo es universal. Es el mismo para
todos los organismos.
4. El cdigo es degenerado. Esto significa
que ms de una tripleta puede codificar
para un aminocido. Sin embargo, los
primeros dos nucletidos de una tripleta
son generalmente los mismos para un
aminocido determinado.
El proceso de la sntesis de
protenas puede dividirse en diferentes
etapas:
a) La activacin de los aminocidos, es
decir, la formacin de los aminoacil RNAt
por sintetasas especficas.
b) La iniciacin es la primera fase del
proceso; en ella se requiere la presencia
de tres protenas conocidas como
factores de iniciacin necesarios para
disociar los ribosomas en sus
subunidades y para acarrear el aminoacil
RNAt inicial (generalmente metionil RNAt
o su anlogo formilado). Adems, se
necesita la asociacin del RNA
mensajero con la seal de inicio de la
traduccin (generalmente la tripleta
AUG) a la subunidad pequea del
86
 ribosoma y del aminoacil RNAt inicial al
sitio peptidilo (P) del ribosoma. Todo este
complejo de protenas, de RNAs y de la
subunidad pequea del ribosoma
constituye el complejo de iniciacin, al
que se une la subunidad grande para
formar el ribosoma activo.
c) El alargamiento de la cadena
polipeptdica se realiza a partir de este
momento por la llegada del siguiente
aminoacil RNAt al sitio aminoacilo (A) del
ribosoma con la ayuda de un factor de
alargamiento asociado a GTP, que lo
coloca en el sitio adecuado con gasto de
un enlace de alta energa. Enseguida se
forma el enlace peptdico por la accin
de la peptidil transferasa que se
encuentra asociada a la subunidad
grande del ribosoma y el movimiento del
ribosoma sobre la molcula de RNAm
para colocar al nuevo peptidil RNAt en el
sitio P y dejar libre el sitio A del ribosoma
y continuar el alargamiento de la cadena.
El movimiento del ribosoma se realiza
por la accin de otro factor de
alargamiento (factor G) con hidrlisis de
una nueva molcula de GTP.
d) La terminacin se realiza cuando los
factores de terminacin (factores R)
encuentran una tripleta sin sentido (UAA,
UGA, UAG), lo que provoca la activacin
de la peptidil transferasa que hidroliza el
enlace peptidil RNAt y libera a la cadena
polipeptdica. El RNAt y el RNAm se
liberan al igual que el ribosoma, que
ahora puede volver a disociarse para
iniciar un nuevo ciclo de traduccin. El
polipptido liberado adquiere
estructuras secundaria y terciaria
correspondientes.
Esta descripcin de la sntesis de
protenas corresponde a protenas que
permanecern intracelularmente. En el caso
de los organismos eucariticos, las protenas
que sern excretadas, o que forman parte de
la membrana plasmtica, del retculo
endoplsmico, del aparato de Golgi o de los
lisosomas, se forman en ribosomas
firmemente unidos al retculo endoplsmico.
Conforme el polipptido se va sintetizando,
entra en cisternas endoplsmicas y es
transportado al aparato de Golgi donde se
concentra y se modifica, por ejemplo, con
adicin de azcares. Ms tarde estas
protenas son englobadas en vesculas que
viajan a la superficie celular y se fusionan
con la membrana para verter su contenido al
espacio extracelular. Las protenas cuyo
destino son los organelos intracelulares se
sintetizan en retculo endoplsmico y se
transportan a su destino mediante una seal
interna que es reconocida en dicho organelo.
B.4.2 Modificacin postraduccional y
degradacin de protenas.
B.4.2.1 Mencionar en qu
consisten las
modificaciones
postraduccionales:
plegamiento,
modificaciones cova-
lentes reversibles
(fosforilacin, acetilacin y
ADP ribosilacin) e
irreversibles
(glucosilacin,
hidroxilacin, protelisis
controlada, unin a grupos
prostticos) y cul es su
posible funcin.
sus B.4.2.2 Comprender el concepto
de vida media de una
protena.
B.4.2.3 Describir cules son los
procesos lisosomal y no
lisosomal, mediante los
que se degradan las
protenas.

87

Lectura recomendada
1. Goldberg AL. The cellular
chamber of pomm. Scientific
American. 2001; 284 (1): 56-61.
Las modificaciones postraduccionales de las
protenas pueden incluir desde el
plegamiento de los polipptidos con la ayuda
de protenas como las chaperonas y
chaperoninas, cambios en el extremo amino-
terminal y en aminocidos especficos,
procesamiento proteoltico, formacin de
puentes disulfuro y otras como la unin de
carbohidratos, metales, grupos prostticos,
etctera.
Una de las modificaciones ms
comunes en el extremo amino terminal que
se da en las clulas eucariticas es el de
remover los residuos de metionina, con las
que se inicia la sntesis de la misma; en las
clulas bacterianas se remueve la formilacin
presente en la metionina y, en algunos
casos, sta tambin es recortada. Adems
de este tipo de modificaciones que ocurren
en la secuencia del extremo amino terminal
de una protena, los aminocidos presentes
en la protena tambin se pueden modificar;
por ejemplo, los aminocidos serina, treonina
y tirosina pueden unir grupos fosfatos a sus
cadenas laterales, es decir, son susceptibles
de ser fosforilados en sus cadenas laterales.
Este tipo de transformaciones se usa por la
clula para comunicar cambios en el medio
ambiente que tienen como respuesta
modificaciones en la regulacin de vas
metablicas. Algunos aminocidos, como la
lisina, puede metilarse, otros como la
cistena, aadir grupos isoprenlicos u otros
lpidos a su cadena lateral, lo cual facilita la
unin de la protena con la membrana. Los
residuos de cistena pueden formar de
manera especfica puentes disulfuro.
Finalmente, muchas de las protenas son
sintetizadas de tal forma que requieren que
se les realice un corte de tipo proteoltico
para que adquieran su forma activa, como es
el caso de los zimgenos y las prohormonas.
El corte de la preprotena hacia su forma
biolgicamente activa se realiza por una
proteasa especfica y se encuentra regulado
por los diferentes eventos celulares.
Qu determina la estabilidad de las
protenas?
Todas las clulas contienen gran cantidad
de proteasas con diferente especificidad.
Estas las podemos dividir en tres grupos
generales:
1. Algunas proteasas cortan a la
protena en sitios especficos dando origen
a protenas maduras que son de menor
tamao que su protena precursora. Estas
proteasas participan en diferentes
procesos que incluyen el corte de la
secuencia seal de una protena de
exportacin y el procesamiento de
protenas citoslicas para dar origen a sus
formas maduras.
2. La internalizacion de protenas de
membrana (algunos receptores) en
respuesta a la unin del ligando genera
como primer evento la unin de clatrina
alrededor de la membrana; sta se
invagina al citoplasma y forma vesculas
rodeadas de clatrina. El destino de estas
vesculas son los endosomas temprano,
tardo y finalmente el lisosoma que es el
responsable de la degradacin de
macromolculas por medio de enzimas
hidrolticas.
3. Finalmente, la vida media de las protenas
vara entre algunos segundos, das y
excepcionalmente toda la vida (cristalino).
Para ser degradadas, las protenas son
marcadas para ser reconocidas por el
proteosoma, el cual es un complejo de alto
peso molecular que se encarga de la
degradacin de protenas citoslicas. Los
sustratos de este sistema son
88
 principalmente protenas que estn
alteradas en su plegamiento, por lo que el
proteosoma acta como un sistema de
control de calidad. Tambin est
involucrado en la degradacin de protenas
como un mecanismo de regulacin, por
ejemplo en el caso de las ciclinas para que
se complete el ciclo celular. El primer paso
en este sistema es el marcar a la protena
alterada (protena blanco) para que sea
degradada. La marca es una pequea
protena llamada ubiquitina, la cual se
une covalentemente a la protena blanco.
Son tres los componentes del sistema de
ubiquitinacin:
a) E1 enzima activadora de la ubiquitina,
dependiente de ATP
b) E2 enzima que conjuga a la ubiquitina
con la protena blanco
c) E3 ligasa de ubiquitina, selecciona a la
protena blanco
d) El complejo multiproteico del proteosoma
(20S) degrada rpidamente a las
protenas unidas a la ubiquitina. Este
complejo est formado por 14
subunidades apiladas una sobre otra y
que son las responsables de la actividad
proteoltica.
Para que la protena sea degradada
necesita tener varias ubiquitinas unidas.
C. Mutaciones y reparacin del dna
Al finalizar esta subunidad el alumno
conocer los diferentes cambios que puede
sufrir el DNA y sus consecuencias. Conocer
tambin los mecanismos de reparacin del
DNA.
C.1 Conocer los diferentes tipos de
mutaciones y la accin de algunos
agentes mutgenos: luz UV,
radiaciones, naranja de acridina,
bromuro de etidio, 5 bromouracilo.
C.2 Efecto de mutaciones en promotores,
operadores, genes reguladores,
intrones, exones y genes estructurales
y dar ejemplos: talasemias, anemia
de clulas falciformes, etctera.
C.3 Identificar los mecanismos que
existen para la reparacin del DNA:
uvr, fotoliasa, excinucleasa, sistema
SOS, entre otros.
Durante la duplicacin puede ocurrir
espontneamente un nmero pequeo de
errores en el orden o tipo de las bases
nitrogenadas. La probabilidad de uno de
estos errores puede incrementarse bajo la
influencia de diferentes agentes mutgenos
(qumicos o fsicos). Estos cambios en la
secuencia de bases nitrogenadas en el DNA
se conocen con el nombre de mutaciones.
Existen varios tipos de mutaciones:
las que cambian una base por otra
(sustitucin) y pueden ser de una base prica
por otra base prica o de una pirimidina por
otra pirimidina; lo que se conoce como
transicin. Si el cambio es de una purina por
una pirimidina, o viceversa, la mutacin se
conoce como transversin. Existe otro tipo de
mutaciones en las que hay un cambio de
marco de lectura para la traduccin. Hay dos
tipos de mutaciones de este tipo: la insercin,
en la que la entrada de uno o dos nucletidos
modifica el marco en que se leer el mensaje
por los ribosomas, y la supresin (delecin),
en la que la prdida de uno o dos nucletidos
provoca el mismo efecto.
En el caso de las mutaciones
puntuales, en las que slo hay cambio de
una base, la informacin gentica es
cambiada casi imperceptiblemente y las
mutantes pueden sobrevivir. Cuando cambia
un mayor nmero de bases, ocurren
alteraciones importantes en la secuencia de
89
un gen, lo que puede ser incompatible con la
existencia de esa mutante.
Con el fin de sobrevivir, la clula tiene
mecanismos para reparar el DNA daado. En
ese sentido la actividad exonucleasa
3 ; 5 de las DNA polimerasas, la de los
productos de algunos genes, como los uvr
ABC, los de la fotoliasa y la de la uracilo-DNA
glucosidasa desempean un papel
importante.
D. Niveles de regulacin de la
expresin gentica
Al finalizar esta subunidad el alumno
conocer los diferentes niveles de regulacin
gentica (en procariotos y en eucariotos), as
como los diversos mecanismos implicados en
ella.
D.1 Describir los niveles de posible control
de la expresin de la informacin
gentica (transcripcionales,
traduccionales, modificaciones
postranscripcionales y which genes are transcribed,
postraduccionales).
D.2 Conocer cmo la informacin que el
organismo recibe del medio exterior se
transforma en seales que se traducen
en diferentes acciones.
D.3 Conocer los posibles mecanismos
que operan en los diferentes niveles de
regulacin:
D.3.1 Cambios en la molcula del
DNA: prdida amplificacin y
rearreglo de genes.
D.3.2 Control de la transcripcin en
eucariotos (a nivel del rearreglo
de la cromatina, de la iniciacin y
a nivel de los mecanismos de
accin de los receptores
intracelulares).
D.3.3 Control de modificaciones del
transcrito primario.
D.3.4 Control de la traduccin por la
presencia del casquete, de
secuencias especiales, vida
media del RNAm.
D.3.5 Regulacin del proceso de
sntesis proteica.
D.4 Revisar un modelo de regulacin en
procariotos y otro en eucariotos
(opern de lactosa y regulacin de la
expresin de los genes de las
inmunoglobulinas).
D.5 Conocer la relacin que existe entre
el ciclo celular, el tipo de clula y los
procesos antes descritos, y el proceso
de diferenciacin celular.
Lecturas recomendadas
1. Etchergary P. Rhytmic histone
acetylation underlies
transcription in the mammalian
circadian clock. Nature. 2003;
421: 177-182.
2. Pombo A. Cellular genomics:
when and where? TIBS. 2003;
28 (1): 6-9.
3. Konberg RD. Eucaryotic
transcriptional control. TIBS.
Millenium Issue 1999; M46-M48.
4. Papin JA. Metabolic pathways in
the post genome era. TIBS.
2003; 28(5): 250-258.
5. Le Hir H, Nott A, Moore M. How
introns influence and enhance
eukaryotic gene expression.
TIBS. 2003; 28(4): 215-220.
Las bacterias son capaces de controlar la
expresin de las enzimas necesarias para
utilizar nutrientes del medio, o bien, aquellas
enzimas requeridas para la sntesis de
biomolculas que intervienen en su
funcionamiento y proliferacin. Estos
cambios de expresin ocurren con gran
rapidez y precisin y fueron el primer ejemplo
claro de la manera en que se regula la
90
expresin gnica. Cuando una enzima se
expresa en respuesta a una necesidad
bacteriana se habla de un proceso de
induccin gnica, mientras que, cuando su
expresin se apaga, se habla de represin
gnica.
Los cambios en la expresin de un
gen estn controlados por la interaccin de
su regin reguladora con diversas protenas
nucleares que favorecen o interfieren con la
unin de la RNA polimerasa al sitio de
iniciacin de la transcripcin. El ejemplo ms
sencillo de esta regulacin es la manera
como se controla la expresin de un conjunto
de genes, llamado opern de lactosa, cuya
expresin depende de la presencia de
lactosa en el medio; normalmente, la
expresin de este opern se encuentra
reprimida. El gen regulador codifica para una
protena que se une con gran afinidad a la
regin del DNA que controla la expresin del
opern y que previene que la RNA
polimerasa pueda iniciar la transcripcin. Por
su funcin, a esta protena se le denomina el
represor del opern de lactosa. La presencia
de lactosa, en ausencia de otros nutrientes,
favorece que una pequea porcin de dicha
lactosa sea transformada enzimticamente a
un metabolito que puede unirse al represor
con gran afinidad; el resultado de esta unin
es una inactivacin alostrica del represor. A
este metabolito de la lactosa se le denomina
inductor del opern ya que, al disminuir la
cantidad de represor funcional, favorece de
manera indirecta la iniciacin de la
transcripcin de los otros genes del opern.
Un nivel ms de control queda de manifiesto
cuando las bacterias reprimen la expresin
del opern de lactosa cuando en el medio
aparecen otros nutrientes como la glucosa. A
este efecto represor de la glucosa se le
conoce como represin catablica y ocurre
gracias a que la presencia de glucosa reduce
los niveles intracelulares de AMP cclico
(cAMP). Normalmente, el cAMP se une a una
protena denominada protena receptora de
cAMP (CRP, tambin denominada CAP) y
forma un complejo que se une a la regin
reguladora de los operones y favorece su
transcripcin. Por tanto, cuando la glucosa
reduce los niveles de cAMP, la protena CRP
pierde su afinidad por la regin reguladora
del opern y se interrumpe la expresin.
Una forma alternativa de regular la
expresin gnica es acoplar la transcripcin a
la traduccin lo cual favorece la terminacin
temprana de la transcripcin. Este proceso
se conoce como atenuacin y el opern de
triptofano constituye un buen ejemplo.
Cuando hay triptofano en el medio se
favorece la terminacin de la transcripcin y
el opern nunca logra expresarse; sin
embargo, cuando el triptofano se agota, la
transcripcin contina y se expresan las
enzimas necesarias para su sntesis. La
expresin de otros operones necesarios para
la sntesis de aminocidos, como histidina,
fenilalanina, leucina, treonina e isoleucina, es
controlada por atenuacin.
Mientras que en las bacterias
cualquier individuo puede expresar todos sus
genes, en las clulas animales esto no
siempre es cierto. Por ejemplo, todas las
clulas del cuerpo humano poseen la misma
informacin gentica codificada
5
aproximadamente en 10 genes distintos; sin
embargo, no hay ningn tipo celular que
exprese todos estos genes simultneamente.
De hecho, cualquier clula expresa slo un
nmero reducido de estos genes, la gran
mayora de los cuales codifica para protenas
necesarias para las funciones generales de
cualquier tipo celular. La expresin de estos
genes es lo que hace similares a los distintos
tipos celulares; un ejemplo claro de este tipo
de genes lo constituye los que codifican para
las enzimas glucolticas, protenas que se
expresan de manera constitutiva como
resultado de que las regiones reguladoras de
estos genes responden a factores de
transcripcin presentes en todas las clulas.
Los transcritos primarios son editados
91
inmediatamente para dar origen al RNA
mensajero maduro que es traducido por
ribosomas libres para sintetizar un pptido
que, al adquirir su conformacin nativa,
posee actividad enzimtica. As como la
expresin de los genes constitutivos confiere
similitudes a los distintos tipos celulares, la
expresin de genes tejido especfico es la
que le da a cada tipo celular sus
caractersticas. Los hepatocitos, por ejemplo,
expresan albmina, pero no miosina, como lo
hacen las clulas musculares, ni tampoco
expresan las enzimas que permiten la
sntesis de neurotransmisores como lo hacen
las neuronas. La expresin de estos genes
tejido-especfico est controlada por sus
regiones reguladoras las cuales requieren de
factores de transcripcin especiales que
aparecen en dos etapas. En la primera, la
expresin de estos factores ocurre en
respuesta a estmulos hormonales o de
factores de crecimiento durante
diferenciacin celular. En la segunda, la
presencia de estos factores de transcripcin
se hace independiente del estmulo hormonal
y de factores de crecimiento o diferenciacin
y se convierte en protenas que se expresan
de manera permanente en la clula
diferenciada. Muchas de las hormonas que
activan este proceso requieren de receptores
de membrana y sistemas de transduccin
que llevan la seal al ncleo a travs del
citoplasma. Otros, como las hormonas
esteroides, se unen a receptores nucleares
que sirven como factores de transcripcin.
En algunas ocasiones la regulacin
implica un cambio de la secuencia del DNA,
como se ejemplifica a continuacin. En el
humano, como en todos los organismos
diploides, la mayora de los genes est
presente en dos copias, una de origen
paterno y una de origen materno. Algunas
veces, el origen paterno o materno del gen
determina que este gen pueda ser transcrito
o no, fenmeno al que se le denomina
impronta gentica. El resultado de esta
inactivacin es que la expresin del gen se
reduce a la mitad, ya que slo una de las dos
copias es activa, como es el caso de los
genes localizados en el cromosoma X. En
contraposicin, existen genes que pueden
estar presentes en un mayor nmero de
copias como resultado de una amplificacin;
tal es el caso de los genes que codifican para
los RNA ribosomales, de los cuales las
clulas requieren muchas copias. En genes
que codifican para los anticuerpos en clulas
B y los receptores de las clulas T ocurre un
rearreglo de las secuencias primarias del
DNA, lo que es responsable de la gran
diversidad de antgenos naturales y
artificiales que pueden ser reconocidos por el
sistema inmune. Este proceso es controlado
por los distintos factores que regulan la
maduracin de las clulas B y las clulas T.
Adems de la capacidad de
transcribir o no ciertos genes con mayor o
la menor eficiencia, existen otros niveles en los
que se puede regular la funcin del producto
final por medio de la modulacin tanto en
cantidad como en calidad. El primer nivel de
regulacin se refiere al control de la vida
media de los RNA mensajeros determinada
por la existencia de secuencias en los
extremos no codificantes que regulan su
velocidad de degradacin. Durante el
proceso de maduracin de los mensajeros,
en el cual se eliminan intrones, tambin
pueden eliminarse uno o varios exones y dar
lugar a una mayor diversidad de protenas; a
este proceso se le denomina edicin
alternativa. Una vez que el mensajero ha
madurado, existen varios mecanismos que
pueden aumentar o disminuir la eficiencia
con la que los ribosomas traducen la
informacin a un pptido. En muchas
ocasiones la protena tiene un destino final
diferente al citoplasma, el cual puede ser
mitocondrial, lisosomal, de membrana celular
o una protena de secrecin; esta informacin
se encuentra codificada en el extremo amino
terminal del pptido naciente y puede
92
constituir un punto ms de control. El ltimo
punto de regulacin consiste en aumentar o
disminuir la velocidad de degradacin de las
protenas por el sistema de la ubiquitina; este
mecanismo nuevamente contribuye a
controlar la cantidad del producto gnico. A
pesar de la diversidad de los niveles de
regulacin de la expresin gnica, los
mecanismos ms comunes son los que
modulan la eficiencia de la transcripcin y los
que modulan la actividad biolgica por
modificaciones postraduccionales, entre los
que destacan la fosforilacin y la
desfosforilacin.
Hemos mencionado los rasgos ms
sobresalientes de la manera en que las
clulas regulan la expresin gnica, pero an
es poco lo que se sabe con respecto a cmo
se integran e interaccionan. Por ejemplo, an
resulta difcil explicar cmo distintos factores
de crecimiento, con diferentes receptores de
membrana y sistemas de transduccin,
estimulan a los mismos factores de
transcripcin, pero conducen a respuestas
celulares diversas. El gran nmero de niveles
a los cuales se puede regular la expresin
gnica y las mltiples combinaciones y
secuencias en las que pueden presentarse
sugiere una gran complejidad. El resultado
final de esta complejidad determina al tipo de
genes que participan y la secuencia en la que
se expresan para dar origen a los diferentes
tipos celulares.
F. Virus, oncogenes y
transformacin
Al finalizar esta subunidad el alumno
conocer la estructura general de los virus,
su clasificacin y su posible implicacin en la
transformacin celular. Conocer la relacin
entre la funcin de los productos de los
oncogenes y la transformacin celular.
E.1 Describir la estructura general de los
virus.
E.2 Conocer la clasificacin de los virus
con base en su cido nucleico y dar
ejemplos de cada uno.
E.3 Definir los conceptos de oncogn y
protooncogn.
E.4 Revisar algunos mecanismos por los
cuales un protooncogn se transforma
en oncogn, como:
E.4.1 Insercin de un promotor o de un
intensificador (amplificador).
E.4.2 Mutacin puntual.
E.4.3 Traslocaciones cromosmicas.
E.4.4 Amplificacin.
E.5 Estudiar el producto de algunos
oncogenes como son: src, sis, erb B,
ras y myc y establecer la relacin
entre la funcin de dichos productos y
la transformacin celular.
Los virus son partculas subcelulares
constituidas por cidos nucleicos en forma de
DNA o de RNA de cadena doble o sencilla,
protenas y, en ocasiones, membranas
lipdicas. Su genoma compacto est
constituido por un reducido nmero de genes
que codifican para protenas estructurales de
la cpside, enzimas de duplicacin, as como
enzimas y secuencias de DNA que permiten
la insercin del genoma viral al genoma de la
clula husped, entre otros.
Los virus son incapaces de
multiplicarse de manera autnoma, pero
pueden hacerlo cuando se encuentran en el
interior de una clula. En la mayora de los
casos la infeccin viral conduce a la
multiplicacin viral a expensas de la clula
infectada. El dao ocasionado al destruir las
clulas es responsable de una gran variedad
de enfermedades de menor gravedad, como
la influenza, o enfermedades ms serias,
como la viruela, e incluso enfermedades
mortales, como el sndrome de
inmunodeficiencia adquirida. En algunos
93
casos la infeccin viral se asocia a una
mayor frecuencia en el desarrollo de tumores
y cncer, como es el caso del virus del
papiloma y el cncer cervicouterino. Es
interesante notar que un tipo de virus slo
puede infectar a un restringido tipo de clulas
y a ninguna otra, por ejemplo, el virus del
herpes infecta las clulas de los nervios
perifricos. A este fenmeno de especificidad
de infeccin se le denomina tropismo y se
debe a que el virus y su clula blanco
interactan por la unin de una protena de la
envoltura viral con un antgeno presente en la
membrana celular.
Las enfermedades por virus son
difciles de tratar debido a que, fuera del
momento en que las partculas virales viajan
hasta sus clulas blanco y penetran en su
interior, no pueden ser neutralizadas por
anticuerpos.
El problema del reconocimiento de
antgenos virales por anticuerpos se dificulta
si uno considera que en poco tiempo emerge
un gran nmero de partculas virales de una
clula infectada y que el tiempo en que se
logran ttulos protectores de anticuerpos es
relativamente largo. A estas dificultades se
suma una caracterstica gentica de los virus
que les permite tolerar cambios de
secuencias o incluso eliminar o adquirir
nuevos genes a lo largo de su multiplicacin,
lo que les confiere una gran diversidad
gentica. Estos cambios en secuencias son
particularmente nocivos cuando ocurren en
regiones del DNA que codifican para los
antgenos que son reconocidos por
anticuerpos.
Las protenas virales que se
seleccionan son aquellas que continan
teniendo la funcin requerida por el virus,
pero que no pueden ser reconocidas por los
anticuerpos. La velocidad con la que estos
cambios se propagan a toda la poblacin
viral es sorprendentemente rpida y
previenen el uso eficaz de vacunas contra
varias enfermedades virales. Adems de los
anticuerpos, el organismo produce factores
proteicos solubles llamados interferones que
aceleran la muerte de la clula infectada e
interrumpen la expresin de protenas virales.
El que los virus se aslen del sistema inmune,
su ciclo de vida y su gran diversidad
gentica, son responsables de que no haya
medidas eficaces para su eliminacin y son
la causa de su gran impacto, tanto en la
salud pblica, como en la economa
agropecuaria y agrcola.
En su mayora, los virus son capaces
de activar la maquinaria de sntesis del DNA
de la clula infectada, evento ligado al ciclo
celular y al control mismo de la proliferacin;
al interferir con este aspecto de la vida
celular los virus aseguran su multiplicacin.
No es sorprendente entonces que en
ocasiones los virus hayan incorporado a su
reducido genoma versiones de genes
celulares que controlan la proliferacin
celular. Un ejemplo de este tipo de genes es
ras, que codifica para una protena G
monomrica que transduce la seal
proliferativa de diversos factores de
crecimiento. La versin celular de ras (c-ras)
posee homlogos virales (v-ras), la mayora
de los cuales presenta alteraciones que dan
lugar a una protena permanentemente activa
y que no est sujeta a la regulacin celular.
As, mientras que c-ras slo entra en funcin
cuando los receptores o factores de
crecimiento son activados, v-ras
constantemente obliga a la clula a proliferar.
Cuando los virus, en lugar de lisar a una
clula, integran su genoma al material
gentico de sta, los genes virales pueden
expresarse de manera constitutiva; si esto
ocurre con genes como v-ras, se favorece
una proliferacin celular descontrolada y se
dice que la clula ha sido transformada. Hay
protenas virales que pueden interferir con la
proliferacin celular, como el antgeno grande
T del adenovirus o las protenas E7 del virus
del papiloma.
94
 No slo la integracin viral puede dar G. Tcnicas de manipulacin
origen a la expresin de genes que del DNA
promueven la proliferacin celular, tambin la
aparicin de mutaciones espontneas puede Al finalizar esta subunidad el alumno
dar origen a versiones de c-ras que al igual conocer las diferentes tcnicas de
que v-ras estimulan continuamente la manipulacin del DNA y sus posibles
proliferacin. A estas versiones mutadas se aplicaciones.
les denomina oncogenes, ya que estn
asociadas al desarrollo de neoplasias, F.1 Sealar la importancia de la
tumores y diversos tipos de cncer. A los tecnologa del DNA recombinante en el
genes celulares que al ser mutados pueden campo de la medicina.
dar origen a oncogenes se les denomina
F.2 Definir qu son las enzimas de
protooncogenes; a stos pertenece una larga
restriccin y conocer cul es su
lista de receptores y protenas de
utilidad y funcin en el estudio y la
transduccin de diferentes factores de
manipulacin del DNA.
crecimiento y protenas que controlan el ciclo
celular. Mientras que los protooncogenes son F.3 Definir qu es un vector de clonacin
todos parte de las seales que activan la y un vector de expresin; tomar como
proliferacin, tambin existen genes cuyos ejemplo los plsmidos.
productos sirven para frenarla. A estos frenos F.4 Conocer en qu consiste el
de la proliferacin se les denomina genes procedimiento bsico de la
supresores de tumores o antioncogenes. Si metodologa de clonacin y cul es su
un gen supresor de tumores se muta y pierde utilidad, al tomar en cuenta:
su funcin, el resultado puede compararse
con la prdida de un freno de la proliferacin F.4.1 Cmo se fragmenta el DNA.
celular. Cuando esto ocurre tambin puede F.4.2 Cmo se unen los fragmentos de
presentarse un crecimiento descontrolado, DNA a los vectores.
ahora como resultado de la falta de un F.4.3 Cmo se introduce el DNA
mecanismo de freno. recombinante en las clulas
Las clulas transformadas poseen hospederas (transfeccin).
mutaciones, tanto en protooncogenes como F.4.4 Cmo se seleccionan las clulas
en genes supresores de tumores, lo que da que contienen DNA
como resultado una seal permanente de recombinante.
proliferacin, por un lado, y la falta de F.4.5 Cul es la utilidad del DNA
mecanismos de freno, por el otro. Esta recombinante.
combinacin hace que estas clulas F.5 Conocer los mecanismos de
presenten una duplicacin descontrolada y recombinacin in vitro (ingeniera
mucho ms veloz que las clulas normales, gentica).
lo que, en parte, es responsable del
F.6 Conocer el significado de los tminos:
crecimiento desmesurado de las masas
transgen, sobreexpresin, knock out, huella
tumorales.
digital del DNA y polimorfismo.

Las tcnicas modernas de biologa molecular

han permitido un gran control sobre la
caracterizacin y manipulacin del material

95
gentico tanto de DNA como de los distintos
tipos de RNA. Debido a su especificidad y
gran capacidad de deteccin, estas tcnicas
han tenido un gran impacto en la medicina.
Inicialmente, la biologa molecular se ha
aplicado al diagnstico de entidades
patolgicas y para determinar la presencia de
agentes infecciosos como microorganismos y
virus. En la actualidad se estudia con gran
inters la posibilidad de una teraputica
gnica que pueda corregir alteraciones
fisiopatolgicas derivadas de la prdida de la
funcin parcial o total de un gen; esto abre
una nueva era en las aplicaciones de la
biologa molecular en la medicina.
La biologa molecular recibi un gran
impulso con el descubrimiento de entidades
circulares de DNA llamadas plsmidos que,
adems de poseer genes que confieren
resistencia a los antimicrobianos, pueden
contener y expresar muchos otros genes.
Dos herramientas cruciales de la biologa
molecular son la posibilidad de cortar el DNA
con enzimas de restriccin, endonucleasas
que slo cortan secuencias especficas, y el
uso de ligasas, que generan un enlace
covalente entre los extremos obtenidos por la
accin de las enzimas de restriccin. Estos
dos principios bsicos permiten remover o
insertar cualquier porcin de DNA contenida
entre dos sitios de restriccin y se dice que
se ha clonado esta secuencia de DNA. La
clonacin hace posible introducir en un
plsmido, no slo secuencias de DNA de
otros plsmidos, sino tambin de cualquier
origen: viral, bacteriano, animal o vegetal. La
reciente aplicacin de transcriptasas reversas
de origen viral, enzimas que sintetizan DNA
complementario mediante RNA como molde,
y de polimerasas termostables que permiten
amplificar un segmento de DNA, ha
simplificado an ms el uso de tcnicas de
biologa molecular.
El tener secuencias de DNA o DNA
complementario al RNA mensajero ha
resultado de gran utilidad para el estudio de
genes y RNA mensajeros. Los fragmentos de
DNA obtenidos de la clonacin en plsmidos,
o por transcripcin reversa y amplificacin,
pueden unirse a nucletidos marcados con el
istopo radiactivo del fsforo 32P, o
"derivatizados" con molculas fluorescentes;
la marca permite seguir a estas molculas
que sirven como sondas para localizar a sus
secuencias complementarias. La gran
especificidad y elevada capacidad de
deteccin de la hibridacin de la sonda con
su secuencia complementaria permite el
anlisis de DNA para detectar la presencia y
nmero de copias de un gen (tcnica
denominada Southern); tambin se aplica en
la identificacin y la cuantificacin de RNA
mensajeros (tcnica a la que se le denomina
Northern).
Los segmentos de DNA cuyo estudio
ha resultado de mayor inters son aquellos
que contienen toda la informacin de un gen
o de las regiones reguladoras. Sin embargo,
introducir un gen o un promotor a unas
cuantas molculas de plsmido sera
problemtico para estudios bioqumicos,
genticos y estructurales por la reducida
cantidad de material. Esta limitacin haba
sido resuelta previamente, ya que los
plsmidos pueden ser introducidos a
bacterias a travs del proceso de
transformacin. Normalmente los plsmidos
contienen secuencias que les permiten
multiplicarse una vez que estn dentro de
una bacteria; a estas secuencias se les
denomina origen de duplicacin. Gracias a
que los plsmidos contienen genes que
confieren resistencia a los antimicrobianos,
las bacterias que han sido transformadas con
un plsmido pueden distinguirse de las que
no lo han sido al hacerlas crecer en medio de
cultivo que contiene al antimicrobiano en
cuestin; los antimicrobianos ms utilizados
son la ampicilina y la kanamicina. Este simple
proceso de seleccin logra dos resultados
prcticos: por una parte, elimina a las
bacterias no transformadas y, por otra,
96
asegura la multiplicacin masiva del plsmido
que se duplica junto con el genoma
bacteriano. El resultado es un cultivo de
bacterias con un alto contenido de plsmidos
y, por tanto, del segmento de DNA que se
desea estudiar. La multiplicacin del
segmento de DNA por estudiar asegura
suficiente material para cualquier otro
propsito.
A los plsmidos que sirven para
insertar DNA ajeno al plsmido y permiten su
multiplicacin se les denomina vectores de
clonacin, pero existen tambin plsmidos
ms complejos en los que el sitio en el que
se puede insertar el DNA exgeno se
encuentra frente a una regin reguladora que
permite la sntesis de RNA mensajero. A
estos plsmidos se les llama vectores de
expresin, ya que permiten que el DNA sea
transcrito a RNA; estos plsmidos pueden
presentar regiones reguladoras reconocidas
por bacterias o por clulas de animales.
Hemos dicho que la transformacin consiste
en introducir el DNA a una bacteria y
expresarlo; cuando esto ocurre en una clula
eucaritica: levadura, clula animal o vegetal,
el proceso se denomina transfeccin. Una
aplicacin particularmente til de la biologa
molecular se ha derivado del uso de vectores
de expresin en bacterias y clulas animales.
La expresin de protenas exgenas por
bacterias y levaduras ha permitido obtener
cantidades suficientes para estudios
bioqumicos, estructurales e, incluso, ha sido
la principal fuente para la cristalizacin. La
transfeccin y la expresin de protenas
exgenas en clulas de mamferos y en
clulas vegetales ha permitido identificar
versiones de genes que contienen
alteraciones en sus secuencias que dan
como resultado protenas con una funcin
alterada. Con esta aproximacin se han
identificado mutaciones responsables de
enfermedades como el cncer y la diabetes.
Una aplicacin sorprendente ha sido la de
identificar la funcin de genes recin
descubiertos que al ser insertados en
vectores de expresin no slo han permitido
obtener protenas puras en cantidades
suficientes para su caracterizacin
bioqumica, sino tambin han dado la
oportunidad de conocer su funcin, al
expresarlas en un ambiente celular normal.
97
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

I
CONCEPTOS TERICOS INICIALES

98
EL MTODO CIENTFICO
La cultura no puede comprenderse sin hacer
referencia al mtodo cientfico. La ciencia no
es un sector de la civilizacin que pueda
separarse del resto de ella, sino un esfuerzo
creativo con su propio sistema de valores
que, poco a poco, ha llegado a formar parte
de los valores generales en la sociedad
moderna.
La ciencia est basada en el mtodo
cientfico; su capacidad y limitaciones estn
definidas por l y dondequiera que el mtodo
cientfico sea aplicable, puede haber ciencia.
El origen de la ciencia se pierde en
el ms remoto pasado. Mucho antes de que
existieran los registros histricos de la
humanidad, la magia primitiva dio origen
tambin a la religin y, mucho antes, al arte.
Ciencia, religin y arte difieren en mtodos,
pero coinciden en metas: comprender e
interpretar al universo y la interaccin de sus
partes para promover el progreso material y
espiritual de la humanidad.
El objetivo de la ciencia es hacer
teoras. Las teoras cientficas explican los
hechos y predicen con alto grado de
probabilidad la ocurrencia de hechos
similares.
La secuencia del mtodo cientfico
es: observar, plantear problemas, hacer
hiptesis, experimentar y formular teoras.
Cada uno de los procesos del mtodo
cientfico, tomado aisladamente, forma parte
de la actuacin cotidiana de todos los seres
humanos, pero, en su conjunto, utilizados
sistemticamente, constituyen la ms
poderosa herramienta que ha diseado la
humanidad para conocer y controlar a la
naturaleza.
Observacin
El mtodo cientfico se inicia con la
observacin. Lo que no puede observarse,
directa o indirectamente por medio de
instrumentos o de modificaciones de la
conducta, no puede ser investigado por la
ciencia.
La observacin debe ser repetida en
forma independiente por observadores
diversos. Las observaciones nicas, que no
se repiten ni actual ni potencialmente, no
pueden ser objeto de estudio cientfico.
Problema
Despus de que una observacin se hace y
se repite, el segundo tiempo del mtodo
cientfico es plantear un problema; en otras
palabras, se hacen preguntas sobre la
observacin: Cmo es que los hechos
ocurren de esta manera? Qu es lo que
determina su desarrollo, evolucin y trmino?
Es en este punto donde el cientfico difiere
del hombre comn; ambos hacen
observaciones pero slo el primero muestra
curiosidad cientfica sobre ellas.
Plantear un problema es hacer
preguntas, pero, hacer buenas preguntas al
igual que hacer buenas observaciones es
un arte muy preciado. Para que tengan valor
cientfico los problemas deben ser
significativos y tener respuestas
comprobables por tcnicas apropiadas.
Las preguntas que se inician por
cmo? o qu? se resuelven mejor,
cientficamente, que las que comienzan con
por qu?, pero los investigadores pueden
formular los problemas para que adopten la
forma adecuada.
99
Hiptesis
Una vez planteado un problema adecuado, el
cientfico procede al tercer tiempo del
mtodo: formular una explicacin o hiptesis.
Por supuesto que un problema puede tener
varias explicaciones posibles, pero slo una
de ellas es la verdadera. Las respuestas
casuales a un problema son generalmente
errneas; pero el cientfico con su intuicin,
su experiencia y, a veces por incidentes
afortunados, acierta en la hiptesis. Esto se
sabe al emplear el cuarto tiempo del mtodo
cientfico.
Experimentacin
El objetivo de la experimentacin es
comprobar la validez de la hiptesis. Si los
experimentos demuestran que la hiptesis es
errnea, se hace una nueva y se la sujeta a
comprobacin. El procedimiento puede
prolongarse por mucho tiempo al formular
nuevas hiptesis y tratar de comprobarlas
experimentalmente.
La situacin ideal en la
experimentacin consiste en reducir el
problema a dos alternativas posibles que
puedan contestarse con claridad, afirmativa o
negativamente; pero en muchas ocasiones
los resultados del experimento slo conducen
a soluciones parciales.
La experimentacin es la parte ms
ardua del mtodo cientfico. Cada
experimento es un caso en s mismo; el
conocimiento anterior y la experiencia
ayudan tcnicamente para decidir la forma en
que una hiptesis puede ser comprobada
experimentalmente. La eleccin correcta del
experimento y su interpretacin es lo que
separa al genio del aficionado a la
investigacin.
Teora
Las pruebas experimentales son la base del
quinto peldao, final del mtodo cientfico: la
formulacin de una teora. Cuando una
hiptesis se ha sostenido por pruebas
convincentes, obtenidas por muchos
laboratorios e investigadores independientes,
se propone una teora que consiste en una
afirmacin con lmites mucho ms amplios
que los experimentos en que se basa y que
expresa la creencia o probabilidad de que
sea valedera en cualquier combinacin de
sujeto, tiempo y lugar en donde se renan
condiciones similares.
Desde este punto de vista una buena
teora permite hacer predicciones. Las
predicciones cientficas tienen siempre un
soporte experimental muy slido y aun
cuando no afirman que un hecho ocurrir con
certidumbre, s plantean que tiene una gran
probabilidad de ocurrir.
Unas pocas teoras han probado su
validez tan universalmente, y expresan tan
alto grado de probabilidad, que se las conoce
con el nombre de leyes naturales. Por
ejemplo, ninguna excepcin se conoce al
hecho de que una manzana desprendida de
su rbol caer al suelo si no es sostenida de
alguna manera. La ley de gravitacin se basa
en esta observacin.
Las leyes naturales orientan la
investigacin cientfica. Si en el anlisis de un
hecho se elimina lo imposible, aquello que es
contrario a las leyes naturales, lo que resta,
aunque sea muy raro y poco probable, debe
ser la verdad. La verdad son los hechos que
nos rodean. Aunque acontecen sin cesar a
nuestro alrededor, muy pocas personas y
muy pocas veces se hace un anlisis
cientfico de ellas.
100
 Si se emplean las leyes naturales
para marcar lo imposible, con el resto posible
se hacen nuevas hiptesis, se comprueban
por experimentos, se formulan nuevas
teoras y se acumula el conocimiento
cientfico que ha permitido al hombre situarse
en un Universo observable que tiene un radio
(r) de millares de millones de aos luz y que
incluye un microcosmos tan pequeo que se
expresa en rdenes de magnitud menores de
20
10 m y adquirir un dominio incuestionable
sobre su ambiente.
SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES
(SI)
Los resultados de todos los experimentos en
que se basan las teoras cientficas y las
leyes naturales derivan de las mediciones de
objetos o de sus propiedades.
Medir es comparar magnitudes; toda
medicin comprende un nmero y una
unidad. La unidad identifica la clase de
dimensin y el nmero expresa las veces que
la unidad est contenida en el objeto o la
propiedad medida. La medicin es un arte
muy refinado; en la actualidad emplea
instrumentos muy complejos y alcanza una
precisin extraordinaria.
Un sistema de medidas preciso
requiere unidades bien definidas. La Oficina
Internacional de Pesas y Medidas revisa
peridicamente el sistema para incorporar los
adelantos tecnolgicos y mejorar la exactitud
y precisin de las medidas.
Se han hecho muchos esfuerzos
para desarrollar un sistema de unidades
universalmente aceptable. El producto de
estos esfuerzos es el Sistema Internacional
de Unidades (cuya abreviatura es SI en todos
los idiomas). A partir del creciente
intercambio de informacin cientfica este
sistema ha sido aceptado por toda la
comunidad y en especial en medicina. El SI
es esencialmente una versin ampliada del
sistema mtrico decimal.
El SI comprende tres tipos de
unidades: las unidades de base, las unidades
derivadas, las unidades suplementarias y una
serie de prefijos que permiten tomar mltiplos
y submltiplos decimales de las unidades
utilizadas.
Unidades de base
El SI consta de siete unidades bsicas que
son dimensionalmente independientes. Las
unidades bsicas estn anotadas en el
cuadro I.1, junto con los smbolos que hay
que utilizar para indicar estas cantidades.
Unidades SI derivadas
Al multiplicar una unidad de base por s
misma o al asociar dos o ms unidades de
base por una simple multiplicacin o divisin,
se puede formar un amplio grupo de
unidades llamadas SI derivadas (cuadro I.2).
Ejemplo: la unidad derivada de volumen es el
metro elevado al cubo, o metro cbico.
La combinacin de unidades de base
para formar las unidades derivadas es una
de las grandes ventajas del SI. En el SI no es
preciso memorizar factores de conversin; el
factor a que se recurre para formar las
unidades derivadas es 1 (unidad), cualidad
que hace al SI coherente.
101
Cuadro I.1. Unidades bsicas del SI. signo de puntuacin alguno (ejemplo:
Magnitud Nombre Smbolo nanmetro y no nano-metro).
Longitud metro m El smbolo del prefijo se antepone
Masa kilogramo kg tambin directamente al smbolo de la
Tiempo segundo s unidad, sin espacios intermedios ni signos de
Cantidad de mol mol
sustancia puntuacin (ejemplo: mm, milmetros; nmol,
9
Temperatura kelvin K nanomol que equivale 10 moles).
termodinmica Cuadro I.3. Unidades SI derivadas con
Intensidad luminosa candela cd nombres especiales
Definicin
Intensidad de ampere A Magnitud Nombre Smbolo
corriente elctrica Fuerza Newton Nm. kgm/s
2

Presin Pascal Pa N/m2

Cuadro I.2. Algunas unidades derivadas
simples Trabajo; energa; cantidad Joule J Nm
de calor
Magnitud Nombre Smbolo Carga elctrica; cantidad Coulomb C
A.s
2
Superficie metro m
cuadrado de electricidad
3 Potencia; flujo energtico Watt W J/s
Volumen metro m
cbico Tensin elctrica; Volt V W/A
3
Concentracin mol/metro mol/m potencial elctrico
de sustancia cbico
Velocidad metro por m/s Temperatura Celsius Grado C
K273,16
segundo Celsius

Cuadro I.4. Prefijos SI.

A cierto nmero de unidades SI derivadas se
les ha dado nombres especiales, en su Factor Prefijo Smbolo
18
mayor parte tomados de los hombres de 10 exa E
15
ciencia que han hecho contribuciones 10 Peta P
12
notables al conocimiento del tema de estudio 10 Tera T
9
correspondiente (cuadro I.3). 10 Giga G
6
10 Mega M
3
Prefijos SI 10 Kilo k
3
10 Mili m
Cuando las unidades SI derivadas resultan 10
6
Micro
demasiado grandes o demasiado pequeas 10
9
Nano n
para determinados fines (sera 10
12
Pico p
desproporcionado, por ejemplo, utilizar el 15
10 Femo F
metro cbico para expresar el volumen de 18
10 ato q
sangre del cuerpo humano), el SI contiene
una serie de prefijos que permiten formar
Unidades no pertenecientes al SI
mltiplos y submltiplos decimales de las
unidades SI (cuadro I.4).
Ciertas unidades ajenas al SI son de uso tan
Los prefijos SI se anteponen
frecuente que en cierto modo forman parte
directamente al nombre de la unidad, sin

102
de nuestra vida cotidiana y se acord
utilizarlas juntamente con el SI (cuadro I.5). La multiplicacin de las unidades se
Algunas de estas unidades, en indica con un punto a nivel o elevado
especial el litro y las unidades de tiempo, son (newton.metro=N.m) o un espacio (N m). La
de gran importancia en las profesiones de la divisin se puede indicar mediante una barra
salud. Conviene sealar que el litro es un oblicua o por exponentes negativos:
nombre especial que se da al submltiplo, 1
1/s = s
decmetro cbico, de la unidad SI de
volumen. mol por metro cbico puede expresarse por:
3 3
mol/m o mol.m
Cuadro I.5. Algunas unidades no El SI tiene muchas ventajas y
pertenecientes al SI. algunas desventajas, pero se reconoce la
Magnitud Unidad Smbolo Valor en realidad del esfuerzo para implantarlo como
SI una forma de expresar los datos cientficos,
Tiempo minuto min 60 s comprensible para todos. Se recomienda
hora H 3 600 s desechar las unidades que no pertenecen al
SI a la mayor brevedad posible, pero la
Da D 86 400 s
realidad del uso de otras unidades en textos
Volumen Litro loL 10-3 m3
y comunicaciones cientficas no se puede
Energa calora cal 4.185J
negar. En este Manual las unidades SI se
anotarn entre parntesis cuando se juzgue
conveniente.

Reglas de escritura de smbolos y cifras

Los smbolos de las unidades no toman la
terminacin del plural (ejemplo: dos mililitros
se escribe 2 ml, y no 2 mls).
Los smbolos de las unidades jams
van seguidos de un punto, salvo si estn al
final de una frase (ejemplo: 5 ml y no 5 ml.).
Cuando se escriben cifras, la coma
slo se puede utilizar para indicar los
decimales; las cifras deben agruparse en
tros, dispuestos a la derecha y a la izquierda
de la coma, y separados entre s por un
pequeo espacio. Ejemplo:
forma correcta: 1 000 000
0,003 278
0.003 278
forma incorrecta: 1,000,000
0.003,278
Algunas recomendaciones para utilizar
el SI en bioqumica
PARA EXPRESAR CONCENTRACIONES
La concentracin de sustancias cuya masa
molecular se conoce se expresa en forma de
cantidad de sustancia, es decir, en moles (o
en submltiplos como el milimol o el
nanomol) por litro. Ejemplo:
cido rico en el suero o plasma:
Varones: 0.18 a 0.53 mmol/l.
Mujeres: 0.15 a 0.45 mmol/l.
Colesterol en el suero o plasma: 3.9 a 7.2
mmol/l.
Glucosa en el suero o plasma: 3.6 a 6.1
mmol/l.
Vitamina A en el suero: 0.53 a 2.1 mol/l.
La concentracin en forma de
cantidad de sustancia no debe ser

103
denominada concentracin molar o La actividad tambin puede ser
molaridad, ni utilizar el smbolo M en vez de
mol/l (como tampoco mM, nM, etctera, en
vez de mmol/l, nmol/l, etctera).
La concentracin de sustancias cuya
masa molecular se desconoce o es dudosa
se expresa en kg/l, g/l, mg/l, etctera.
Ejemplo:
Protena srica total: 60 a 80 g/l.
Albmina srica: 33 a 55 g/l.
Globulina srica: 20 a 36 g/l.
Fibringeno en el plasma: 2 a 6 g/l.
Hormona antidiurtica en plasma: 2 a 12
pg/ml
Concentracin de sustancias en tejidos.
Se expresa en unidades de masa (si no se
conoce la masa molecular) o en moles (si se
conoce la masa molecular) por kilogramo de
tejido seco o hmedo. Ejemplo:
g/kg, mg/kg o mol/kg, mmol/kg, etctera.
No se recomienda expresarla en unidades
de volumen, es decir en mg/ml, g/l, etctera.
Concentracin de iones hidrgeno.
La concentracin de hidrogeniones en los
lquidos biolgicos se expresa en nmol/l, as
como en unidades de pH. El valor del pH se
define como el logaritmo negativo de la
actividad de los iones hidrgeno (pH = -log
+ ejercicio, examine las cantidades siguientes:
H ), esta actividad puede determinarse
potenciomtricamente con la ayuda de un
pH-metro.
Actividad enzimtica. La unidad SI de
actividad cataltica es mol por segundo: mol/s
(tambin llamado katal, smbolo: kat) y
corresponde a la cantidad de sustrato
transformado por segundo como resultado de
la catlisis. La velocidad medida es
proporcional a la cantidad de enzima
presente.
expresada en trminos de unidades (smbolo:
U). Por definicin, una unidad es igual a la
concentracin de enzima necesaria para la
formacin de un micromol de producto por
minuto (mol/min). La actividad especfica de
una enzima se define como la concentracin
de producto que se forma por 1 miligramo de
enzima por minuto.
MATEMTICAS PARA EL LABORATORIO
Notacin cientfica o exponencial
Cuando se expresan cantidades muy
grandes o muy pequeas, como es el caso
frecuente en bioqumica, la dificultad de
escribir y manipular muchos ceros se evita
con el uso de la notacin exponencial o
cientfica.
En la notacin exponencial todo
nmero puede expresarse como una
potencia entera de 10, o como un producto
de dos nmeros, uno de los cuales es una
potencia entera de 10. Ejemplo: el nmero de
Avogadro seiscientos dos sextillones se
escribe:
602 000 000 000 000 000 000 000
y en la notacin exponencial como una
cantidad decimal multiplicada por 10 elevada
23
a la potencia apropiada = 6.02 x 10 . Como
2
200 = 2 x 10 x 10 = 2 x 10
2
205 = 2.05 x 10
5
205 000 = 2.05 x 10
1
0.205 = 2.05 x 10
4
0.000 205 = 2.05 x 10
7
0.000 000 1= 1/10 000 000 = 1 x 10
El exponente de la base 10 para
nmeros mayores de la unidad es el nmero
de lugares desde la coma o punto decimal
separada de la primera cifra significativa:
104
 2 2
205 = 2.05 x 10 = 2 lugares
Para fracciones decimales menores
de la unidad se separa la primera cifra
distinta de cero despus de la coma decimal
y se cuentan los lugares hacia la izquierda
hasta la coma decimal, incluso la cifra
separada y el nmero es el exponente
negativo:
0.000 205 = 0.000 205
del 2 a la coma decimal son 4 lugares; por lo
4
tanto, es 2.05 x 10 .
Las operaciones de multiplicar y
dividir, elevar a potencias o extraer races se
facilitan manipulando los exponentes segn
reglas muy sencillas. La porcin decimal no
exponencial se opera en forma ordinaria, lo
que reduce el manejo a tres cifras
significativas como mximo; los exponentes
se suman algebraicamente para multiplicar,
se restan para dividir, se multiplican por una
potencia deseada para tener el exponente de
la misma y para encontrar races se divide el
exponente entre el ndice de la raz.
Ejemplos:
6 3 9 10
6 x 10 por 3 x 10 = 18 x 10 = 1.8 x 10
6+3 9
ya que 6 x 3 = 18 y 10 = 10
6 3 3
6 x 10 entre 3 x 10 = 2 x 10
63 3
ya que 6/3 = 2 y 10 = 10
Para la adicin y la sustraccin usando
notacin cientfica, primero se escribe cada
cantidad con el mismo exponente n. Luego
se realiza la operacin deseada entre los
valores N1 y N2, donde N1 y N2 son los
nmeros obtenidos con el mismo exponente;
estos ltimos permanecen iguales. Ejemplo:
3 3
(5.1 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = (0.51 x 10 ) + (3.4 x
3 3
10 ) = 3.91 x 10
El mtodo del factor unitario en los
clculos
El procedimiento que se utilizar para
resolver problemas que incluyan conversin
de unidades se denomina mtodo del factor
unitario. Esta tcnica se basa en las
propiedades del nmero 1, es decir:
Cualquier nmero al ser multiplicado por
uno, sigue siendo el mismo nmero (1 x 5 =
5).
El nmero 1 puede ser escrito como el
cociente de cualquier nmero dividido por si
mismo (3/3 6/6).
Se puede tomar cualquier ecuacin y
dividirla por uno de los miembros para
obtener una razn igual al nmero 1.
Por ejemplo, dada la ecuacin:
1 minuto = 60 segundos, obtener la razn
igual al nmero 1.
1 minuto = 60 segundos
1 minuto 1 minuto
1= 60 segundos 1= 1 minuto
1 minuto 60 segundos
Estas razones o factores que son
equivalentes al nmero 1 se conocen como
factores unitarios, factores de conversin o
coeficientes de conversin.
El recproco de cualquier factor
unitario es tambin un factor unitario.
En ambos casos el numerador y el
denominador describen la misma cantidad,
por lo que se puede efectuar conversiones
entre diferentes unidades que miden la
misma cantidad.
105
El mtodo del factor unitario consiste en:
1. Tomar una relacin entre unidades y
expresarla en forma de una ecuacin,
2. Luego expresar la relacin en forma de
una fraccin (llamada factor de
conversin) y, por ltimo;
3. Multiplicar la cantidad dada por ese factor.
En esta multiplicacin, las unidades
idnticas se multiplican o cancelan como
si fueran nmeros.
Ejemplo: Cuntos l hay en 0.00005 L (5 x
-5
10 L)?
-6 6
1) 1 l = 10 L 1 L = 10 l
6
2) 10 O
1L
-5 [-5+ 6]
3) 5 x 10 L x= 5 x 10 = 5 x 10 l =
50l.
En este mtodo las unidades se
acarrean en todo el proceso del clculo, por
lo tanto si la ecuacin se establece en forma
correcta, todas las unidades se cancelan
excepto la deseada.
Logaritmos
El logaritmo de un nmero es el exponente o
potencia de una base determinada que se
requiere para obtener el nmero. Si el
n
nmero a elevado a la potencia n (a ) es
igual al nmero N, entonces n es el
logaritmo de base a del nmero N. Es
decir:
n -2.6990 cologaritmo
si a = N entonces n = loga de N
La base a puede ser cualquier
nmero; en la prctica mdica se usa como
base el nmero 10 y los logaritmos
resultantes se conocen como logaritmos
comunes o de Briggs. Su smbolo es: log o
log.10
Los logaritmos son indispensables
para manejar los datos bioqumicos; constan
de dos partes que se separan por una coma
o punto decimal; a la izquierda, la
caracterstica corresponde al orden de
magnitud y puede ser positiva o negativa
segn sea la cantidad mayor o menor de la
unidad. El exponente de la base 10 para
nmeros mayores de la unidad es siempre
positivo. Cuando es negativo se indica con el
signo menos arriba del nmero que la
representa:
0.001 = 10 -3 caracterstica 3
-3
1 000 = 10 caracterstica 3
A la derecha, la mantisa es la
fraccin decimal de exponente que
1
corresponde a los dgitos que ocupan el
orden de magnitud; se obtiene de tablas o de
calculadoras electrnicas y siempre tiene
valor positivo:
0.3010
log 2 = 0,3010 esto es 10 =2
Cuando la caracterstica y la mantisa
son de diferente signo (+ o ) se opera con el
cologaritmo que se obtiene por la suma
algebraica de la mantisa positiva con la
caracterstica negativa es un nmero todo
negativo, ver el siguiente ejemplo:
Log 0.002 = 3.3010 = -2.6990
3.000
+0.3010
La caracterstica indica la posicin del punto
decimal en la cifra representada por la
mantisa y se determina por inspeccin del
nmero.
Para un nmero mayor que 1, la
caracterstica es uno menos que el nmero
106
de cifras antes del punto decimal; as: la
caracterstica de 100 es 2 porque el nmero
cien tiene 3 dgitos a la izquierda del punto
decimal. Para un nmero menor que 1, la
caracterstica es numricamente uno ms
que el nmero de ceros que siguen al punto
decimal; as: la caracterstica de 0.000 000 1
es 7 con signo negativo.
Para encontrar el logaritmo de un
nmero, por ejemplo: 0.000 809, se busca en
la tabla las dos primeras cifras distintas de
cero de izquierda a derecha (80) en la
primera columna vertical de las tablas se
sigue la horizontal correspondiente hasta la
columna 9, que es el otro nmero, en donde
se lee 9 079, que es la mantisa requerida. La
mantisa para 809, 8.09, 0.0809, etctera; es
la misma (9 079), pero difiere la
caracterstica. As:
Log 0.000 809 = 4.9079 = -3.0921
Si el nmero del cual se requiere el
logaritmo tiene cuatro cifras, la cuarta se
busca en la misma columna horizontal en la
parte de la tabla que dice partes
proporcionales y debe agregarse a la
mantisa como diez milsimos.
Por ejemplo, para el nmero 8 091:
Mantisa para 809 = 9 079
parte proporcional para 1 = 1
0.9079
+ 0.0001
0.9080; log 8091 = 3.9080
El antilogaritmo es el nmero que
corresponde a un logaritmo dado. Para
encontrarlo se busca la mantisa en la tabla
de antilogaritmos, se determina el nmero a
que corresponde y se fija la posicin del
punto decimal segn la caracterstica. Por
ejemplo el antilogaritmo de 1.6747 es 47.29:
la caracterstica es 1 (hay dos dgitos a la
izquierda del punto decimal) y la mantisa es
0.6747, que se buscara en la tabla de
logaritmos donde se hallara que
corresponde a 4 729.
Los estudiantes deben familiarizarse
con el uso de logaritmos en las operaciones
comunes.
El logaritmo del producto de dos
nmeros es igual a la suma de sus
logaritmos:
log a x b = log a + log b
El logaritmo del cociente de dos
nmeros es igual al logaritmo del dividendo
menos el logaritmo del divisor:
log a/b = log a log b
El logaritmo de la potencia n de un
nmero es igual a "n" veces el logaritmo del
nmero:
3
log a = 3 x log a
Grficas
"Una figura equivale a mil datos en una tabla
numrica" y as como se construye un
modelo para visualizar un conjunto complejo
de hechos, se utiliza una grfica para
presentar los datos experimentales en tal
forma que fcilmente se asimilen y aprecien
sus relaciones cuantitativas.
Se llama grfica a la representacin
esquemtica de las variaciones que sufren
las distintas magnitudes que intervienen en
los fenmenos fsicos, qumicos, biolgicos,
sociales o de cualquier otra ndole. Tiene por
objeto mostrar rpida e intuitivamente la
relacin que guardan las magnitudes
comparadas.
Entre las diferentes clases de
grficas que existen las ms importantes son:
Grfica poligonal. Consiste en
expresar las variaciones de un fenmeno
107
continuo por medio de puntos y de
representar la marcha de dicho fenmeno por
medio de una lnea que une esos puntos.
Para elaborar una grfica poligonal
se trazan en un papel, de preferencia
milimtrico, dos rectas perpendiculares entre
s que se corten en cero. En cada una de
ellas se representar una de las magnitudes
que se van a relacionar. El punto cero (0) se
llama origen y la rectas son los ejes; 0X es el
eje X y 0Y es el eje Y. Para referirse al eje X
generalmente se dice: eje horizontal o eje de
las abscisas (variable independiente) y para
el eje Y: eje vertical o eje de las ordenadas
(variable dependiente).
Los ejes dividen su propio plano en
cuatro regiones llamadas cuadrantes que se
numeran I, II, III y IV. En el laboratorio
utilizamos habitualmente slo el primer
cuadrante (figura I.1).
Las distancias a la derecha de 0, a lo
largo del eje X, se consideran como positivas
y las de la izquierda como negativas.
Similarmente, hacia arriba de 0, a lo largo del
eje Y, se miden las distancias positivas y
hacia abajo de 0 las negativas.
Despus se trazan los puntos cuyas
distancias a uno de los ejes sean
proporcionales a la magnitud que se va a
representar y, finalmente, al unir estos puntos
por medio de segmentos de recta, se tiene la
grfica poligonal.
Nota: por lo general, es mejor que la
curva llene una parte considerable de la
pgina. Muy bien puede usarse la misma
unidad de medida sobre los dos ejes, pero a
menudo los valores tienen un campo de
variabilidad muy amplio, lo cual hace
necesario usar diferente escala para cada
uno de los ejes.
Diagrama en barras. Cuando se
quieren expresar simples comparaciones de
medidas entre s o para representar un
fenmeno discontinuo se emplean las barras,
que pueden ser horizontales o verticales.
Barras verticales. Las magnitudes se
representan por medio de rectngulos, barras
de base igual que descansan en el eje de las
abscisas y cuya altura es proporcional a la
intensidad del fenmeno y se mide en el eje
de las ordenadas.
Barras horizontales. Las barras
descansan sus bases en el eje de las
ordenadas y el fenmeno se mide en el eje
de las abscisas.
Grfica de sectores circulares. Para
hacer una grfica de este tipo hay que tener
en cuenta que el crculo debe tener el total de
las magnitudes que se van a representar.
Los sectores circulares son
proporcionales a las magnitudes que
representan; magnitud que se mide en
grados de circunferencia. Para determinar el
nmero de grados que deben tener dichas
partes se plantearn una serie de reglas de
tres para cada una de ellas en las cuales se
consideran:
como 100% a la suma total de las
magnitudes que se quieren graficar, para
obtener en cada caso el porcentaje
correspon diente; una vez obtenido
ste, se pasar a grados, considerando
108
360o como 100% y procediendo entonces a
hacer la grfica.
ALGUNOS MTODOS UTILIZADOS EN
BIOQUMICA
Centrifugacin
Un mtodo muy til en el laboratorio para
separar sustancias de diferente densidad
suspendidas en un lquido es la
centrifugacin; en ella, la accin de la fuerza
centrfuga (fuerza necesaria para desplazar
hacia afuera un determinado peso en
direccin radial) da como resultado que las
partculas ms pesadas se sedimenten ms
rpido que las partculas ligeras.
La fuerza centrfuga depende de la
cantidad de materia (m) que se desplaza
hacia afuera cuando est rotando a una
velocidad por minuto de (n) veces a una
distancia radial (r) y se expresa por la
frmula:
2
f (en dinas) = 0.01096 n m r
En el sistema mtrico decimal, la unidad de f
es la dina, la de m es el gramo y la de r es el
centmetro. Ejemplo: si se coloca un gramo
de agua en un tubo de centrfuga y se rota a
2 000 rpm (revoluciones por minuto) a una
distancia radial de 16 cm, la fuerza es:
2
f = 0.01096 x 2000 x 1 x 16 = 701 440 dinas
Si transformamos las dinas a peso,
entonces el gramo de agua tiene peso
porque es atrado al centro de la Tierra de
acuerdo con la ley de la gravitacin y es
atrado en estado normal, con 980 dinas de
fuerza. Si usamos, por lo tanto, peso en vez
de dinas como la unidad de nuestro problema
tendremos:
f = 0.01096 x n2mr = 717 g
980
o sea, interpretando la frmula, la fuerza de
contencin para sostener la unidad masa (el
gramo) e impedir que se vaya del centro de
rotacin es la fuerza que la gravedad ejerca
sobre 716 g o, dicho de otra manera, el
gramo a esa velocidad pesa en el fondo del
tubo de la centrfuga 716 gramos comparado
con el tubo en reposo o 716 veces la fuerza
de la gravedad (g).
La centrifugacin y
ultracentrifugacin son operaciones que se
basan en el principio anterior y que permiten
separar los componentes de una mezcla.
Las centrfugas ordinarias operan a
rotaciones menores de 10 000 revoluciones
por minuto (rpm). Las condiciones que limitan
esta velocidad son la resistencia de la parte
de la centrfuga que sostiene el rotor (brazo),
la friccin con el aire y el calentamiento.
Las ultracentrfugas operan en
cmaras refrigeradas, evacuadas de aire, y el
rotor no gira sostenido por un brazo sino
impulsado por chorros de aceite o aire
comprimido que se aplica a una porcin
externa del rotor sostenido por una pared
muy gruesa de una cmara cilndrica de
rotacin. Se alcanzan velocidades de 20 000
a 70 000 rpm.
La sedimentacin en la
ultracentrfuga se expresa en unidades
Svedberg (smbolo: S) y se aplica a la
comparacin prctica de tamaos
moleculares que no slo dependen de la
masa de las molculas implicadas sino
tambin de su forma. Es importante
considerar que los valores de Svedberg no
son aditivos, es decir, dos partculas 5S no
crean una partcula 10S. Sin embargo, hay
109
una correspondencia tosca que para las
protenas esfricas es de:
2 S = 10 kdal
4 S = 50 kdal
8 S = 160 kdal
16 S = 400 kdal
13
La unidad Svedberg es igual a 10
segundos; no pertenece al SI y puede
suplirse por 0,1 picosegundo (ps) o 100
femtosegundo (fs). En las molculas menos
densas que el medio de suspensin, como
las lipoprotenas, el desplazamiento es hacia
la superficie y se expresa en Svedberg de
flotacin (Sf) y permite la clasificacin en:
LDL, HDL y VHDL (low density, high density
y very high density) con Sf de 0 a 10, 10 a
400 y las muy densas que no flotan y tienen
una densidad mayor de 1.
El peligro del mal uso de la centrfuga deriva
de la enorme fuerza que alcanza en el radio
de rotacin y el peso de las sustancias
colocadas en el campo gravitacional del
aparato.
Se debe tener cuidado con los
siguientes puntos:
1. Los tubos en las centrfugas debern
colocarse por pares para que no haya
diferencia de peso en un lado de la
centrfuga. Enfrente de un tubo de un
peso determinado debe estar otro, en la
misma posicin, con el mismo peso. El
descuido de esta regla implica un desnivel
que, a las velocidades y fuerzas
sealadas, puede romper los tubos y
daar el aparato. Para balancear por
pares los tubos lo mejor es usar una
balanza de dos brazos y ajustar el peso
hasta que sea idntico.
2. Para no forzar el motor arrnquese
gradualmente la centrfuga hasta alcanzar
la velocidad requerida.
3. Nunca se frene una centrfuga; djese
parar por su propia inercia; el no hacer
esto conduce a que se agite el contenido
de los tubos y se eche a perder el trabajo.
4. No alzar las tapas de la centrfuga cuando
est en movimiento.
5. Ante cualquier dificultad o duda consulte
al profesor.
Potenciometra
Muchas de las reacciones que se realizan en
las clulas son reacciones de oxidacin y de
reduccin, es decir, en las que se transfieren
electrones.
La electroqumica estudia las
reacciones qumicas en las que hay
transferencia de uno o ms electrones.
La oxidacin es la prdida o liberacin de
electrones y la molcula que los cede se
denomina agente reductor.
La reduccin es la ganancia de electrones y
la molcula que los acepta se denomina
agente oxidante.
Cuando se oxida un agente reductor,
se transforma en su forma oxidada y como la
reaccin es reversible las formas oxidada y
reducida del compuesto constituyen un par
conjugado llamado par redox o par de
oxidorreduccin.
El proceso de oxidacin siempre va
acompaado del proceso de reduccin ya
que los electrones que cede una molcula
reductora son aceptados por una molcula
oxidante, lo cual constituye las reacciones de
oxidorreduccin o reacciones redox.
La determinacin cuantitativa de la
concentracin de las molculas oxidantes y
reductoras en una solucin es el objeto de
estudio de la potenciometra. En esta tcnica
se determina el potencial elctrico generado
por la transferencia de electrones en una
reaccin redox en la cual estn involucradas
las molculas a estudiar. Este potencial se
mide en una celda electroqumica. La celda
ms comn es la de Daniell (Fig. I.2), en la
110
que en dos compartimientos separados que presin del gas de una atmsfera. Sin
contienen ZnSO4 y CuSO4 se colocan cinc y embargo, en la prctica es inconveniente
cobre metlico, respectivamente; las dos porque se trata de un electrodo gaseoso.
soluciones se conectan por un puente salino
(un tubo que contiene agar embebido en una
solucin de un electrolito como el KCl).
Cuando los dos electrolitos se conectan por
un alambre metlico, ocurre un flujo de
electrones del electrodo de cinc al electrodo
de cobre, el cual puede ser medido por
medio de un voltmetro. Cuando el cinc cede
los electrones se convierte en ion soluble,
mientras que el cobre disuelto, al aceptar los
electrones, se convierte en cobre metlico
que se deposita en el electrodo. El puente
salino cierra el circuito elctrico entre las dos
Fig. 1.2 Celda de Daniell
soluciones.
El hecho de que fluya una corriente
Es por ello, que se usan otros
elctrica del polo positivo (nodo, que en
electrodos de referencia, como el de calomel,
este caso es el electrodo de cinc) al polo
en el cual el sistema de medicin es mercurio
negativo (ctodo, que en este caso es el
y cloruro mercuroso. En el caso de este
electrodo de cobre), significa que hay una
electrodo, como sucede con todos los pares
diferencia de potencial entre los electrodos
redox, debe calibrarse con respecto al
denominada fuerza electromotriz (fem) de la
electrodo de hidrgeno.
celda. Dado que el potencial de un electrodo
Los pares redox de inters para el
est relacionado con la magnitud de cargas
bioqumico incluyen a menudo al ion
positivas existentes, la diferencia de potencial
hidrgeno como reactivo o como producto,
compara las cargas relativas existentes en
por lo que tales sistemas estn en funcin del
dos puntos. Se denomina potencial de
pH del medio.
electrodo (E) a la diferencia de potencial
Hay diferentes tipos de electrodos:
respecto a un electrodo de referencia
los metlicos (como los de la celda de
arbitrario y depende de la concentracin de
Daniell), los metlicos-sal insoluble (como el
las molculas en la solucin y de la
de plata/cloruro de plata), los gaseosos
temperatura.
(como el de hidrgeno, que se adsorbe sobre
En general, el potencial de los
platino), los electrodos selectivos de iones
electrodos se mide con referencia al
(que pueden ser para aniones o para
electrodo de hidrgeno al que se le ha
cationes) y los de vidrio (que son electrodos
asignado
selectivos de iones, especiales para
En general, el potencial de los electrodos se +
determinar H ). Estos ltimos son los ms
mide con referencia al electrodo de
utilizados ya que una de las aplicaciones
hidrgeno al que se le ha asignado
prcticas ms importantes de la
arbitrariamente un potencial de cero a 25o C
potenciometra es la determinacin del pH.
a una concentracin de 1 mmol/L y una

111
 Dentro del electrodo de vidrio hay un El esquema del circuito de un
alambre de plata con un extremo sumergido potencimetro tpico se encuentra en la figura
en una solucin de HCl 0.1M. El bulbo de la I.3. La sensibilidad del medidor se puede
parte inferior es de un vidrio especial, ajustar para cambios de acuerdo a la
+
permeable a los iones H . La superficie temperatura (botn de control de
interior de esta membrana de vidrio est en temperatura). Con el botn de calibracin a
contacto con la solucin de HCl y la exterior cero se introduce un voltaje lateral en el
con la solucin cuyo pH se quiere determinar. circuito que permite que la lectura
En las dos superficies la membrana de vidrio corresponda al pH de la solucin reguladora
absorbe agua y forma una capa de gel a tipo. Los medidores de pH se construyen de
travs de la cual difunden los iones tal manera que el cero de la escala del
hidrgeno y desplazan a otros iones de la potencimetro corresponda a un pH de 7. El
estructura del vidrio (como sodio) y esto medidor se calibra antes de usarlo, primero
provoca el establecimiento de un potencial.
En una solucin amortiguadora que contenga
Cl se sumerge un electrodo de Ag/AgCl.
Cuando el electrodo se coloca en una
solucin cuyo pH es diferente al de la
solucin amortiguadora, aparece una
diferencia de potencial entre los dos
extremos, lo cual es una medida de la
diferencia de los dos valores de pH.
La determinacin ms precisa del pH
se realiza en un pH-metro que consiste,
fundamentalmente, en un potencimetro
diseado para emplearse con un sistema de
electrodo de vidrio. Como una unidad de pH
corresponde a 59 milivoltios a 25 C, el con una solucin reguladora de pH 7,
mismo medidor se puede usar con dos ajustando el cero para que d la lectura
escalas para hacer lecturas en mv o en pH. exacta; se lava el electrodo con agua
El electrodo de vidrio consiste en una destilada o desionizada y se calibra con una
membrana de vidrio situada al final de un segunda solucin reguladora de pH 4 10;
tubo de vidrio o plstico de paredes ms se ajusta nuevamente el medidor, ahora con
gruesas. En el tubo se encuentra cido el control de temperatura, para que d la
clorhdrico diluido saturado de cloruro de
lectura exacta; luego se determina el pH de
plata y un hilo de plata que conecta a la la solucin problema.
terminal del voltmetro con un electrodo de
referencia. El pH se determina midiendo la Electroforesis
diferencia de potencial a travs de la
Una partcula coloidal o un ion provistos de
membrana de vidrio que separa la solucin a carga elctrica emigran hacia el nodo o el
la cual se quiere determinar el pH, de la
ctodo bajo la influencia de un campo
solucin de referencia cuya concentracin de elctrico externo. Si las partculas de una
hidrogeniones se conoce.
mezcla tienen diferentes velocidades de

112
desplazamiento, puede aprovecharse esta
propiedad para separarlas. El empleo de
fuerzas elctricas para lograr esta separacin
se llama electroforesis y depende
fundamentalmente de la carga y no de la
masa molar de las partculas cargadas. Esta
tcnica se ha empleado en la
separacin de protenas, pptidos,
nucletidos, cidos orgnicos y porfirinas,
entre otros compuestos. Es importante
considerar que en el caso de una protena su
carga depende del pH del medio, por lo que
es posible emplear la tcnica para determinar
el punto isoelctrico de la misma.
Si se aplica un campo elctrico a
travs de una solucin, la fuerza que acta
sobre las molculas cargadas de soluto
depende de la carga elctrica (e); del nmero
de cargas en la molcula (z), y de la fuerza
del campo elctrico (E). Inmediatamente
despus de poner a funcionar el campo, las
partculas cargadas se aceleran hasta que
alcanzan un equilibrio, o sea, cuando la
carga electrosttica queda equilibrada por la
fuerza de friccin que ejerce el medio
disolvente; entonces, se mueven a una
velocidad constante. La velocidad por unidad
de campo elctrico se denomina movilidad
electrofortica. Dado que la friccin depende
del tamao de la partcula y de la viscosidad
del medio en que se mueve, la facilidad con
la que se mueve una partcula cargada
depende directamente de su carga e
inversamente de su tamao y de la
viscosidad del medio.
Existen dos tipos de electroforesis: la
frontal y la zonal.
Electroforesis frontal o en medio
lquido. Es el mtodo clsico de Tiselius en el
que la separacin de los componentes de
una mezcla se realiza en varios frentes o
lmites que se traslapan a lo largo del
procedimiento. El movimiento de los frentes
se realiza en un canal vertical y la densidad
de la solucin por debajo del frente debe ser
mayor que la de arriba, ya que en caso
contrario el sistema de frentes se destruira.
En el mtodo, la solucin a separar se coloca
encima del medio amortiguador conductor.
La tcnica es difcil y costosa, aunque puede
presentar la ventaja de que se evitan las
interacciones de los solutos con cualquier
superficie y se eliminan as los efectos
adsorbentes y desnaturalizantes. Adems,
puede operarse en medios acuosos, a baja
temperatura y bajo condiciones favorables de
pH y fuerza inica.
Electroforesis zonal. Uno de los
problemas que presenta la tcnica anterior es
la necesidad de estabilizar las zonas de
soluto contra la conveccin gravitacional y la
difusin. Esto origin el empleo de otra
tcnica de electroforesis: la electroforesis
zonal. En ella, el empleo de gradientes de
densidad, slidos porosos o fibrosos y geles
permite resolver el problema de la difusin y
de la conveccin gravitacional.
En este tipo de electroforesis la
mezcla de solutos a separar se aplica como
una mancha o una banda delgada en un
punto del canal electrofortico. Los solutos
migran con distintas velocidades (de acuerdo
a su movilidad) y se separan en zonas
discretas. La distancia de migracin es
directamente proporcional al voltaje aplicado
y al tiempo. Los solutos migran a travs del
solvente que baa un soporte slido. Este
soporte puede ser de diversa naturaleza y
cada uno presenta algunas ventajas y
desventajas en su uso. Los soportes ms
comunes son papel, acetato de celulosa,
almidn, agar, agarosa y poliacrilamida.
Dado que en el caso de los geles es posible
un manejo del tamao del tamizado para
lograr una mxima eficiencia en la
113
separacin, este mtodo es el ms usado en
bioqumica.
En la tcnica hay que cuidar algunos
aspectos que pueden afectar la separacin
como: la seleccin adecuada del soporte, del
amortiguador, vigilar la temperatura de la
cmara, la intensidad del campo elctrico, el
tiempo, etctera.
Electroforesis en papel y en acetato
de celulosa. La electroforesis en papel fue el
primer mtodo de separacin en zonas en un
campo elctrico. Es una tcnica sencilla y
rpida, que requiere pequeas cantidades de
muestra y que es especialmente til en las
electroforesis de alto voltaje para separar
molculas de bajo peso molecular como
aminocidos, pptidos, oligonucletidos y
otros compuestos orgnicos con grupos
cargados. Ha sido muy utilizada en el mapeo
bidimensional de protenas (fingerprinting),
para identificar diferencias entre protenas
similares, probar que una protena es
producto de otra de mayor tamao, etctera.
Dado que el papel tiene una alta
actividad endosmtica*, lo que causa algunos
problemas en la electroforesis, ha sido
sustituido por el acetato de celulosa, que
tiene una estructura microporosa uniforme,
actividad endosmtica baja y en el que la
adsorcin de las protenas ha sido eliminada.
En los aparatos en que se realizan
estas tcnicas el soporte se humedece al
sumergirlo en el amortiguador y colocarlo de
tal manera que se establezca el contacto con
las soluciones en que estn los electrodos.
Los aparatos se tapan para evitar la
evaporacin y para mantener una atmsfera
hmeda dentro del aparato.
Electroforesis en geles de agar y
agarosa. El agar es una mezcla de
polisacridos que se obtiene de ciertas
especies de algas marinas. Est constituido
de dos componentes principales: uno lineal o
agarosa y uno ramificado y muy cido
llamado agar o pectina. El agar y la agarosa
son solubles en soluciones acuosas a 100oC
y solidifican a temperatura ambiente; forman
geles de buena firmeza cuando se usan a
una concentracin de 0.5 a 2%. Su estructura
se mantiene por numerosos puentes de
hidrgeno entre cadenas adyacentes de
polisacridos. El gel de agarosa ofrece
ciertas ventajas sobre otros soportes; posee
una porosidad elevada y uniforme, lo que
favorece la migracin regular de las
sustancias cargadas, lo cual se traduce en
una mayor resolucin.
Para realizar la electroforesis en
estos medios se prepara el gel sobre una
superficie de vidrio. Una vez solidificado el
gel, se hacen pocillos en l para aplicar en
ellos la muestra. Se lleva a cabo, o se
"corre", la electroforesis y, al final, se fija la
preparacin, se tie y se seca. La tcnica se
ha usado en combinacin con la
inmunodifusin en el anlisis inmunolgico
de protenas y en la cuantificacin de
protenas inmunoprecipitables.
La electroforesis en agarosa ha
permitido el estudio de las molculas del
DNA, cuyo tamao impide que puedan
penetrar en los geles de poliacrilamida, pero
que penetran fcilmente en geles de agarosa
6
a 0.2%, si tienen un peso hasta de 150 x 10 ,
6
o a 0.8% si pesan hasta 50 x 10 .
Es posible separar molculas de
DNA que difieren slo 1% de peso molecular
segn sea la concentracin de la agarosa.
Para detectar las bandas, se sumerge el gel
en una solucin de bromuro de etidio el cual
se pega al DNA y fluoresce cuando se excita
con luz ultravioleta. El peso molecular se
determina por la distancia de migracin.
Tambin se han usado estos geles de
agarosa para la obtencin de mapas de
restriccin, los que permiten ver diferencias
114
entre dos molculas de DNA, localizar
mutaciones, detectar recombinaciones de
fagos, aislar fragmentos de DNA deseados,
distinguir entre el DNA lineal, circular o
superenrollado.
Electroforesis en geles de
poliacrilamida. Los geles de poliacrilamida
son geles totalmente sintticos que han
sustituido a los geles de almidn en el
estudio rutinario de protenas por mtodos
electroforticos. Esto ha sido posible gracias
a la gran facilidad con que puede variarse
segn el contenido total del monmero y su
grado de entrecruzamiento. Dada su
capacidad de filtrador molecular, se ha
empleado para separar compuestos con
base en su peso molecular para lo que se
usa lauril sulfato de sodio (SDS) con el objeto
de evitar las diferencias individuales en las
cargas de las protenas.
Los amortiguadores que se usan pueden ser
continuos (en los que se utiliza el mismo
amortiguador en los tanques de los
electrodos y los sistemas electroforticos) y
discontinuos, en los que hay dos tipos de
geles: el de separacin, o de poro cerrado,
en el cual se resuelven los componentes de
una mezcla (aqu es importante el uso del
amortiguador adecuado) y el gel
concentrador, o de poro abierto, que sirve
para concentrar la muestra. A los geles se les
puede incorporar sustancias disociantes
como la urea y el SDS sin que sean
afectados. Tambin pueden emplearse
agentes reductores como el 2
mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los
puentes disulfuro de las protenas.
Las dos aplicaciones principales de
la electroforesis discontinua son la
determinacin de la pureza de protenas y el
anlisis de los componentes de una mezcla.
La electroforesis en gel de poliacrilamida en
presencia de SDS tambin se ha empleado
en la determinacin de los pesos moleculares
de protenas.
Electroenfoque. Si se coloca una protena en
un gradiente de pH sujeto a un campo
elctrico, se mover hasta alcanzar su punto
isoelctrico, donde permanecer sin
moverse. Esta tcnica es lo que se conoce
como electroenfoque. Para formar un
gradiente estable y continuo de pH se usan
anfolitos sintticos de una gran variedad de
pesos moleculares y rangos de pH. Cuando
se establece el campo elctrico, los anfolitos
migran y generan el gradiente de pH segn
sus propios puntos isoelctricos. Esta tcnica
ha sido utilizada en combinacin con la
separacin por pesos moleculares en la
electroforesis bidimensional como mtodo de
anlisis de protenas.
*Nota: Cuando se aplica un potencial
elctrico a un lquido contenido en un soporte
no conductor el lquido se mover hacia uno
u otro electrodo, en favor o en contra del
movimiento electrofortico, alterando la
movilidad electrofortica de las partculas
cargadas. Este fenmeno se conoce como
endosmosis. Si el soporte est cargado,
induce la orientacin de las cargas con signo
opuesto en el lquido, lo que ocasionar al
aplicar la corriente elctrica que ocurra un
flujo del lquido dentro del canal
electrofortico. Este fenmeno es lo que se
conoce como actividad endosmtica y puede
causar problemas en las separaciones
electroforticas.
SOLUCIONES
Una solucin es una mezcla homognea de
por lo menos dos componentes: una fase
dispersa, que es el soluto (sustancia que se
disuelve), y una dispersora que constituye el
solvente o disolvente (la sustancia que
disuelve al soluto) y que, generalmente, se
encuentra en mayor proporcin. Las
115
soluciones ms utilizadas en bioqumica son
las que tienen agua como solvente.
La solubilidad de un soluto en un
solvente depende de la naturaleza de stos,
de la temperatura y, en el caso de un gas, de
la presin. La solubilidad generalmente est
dada en gramos de soluto por 100 g de
solvente.
Se llaman soluciones diluidas las que
contienen una proporcin relativamente
pequea de soluto; se llaman soluciones
concentradas las que contienen una gran
cantidad de soluto. Slo son posibles
soluciones concentradas cuando el soluto es
muy soluble.
Una solucin saturada contiene la
cantidad de soluto disuelto necesaria para la
existencia de un equilibrio entre las
molculas disueltas y las molculas en
exceso que no estn disueltas. Esta solucin
se forma por medio de una vigorosa agitacin
con exceso de soluto. Existe una solucin
sobresaturada cuando en la solucin hay
presente ms soluto que en una solucin
saturada. Para prepararla se forma una
solucin saturada a temperatura elevada y se
enfra cuidadosamente para evitar la
cristalizacin. Las soluciones sobresaturadas
son inestables y con facilidad se convierten
en soluciones saturadas.
Las mencionadas soluciones son
poco precisas y no indican, de manera
cuantitativa, el soluto ni el solvente; los
mtodos cuantitativos ms comunes, que
sirven para expresar la concentracin (la
medida numrica de la cantidad relativa de
soluto en la solucin) de las soluciones, son
las porcentuales, las molares y las normales.
Soluciones porcentuales
En las soluciones porcentuales no se toma
en cuenta el peso frmula del soluto. En este
tipo de soluciones se debe especificar si la
relacin es peso a peso (p/p), peso a
volumen (p/v) o volumen a volumen (v/v).
Ejemplos:
Solucin porcentual p/p. Solucin al
10% de NaCl contiene 10 g de la sal por 100
g de solucin. El peso/peso porcentual
expresa el nmero de gramos del soluto en
100 gramos de la solucin final.
%p/p = g de soluto x 100
100 g de solucin
Solucin porcentual p/v. Solucin de NaCl
a 10% p/v: 10 g de NaCl en 100 ml de
solucin. Esto expresa el nmero de gramos
de soluto en 100 ml de la solucin final. En
bioqumica, si no se especifica otra situacin,
las soluciones porcentuales deben
entenderse como p/v.
%p/p = g de soluto x 100
100 ml de solucin
Solucin porcentual v/v. Se utiliza
cuando el soluto y el solvente son lquidos. El
v/v indica el nmero de volmenes de soluto
por 100 volmenes de solucin. Solucin de
etanol a 30% v/v: 30 ml de ste en 100 ml de
solucin. Esto quiere decir que por cada 100
ml de solucin, 30 ml corresponden al soluto
y el resto, hasta completar 100 ml, al agua
destilada o al solvente empleado.
%v/v = volumen de soluto x 100
100 volmenes de solucin
Es importante insistir que los
trminos porcentuales expresan siempre una
relacin, es decir, podemos variar los
volmenes siempre y cuando no perdamos
dicha relacin. Por ejemplo, si nos pidieran
preparar 50 ml de una solucin de alcohol
etlico a 20%, seguiramos el siguiente
planteamiento:
116
 100 ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro
50 ml de sol. tienen x ml de alcohol puro
X = 20 x 50 x 10
100
Resultado: necesitamos 10 ml de
alcohol puro y completar un volumen de 50
ml.
El alcohol etlico comn es de 96%
de pureza (v/v). Por lo tanto, si no contamos
con alcohol puro y quisiramos preparar una
solucin de alcohol a 20%, seguiramos el
siguiente planteamiento:
100 ml de sol. tienen 96 ml de alcohol puro
X ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro
X= 20 x 100 = ml de solucin
96
Resultado: necesitamos 20.83 ml de
solucin de alcohol a 96% y completar un
volumen de 100 ml.
Si tan slo queremos 50 ml de esta
nueva solucin, entonces:
100 ml de sol. de alcohol a 20% tienen
20.83 ml de alcohol a 96%
50 ml de sol. de alcohol a 20% tienen X ml
de alcohol a 96%
X= 50 x 20.83 = 10.41ml
100
Resultado: necesitamos 10.41 ml de
alcohol de 96% y completar con agua
destilada hasta un volumen final de 50 ml.
Soluciones molares
Una solucin molar se define como el
nmero de moles de soluto en un litro de
solucin:
M= No. de moles
litro de solucin
donde un mol es igual al peso atmico o
molecular expresado en gramos (tomo
gramo o molcula gramo). Un mol contiene el
23
nmero de Avogadro (6.023x10 ) de
partculas, tomos o molculas.
Si un mol de una sustancia se
disuelve en agua hasta un volumen de un
litro, se obtiene una solucin 1 molar (1M).
Por ejemplo, si quisiramos preparar
una solucin 1 molar de NaCl, tendramos
que considerar, primero, su peso molecular
(Na:23 + Cl:35.5 = 58.5) y este valor en
gramos disolverlo en agua, hasta completar
un litro.
Ahora bien, si nos piden preparar 400
ml de una solucin 0.5 M de NaCl: cuntos
gramos de NaCl deben pesarse?
1. Sabemos que un mol de NaCl es de 58.5
g.
2. Haremos el siguiente planteamiento:
Una sol. 1M tiene 58.5g de NaCl.
Una sol. 0.5M tiene X g de NaCl.
X= 0.5 x 58.5 = 29.25 g de NaCl
100
3. De acuerdo con la definicin de solucin
molar, los 29.25 g de NaCl los
consideramos en un litro de solucin, pero
como nos piden preparar 400 ml haremos
el siguiente planteamiento:
En 1000 ml de sol. hay: 29.25g de NaCl
En 400 ml de sol. hay: X g de NaCl
117
 X= 400 x 29.25 = 11.7 g de NaCl
1000
Resultado: necesitamos 11.7 g de
NaCl y disolverlo hasta completar un
volumen de 400 ml.
En este ejemplo, como podemos ver,
hemos multiplicado la molaridad del
problema (0.5 mol/L) por el peso molecular
de NaCl (58.5 g) y por el volumen del pro-
blema (400 ml). Posteriormente dividiremos
entre 1 litro (1 000 ml). Para simplificar el
procedimiento podemos aplicar la siguiente
frmula:
V x PM x M = gramos de la sustancia
1000
En donde:
V= Volumen del problema en ml.
PM = Peso molecular de la sustancia en g.
M= Molaridad del problema.
Soluciones normales
Son las que contienen el peso equivalente de
una sustancia en gramos por litro de
solucin:
N = peso equivalente
litro de solucin
donde el peso equivalente de una sustancia
es el nmero de unidades de esta sustancia
que puede combinarse con una unidad de
hidrgeno:
Peso equivalente = peso molecular
n
n = nmero de hidrgenos sustituibles.
Ejemplo: el peso equivalente de un
cido se calcula dividiendo el peso molecular
entre el nmero de tomos de hidrgeno
sustituibles en la molcula. El cido sulfrico
(H2SO4), de peso molecular 98, tiene dos
tomos de hidrgeno sustituibles en cada
molcula; por lo tanto, su peso equivalente
es: 98/2 = 49.
El peso equivalente de un hidrxido
se calcula dividiendo el peso molecular entre
el nmero de grupos hidroxilo (OH ) de la
molcula. El hidrxido de aluminio Al (OH)3
contiene tres grupos OH por molcula; su
peso molecular es de 78; por lo tanto, su
peso equivalente es 78/3 = 26.
El peso equivalente de una sal se
calcula dividiendo el peso molecular entre la
valencia total de los cationes (cargas
positivas) que contenga la frmula. La
valencia del sodio es 1, y el sulfato de sodio
Na2SO4 (peso mo-lecular 144) tiene dos
iones de sodio en cada molcula; por lo
tanto, el peso equivalente del sulfato de sodio
ser 144/2 = 72.
El peso equivalente de un oxidante
(reductor) se calcula dividiendo el peso
molecular entre el nmero de electrones
ganados (o perdidos) que puedan aportar por
molcula.
Recordemos la frmula utilizada para
calcular la cantidad de sustancia necesaria
para preparar cualquier cantidad de una
solucin determinada:
Para calcular la cantidad de una sustancia
que se necesita pesar para preparar un
volumen determinado de una solucin de
cualquier normalidad, se aplica una frmula
semejante:
V x Eq x N = gramos de la sustancia
1000
Ejemplo: preparar una solucin 0.1 N
de cloruro de calcio (CaCl2) para obtener un
volumen de 300 ml:
118
 V = 300 ml
N = 0.1
Eq = peso molecular del CaCl2
111/2 = 55.5
sustituyendo=300 ml x 55.5 g x 0.01 N= 1.67
1000
Resultado: necesitamos 1.67 g de
CaCl2 para preparar 300 ml de una solucin
0.1 N.
Soluciones osmolares
El fenmeno de la smosis se presenta
cuando una solucin est separada de su
solvente por una membrana semipermeable.
La smosis es la difusin de solvente a
travs de la membrana desde la parte de
menor a la de mayor concentracin. La
presin osmtica es la presin que debe
aplicarse sobre la solucin de mayor
concentracin a fin de impedir el paso del
solvente (smosis) a travs de la membrana.
Las membranas biolgicas tienen
permeabilidades dis-tintas y se dice que son
semipermeables, es decir, que son
permeables de forma selectiva para las
molculas del solvente o pequeas
molculas, pero no permiten el paso libre de
todas las molculas disueltas.
Las mediciones cuantitativas
demuestran que la presin osmtica es
proporcional a la concentracin molar (para
sustancias no disociables) del soluto, por lo
que una solucin osmolar es aquella que
contiene un mol de la sustancia en gramos
en un litro de solucin; el osmol es una
medida del nmero total de partculas en
solucin. La concentracin expresada en
osmol por litro se llama osmolaridad; el osmol
por kilogramo de disolvente se denomina
osmolalidad; en las soluciones muy diluidas,
como son las del cuerpo humano, las dos
medidas son tan cercanas que con gran
frecuencia se utilizan indistintamente.
La presin osmtica depende del
nmero de partculas y no de su carga, ni de
su masa; la misma fuerza osmtica es
ejercida por una molcula grande, como una
protena, con peso molecular de varios miles
y muchas cargas, como por una molcula de
+
glucosa o un ion de Na o de Cl . As para
determinar el efecto osmtico de una
solucin hay que sumar los efectos de todas
las partculas incapaces de atravesar la
membrana independientemente de su peso
molecular.
Por ejemplo: el cloruro de sodio en
solucin acuosa se disocia casi
+
completamente en iones sodio (Na ) y cloruro
(Cl ). Por lo tanto, cada molcula da origen a
dos partculas osmticamente activas, y una
solucin osmolar contiene media molcula
gramo (peso molecular expresado en
gramos) por litro, o sea:
1 osm/l = 58.5/2 = 29.25 g/l tambin
1 mol de NaCl = 2 osm/l
En cambio, la glucosa en solucin no
se disocia y para esta sustancia la solucin
osmolar contiene un mol en gramos por litro:
1 mol de glucosa = 180 g/l = 1 osm/l
La mayora de los lquidos corporales
tiene una presin osmtica que concuerda
con la de una solucin de cloruro de sodio a
0.9 % y se dice que esta solucin es
isosmtica con los lquidos fisiolgicos.
Soluciones isotnicas
Las soluciones isotnicas con respecto unas
a otras ejercen la misma presin osmtica;
es decir, contienen la misma concentracin
de partculas osmticamente activas. Cuando
se habla de soluciones isotnicas en
el laboratorio, suele tratarse de las que
119
tienen la misma presin osmtica que el
plasma sanguneo, que es apro-
ximadamente de 0.3 osmolar (300
miliosmoles). Las soluciones fisiolgicas de
concentracin menor a 300 mosm/l se llaman
hipotnicas; cuando su concentracin es
mayor de 300 mosm/l se denominan
hipertnicas.
Una solucin es isotnica con
respecto a una clula viva cuando no ocurre
ganancia ni prdida neta de agua en la
clula, ni se produce ningn otro cambio en
sta cuando entra en contacto con la
solucin.
El trmino isotnico, que significa:
igualdad de tono, se emplea en medicina
como sinnimo de isosmtico; pero los
trminos isotnico y tonicidad slo deben
emplearse en relacin con un lquido
fisiolgico. Por ejemplo, una solucin de
cido brico que es isosmtica con la sangre
y el lquido lagrimal, slo es isotnica con el
lquido lagrimal, ya que esta solucin
ocasiona hemlisis de los eritrocitos porque
las molculas de cido brico atraviesan
libremente la membrana eritrocitaria a
cualquier concentracin. En consecuencia,
isotonicidad connota compatibilidad
fisiolgica, mientras que isoosmoticidad, no
necesariamente. En otras palabras, la
tonicidad es una fraccin de la presin
osmtica total de la solucin; por tanto, la
tonicidad de una solucin no se puede
predecir nicamente por su composicin ya
que intervienen tambin las propiedades
distintivas de la membrana limitante.
Clculo y expresin de diluciones
La dilucin consiste en preparar una solucin
menos concentrada a partir de una solucin
inicial ms concentrada. Las diluciones se
expresan usualmente como una razn
matemtica, como 1:10. Esto significa una
unidad de solucin original diluida a un
volumen final de 10, esto es, 1 volumen de
solucin original con 9 volmenes de
solvente (volumen final = 10).
Para calcular la concentracin de la
solucin diluida se multiplica la concentracin
de la solucin original por la dilucin
expresada como fraccin.
Ejemplo: una solucin de 300 mg/100
ml se diluye en la razn 1:10. La
concentracin de la solucin final es:
300 x 1/10 = 30 mg /100 ml.
Si se hace ms de una dilucin, a
partir de una misma solucin, la
concentracin de la solucin final se obtiene
al multiplicar la concentracin original por el
producto de las diluciones. Ejemplo: la
solucin anterior se diluye a su vez en la
razn 1:100. La concentracin de la solucin
ser: 300 x 1/10 x 1/100 = 0.3 mg/100 ml.
La dilucin y redilucin sistemticas
de una solucin se llaman diluciones
seriadas. Para encontrar la concentracin en
un tubo dado de la serie, se multiplica la
dilucin en ese tubo por cada una de las
diluciones precedentes, incluida la del tubo
original.
Ejemplo: hacer una dilucin seriada
1:2, 1:4, 1:8, etctera, a un volumen final de
1 ml.
Paso 1: a 0.5 ml de la solucin a
diluir, aadirle 0.5 ml del diluyente y
etiquetarlo como tubo 1 (dilucin 1:2,
volumen 1 ml).
Paso 2: transferir a otro tubo 0.5 ml
de la dilucin anterior y agregarle 0.5 ml de
diluyente (dilucin 1:2). La dilucin final
obtenida se calcula al multiplicar la dilucin
del tubo 1 (o anterior) con la nueva dilucin
(1/2 x 1/2), igual a 1:4. Los pasos siguientes
se hacen igual que para el paso 2. En el
120
siguiente cuadro se muestra un resumen de la vez, en forma suave para no lesionarla; no
lo anterior. debe demostrrsele miedo o repugnancia
Tubo Dilucin para evitar que se ponga nerviosa e
intranquila, lo que puede ocasionar que
1. 0.5 ml(1) = 0.5 ml (1) = 1:2(4)
muerda.
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2) 1 ml (3)
La palma de la mano se coloca sobre
2. 0.5 ml(1) = 0.5 ml (1) = 1:4 (4)
el dorso del animal; la cabeza de ste entre
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2) 1 ml (3)
el dedo pulgar y el dedo ndice; de esta
es decir: 1/2 ; x 1/2 = 1:4 manera se logra su inmovilidad y es posible
3. 1/4 x 1/2 = 1:8 levantar el animal y moverlo de lugar.
4. 1/8 x 1/2 = 1:16 Muchas veces es necesaria la
5. 1/16; ; x 1/2 = 1:32 inyeccin intraperitoneal de alguna sustancia,
para lo cual se sostendr al animal con una
(1) Volumen de la solucin original a diluir. mano, como se indic antes, mientras con la
(2) Volumen del agua necesaria para la
otra se introduce la aguja de la jeringa
dilucin.
(3) Volumen final. formando un ngulo de 10 con la pared
(4) Dilucin obtenida. abdominal en el cuadrante inferior izquierdo,
(5) Volumen de la solucin diluida 1:2 (o ligeramente a la izquierda de la lnea media;
anterior).
es importante mantener el ngulo de la aguja
porque, si ste se abre, la aguja puede llegar
MANEJO DE MATERIAL BIOLGICO
a la vejiga o al intestino. Para tener la
Se le llama material biolgico al conjunto de
seguridad de estar en la cavidad peritoneal,
seres vivos o sus productos utilizado en el
hay que jalar el mbolo de la jeringa para que
desarrollo del trabajo en el laboratorio. La
se haga el vaco; si el vaco no se hace y, por
utilidad e importancia de este material es
el contrario, se extrae lquido, es probable
muy grande ya que muchos fenmenos de
que se haya puncionado la vejiga.
los seres vivos slo pueden estudiarse en
Para la extraccin de vsceras, como el
ellos mismos, por ejemplo, la
hgado, es necesario sacrificar al animal, lo
experimentacin de nuevos frmacos o los
cual se logra fcilmente y con menor
mecanismos que se presentan en entidades
sufrimiento para la rata anestesindola o
patolgicas y la produccin de las mismas en
descerebrndola, o sea, seccionando la
forma experimental. Del correcto manejo
mdula espinal a nivel del cuello mediante un
depender en gran parte el xito de la
golpe certero en este lugar contra el borde de
experimentacin y la veracidad de los
una mesa. Despus se prosigue a la
resultados obtenidos. A continuacin se
darn algunas generalidades sobre el manejo extraccin de la vscera y se abre la pared
del material biolgico utilizado en las abdominal con unas tijeras o bistur.
prcticas de este Manual.
Extraccin de sangre para anlisis
Animales El profesor a cargo del grupo deber estar
El animal utilizado ms comnmente en el presente en el momento de la extraccin; de
laboratorio de bioqumica es la rata. Para su lo contrario, por ningn motivo, el alumno
correcto manejo es importante la forma cmo podr hacerla por su cuenta.
se sujeta, lo cual se har con firmeza, pero a

121
 Procedimiento para obtener una muestra
de sangre venosa:
1. Para que un alumno sea considerado
como voluntario debern tomarse en
cuenta algunos antecedentes como: no
padecer o haber padecido hepatitis o
alguna otra enfermedad
infectocontagiosa; no tener problemas de
coagulacin y no ser muy aprensivo. El
donador (de preferencia con las venas
visibles), estar sentado con el brazo
sobre la mesa.
2. Con una ligadura elstica, aplicar un
torniquete en el brazo por encima del sitio
de la puncin (esto causa congestin
venosa y evita el retorno de la sangre). El
uso prolongado del torniquete causa
estasis de la sangre
hemoconcentracin. Si las venas no se
hacen prominentes, pedir al donador que
cierre y abra la mano varias veces.
Escoger una vena fija y de buen calibre,
localizarla y palparla con el dedo para
sentir su consistencia y trayectoria; antes
de puncionar, asegurarse de que la
jeringa no contenga aire y que el mbolo
se deslice suavemente. Las dimensiones
de la aguja y la jeringa dependen de la
cantidad de sangre que se necesita as
como del tamao e integridad de la vena
que se usa. Tambin se puede usar el
sistema Vacutainer que consiste en un
tubo al vaco, un mango y una aguja
recolectora de muestras mltiples.
3. Limpiar minuciosamente la zona con una
torunda humedecida con alcohol de 70 y
dejar secar espontneamente. Sujetar la
piel con el pulgar izquierdo; puncionar
primero la piel y luego penetrar la vena
con el bisel de la aguja hacia arriba
siguiendo el trayecto de la vena.
4. Despus que se ha entrado a la vena, la
sangre llenar los tubos vacos del
sistema vacutainer. Si se usa jeringa, se
necesita una ligera succin con sta para
obtener la muestra (por lo general,
aparece una gota de sangre en la base de
la aguja). Una succin excesiva puede
causar colapso de la vena. Tirar del
mbolo de la jeringa hasta que se haya
extrado la cantidad de sangre deseada.
5. Soltar la ligadura antes de extraer la aguja
con un movimiento rpido y uniforme
mientras que se ejerce una presin sobre
la herida con una torunda.
6. Mantener la presin por un momento o
hasta que se haya detenido el sangrado.
Cubrir la puncin con una cinta adhesiva.
7. Retirar la aguja de la jeringa en el
y
contenedor de punzocortantes y vaciar lo
ms pronto posible la muestra de sangre
en un tubo de centrfuga procurando
deslizar la sangre suavemente por la
pared del tubo (si es que no se utiliz el
sistema Vacutainer).
Alerta clnica
Si es difcil detener el sangrado de la
puncin, elevar la zona y aplicar una cubierta
que presione. Los hematomas se pueden
evitar:
Usando una buena tcnica.
Aflojando el torniquete antes de retirar la
aguja.
Aplicando la presin suficiente sobre el
sitio de puncin despus de completar el
procedimiento.
La sangre obtenida puede tratarse de
diferentes maneras segn el empleo que se
le vaya a dar.
Para obtener suero. La sangre se
recibe en un tubo de ensayo o de centrfuga
seco y se deja coagular a temperatura
ambiente o en una estufa o bao de agua a
122
37 C. Si se va a trabajar inmediatamente
con el suero, separar con un aplicador de
madera el cogulo y centrifugar el resto del
tubo. Si se desea la separacin espontnea
del suero, se deja a temperatura ambiente
por unas horas para que el cogulo se
retraiga. Debe evitarse que el suero se
mezcle con porciones de cogulo; si esto
sucede, es necesario centrifugar y volver a
separar el suero con una pipeta Pasteur.
Para obtener plasma. Hay que evitar
la coagulacin por medio de un
anticoagulante (heparina, citrato de sodio o
EDTA) en el tubo que recibe la sangre.
Mezclar suavemente por inversin.
Centrifugar a 2 500 rpm durante 5 minutos y
extraer enseguida el plasma sobrenadante
con una pipeta Pasteur; pasarlo a otro tubo.
La sangre, el plasma o el suero y
todos los recipientes que los contengan
deben considerarse como material
potencialmente infectante, por lo que
(torundas, agujas, tubos, etctera) debern
depositarse, de acuerdo a su clasificacin,
en envases que tengan impreso el smbolo
de riesgo biolgico y entregarse a la
coordinacin del laboratorio para su
desinfeccin y desecho.
MEDIDAS DE SEGURIDAD
Durante el desarrollo del curso de
bioqumica, en el laboratorio se pueden llegar
a utilizar sustancias o muestras biolgicas
que, en ocasiones representan riesgos
potenciales a la salud, debido a que pueden
ser: corrosivas, reactivas, explosivas, txicas,
inflamables o biolgico infecciosas.
Aunque los laboratorios se
consideran en general lugares de trabajo
seguros, esto es as slo cuando conocemos
y seguimos las normas de seguridad
existentes en la materia acerca de la
clasificacin, manejo y disposicin final de
estas sustancias, lo cual nos permite
identificar los peligros y disminuir los riesgos.
Manejo de materiales peligrosos y/o
biolgico infecciosos
Precauciones generales: Se refieren a las
medidas para minimizar la difusin de
enfermedades transmisibles, especialmente
hepatitis B o SIDA y para evitar incendios,
cortaduras o exposiciones simples, de corta
duracin o accidentales a sustancias
qumicas peligrosas.
1. Manejar cualquier lquido corporal,
sangre, plasma, suero, orina, tejido,
cadver o cultivo como potencialmente
infeccioso. Todas las sustancias qumicas
proporcionadas, equipos y materiales del
laboratorio debern ser utilizados con el
mximo cuidado, atendiendo a las
indicaciones de peligrosidad y cuidados
especficos, segn el caso.
2. Se debe conocer los smbolos y los
cdigos de color sobre las precauciones y
los peligros en el laboratorio. Asegurarse
de conocer la localizacin de
extinguidores, del botiqun y de las salidas
de emergencia.
3. Usar bata en el laboratorio, la cual deber
estar cerrada durante todo el tiempo que
se permanezca en el laboratorio.
4. Lavar las manos y usar guantes. Los
guantes deben usarse para efectuar
punciones vasculares y para manipular
sangre, lquidos corporales, cultivos de
microorganismos, sustancias o superficies
contaminadas. Despus del uso de
cualquier material biolgico, se procede al
lavado de manos con los guantes
puestos. Despus de quitarse los guantes
debemos lavarnos nuevamente las
manos.
123
5. Todos los materiales desechables y no
desechables se deben descontaminar en
una solucin 1:10 de hipoclorito de sodio
de 4 a 7 % de concentracin, durante ms
de 20 minutos antes de ser desechados.
6. Los elementos punzocortantes deben
desecharse en recipientes especiales
destinados para ello, los cuales deben
estar etiquetados con la leyenda que
indique "Peligro, residuos punzocortantes
biolgico-infecciosos" y marcados con el
smbolo universal de riesgo biolgico.
Nunca reencapuchar las agujas
7. Limpiar las superficies potencialmente
contaminadas con hipoclorito de sodio al
1%, con alcohol al 70% o con agua
oxigenada.
8. Todas las sustancias qumicas son
potencialmente txicas y peligrosas, por
lo que se deber:
a) Conocer las propiedades (venenosas,
custicas o corrosivas) y el uso correcto
de las mismas.
b) Nunca probar, as como tampoco inhalar,
directamente las sustancias. Para
determinar el olor se acerca la tapa del
frasco cuidadosamente a la nariz, o bien,
si se trata de sustancias voltiles o
vapores acercar stos con la mano a la
nariz.
c) Evitar el contacto de sustancias con la
piel, especialmente la cara; usar bata y
guantes para proteger la ropa y el cuerpo;
nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca
de un matraz con lquidos en ebullicin o
material de reaccin hacia el vecino, o a
s mismo, ya que puede proyectarse el
contenido; para las sustancias que no
tienen un efecto pronunciado sobre la
piel, pero cuya ingestin es peligrosa,
evitar la contaminacin de alimentos,
cigarros o manos que despus se llevarn
a la boca o con las que se tocarn
alimentos (nunca ingerir alimentos en el
laboratorio). Por ltimo, nunca pipetear
con la boca, especialmente los cidos
fuertes, productos custicos, oxidantes
fuertes y compuestos venenosos.
9. Seguir las indicaciones del profesor y del
personal a cargo del rea de prcticas. Es
una regla de laboratorio que todos los
accidentes personales, por triviales que
sean, se comuniquen inmediatamente al
profesor. Nunca realizar actividades
experimentales sin la supervisin del
responsable del grupo.
10. Manejar adecuadamente los residuos
peligrosos derivados de las prcticas,
identifique su nivel de riesgo y el
mecanismo para su desecho. Queda
prohibido desechar sustancias a la tarja o
por cualquier otro medio, sin autorizacin
del responsable del grupo. Las hojas de
seguridad correspondientes incluyen qu
hacer en caso de accidentes y la forma
correcta de desechar los residuos.
11. Indicaciones generales para evitar
incendios o explosiones al utilizar
solventes inflama-
bles. Los solventes inflamables (alcohol,
ter, cloroformo, acetona, tolueno, xilol,
etctera) se utilizan en todos los
laboratorios, por lo que se recomiendan
las siguientes precauciones:
a) No fumar en el interior del laboratorio.
b) No utilizar la llama del mechero sin
cerciorarse de que no hay cerca lquidos
inflamables. No mantener el mechero
encendido cuando est fuera de uso.
124
c) Si se vierten accidentalmente sobre las parado sobre un piso hmedo. Siempre
mesas, secar de inmediato con un trapo apagar y desconectar los aparatos antes
hmedo y enjuagar ste en el chorro de de cualquier manipulacin.
agua, exprimindolo.
Pictogramas de seguridad
d) Nunca calentar un lquido orgnico sobre En las etiquetas de productos qumicos de
una flama. Para calentar, usar bao de uso en el laboratorio adems de la
agua o parrilla elctrica. identificacin del contenido, calidad y lmite
de pureza de lo que contiene, podemos
En caso de incendio debe hacerse lo
encontrar pictogramas (smbolos
siguiente: para un incendio pequeo en un
internacionalmente aceptados y reconocidos)
vaso, un matraz, etctera, ste se cubrir con
que indican los riesgos principales. Los
un recipiente mayor o se ahogar el fuego
pictogramas de seguridad son:
con un trapo mojado o se combatir con un
extinguidor.
Cuando el fuego sea de un solvente
RIESGO BIOLGICO
derramado sobre la mesa o el piso, se
utilizar un extinguidor de bixido de
carbono. Si el fuego no puede vencerse de
inmediato, se evacuar el laboratorio y se
avisar al departamento contra incendios de
la institucin. Todo aquello que pueda contener
12. Los accidentes ms frecuentes que bacterias, virus u otros microorganismos con
ocurren en el laboratorio son las lesiones capacidad de infeccin o cuando contiene
debidas a cortes, laceraciones, etctera, toxinas producidas por microorganismos que
por cristalera rota. causen efectos nocivos a los seres vivos.
Ejemplo: jeringas, sangre.
En caso de heridas pequeas dejar
Medidas de prevencin: evitar el
que sangre unos segundos; tener cuidado de
contacto con los ojos, la piel y las vas
no dejar partculas de vidrio en la herida y
respiratorias. Utilizar elementos de proteccin
aplicar un desinfectante.
personal.
Las heridas de mayor importancia
deben ser atendidas por un mdico. Mientras
tanto, evitar el sangrado aplicando presin en E = EXPLOSIVO
un punto ms arriba la herida o antes de ella
(no mantener la presin por ms de 5
minutos).

13. Casi siempre, los choques elctricos en

el laboratorio son de poca importancia;
las precauciones de seguridad se Es toda sustancia slida o lquida o
deducen de la naturaleza del peligro. mezcla de sustancias que pueden
Nunca tocar un aparato elctrico con las desprender gases a una temperatura, presin
manos hmedas o cuando se est y velocidad tales que pueden detonar,

125
producir violentas deflagraciones, o explotar
al exponerse al calor cuando estn
parcialmente confinadas. Ejemplo: azida de
plomo, fluoruro de carbono.
Medidas de prevencin:
almacenarlas alejadas de otros productos,
evitar todo
choque, friccin y mantener alejadas de
fuentes de calor, chispas o fuego.
O = OXIDANTE
Sustancias capaces de aportar
oxgeno cuando reaccionan con otra
sustancia, por lo que cuando entran en
contacto con combustibles o inflamables
avivan la reaccin pudiendo desarrollar
reacciones violentas. Ejemplo: nitrito de
sodio, hiposulfito de sodio.
Medidas de prevencin: mantener
alejadas de las sustancias combustibles o
inflamables, ya que pueden favorecer los
incendios y dificultar su extincin.
Xn = NOCIVO
Sustancias de menor toxicidad pero
pueden causar daos a la salud. Tambin se
incluyen aquellas mezclas o preparados que
tienen alguna sustancia que puede ser txica
pero que se encuentra a una baja
concentracin en la mezcla.
Xi = IRRITANTE
Sustancias que pueden causar
irritacin a la piel, mucosas, o los ojos, por
contacto inmediato, prolongado o repetido,
pudiendo tambin provocar inflamacin.
Ejemplo: cloroformo, SDS, hipoclorito de
sodio, aminoantipirina.
Medidas de prevencin: evitar el
contacto con los ojos, la piel y las vas
respiratorias. Utilizar elementos de proteccin
personal.
F+ = EXTREMADAMENTE INFLAMABLE
Sustancias cuyo punto de ignicin es menor
de 0C y su punto de ebullicin mximo de
35C.
F = INFLAMABLE
Sustancias lquidas cuyo punto de ignicin es
menor a 40C. Ejemplo: etanol, tolueno, ter
dietlico.
Medidas de prevencin: mantener
alejado de fuentes de calor, de ignicin o
eventuales chispas, de materiales
combustibles y oxidantes.
N = NOCIVO PARA EL MEDIO
AMBIENTE
Aquellas sustancias o preparados que
cuando son liberados al medio ambiente
pueden presentar un efecto inmediato o
diferido, poniendo en peligro a alguna
especie. Ejemplo: tiourea, o-toluidina.
Medidas de prevencin: evitar que
los derrames alcancen los desages, tratar
126
los residuos en condiciones ambientalmente
adecuadas.
T+ = ALTAMENTE TXICO, T TXICO
Sustancias que pueden causar dao en
forma aguda o crnica a la salud o causar la
muerte si son inhaladas, ingeridas o se
absorben por la piel, an en pequeas
cantidades. Ejemplo: azida de sodio,
dinitrofenol, bromuro de etidio.
Medidas de prevencin: evitar todo
contacto directo. Utilizar elementos de
proteccin personal. Emplear estrictas
medidas de higiene personal y del ambiente
del laboratorio.
C = CORROSIVO
Sustancias capaces de atacar y destruir los
tejidos orgnicos si entran en contacto con
ellos o bien atacar ciertos metales o
materiales. Ejemplo: hidrxido de sodio,
cido clorhdrico, cido actico.
Medidas de prevencin: evitar el
contacto con los ojos, la piel y las vas
respiratorias. Utilizar elementos de proteccin
personal.
Identificacin sobre los riesgos
especficos y los consejos de prudencia
Frases "R" stas advierten acerca del riesgo
ms comn asignado a esa sustancia
qumica, por medio de la enumeracin de
riesgos especficos en frases cortas que son
adaptables a las distintas sustancias.
Las frases "S" brindan los consejos
de prudencia o las medidas de prevencin
ms importantes relacionadas con el riesgo
asignado a esa sustancia qumica y que
permitirn su manipulacin y
almacenamiento en forma segura. En
algunos casos se mencionan combinaciones
de frases R o de frases S, cuando dos o ms
riesgos tienen relacin entre s (cuadro I.6).
El smbolo de la N.F.P.A. (National Fire
Protection Association)
El smbolo de la N.F.P.A. es un sistema de
identificacin de riesgos de un producto
qumico, en tres categoras principales:
"salud", "inflamabilidad" y "reactividad"
indicando el grado de severidad por medio de
una escala numrica desde (4) que indica el
riesgo mayor, (3) riesgo severo, (2) riesgo
moderado, (1) riesgo menor, hasta (0) que
representa ausencia de riesgo.
Este smbolo es til para alertar
acerca del riesgo de ese producto y, a su
vez, puede ayudar a determinar los cuidados
a tener en cuenta en el almacenamiento y en
caso de emergencias, de derrames o
salpicaduras.
La informacin se presenta por
medio de una estructura espacial en forma
de rombo principal, dividido a su vez en otros
cuatro.
El rombo azul a la izquierda identifica
el riesgo para la salud. El rombo rojo en la
parte superior indica el riesgo por
inflamabilidad. El rombo amarillo a la derecha
seala el riesgo por reactividad o
inestabilidad. El rombo blanco en la parte
inferior indica riesgos especiales tales como:
W reactivo al agua, COR corrosivo, AIR
reactivo al aire, OXY oxidante. Ejemplo:
127

3 C
o
a n
cido clorhdrico
Hojas de seguridad
Cada prctica cuenta con las hojas de
seguridad para cada reactivo o sustancia que
se utilice en el laboratorio.
Las hojas de seguridad proveen
informacin sobre (cuadro I.7, pg. 100):
Los componentes de un producto, su
reactividad, las medidas precautorias
principales o las advertencias ms
importantes.
Los elementos de proteccin personal que
se recomienda emplear en la manipulacin.
Las vas de ingreso y los rganos blanco.
Las medidas por derrame accidental y de
primeros auxilios.
La informacin toxicolgica.
Las recomendaciones para su
almacenamiento.
Las condiciones para la disposicin de los
residuos.
Clasificacin de los residuos
Los residuos que se generan en laboratorios
de instituciones de enseanza
investigacin as como en hospitales
clnicas contienen residuos no peligrosos
municipales, residuos biolgico infecciosos
residuos especiales.
Residuos peligrosos biolgico
infecciosos (RPBI): es todo aquello que ha
entrado en contacto con pacientes o
animales, sus muestras biolgicas y/o cepas
de microorganismos, se clasifican en: sangre,
cultivos, patolgicos (tejidos, rganos, partes
y fluidos corporales, etctera), no anatmicos
(gasas, algodones, jeringas, etctera) y
punzocortantes (lancetas, agujas, pipetas
Pasteur, etctera).
Residuos municipales: son aquellos
que no representan peligro para la salud y
sus caractersticas son similares a los
residuos domsticos comunes.
Residuos especiales CRETI: son
aquellos residuos que constituyen un peligro
para la salud por sus caractersticas
agresivas tales como: Corrosividad,
Reactividad, Explosividad, Toxicidad e
Inflamabilidad Es importante no olvidar que,
la mezcla de residuos municipales con
residuos biolgico infecciosos hace que se
consideren en su totalidad como biolgico
infecciosos, mientras que la mezcla de
residuos biolgico infecciosos con peligrosos
CRETI se deben consideran como peligrosos
CRETI.
Envasado y etiquetado de RPBI para su
desecho.
Los residuos RPBI deben ser envasados de
acuerdo con sus caractersticas fsicas y
biolgico infecciosas conforme la norma
oficial mexicana 087-ECOL-95 (cuadro I.8).
Es importante destacar que todos los
envases tengan impreso el smbolo universal
de riesgo biolgico y leyendas que indiquen
o
la peligrosidad de los residuos y el tipo de
y
residuos que contienen.
o
Los contenedores para
y
punzocortantes deben de ser: De color rojo.
De paredes rgidas.
De polipropileno.
Resistentes a fracturas y prdida del
contenido al caerse.
Destruibles por mtodos fisicoqumicos.
128
 Esterilizables y con tapa, la que puede tener Las hojas de seguridad sern proporcionadas
o no separador de agujas. para cada prctica en el laboratorio.
Precauciones: depositar los RPBI, de De manera general, los envases
acuerdo a su clasificacin, inmediatamente destinados a los residuos CRETI deben
despus de su generacin. ser de cristal de color mbar, con
No compactar los residuos durante el capacidad de uno a cuatro litros, latas de
envasado y no mezclar residuos de diferente
aluminio para solventes (capacidad
mxima de 20 litros) y, en algunos casos
clasificacin.
recipientes de plstico, siempre y cuando
Una vez identificados, separados y
las caractersticas fisicoqumicas de la
envasados correctamente los residuos
sustancia a envasar lo permita. Cada
peligrosos, el personal responsable del residuo debe envasarse en forma
laboratorio se encargar de su recoleccin, individual y colocar en el frasco
tratamiento y disposicin final as como de respectivo el pictograma de seguridad
las medidas necesarias para la desinfeccin, correspondiente.
esterilizacin y limpieza del material y equipo
utilizado en el laboratorio.

Frases R Frases S Combinacin de frases

R7 Puede provocar incendios S3 Conservar en sitio fresco R 20/21 Nocivo por inhalacin y contacto por la piel

No comer ni beber Txico: peligro de efectos irreversibles graves por

R 23 Txico por inhalacin S 20 R 39/25
durante la manipulacin ingestin

No tirar los residuos por Mantenga el contenedor bien cerrado y en un lugar

R 36 Irrita los ojos S 29 S 3/7
los desages fresco

Llevar guantes de Utilice ropa protectora adecuada, guantes y

R 45 Puede ser cancergeno S 37 S 36/37/39
proteccin adecuados proteccin facial o gafas

Cuadro I.6 Ejemplos de frases S y R

Manejo de residuos CRETI

El manejo, consistente en la separacin,

envasado y almacenamiento de cada uno de
los reactivos peligrosos CRETI utilizados en
las prcticas deber realizarse de acuerdo a
cada reactivo en cuestin segn lo indicado
en las hojas de seguridad.
El manejo de accidentes, tales como
derrames, ingestin o salpicaduras, as como
la aplicacin de primeros auxilios debern de
realizarse de acuerdo al reactivo en cuestin
segn lo indicado en la hoja de seguridad.

129
 cido clorhdrico
Identificacin
Frmula qumica: HCl
Apariencia y olor: solucin de color ligeramente
amarillo o incolora
con olor caracterstico muy penetrante.
Marcaje liqudo corrosivo
Sinnimos: cido muritico, cloruro de hidrgeno.
Generalidades
Est presente en el sistema digestivo de muchos
mamiferos y una deficiencia de ste provoca
problemas en la digestin; un exceso provoca
lceras gastricas. La disolucin acuosa grado
reactivo contiene aproximadamente 38% de HCl.
Propiedades fsica y qumicas
PM: 36.46
Solubilidad: soluble en agua
pH de disoluciones acuosas: 0.1 (1.0N), 4.0(0.001N).
Reacciona con la mayora de los metales
desprendiendo hidrgeno.
Con agentes oxidantes como perxido de hidrogeno
genera cloro, el cual es muy peligroso.
Niveles de toxicidad.
DL50 (oral en conejos): 900 mg/Kg, inhalacin en
ratas): 3124 ppm/1 h.
CLMo (concentracin letal minima publicada):
(inhalacin en humanos) 1300 ppm/30 min;
3000ppm/5 min.
Riesgos
Produce gas inflamable cuando se encuentra en
contacto con metales. Se generan v apores txicos e
irritantes de cloruro de hidrgeno cuando se calienta.
Inhalacin: elgas causa dificultad para respirar, tos,
inflamacin y ulceracin de nariz, trquea y laringe.
Exposiciones severas causan espasmo de la laringe
y edema en los pulmones.
Contaco con los ojos y piel: es un irritante severo de
ojos y piel, puede causar quemaduras serias,
dermatitis, reducir la visin o, incluso, la prdida total
de sta.
Ingestin: produce corrosin de las membranas
mucosas de la boca, esfago y estmago, causa
nusea, vmito, disfagia, sed intensa y diarrea
Cuadro I.7. Hoja de seguridad para el cido Clorhdrico.
Primeros auxilios
Ojos: lavar inmediatamente con agua corriente
durante 15 mi nutos.
Piel: quitar ropa y zapatos contaminados, lavar
inmediatamente la zona daada con abundante
agua.
Inhalacin: mover a la persona al aire fresco; si se
dificulta la respiracin proporcionar oxigeno y
mantenerlo caliente y en reposo, no dar a ingerir
nada.
Ingestin: no provocar vmito y dar a beber agua
continuamente, por ejemplo, una cucharada cada 10
minutos o dar a beber leche de magnesia.
En todos los casos de exposicin, el afectado debe
ser transportado al hospital tan pronto como sea
posible.
Manejo y almacenamiento
Peligro: corrosivo y venenoMantngase en envase
de vidrio, en lugares secos, bien ventilados, alejados
de materiales oxidantes y fuentes de ignicin o calor.
Tratamiento en caso de accidente
Control de fuego: en caso de accidente utilizar CO2,
polvo qumico seco o arena seca. Los extinguidotes
de fuego se eligen dependiendo de los alrededores,
ya que el HCl no arde.
Fugas y derrames: ventilar el rea y protegerse con
el equipo de seguridad necesario. Cubrir el derrame
con bicarbonato de sodio o una mezcla de 50:50 de
hidroxido de calcio y cal sodada, mezclar
cuidadosamente. Mantener el materil lejos de fuentes
de agua y drenajes hasta no ser neutralizado como
se indic anteriormente.
Desechos
Neutralizar las soluciones concentradas de cido
clorhdrico con carbonato de calcio o cal y diluir con
agua cuidadosamente. La disolucin resultante
puede verterse al drenaje, con abundante agua. En
caso de soluciones diluidas,
130
Cuadro I.8 Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.

TIPO DE RESIDUO ESTADO FSICO ENVASADO COLOR

Sangre Slido Bolsa de plstico Rojo

Lquido Recipiente hermtico

Cultivos y cepas de Slidos Bolsa de plstico Rojo

agentes infecciosos Lquidos Recipiente hermtico

Residuos no Slidos Bolsa de plstico Rojo

anatmicos Lquidos Recipiente hermtico

Patolgicos Slidos Bolsa de plstico Amarillo

Lquidos Recipiente hermtico
Objetos
punzocortantes Slidos Recipientes rgidos Rojo
usados y sin usar

131
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

II
EXPERIMENTOS

132
 Prctica 1
Soluciones
Tiempo de la prctica 3 horas
Objetivos
Que el alumno:
1. Identifique la existencia de soluciones
en los sistemas biolgicos.
2. Explique los clculos y procedimientos
para preparar soluciones porcentuales,
molares y normales, as como las
diferentes diluciones de stas.
3. Presente ejemplos de soluciones
utilizadas en medicina (solucin
isotnica, Ringer, Darrow y Hartman).
Responda a las siguientes preguntas:
1. Qu es una solucin?
2. Cuntas clases de soluciones
existen?
3. Qu significan los siguientes
trminos: mol, solucin molar y solucin
normal?
4. Qu significan: v/v, p/v, p/p y ppm?
5. Cul es la composicin de las
siguientes soluciones: solucin isotnica
de cloruro de sodio, suero glucosado a
5%, Ringer-lactato?
6. Cules son los tipos de soluciones
que existen in vivo? Mencionar ejemplos.
7. Qu es una solucin isotnica?
8. Qu es una solucin osmolar?
9. Cmo se calcula la osmolaridad de
una solucin?
10. Qu les pasa a los eritrocitos
cuando se ponen en contacto con
soluciones salinas de diferente
osmolaridad?
11. Qu se entiende por dilucin y
dilucin seriada de las soluciones?
Material
Por equipo:
3 vasos de precipitado de 10 ml
3 pipetas de 1.0 ml
3 pipetas de 5.0 ml
3 pipetas de 10.0 ml
Gradilla con 6 tubos de ensayo
Eritrocitos humanos lavados en
solucin
Salina isotnica
Solucin de azul de metileno al 1.0%
Cloruro de sodio en cristales (NaCl)
Balanza granataria
Por grupo:
1 Microscopio marca Leica.
Procedimiento
1. Hacer los clculos correspondientes
para comprobar que la solucin a 0.9%
de NaCl es isotnica con respecto al
plasma (ver pag. 121). Considerar que:
a) El cloruro de sodio se disocia en
solucin acuosa en los iones sodio y
cloruro, por lo que la concentracin
inica se duplica (1 mmol/l = 2 mosm/l).
b) La presin osmtica normal del
plasma es de 290-310 mosm/l.
2. Preparar 20 ml de una solucin de
NaCl a 4.5% (etiquetar como solucin 1).
3. A partir de la solucin anterior,
preparar 25 ml a 0.9% (solucin 2) y 50
ml a 0.045% (solucin 3).
4. Colocar en tres tubos de ensayo 2 ml
de las diferentes soluciones de cloruro
de sodio preparadas en los puntos 2 y 3.
Con la ayuda de un gotero (dejando caer
lentamente por las paredes del tubo) 2
gotas de eritrocitos lavados. Mezclar con
cuidado y dejar reposar a temperatura
ambiente unos minutos. Valorar el grado
de hemlisis que sufren los eritrocitos
133
 cuando se ponen en contacto con las
diferentes soluciones.
5. De las 3 soluciones prepradas con los
eritrocitos tomar una gota de cada una y
por separado colocarlas en un porta-
objetos, colocar un cubre-objetos y
observarlas al microscopio
Ver las intrucciones para el uso del
microscopio
6. Hacer la dilucin y redilucin (dilucin
seriada) de la solucin de azul de
metileno como se muestra en el
siguiente cuadro:
DILUCIN SERIADA DE AZUL DE
METILENO
Tubo H2O (ml) Sol de azul Volumen de
de metileno transferencia
1 2 0.5 ml* - requieren para preparar una solucin
2 2 - 0.5 ml
3 2 - 0.5 ml
4 2 - 0.5 ml
5 2 - 0.5 ml
6 2 - 0.5 ml
*Nota: para mezclar al hacer las
diluciones se debe succionar y soplar
con cuidado la pipeta en cada tubo
varias veces antes de transferir la
dilucin al siguiente tubo.
Resultados
1. Expresar en forma ordenada los
clculos efectuados para cada uno de los
ejercicios.
2. Deducir el movimiento o no del
solvente cuando se ponen en contacto
eritrocitos con soluciones hipo, hiper e
isoosmticas.
3. Calcular la dilucin y la concentracin
de azul de metileno en cada uno de los
seis tubos de la dilucin seriada (ver pg.
93). Asegrese que la coloracin
obtenida disminuya gradualmente
conforme avanza la dilucin.
Problemas
1. Hacer los clculos para preparar una
solucin de KCl al 3%.
2. Hacer los clculos para prepara una
solucin de CaCl2 0.25 M se requieren
15 ml.
3. Calcular el volumen de H2SO4 se
requiere para preparar una solucin 3N
40 ml volumen final.
4.- Prepare 500 ml de una solucin
0.125 M de NaHC03
5.- 250 ml de H2SO4 0.1 M
6.-100 ml de glucosa 0.5 M
7.-Cuantos mililitros de HCl 0.1M se
contiene 0.025 M de HCl
8.-Cuantos gramos de soluto se
requieren para preparar las siguientes
soluciones
125 ml de NaCl al 10%
50 ml de Ca(NO3)2 al 3.35 %
750 ml de CaCl2 al1.5%
9.-Cual presenta la osmolaridad ms alta
NaCl 0.1M o Na2SO4 0.08 M
10.- A un enfermo hay que inyectarle 15
g de KCl y 126 g de glucosa Cunta
agua habr que aadirles para que
resulte un suero 0.4 osmolar?
11.- Expresar en meq/l una
concentracin de Ca2+ de 11 mg/dl.
12.- Una solucin 14 g de glucosa en 25
ml Cul es la concentracin molar de la
solucin?
13.- Calcular la osmolaridad a partir de la
composicin de algunas soluciones
como Dextrosa a 10 % en solucin salina
a 0.45%.
134
14.- Dextrosa a 5 % en solucin salina a
0.2 %.

15.- Describir la composicin de las

siguientes soluciones Hartman, Ringer y
Darrow y demostrar su osmolaridad con
respecto al plasma.

Referencias

1. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn

DO, Sierra UA. Fluidos y electrlitos.
Mxico: JGH Editores; 2000.

2. Pea-Daz A, Arroyo BA, Gmez PA,

Tapia IR, Gmez EC. Bioqumica.
Undcima reimpresin de la 2a. ed.
Mxico: Editorial Limusa; 2004.

3. Laguna J, Pia E. Bioqumica de

Laguna. 5a.ed. Mxico: Editorial El
Manual Moderno; 2002: p. 41-56.

4. Holum JR. Fundamentos de qumica

general, orgnica y bioqumica para
ciencias de la salud. Mxico: Editorial
Limusa Wiley; 2001.

5. Farias GM. Qumica clnica. Dcima

edicin Mxico: Editorial El Manual
Moderno; 1999.

6. Bloomfield MM.Qumica de los

organismos vivos. Mxico: Editorial
Limusa; 1997.

135
 INSTRUCCIONES PARA EL USO DEL MICROSCOPIO MARCA LEICA
1. Nunca use un adaptador entre el
cable y la fuente de alimentacin.
2. Use siempre el microscopio sobre una
superficie dura y estable.
3. Conecte el cable de alimentacin del
microscopio a una toma de corriente con
conexin a tierra. Se suministra un cable
de tres terminales con toma a tierra.
4. Encienda el microscopio girando el
interruptor de control de la iluminacin
situado en la parte inferior izquierda del
instrumento.
5. Coloque el interruptor de control de la
iluminacin en el nivel ms bajo. El
control de iluminacin le permite ajustar
la intensidad de luz.
6. Abra completamente el diafragma de
apertura del condensador girando el
anillo hacia el extremo derecho.
7. Usando el botn de enfoque del
condensador, suba el condensador hasta
el extremo superior de su
desplazamiento. Iluminacin critica
nicamente: si el desplazamiento del
condensador es excesivo, limtelo con
el tornillo situado debajo de la platina
hasta que la lente superior del
condensador se encuentre debajo de la
superficie de la platina.
8. Coloque la preparacin de la muestra
con la muestra en la platina.
9. Gire el revlver hasta situar el
objetivo 4X en la posicin de trabajo.
(pag X)
10. Suba la platina girando el mando de
enfoque macromtrico hasta que
observe la preparacin y, finalmente,
enfoque la muestra con precisin
utilizando el mando de enfoque
micromtrico.
11. Ajuste los tubos oculares a la
distancia de los ojos.
12. Al trmino del uso del microscopio
retirar la muestra de la platina.
13. Bajar la platina hasta el tope y
regresarla a su posicin original si es
necesario.
14. Colocar el revolver de los objetivos
de manera que el objetivo de 4X sea el
que quede en direccin de la lmpara.
15. Desconectar el equipo y enrollar el
cable.
16. Limpiar la platina y oculares con un
pao humedecido con metanol o con un
limpia cristal comercial.
17. Colocar al microscopio la funda
contra el polvo para mantenerlo en
buenas condiciones fsicas y mecnicas.
Partes del microscopio:
1) Oculares.
2) Revolver con 4 objetivos 4X, 10X, 40X
y 100X.
3) Platina.
4) Diafragma.
5) Lmpara.
Tornillo de la platina para desplazar la
muestra.
Interruptor de control de la iluminacin.
Tornillo macromtrico.
Tornillo micromtrico.
1
6
9 3
4
8
7 5
136
 Prctica 2
Regulacin del equilibrio cido-base
despus del ejercicio muscular intenso
y de la ingestin de bicarbonato de sodio
TIEMPO DE PRCTICA: 3 HORAS
Objetivos
1. Al finalizar la prctica, el alumno
constatar las actividades reguladoras
del pulmn y el rin para mantener el
equilibrio cido-base en condiciones que
tienden a romperlo.
2. Mediante la determinacin del pH
observar la variacin de la
concentracin de hidrogeniones en la
orina de un individuo que ha realizado
ejercicio muscular intenso.
3. Relacionar los resultados obtenidos
con los cambios metablicos originados
por el ejercicio muscular intenso.
Conteste las siguientes preguntas:
1. Por qu es importante que se
mantenga constante, dentro de ciertos
lmites, el pH en el organismo?
2. Cules son las fuentes de iones H+
en el organismo?
3. Cules son los sistemas reguladores
que facilitan la eliminacin del H+
producido en el organismo con el fin de
mantener constante el pH sanguneo?
4. Cules son las reacciones de
formacin del cido carbnico (H2CO3) a
partir de CO2 y H2O, y de su disociacin
para formar el ion bicarbonato?
Escrbalas.
5. Qu sistemas amortiguadores
participan directamente en la regulacin
del pH sanguneo?
6. Cules son los sistemas
extrasanguneos que tienden a mantener
el pH extracelular?
Escriba la ecuacin de Henderson y
Hasselbalch aplicada al sistema HCO3
/H2CO3 y, con base en ella, conteste la
siguiente pregunta:
a).Cmo participan el aparato
respiratorio y el rin en el control del pH
sanguneo?
INTRODUCCIN
Dentro de los mecanismos de regulacin
de que dispone el organismo para
mantener la integridad fisiolgica,
aquellos involucrados en la homeostasis
del pH en los fluidos extracelulares
desempean un papel crucial para la
supervivencia del individuo. En este
sentido cabe sealar que, como
resultado de la oxidacin de los
alimentos, un humano adulto promedio
produce alrededor de 20 moles de CO2
al da, Al difundir a la sangre, gran parte
de dicho gas se combina con al agua en
el interior de los eritrocitos, produciendo
cido carbnico (H2CO3), reaccin que
es seguida por la disociacin del H2CO3
para producir el anin bicarbonato HCO3-
y un in hidrgeno (H+). Dado el carcter
de cido dbil del H2CO3, la fraccin
disociada del mismo es pequea; sin
embargo, considerando la gran cantidad
de CO2 que produce el organismo, la
acidificacin de los fluidos extracelulares
sera importante en ausencia de
mecanismos reguladores. En el hombre,
137
la intervencin de los pulmones y los
riones evita que ocurra tal acidificacin
manteniendo en un nivel constante la
concentracin de H+ y, por consiguiente,
del pH.
Para entender el papel que
juegan ambos rganos en la
homeostasis del equilibrio cido-base,
debe tenerse presente que el sistema del
cido carbnico implica la participacin
de un componente gaseoso o voltil (el
CO2) y dos componentes no voltiles (el
HCO3- y el H+). En la sangre, el equilibrio
entre dichos componentes determina el
valor del pH sanguneo, que puede
evaluarse mediante la bien conocida
ecuacin de Henderson-Hasselbach. En
el individuo normal, dicho valor fluctua en
un promedio 7.4, siendo la sangre
venosa enriquecida en CO2 ligeramente
ms cida en relacin con la sangre
arterial. Ahora bien, ya que a
temperatura ambiente el CO2 existe en
estado gaseoso, la cantidad de CO2
disuelto en la sangre depender de la
presin parcial (PCO2) ejercida por el
mismo a nivel de los alvolos
pulmonares. En el mundo, la magnitud
de dicha PCO2 es de aproximadamente 40
mmHg , lo que se traduce en una
concentracin de CO2 sanguneo de
aproximadamente 25 mM; este ltimo
valor incluye no solo el CO2 como tal,
sino tambin el bicarbonato y el cido
carbnico. Considerando el pH
sanguneo normal y el pKa del sistema
bicarbonato-cido carbnico, la relacin
[HCO3-] / [H2CO3 + CO2] es de
aproximadamente 20. Es precisamente
la PCO2 la que es controlada por los
pulmones, ya que durante el proceso de
la exhalacin se elimina CO2,
manteniendo constante la PCO2 en los
alvolos y evitando as que que aumente
el nivel de CO2, disuelto en la sangre.
Todo proceso o patologa que se
Por lo que respecta a los riones,
su participacin en el mantenimiento de
un pH extracelular constante se da a
travs de dos mecanismos: la excrecin
de equivalentes cidos (H+) hacia la orina
y la regulacin de la cantidad de HCO3-
reabsorbido hacia la sangre desde el
filtrado glomerular. A diferencia del
intercambio gaseoso en los pulmones,
los mecanismos de regulacin renal son
de situaciones patolgicas donde se
altera el intercambio de gases pulmonar
(es decir, en la acidosis y alcalosis
respiratorias), en cuyo caso es necesario
aumentar o disminuir la tasa de
reabsorcin del HCO3- , o bien en
estados fisiolgicos que producen
cantidades importantes de cidos
orgnicos (por ejemplo, en la diabetes no
controlada o durante el ejercicio intenso)
donde se incrementa la excrecin de H+
Gran parte de este ltimo aparece en la
orina acomplejado con el amoniaco en
forma de in amonio (NH4+) o asociado
con el fosfato en forma de fosfato
monobsico de sodio (NaH2PO4),
representando este ltimo la llamada
acidez titulable. En general, el pH de la
orina ser un reflejo de la produccin de
cidos no voltiles por el organismo.
El resultado final de los
mecanismos fisiolgicos que participan
en el mantenimiento del equilibrio cido-
base es el de mantener el pH
extracelular en un rango compatible con
el funcionamiento adecuado del
organismo manifieste en una alteracin
en la frecuencia y/o profundidad del
proceso de inhalacin-exhalacin, dar
como resultado una alteracin de la PCO2
alveolar aumentandola o
disminuyndole -con la siguiente
modificacin del del nivel de CO2]
Material
Diez probetas o vasos de precipitado.
Orina.
Solucin de bicarbonato de sodio a 3%.
Potencimetro.
Mtodo
Un alumno por equipo desayunar o
comer normalmente (evitar ingestin de
jugos cidos); despus har lo que se
indica a continuacin.
138
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes
de la clase prctica. Vaciar la vejiga y
descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua
inmediatamente antes de la clase
prctica.
3. Orinar en un vaso de precipitado de
100 ml. Anotar el volumen de la muestra.
4. Ingerir 250 ml de agua.
5. Realizar ejercicio muscular intenso,
como subir y bajar varias veces las
escaleras de tres o cuatro pisos u otro
ejercicio sugerido por el profesor.
6. Obtener muestras de orina cada 15
minutos, como en el inciso 3, hasta
completar por lo menos cinco muestras.
7. A cada muestra se le determinar el
pH inmediatamente despus de haber
sido obtenida ya que con el tiempo el pH
tiende a aumentar debido a la prdida de
dixido de carbono y a que el
crecimiento bacteriano produce
amoniaco a partir de la urea.
Anlisis de resultados
Anlisis de resultados
Una vez obtenido el valor del pH para
cada una de las 5 muestras de orina,
trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en
grupo.
Objetivos (Segunda parte)
1. El alumno constatar el papel del rin
en el mantenimiento del equilibrio cido-
base en una situacin de alcalosis
metablica provocada por la ingestin de
bicarbonato de sodio.
2. Mediante la medicin del pH, observar
la variacin de la concentracin de
hidrogeniones en la orina de un individuo
que ha ingerido una carga de
bicarbonato de sodio.
Hiptesis
Elabore la hiptesis apropiada.
Material
Orina
Solucin de bicarbonato de sodi al 3%
Potencimetro
Mtodo
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes
de la clase prctica. Vaciar la vejiga y
descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua
inmediatamente antes de la clase
prctica.
3. Orinar en una probeta de 100 ml.
Anotar el volumen de la muestra.
4. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de
bicarbonato de sodio.
5. Obtener muestras de orina cada 15
minutos, hasta completar por lo menos 5
muestras.
6. A cada muestra se le determinar el
pH inmediatamente despus de haber
sido obtenida.
Anlisis de resultados
Una vez obtenido el valor del pH para
cada una de las cinco muestras de orina,
trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en
grupo.
Referencias
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto
con aplicaciones clnicas. 4a. ed.
Barcelona: Editorial Reverte; 2004.
2. Montgomery R. Bioqumica: casos y
texto. 6a. ed. Editorial Harcourt-Brace;
1998: cap.4.
3. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn
139
 Prctica 3
Titulacin de un aminocido
con una base y la aplicacin
de la ecuacin de Henderson y Hasselbalch.
Determinacin del pK1 y del pK2
Tiempo de prctica: 3 horas
Objetivo
Que el alumno:
1. Experimente y entienda cmo se
comporta un sistema amortiguador de
pH.
2. Aprenda el uso de la ecuacin de
Henderson-Hasselbalch.
3. Aprenda a calcular el pK de un par
cido-base.
4. Mida el pH de diferentes sustancias y
calcule su concentracin de H+.
5. Aplique estos conocimientos al estudio
de las propiedades de los aminocidos.
Para lograr lo anterior conteste las
siguientes preguntas
planteamientos:
1. Qu es el pH de una solucin?
2. Qu es un sistema amortiguador
cido-base y para qu sirve?
3. Cules son los sistemas
amortiguadores ms importantes en
biologa?
4. Escribir la ecuacin de Henderson-
Hasselbalch.
5. Qu es el pK de un par cido base?
6. Por qu es importante la
concentracin de H+ en los seres vivos?
7. Dibujar la frmula de la glicina, de la
lisina, de la histidina y del cido asprtico
e identificar a los grupos -amino y -
carboxilo de estos aminocidos, as
como su radical, e indicar la naturaleza
del mismo.
8. Qu les pasa a estos grupos
funcionales cuando se someten a pH
cido o bsico?
9. Se pueden usar los aminocidos
como amortiguadores de pH?
10. Son los aminocidos buenos
amortiguadores a pH de 7.0?
11. Cul es el punto isoelctrico de los
aminocidos que tienen un grupo amino
y un grupo carboxilo?
12. Cul es la carga elctrica de los
aminocidos que tienen dos grupos
carboxilo a pH de 7.0?
13. Cul es la carga elctrica de los
aminocidos que tienen dos grupos
amino a pH de 7.0?
y
Material
Cuatro vasos de precipitado de 100 ml.
Pipeta de 1 ml (para el NaOH).
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo.
Glicina 0.025 mol/l pH 2.
Lisina 0.025 mol/l pH 2.
cido asprtico 0.025 mol/l pH 2.
Histidina 0.025 mol/l pH 2.
NaOH 1.0 mol/l.
Mtodo
1. Poner 20 ml de la solucin de glicina
en un vaso de precipitado de 100 ml.
2. Proceder a la medicin del pH.
140
3. Aadir 0.1 ml de NaOH 1.0 mol/l.
Agitar el vaso y volver a medir el pH;
anotar los resultados.
4. Repetir el paso 3 hasta llegar a un pH
aproximado de 12.
5. Hacer lo mismo (pasos 1 a 4) para los
otros tres aminocidos.
Anlisis de resultados
1. Hacer una grfica de pH vs volumen
en ml de NaOH gastados luego de tomar
en cuenta que cada 0.1 ml de NaOH
diluido en 20 ml aumenta la
concentracin de OH en 5 mM.
2. Localizar en la grfica el pI y los
diferentes pK de los aminocidos.
3. Mediante la ecuacin de Henderson-
Hasselbalch cuantificar la relacin entre
cada par de especies ionizables de los
aminocidos a diferentes pH.
4. Identificar a qu pH tienen poder
amortiguador.
Medicin del pH y clculo de la
concentracin de H+ en diferentes
lquidos
Mtodo
1. Pedir a los alumnos desde la clase
anterior que traigan diferentes muestras,
tales como leche, caf, refresco, orina,
saliva, jugo de frutas, etctera.
2. Colocar los lquidos en un vaso de
precipitado y medir el pH en el
potencimetro.
Anlisis de resultados
Calcular la concentracin molar de H+ en
cada uno de las muestras estudiadas.
Referencias
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto
con aplicaciones clnicas. 4a. ed.
Barcelona: Editorial Reverte; 2004.
2. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios
de bioqumica. 4a. ed. Barcelona:
Ediciones Omega; 2005
141
 Prctica 4
Estudio de las protenas corporales
TIEMPO DE PRCTICA: 2 HORAS
Objetivos
1. Aplicar los conocimientos generales
sobre las protenas al estudio de las
protenas corporales.
2. Conocer las alteraciones ms
frecuentes de las protenas plasmticas y
sus consecuencias.
3. Conocer los mtodos generales para el
estudio de las protenas plasmticas.
4. Determinar la concentracin srica de
protena total y de albmina e interpretar
los resultados obtenidos.
INTRODUCCIN
Las protenas son polmeros lineales
constituidos por los aminocidos, que se
unen entre s por medio de enlaces tipo
amida denominados enlaces peptdicos.
Los polmeros compuestos por dos
aminocidos forman un dipptido, por tres,
un tripptido; cuando el nmero de
aminocidos es mayor, oligopptidos y
polipptidos o simplemente se denominan
pptidos. Las protenas son molculas
constituidas por una o ms cadenas
polipptidicas.
Las protenas pueden ser clasificadas en
funcin de aspectos tan diversos como su
composicin, su disposicin espacial, su
funcin biolgica y su localizacin.
Atendiendo a su localizacin dentro del
organismo humano, las protenas pueden
clasificarse en:
Hsticas o tisulares, son las protenas de
los tejidos.
Plasmticas o hemticas, son las
protenas de la sangre.
Aunque las protenas tisulares son de gran
importancia en el organismo, las localizadas
en la sangre (la hemoglobina en los
eritrocitos y las protenas plasmticas), por
su gran accesibilidad, proporcionan con
facilidad informacin importante y, por lo
tanto, son las ms utilizadas en el
laboratorio clnico.
Protenas plasmticas
La sangre est constituida por formas
celulares en suspensin (eritrocitos,
leucocitos y plaquetas) en un medio lquido
llamado plasma. El plasma se obtiene
cuando, inmediatamente despus de extraer
la sangre, se le agregan anticoagulantes
como oxalato, citrato, EDTA o heparina y se
centrifuga. Si se recoge sangre sin
anticoagulante y se deja que sta coagule,
el lquido que se separa se llama suero. El
suero carece de clulas y de factores de la
coagulacin incluyendo la protena
fibringeno, pues sta ha sido transformada
en fibrina insoluble en el proceso de la
coagulacin. El fibringeno constituye slo
de 3 a 6% del total de las protenas en
plasma.
El agua constituye 92 a 93% del plasma o
suero y en ella encontramos electrlitos,
metabolitos, nutrientes, hormonas y
protenas en una proporcin de 7 a 8%; de
estos solutos presentes, las protenas son
las que estn en mxima proporcin,
aproximadamente 6 a 8 g/dl de suero y este
valor es 0.2 a 0.4 g/dl mayor en plasma por
la presencia de fibringeno.
Las protenas plasmticas son un grupo de
ms de 100 molculas distintas con
caractersticas y funciones muy diversas,
142
aunque para fines prcticos el trmino
"protena plasmtica" se usa para todas
aquellas protenas cuya concentracin en
el plasma sea mayor a 10 mg/dl y que
cumplan con alguna funcin especfica
dentro de l. Aproximadamente son 20 las
protenas que cumplen con ambas
definiciones. Todas estas protenas, a
excepcin del fibringeno, se encuentran
tanto en plasma como en suero.
La mayora de las protenas plasmticas
son sintetizadas por el hgado. Las
protenas del plasma, al igual que otras
protenas del organismo, son destrudas y
reemplazadas constantemente, con una
vida media de aproximadamente 10 das.
Las funciones de las protenas plasmticas
pueden agruparse en tres grandes grupos:
de transporte como la transferrina,
lipoprotenas y la albmina; de defensa del
organismo en el ataque a agentes extraos
o para limitar la respuesta inflamatoria,
como las inmunoglobulinas, la a1-
antitripsina, la haptoglobina y el
complemento. Por ltimo, para mantener la
presin onctica de la sangre, necesaria
para prevenir prdidas de lquido del
espacio vascular al intersticial: la albmina
es el ejemplo ms importante de este
grupo.
Mtodos para el estudio de las protenas
plasmticas
El laboratorio clnico cuantifica en una
muestra de suero las concentraciones de
protena total y de albmina. A partir de
estos datos, se calcula la fraccin globulina
como la diferencia entre los dos resultados
anteriores y la relacin albmina/globulina
se calcula a partir de estos ltimos. La
concentracin de otras protenas se
determina por grupos (por ejemplo, las
gamma-globulinas) o individualmente por
mtodos inmunoqumicos (por ejemplo
algunas hormonas o marcadores
tumorales).
Las enzimas se estudian evaluando su
actividad cataltica o su concentracin de
masa mediante mtodos inmunoqumicos.
Tambin es posible el estudio fraccionado
de las protenas, para lo que se recurre a
otros procedimientos ms precisos de gran
ayuda clnica, como la electroforesis, la
inmunoelectroforesis y la inmunodifusin
radial de protenas plasmticas.
Protena total
La suma de las concentraciones de todas y
cada una de las protenas presentes en el
plasma se conoce como protenas totales y
la cifra normal, en promedio, es de 7.1 g/dl,
siendo las cifras lmite entre 6 y 8 g/dl.
Las protenas totales estn integradas por
albmina (ms de la mitad) y las globulinas;
estas ltimas agrupan a todas las protenas
que no son albmina.
La concentracin de las protenas
plasmticas en un momento determinado es
el resultado de tres procesos: la velocidad
de sntesis, el volumen del lquido en que se
distribuyen y la velocidad de degradacin.
En diversos estados patolgicos, estos
procesos pueden superponerse. En la
prctica, la determinacin de la
concentracin de la protena total es un
parmetro que slo refleja los cambios de
las protenas ms abundantes, como la
albmina y las inmunoglobulinas.
La determinacin de protena total es til en
el diagnstico de enfermedades del hgado,
de los riones y de la mdula sea.
En clnica se puede observar hiper o
hipoproteinemias, pero tanto en unas como
en otras, frecuentemente existe disminucin
de la albmina ; casi nunca, aumento; y
generalmente aumento de globulinas, en
alguna de sus fracciones.
La determinacin de las protenas totales
suele realizarse en el suero que carece de
fibringeno y de cualquier anticoagulante
143
que pueda diluir levemente las protenas en
el plasma.
Albmina
La albmina es la principal protena
plasmtica y es sintetizada y secretada por
el hgado a razn de 12 g al da. Supone
alrededor de 25% de la produccin proteica
heptica total y la mitad de toda su protena
secretada. La albmina es una protena
globular compuesta por 585 aminocidos
en una sola cadena polipeptdica con 50%
de -hlice y 15% de estructura , posee
17 puentes disulfuro y tiene una vida media
entre 14 y 20 das.
En el adulto normal se degradan
diariamente 12 g de albmina que pueden
proveer de aminocidos para la sntesis de
otras protenas. Adems de esta funcin
nutritiva, la albmina ayuda a conservar la
distribucin normal de agua ya que produce
cerca de 80% del efecto osmtico de las
protenas plasmticas totales, debido a su
alta concentracin y bajo peso molecular.
La albmina interviene en el equilibrio
cido-bsico y se encarga tambin del
transporte de varias sustancias como son
los cidos grasos, la bilirrubina, varias
hormonas e incluso algunos frmacos
(sulfonamidas, penicilina G, aspirina, entre
otras).
Alteraciones en la concentracin de
albmina. La ms comn es la disminucin
en su concentracin o hipoalbuminemia. En
general, la disminucin de 1 g de albmina
srica equivale a una prdida de 30 g de
protena tisular. Las principales causas de
hipoalbuminemia son las enfermedades
renales, la desnutricin por baja ingestin
de protenas y la sntesis deficiente como
consecuencia de la insuficiencia heptica,
sobre todo en casos de cirrosis. La
manifestacin clnica ms llamativa de la
hipoalbuminemia es el edema.
Las cifras normales de albmina son de 4.5
g/dl y las cifras lmite entre 3.5 y 5 g/dl. La
relacin normal A/G es mayor de uno y es
un indicador importante en algunos estados
patolgicos. Una relacin A/G baja puede
obtenerse porque existe hiperglobulinemia,
hipoalbuminemia o ambas.
Separacin electrofortica de las
protenas del suero
Las tcnicas de electroforesis, enfoque
isoelctrico y cromatografa de intercambio
inico son algunas de las ms importantes
para el estudio de las protenas basadas en
su carga elctrica.
En la electroforesis, si se colocan las
protenas en un soporte (geles polimricos,
almidn o papel) inmersas en una solucin
amortiguadora a un pH determinado dentro
de un campo elctrico, las protenas se
desplazan hacia un polo cargado. En
funcin de la relacin entre el pH del
amortiguador y el pI de la molcula, sta se
mover hacia el ctodo, hacia el nodo, o
permanecer estacionaria (pH=pI), por
influencia del campo elctrico externo.
Cuando se realiza la electroforesis en papel
o acetato de celulosa a pH 8.6, que es un
pH significativamente superior al pI de las
principales protenas plasmticas cuyo peso
molecular oscila entre 66 000 y 700 000, las
protenas estn cargadas negativamente y
se mueven hacia el polo elctrico positivo.
En funcin de su velocidad de
desplazamiento, las protenas del suero se
separan en cinco fracciones principales:
albmina, globulina -1, globulina -2,
globulina , fibringeno  (para plasma
solamente) y globulina  (Fig. 5.1). La
electroforesis no separa los componentes
proteicos en sustancias qumicamente
puras: algunas de estas fracciones
representan decenas a cientos de protenas
individuales y diferentes que slo tienen en
comn la misma velocidad de
desplazamiento electrofortico. Hay que
144
tener en cuenta que la migracin a distinta realiza mediante mtodos como la
velocidad en el campo elctrico, obedece a nefelometra, la turbidimetra y la
la forma y carga de la molcula y menos a inmunodifusin radial y mtodos de
su tamao o peso molecular. inmunoanlisis con reactivos marcados,
Las membranas de acetato de celulosa como el radioinmunoanlisis, el
tienen la ventaja de ser qumicamente enzimoinmunoanlisis, el
homogneas y poder transparentarse, con fluoroinmunoanlisis y el
lo que las sustancias que se separan luminoinmunoanlisis.
pueden cuantificarse por densitometra,
Tabla 5.1 Algunas protenas cuya
una vez teidas. Este aparato condujo
concentracin se determina en el
histricamente a la separacin y
suero
clasificacin operacional de las protenas
NOMBRE DE LA g/L PROPIEDADES Y MOTIVO PARA LA
del plasma humano (Fig. 5.1). El rea de PROTENA FUNCIN PRUEBA

cada pico determina la concentracin de la Albmina 35-50 Transporte de Desnutricin

protena que posee esa movilidad mltiples Hepatopata
particular. sustancias Neoplasias

Ig G 8-17 Inmunidad Inmunodeficiencias

humoral Mieloma

C3 0.5- Protena del Obstruccin biliar

0.9 complemento Lupus eritematoso

Protena C <0.005 Implicada en la Infecciones agudas

reactiva respuesta
inmune

Protena fijadora 0.2- Une y Dao heptico

de vitamina D 0.55 transporta grave
vitamina D3

Haptoglobina 0.5- Fija la Hemlisis

3.2 hemoglobina Sndrome nefrtico

Fibronectina 0.25- Promueve la Sepsis

0.4 adhesin Leucemia
celular, une Pancreatitis aguda
fibrina
La electroforesis separa las protenas del
Transferrina 2.3- Transporte de Hemocromatosis
suero en patrones que pueden ser
4.3 hierro malnutricin
altamente especficos para ciertas
enfermedades como sucede en el mieloma, Ceruloplasmina 0.2- Transporte de Dao heptico
0.55 cobre grave
el sndrome nefrtico, Sndrome nefrtico
la cirrosis o las quemaduras corporales
extensas (Fig. 5.1).
La tabla 5.1 describe algunas de las
protenas cuya cuantificacin es de utilidad
Protenas especficas clnica.
Las protenas plasmticas de inters clnico
pueden determinarse por procedimientos
cuantitativos especficos que proporcionan
una informacin clinica ms precisa que los
mtodos anteriores. La cuantificacin se

145
Alteraciones de las protenas
plasmticas
Dada la gran diversidad de funciones
desempeadas por las protenas
plasmticas en el organismo, son tambin
muchas las alteraciones o disfunciones que
pueden aparecer.
Las alteraciones pueden clasificarse en:
Alteraciones en la cantidad de protenas
totales.
Alteraciones en las fracciones obtenidas
tras una electroforesis, disproteinemias.
Presencia en el plasma de alguna Ig
anormal y/o de alguno de sus fragmentos,
paraproteinemias.
Circulacin en plasma de Ig que
precipitan al descender la temperatura.
Crioglobulinemia.
Defectos aislados de alguna fraccin.
Material
Gradilla con 6 tubos de ensayo
2 Pipetas de 5 ml,
Pipetas automticas
Puntas para pipetas automticas
Reactivo de Biuret para determinacin de
protena: tartrato de K-Na 15 mmol/l,
yoduro de sodio 100 mmol/l, ioduro de
potasio 15 mmol/l y sulfato de cobre 5
mmol/l.
Espectrofotmetro a 540 nm.
Solucin reactiva para albmina: verde de
bromocresol a pH 4.2
Espectrofotmetro a 630 nm.
Suero problema.
Solucin estndar de protenas 7 g/dl.
Solucin estndar de albmina 5 g/dl.
Jeringa*, ligadura y torundas con alcohol.
Precauciones. Evtese la hemlisis. La
concentracin de las protenas del plasma
se modifica por la postura, de forma que
existe un incremento de entre un 10% y un
20% tras 30 minutos de pasar de la
posicin acostada a la ortosttica. Adems
la aplicacin de la ligadura para extraer la
sangre puede producir un aumento
significativo al cabo de unos minutos. En
ambos casos, la modificacin se debe a un
aumento del paso de lquido desde el
compartimiento vascular hacia el intersticial.
Mtodo
Para la determinacin de protena total se
utiliza el mtodo de Biuret modificado, el
cual es de gran especificidad y precisin.
Los polipptidos que contengan, por lo
menos, dos enlaces peptdicos reaccionan
con las sales de cobre en medio alcalino
para formar un quelato coloreado (violeta)
entre el ion Cu2+ y los tomos de oxgeno
del carbonilo y de nitrgeno de la amida del
enlace peptdico. La concentracin de este
complejo es proporcional a la concentracin
de protena total en la muestra. La
absorbencia se determina a 540 nm con un
blanco de reactivos.
Preparar la siguiente serie de tubos:
No. de 1. Blanco 2. Estndar 3. Suero
tubo problema
Estndar - 25 l -
Suero - - 25 l
problema
Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml
de Biuret
Mezclar e incubar 15 min a temperatura
ambiente.
Leer frente al blanco de reactivos a 540 nm.
El color es estable durante 30 min.
Clculo:
ASuero
X [ Estndar .g / dl ] = [Pr otena .total . g / dl ]
AEstndar
Donde A es la absorbencia.
El resultado se obtiene en g/dl.
146
El mtodo es lineal hasta valores de 15 g/dl
(150 g/l).
Valores esperados:
Recin nacidos 5.2 - 9.1 g/dl
Nios (hasta 3 aos) 5.4 - 8.7 g/dl
Adultos 6.0 - 8.0 g/dl
Para la determinacin de albmina se
requiere de la fijacin especfica del verde
de bromocresol a esta protena a
determinado pH producindose un cambio
de coloracin, de amarillo verdoso a verde
azulado. El cambio en la coloracin es
directamente proporcional a la
concentracin de albmina en la muestra.
La absorbencia se determina a 630 nm con
un blanco de reactivos.
Referencias
1. Peters TJ. Clin Chem. 1968; 14: 1147.
2. Murray KR, Granner DK, Mayes PA,
Rodwell VW. Bioqumica de Harper. 16a.
ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno;
2004.
3. Gonzlez de Buitrago JM. Bioqumica
clnica. Madrid: McGraw-Hill Interamericana;
1999.
4. Laguna-Pia. Bioqumica. 4a. ed.
Mxico: Salvat; 1990. Cap. 4.
5. Pacheco Leal D. Bioqumica mdica.
Mxico: Editorial Limusa; 2004.

Preparar la siguiente serie de tubos:

No. de tubo 1. Blanco 2. Estndar 3. Suero

problema
Estndar - 10 l -
Suero - - 10 l
problema
Reactivo de 2 ml 2 ml 2 ml
albmina

Mezclar e incubar 10 min a temperatura

ambiente.

Leer frente al blanco de reactivos a 630

nm.
El color es estable durante 60 min.
Clculo:
ASuero
X [Estndar.g / dl] = [ Albmin a.g / dl]
AEstndar

Donde A es la absorbencia.
El resultado se obtiene en g/dl.
El mtodo es lineal hasta valores de 6 g/dl
(60 g/l).
Los valores mayores de 6 deben diluirse
1:2 con solucin salina.
Valores esperado de 3.5 a 5 g/dl (50 g/l).

147
 Prctica 5
Cintica enzimtica.
Efecto de la concentracin del sustrato
sobre la velocidad de reaccin enzimtica
TIEMPO DE PRCTICA: 2 HORAS
Objetivo
El alumno:
1. Explicar el efecto de la concentracin
de sustrato sobre la velocidad de una
reaccin enzimtica.
2. Calcular por mtodos grficos la
velocidad mxima y la constante de
Michaelis de una reaccin enzimtica.
3. Conocer los diferentes tipos de
inhibidores que existen y estudiar su efecto
sobre la Km y V mx.
4. Conocer aspectos bsicos de
fotocolorimetra (ver pg, 115).
Para lograr los objetivos de esta prctica
contestar las siguientes preguntas:
1. Qu es la velocidad de una reaccin
enzimtica?
2. Cmo se define la constante de
Michaelis (Km) de una reaccin enzimtica?
3. Cmo se define la velocidad mxima (V
mx) de una reaccin?
4. Para qu le sirve a un mdico la
determinacin de la actividad de algunas
enzimas?
5. Cules son las enzimas cuya
determinacin tiene valor diagnstico?
Hiptesis
Si la velocidad de una reaccin enzimtica
es proporcional a la concentracin del
sustrato; cuando la concentracin del
sustrato es muy alta, por lo tanto la enzima
se satura y alcanza su velocidad mxima.
La enzima que sirve de modelo en esta
prctica es la glucosa oxidasa acoplada a la
peroxidasa.
INTRODUCCIN
Las enzimas son las protenas ms
notables de la naturaleza; sin ellas, la vida
como la conocemos no sera posible. Las
enzimas son catalizadores, esto es,
aceleran la velocidad de las reacciones
sobre las que actan sin consumirse en el
proceso. El poder cataltico de las enzimas
es mucho mayor que el de los catalizadores
inorgnicos, algunas de ellas estn
limitadas solo por la velocidad con que
colisionan con sus sustratos; son
catalizadores perfectos.
Aunque las reacciones que ocurren
en la clula son termodinmicamente
favorables, la velocidad a la cual transcurren
la mayora de ellas es extremadamente
lenta; sin la presencia de las enzimas, las
reacciones necesarias para sostener la vida
ocurriran a una velocidad incompatible con
sta. Adems de su enorme poder
cataltico, las enzimas son altamente
especficas por sus sustratos y tienen la
capacidad de regular su velocidad en
respuesta a las concentraciones de sustrato
y la presencia de inhibidores, activadores,
reguladores alostricos, etc. As pues, las
enzimas desempean un papel central en
los procesos biolgicos, son las
responsables de degradar y sintetizar las
molculas que nos forman y de extraer,
transformar y utilizar toda la energa
relacionada con estos procesos. Por ltimo,
las enzimas son las responsables de regular
y coordinar todas las reacciones que
148
ocurren en un organismo para lograr el
delicado balance que representa la vida.
El primer modelo matemtico que
explic de manera general la cintica de las
enzimas no alostricas, donde la velocidad
de la reaccin se incrementa
hiperblicamente conforme aumenta la
concentracin de sustrato, fue propuesto en
1913 por Leonor Michaelis y Maud Menten a
partir de los trabajos previos de Victor Henri
y Archibald Hill. Este modelo postula la idea
central de que la enzima y el sustrato libres
establecen un equilibrio rpido con el
complejo enzima-sustrato; en un segundo
paso ms lento, este complejo se rompe
liberando el producto y regenerando la
enzima libre. La ecuacin de Michelis-
Menten explica la relacin entre la velocidad
de la reaccin catalizada por una enzima y
la concentracin de sustrato a travs de los
dos parmetros de la ecuacin, Vmax y Km.
La ecuacin de Michaelis-Menten puede ser
re-arreglada matemticamente para obtener
su forma lineal, permitiendo determinar de
manera sencilla los parmetros cinticos de
una enzima a travs del grafico de
Lineweaver-Burk. Este mismo grfico
permite inspeccionar rpida y visualmente
las diferentes formas de inhibicin
enzimtica.
El estudio de las enzimas es de
suma importancia dentro de las ciencias
mdicas; las enzimas estn implicadas en el
origen, diagnostico y tratamiento de una
gran cantidad de patologas y es claro que
en el futuro, su preponderancia ser cada
vez mayor. Por ejemplo, la deficiencia de
algunas enzimas, como las proteasas de la
coagulacin en la hemofilia, es causa de
enfermedades hereditarias. La presencia
anormal de algunas enzimas en el torrente
sanguneo ayuda a diagnosticar el dao
especfico de tejidos, este es el caso de la
amilasa y lipasa en las patologas
pancreticas y las transaminasas en las
enfermedades hepticas. Las enzimas son
tambin el blanco de varios frmacos: la
aspirina inhibe a la ciclooxigenasa, el
omeprazol a la ATPasa de protones y el
captopril a la enzima convertidora de
angiotensina; estas inhibiciones redundan
en un efecto teraputico. La capacidad de
producir enzimas recombinantes abri la
posibilidad de utilizarlas rutinariamente con
fines teraputicos, tal es el caso de la
estreptocinasa para la terapia fibrinoltica en
el infarto agudo al miocardio. Es claro que
todas estas aplicaciones no serian posibles
sin la previa y profunda comprensin de la
estructura y funcin de estas fascinantes
molculas.
Fundamento
El mtodo se basa en el hecho de que la
glucosa, en presencia del oxgeno del aire y
con la participacin de la glucosa oxidasa,
se oxida hasta cido glucnico. El perxido
de hidrgeno que se forma en el curso del
proceso se descompone mediante la
peroxidasa. El oxgeno atmico que se
desprende en esta ltima reaccin se
combina con un cromgeno que se colorea
al oxidarse. La intensidad de la coloracin
del cromgeno oxidado es proporcional a la
concentracin de glucosa.
La glucosa oxidasa (-D-glucosa: oxgeno
xidorreductasa, EC1.1.2.4) tiene un peso
molecular de 160 000. Existe en forma
dimrica y contiene dos moles de FAD
como grupo prosttico por mol de enzima.
La glucosa oxidasa es altamente especfica,
hecho que ha permitido su empleo para el
anlisis cuantitativo de glucosa. La reaccin
consiste de dos pasos:
1. Glucosa + glucosa oxidasa-FAD -
gluconolactona + glucosa oxidasa-FADH2
2. Glucosa oxidasa-FADH2 + O2 glucosa
oxidasa-FAD + H2O2
La 4-gluconolactona se hidrata
espontneamente dando cido glucnico.
La reaccin global se expresa:
Glucosa oxidasa
Glucosa + O2 Acido glucnico +
H2O2
La peroxidasa cataliza la transferencia de
oxgeno del perxido a un aceptor que es
149
cromgeno como la ortotoluidina, la Mtodo II (sin inhibidor)
ortodianisidina, la 2,2-azino-bis (3- 1.- Preparar nuevamente una serie de tubos
etilbencentiazolin-6-sulfnico) o la 4-amino- como lo indica la tabla 1.
antipirina (y fenol) que se colorean al
oxidarse. La reaccin se expresa: 2.- Repetir los paos 3 y 4 del Mtodo I
Leer ambas series de tubos en el
E+S ES E+P fotocolormetro; utilizar como blanco el tubo
1.
Material y reactivos
2 Gradillas con 8 tubos de ensaye cada
Resultados (cuadro 5.2)
una.
1 Pipeta de 5 ml. 1. Clculo de la concentracin inicial de
2 Pipetas de 5 ml. sustrato en cada tubo; tomar en cuenta que
1 Matraz Erlemeyer de 100 ml. la solucin de glucosa contiene 40 molas
Fotocolormetro con filtro azul. ml1.
Solucin estndar de glucosa 40 mmol/l y 2. La velocidad ser igual a las unidades
una dilucin 1:10 de sta para los tubos 2, 3 Klett por .5 min-1 de incubacin.
y 4. 3. Con los datos obtenidos completar el
2 frascos con solucin de enzimas: 41.6 cuadro 5.2 y hacer las dos grficas en papel
Uml1 de glucosa oxidasa, 4.6 Uml1 de milimtrico.
peroxidasa, ortodianisidina 0.21 mmol/l. 4. Hacer una segunda grfica con los
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l valores de 1/v vs 1/[S].
como inhibidor. 5. Calcular el valor de la velocidad mxima
Gotero con HCl. (Vmx) y de la constante de Michaelis (Km)
con y sin inhibidor.
6. Determinar el tipo de inhibidor de
Mtodo I (con azida de sodio)
acuerdo con las grficas del punto anterior.
1. En un matraz Erlenmeyer de 100 ml 7. Analizar si los resultados obtenidos estn
preincubar 20 minutos la solucin de de acuerdo con la hiptesis planteada.
enzimas con 0.3 ml del inhibidor.
Tubo Solucin de H2O Soucin
2. Preparar la siguiente serie de tubos (tabla No. glucosa (ml) (ml) de
1). enzimas
(ml)
3.- Considerar un intervalo de 30 segundos 1 0.0 1.0 3
para cada tubo al agregar la enzima. 2 dil 1:10 0.1 0.9 3
3 dil 1:10 0.25 0.75 3
4.- Agitar cada tubo e incubar 5 minutos
4 dil 1:10 0.5 0.5 3
temperatura ambiente y de inmediato
5 0.1 0.9 3
detener la reaccin agregando 3 gotas de
6 0.25 0.75 3
HCl concentrado Considerar un intervalo de
7 05. 0.5 3
30 segundos para cada tubo al agregar el
8 1.0 0.0 3
HCl.

150
Referencias
Sons; 1999.
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2004.
2. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005. Tubo Concentracin de Velocidad de la Velocidad de la
3. Mathews CK, van Holde KE. Bioqumica. No. sustrato molas reaccin reaccin con
de glucosa inicial unidades Klett 5 INHIBIDOR
3a. ed. Espaa: McGraw-Hill ml-1 min-1 Unidades Klett
Interamericana; 2003. ABCISAS (X) ORDENADAS (y) 5 min -1
4. Voet D, Voet JG, Pratt C. Fundamentals 1
of biochemistry. USA: John Wiley and 2
3
4
Tubo Concentracin de Velocidad de la Velocidad de la
No. sustrato molas reaccin unidades reaccin con
5
de glucosa inicial Klett 5 min-1 1/V INHIBIDOR 1/V 6
ml-1 ORDENADAS (Y) Unidades Klett 7
ABCISAS (X) 5 min1 (Y)
8
1
Cuadro 5.2 Resultados
2
3
4
5
6
7
8

Cuadro 5.3 Resultados (inverso)

151
 Prctica 6
Efecto de la insulina sobre la glucemia de la rata
Tiempo de Prctica: 2 Horas
Esta prctica es una simulacin
compuratizada de un fenmeno bioqumico;
tiene el propsito de que los alumnos se
ejerciten en el manejo de los datos
obtenidos por medio de experimentacin
simulada estrictamente controlada.
Objetivos
1. Que el alumno compruebe el efecto de la
insulina sobre la glucemia de la rata.
2. Relacione sus conocimientos sobre el
metabolismo de la glucosa y los
mecanismos del control de la glucemia y los
mecanismos del control de la glucemia en
un modelo experimental sencillo.
Conteste a las siguientes preguntas:
1. Qu es la insulina y cul es su funcin? Anlisis de resultados
2. Dnde se sintetiza y cuntas cadenas
tiene?
3. Qu se sabe del mecanismo por medio
del cual acta?
4. Por qu la insulina se tiene que inyectar
y no se debe administrar por va bucal?
Hiptesis
Si la glucemia en la rata se modifica por la
accin de la insulina, la rata control
mostrar una glucemia diferente a la
experimental. Analizar la hiptesis
apropiada.
Mtodo
1. Encender la computadora y localizar el
icono del programa. El efecto de la insulina
sobre la glucemia de la rata. Hacer doble
clic sobre este icono.
2. Hacer clic sobre los botones que indican
cada de las partes de la prctica; empezar
por leer las
instrucciones, los objetivos y el fundamento
de la prctica para continuar con la parte
experimental.
3. Seguir todos los pasos de la prctica;
poner especial atencin en la obtencin de
los datos experimentales que dbern ser
anotados en papel como cualquier prctica
convencional.
4. Repetir el experimento las veces que el
usuario quiera, o las veces que sean
necesario, hasta obtener los datos
completos del experimento. Se sugiere
repetirlo por lo menos dos veces y hacer un
promedio de los datos obtenidos.
5. Hacer una tabla con dichos datos,
graficarlo, analizar el significado de los
mismos y, de acuerdo a lo anterior, validar o
rechazar la hiptesis del experimento.
1. Analizar si los resultados obtenidos estn
de acuerdo con la hiptesis planteada.
2. Plantear cul sera el resultado esperado
si se hubiera trabajado con ratas diabticas.
3. Relacionar los datos con el control
hormonal de la glucemia.
4. Hacer el informe de la prctica con los
resultados y las conclusiones que de stos
se deriven.
Referencias
1. Stryer L. Bioqumica. 5a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2003.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 5a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2001.
3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005.
152
 Prctica 7
Estudio del bombeo de protones por levaduras;
efecto de los inhibidores de la cadena de
transporte de electrones y de los desacoplantes
Tiempo de prctica: 2 horas
Objetivos
1. Que el alumno relacione el consumo de
glucosa con los cambios de pH producidos
por las levaduras.
2. Que el alumno describa las vas por las
cuales la glucosa genera los cambios de
pH.
3. Que el alumno interprete el efecto de
los inhibidores y los desacoplantes sobre
la salida de protones.
Responda a las siguientes preguntas:
1. Cules son las fuentes de carbono
que usa la levadura?
2. Cules son las vas metablicas que
catabolizan a los carbohidratos?
3. En qu consisten la gluclisis y la
fosforilacin oxidativa?
4. Cules son los productos finales del
catabolismo de los carbohidratos en las
levaduras?
5. Cules son los inhibidores de la
cadena respiratoria de los sitios I, II y III?
Describa su efecto sobre el consumo de
O2 y la sntesis del ATP.
6. Cul es el mecanismo por medio del
cual los protonforos desacoplan la
fosforilacin oxidativa? Describa su efecto
sobre el consumo de O2 y la sntesis del
ATP.
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae
son organismos unicelulares que se
dividen por gemacin. En comn con otras
clulas eucariontes, las levaduras tienen
un ncleo ; ; en donde reside la
informacin gentica de la clula; ,
mitocondrias ; en donde se lleva a cabo la
sntesis de ATP; y un retculo
endoplsmico y aparato de Golgi que se
encargan de la sntesis de protenas cuya
localizacin final es la membrana
plasmtica o el exterior.
A nivel de la membrana plasmtica, las
levaduras tienen una ATPasa de H+ que
acopla la hidrlisis del ATP con el bombeo
de protones hacia afuera de la clula.
Esta protena es semejante desde un
punto de vista estructural y funcional a la
ATPasa de Na+/K+ de las clulas
animales y, al igual que la bomba de
sodio/potasio, se inhibe con
concentraciones micromolares de
vanadato. Como resultado de la actividad
de la ATPasa de H+ en la levadura, se
genera un gradiente electroqumico de
protones que se utiliza para impulsar el
transporte de nutrientes al interior de la
clula, proceso catalizado por sistemas de
transporte llamados simportadores o
uniportadores. Para darse una idea de la
importancia de esta enzima en la
economa celular y en la energizacin de
la membrana celular, basta decir que la
ATPasa de H+ consume hasta un 25 %
del ATP que se sintetiza en la clula.
Adems de esta ATPasa de H+ de la
membrana plasmtica, las levaduras
tienen otra bomba de protones en la
153
membrana interna de las mitocondrias, la
ATP sintasa, que se encarga de la sntesis
del ATP. En contraste con la enzima de
membrana plasmtica, el flujo de protones
a travs de la ATP sintasa induce la
sntesis de ATP. Uno de los inhibidores
ms efectivos de esta enzima es la
oligomicina.
As, se puede proponer uno de los
muchos ciclos en los que interviene el
ATP en la levadura: por un lado, el ATP se
sintetiza en la mitocondria por medio de la
ATP sintasa, y a nivel de la membrana
plasmtica, la ATPasa de H+ lo hidroliza
para bombear protones al exterior de la
clula. El factor comn en ambos casos es
un flujo de protones a travs de la
membrana.
Hiptesis
Si las levaduras consumen glucosa, se
observar una disminucin progresiva de
su concentracin en el medio de cultivo
con el tiempo y cambios en el pH
extracelular.
Material
Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo del
potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae)
200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una
concentracin final de 1%.
Solucin de dinitrofenol 40 mmol/l en
etanol.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l.
Agua destilada.
Mtodo
Experimento 1 (control)
1 .Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de
agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir
la medicin dos veces ms con intervalos
de 3 minutos para obtener la lnea basal.
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar
y medir el pH.
4. Determinar el pH de la solucin cada 5
minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos
2 veces ms.
EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de
agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.2
ml de la solucin de dinitrofenol 40 mmol/l,
concentracin final de 200 mol/l.
3. Determinar el pH de la solucin y repetir
la medicin dos veces ms con intervalos
de 3 minutos para obtener la lnea basal.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento
control.
EXPERIMENTO 3 (AZIDA)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de
agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.5
ml de la solucin de azida de sodio 400
mmol/l, concentracin final de 5 mmol/l.
Agitar con cuidado.
3. Determinar el pH de la solucin y repetir
la medicin dos veces ms con intervalos
de 3 minutos para obtener la lnea basal.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento
control.
6. Registrar sus datos en la siguiente
tabla.
154
 mamferos (ver fig. 7.1).

pH
Referencias
Tiempo Glucosa Azida de
(min) Dinitrofe sodio 1. Pea A. Studies on the mechanism of
nol
K+ transport in yeast. Arch Biochem
0 Biophys. 1975; 167:397-409.
5
2. Pardo JP. La ATPasa de H+ de la
10 membrana plasmtica de los hongos.
15 Mensaje Bioqumico. 1990; 13: 119-172.
20
Glucosa
30
40
Anlisis de resultados
ADP + Pi
Glucosa
1. Hacer una grfica de cada uno de los H
+
H
+

experimentos; utilizar los valores de las ATP ADP

lecturas de pH contra tiempo. ATP
Etanol
2. Analizar el significado de los cambios
de pH en el experimento control, con H
+ +
H H
+

dinitrofenol como desacoplante y con

azida de sodio. +
H
3. Hacer una relacin de las vas que NAD NADH ADP + Pi
producen estos cambios; tomar en cuenta
ATP
que las levaduras poseen una ATPasa de
protones en la membrana mitocondrial que Acetaldehdo

se encarga de sintetizar ATP y que tienen Mitocondria ADP

otra ATPasa de protones en la membrana ADP
plasmtica cuya funcin es similar a la
bomba de Na+/K+ en las clulas de los

155
 Prctica 8
El efecto del etanol sobre la lipoperoxidacin
Tiempo de Prctica: 2 Horas
Esta prctica es una simulacin
compuratizada de un fenmeno bioqumica;
tiene el propsito de que los alumnos se
ejerciten en el manejo de los datos
obtenidos por medio de experimentacin
simulada estrictamente controlada.
Mtodo
1. Encender la computadora y localizar el
icono del programa. El efecto de la insulina
sobre la glucemia de la rata. Hacer doble
clic sobre este icono.
2. Hacer clic sobre los botones que indican
cada de las partes de la prctica; empezar
por leer las instrucciones, los objetivos y el
fundamento de la prctica para continuar
con la parte experimental.
3. Seguir todos los pasos de la prctica;
poner especial atencin en la obtencin de
los datos
experimentales que debern ser anotados
en papel como cualquier prctica
convencional.
4. Repetir el experimento las veces que el
usuario quiera, o las veces que sean
necesario, hasta obtener los datos
completos del experimento. Se sugiere
repetirlo por lo menos dos veces y hacer un
promedio de los datos obtenidos.
5. Hacer una tabla con dichos datos,
graficarlo, analizar el significado de los
mismos y, de acuerdo a lo anterior, validar o
rechazar la hiptesis del experimento.
Referencias
1. Stryer L. Bioqumica. 5a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2003.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 5a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2001.
3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005.
156
 Prctica 9
Estudio general del metabolismo
de los carbohidratos
Tiempo de prctica: 3 horas
Objetivos
1. Aplicar los conocimientos generales
sobre los carbohidratos a su estudio en los
tejidos o lquidos corporales.
2. Conocer el metabolismo de la glucosa.
3. Conocer las alteraciones ms
frecuentes del metabolismo de los
carbohidratos.
4. Conocer los aspectos bsicos de las
determinaciones del laboratorio clnico
para valorar el funcionamiento del
metabolismo de los carbohidratos.
5. Describir los principios analticos para la
determinacin de glucosa y fructosaminas,
llevar a cabo sus determinaciones y
correlacionar los valores obtenidos con
los valores normales de glucosa y
fructosaminas en suero o plasma.
Conteste las siguientes preguntas:
1. Qu son los carbohidratos y cmo se
clasifican?
2. Cules son las funciones que
desempean los carbohidratos en el
organismo humano?
3. Cmo se lleva a cabo la digestin y
absorcin de los carbohidratos?
4. Cules son las vas metablicas en las
que participan los carbohidratos?
5. Qu es la glucemia y cmo se regula?
6. Cules son las principales alteraciones
de la digestin, absorcin y metabolismo
de los carbohidratos (dficit de
glucosidasas intestinales, malabsorcin
intestinal de azcares, enfermedades del
metabolismo de la fructosa y de la
galactosa, diabetes mellitus, secuelas de
la diabetes, glucogenosis, etctera)?
7. Cul es el mecanismo por el cual la
glucosa puede causar dao a los tejidos
(glucosilacin proteica: formacin de
bases de Schiff, puentes glucosdicos
AGE).
8. Cules son las pruebas de laboratorio
ms utilizadas para el estudio de los
carbohidratos corporales?
INTRODUCCIN
La glucosa es cuantitativamente el
carbohidrato ms importante del que
dispone el cuerpo, ya sea por absorcin
de la dieta o por sntesis interna. Por
consiguiente, la mayora de las pruebas
clnicas estn basadas en el estudio del
metabolismo de la glucosa. Se conocen
varias alteraciones de este metabolismo,
clasificndolas como:
Primarias, alteraciones en el metabolismo
de carbohidratos (diabetes mellitus,
hiperinsulinismo, entre otras).
Secundarias, manifestaciones que
acompaan a otras enfermedades
(sndrome de Cushing, afecciones
hepticas, hipofisiarias o tiroideas, entre
otras).
Entre los procedimientos diagnsticos
para valorar el funcionamiento del
metabolismo de los carbohidratos los ms
importantes son los siguientes:
Glucosa plasmtica en ayunas.
Glucosa en orina.
Cuerpos cetnicos en sangre
(cetonemia) y en orina (cetonuria).
157
 Prueba oral de tolerancia a la glucosa. Mtodo
Hemoglobina glucosilada.
DETERMINACIN DE LA GLUCEMIA BASAL
Fructosaminas.
POR GOD-POD/TRINDER
Determinacin de hormonas
relacionadas con el metabolismo de El mtodo ms utilizado en el laboratorio
carbohidratos (insulina, pptido "C" y clnico es el de la glucosa oxidasa (GOD).
glucagn). Esta enzima cataliza la reaccin de la
Determinaciones de enzimas y sustratos glucosa presente en la muestra.
hidrocarbonados en clulas y tejidos. GOD
Otras determinaciones Glucosa + O2 + H2O H2O2 +
(microalbuminuria, determinaciones Gluconato
inmunolgicas y determinacin de
receptores).
La cuantificacin de los resultados puede
Para llevar a cabo la determinacin de llevarse a cabo de la siguiente manera:
glucosa plasmtica en ayunas (basal)
Mediante polarografa, determinacin del
utilizaremos un mtodo enzimtico
consumo de oxgeno con la ayuda de un
colorimtrico y para la determinacin de
electrodo de oxgeno. La cantidad de
glucosa y cuerpos cetnicos en orina
glucosa en la muestra es directamente
utilizaremos tiras reactivas.
proporcional a la cantidad de oxgeno
consumido. Mtodo muy utilizado en
Material
sistemas automatizados de anlisis
Gradilla con 3 tubos de ensayo.
clnico.
Pipetas de 0.1 y 1 ml.
Enzimtico colorimtrico, por
Solucin reactiva para glucosa: TRIS 92
determinacin de la quinona producida por
mmol/l, pH 7.4; fenol 0.3 mmol/l, glucosa
la accin de la peroxidasa (POD), en
oxidasa 15 000 U/l, peroxidasa 1000 U/l y
donde un cromgeno pasa de su forma
4-aminofenazona 2.6 mmol/l.
reducida (incolora) a su forma oxidada
Solucin reactiva para determinacin de
(coloreada). El mtodo utilizado para esta
fructosaminas 1: proteinasa K 786 U/ml,
determinacin es el de Trinder. En l la
peroxidasa 60 U/ml, amortiguador de pH y
intensidad del color es directamente
diversos estabilizadores.
proporcional a la cantidad de glucosa
Solucin reactiva para determinacin de
presente en la muestra.
fructosaminas 2: cetoamina oxidasa 9
U/ml, 4-aminoantipirina 10.5 mmol/l, EDTA POD
50 mmol/l, amortiguador de pH y 2H2O + Fenol + 4-AF Quinona +
estabilizadores. H2O
Solucin estndar de glucosa 100 mg/dl. Preparar la siguiente serie de tubos:
Solucin estndar de fructosamina 150
mol/l. No. de tubo 1. Blanco 2. Estndar 3. Suero
Curva patrn de fructosaminas (DA problema
contra concentracin) 50, 100, 200, 400 Estndar - 10 l -
mol/l. Grfica proporcionada por la
coordinacin.
Suero - - 10 l
Suero o plasma problema (estable 3 das
a 2-8C). problema
Espectrofotmetro a 505 y 620 nm. Solucin
reactiva para 1 ml 1 ml 1 ml
glucosa
Mezclar e incubar 15 minutos a
temperatura ambiente.

158
 La coloracin es estable 30 minutos.
Medir la absorbencia (A) frente a blanco
de reactivos a 505 nm.
Clculo:
ASuero
X [Estndar.g / dl] = [ Albmin a.g / dl]
AEstndar
El resultado se obtiene en mg/dl (x 0.0555
= mmol/l).
El mtodo es lineal hasta valores de 500
mg/dl.
Diluir el suero 1:2, si la concentracin de
glucosa es mayor a 500 mg/dl con
solucin salina.
La hemlisis hasta 0.3 g/dl de
hemoglobina no interfiere.
Los anticoagulantes como el EDTA,
oxalato, heparina o fluoruro no afectan a
los resultados.
La glucosa en suero o plasma es estable
tres das a 2-8C. A temperatura
ambiente, la glucosa presente en una
muestra de sangre entera puede
desaparecer por completo al cabo de 6
horas debido a la gluclisis en los
eritrocitos. Adems, la contaminacin
bacteriana y la presencia de cantidades
elevadas de leucocitos, pueden tambin
aumentar dicho proceso, por
consiguiente:
Siempre que la muestra sea sangre total,
la determinacin de la glucosa debe
realizarse durante la media hora siguiente
a su recoleccin.
De lo contrario, aadir un conservador que
inhiba la gluclisis (fluoruro sdico).
GLICACIN NO ENZIMTICA DE PROTENAS.
FRUCTOSAMINAS Y HEMOGLOBINA GLICADA
El trmino glicosilacin no enzimtico de
las protenas se refiere a la reaccin entre
los azcares reductores con los grupos
amino
libres de las protenas, por un mecanismo
diferente al empleado en la reaccin
catalizada por las enzimas
glucosiltransferasas, por lo que la unin
que se establece entre el azcar y la
protena no es de naturaleza glucosdica.
Se prefiere el uso del trmino glicacin en
lugar de glicosilacin o glucosilacin (para
el caso de la unin de glucosa con la
protena) para este tipo de reaccin. La
glicacin es una reaccin de
condensacin entre la funcin aldehdo o
cetona de un azcar reductor y un grupo
amino libre de una protena (residuo
amino terminal o psilon amino de una
lisina) en la que se genera una base de
Schiff, que se transforma en una
cetoamina estable llamada producto de
Amadori o fructosamina.
Los productos de Amadori pueden sufrir
una serie de modificaciones como la
condensacin entre dos de ellos para
formar productos complejos de estructura
qumica no del todo aclarada llamados
AGE (Advanced Glycation End products, o
productos de glicacin avanzada) ver la
figura 10.1.
La glicacin depende exclusivamente de
los niveles de glucosa en los lquidos
corporales y del tiempo de contacto entre
sta y las protenas. De ah que, la
determinacin de los productos de
glicacin puede emplearse como medida
del nivel promedio de la glucosa
sangunea durante un cierto perodo de
tiempo, el cual depender de la vida
media de la protena que se analice.
159
 !"#$%&' !"#$%&' !"#$%&' !"#$%&'
entre la determinacin instantnea de la
)
(
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( (*) glucemia y la valoracin a largo plazo
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+
,
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(
dada por la HbA1.
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La determinacin de la Hb glicada puede
( ,
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con hiperglucemia, una hiperglucemia
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4
transitoria secundaria al estrs y una
diabetes mellitus.
./01"2' 3'2$45$461 7899 4444 +$#"';8&' '>'&?'5' :.@

Fig. 10.1. Productos de la glicacin
avanzada
La hemoglobina glicada y las protenas
sricas glicadas (fructosaminas) se utilizan
como parmetros de medida a largo plazo
de la evaluacin del estado del
metabolismo de los carbohidratos en el
diagnstico, control y tratamiento de la
diabetes (una enfermedad caracterizada
por los niveles de glucosa circulante
elevados). Hay un consenso general en
que las complicaciones crnicas de la
diabetes como las retinopatas,
nefropatas, neuropatas
aterosclerosis acelerada, entre otras, son
consecuencia de los niveles altos de
glucosa en la sangre, los que pueden ser
determinados midiendo la concentracin
de protenas glicadas.
El primer indicador retrospectivo del curso
de la glicemia en el tiempo, que se puso al
alcance de los laboratorios clnicos fue la
hemoglobina glicada (HbA1 HbA1c).
sta refleja el promedio de la glucemia de
las 6 a 8 semanas previas a la toma de la
muestra. La hemoglobina tiene una
velocidad de recambio menor que las
protenas plasmticas, por lo que, la
determinacin de fructosaminas puede
emplearse como ndice del control de la
glucemia en un periodo ms corto, de
alrededor de dos semanas previas a la
toma de sangre. Es decir, que cubre un
periodo de tiempo intermedio
!
La determinacin del nivel de glicacin de
la albmina plasmtica (glicoAlb), que
tiene una vida media de 14 a 20 das,
refleja el promedio de la glucemia (y por
tanto, el grado de control del paciente) en
un periodo que va desde 1 a 3 semanas
previas a la extraccin de sangre. Aunque
la albmina es el componente srico
glicado cuantitativamente ms importante,
otras protenas sricas tambin sufren
glicacin. La vida media de estas
protenas circulantes es de slo unos
pocos das, por lo cual la determinacin de
las protenas sricas glicadas totales
(PSG) refleja la glucemia promedio de los
y la 15 das previos a la toma de muestra.
La determinacin de estos productos
glicados se lleva a cabo mediante las
siguientes reacciones: La proteinasa K
digiere las protenas glucosiladas para dar
fragmentos de protenas, los cuales por
medio de la cetoamida oxidasa, oxidan
sus enlaces cetoamida, dando como
resultado aminocidos y perxido de
hidrgeno. La peroxidasa cataliza la
transferencia de oxgeno del perxido a un
aceptor que es un cromgeno, que se
colorea al oxidarse. La absorbencia del
cromgeno oxidado a 620 nm es
proporcional a la concentracin de
protena glicada.
La reaccin completa es la siguiente:
Proteinasa K
Protena glicada Fragmentos de protena
glicada

160
 Cetoamina oxidasa Colocar la tira reactiva horizontalmente
Fragmentos de protena Aminocidos sobre un papel absorbente, en el
+ H2O2 transcurso de 30 segundos a 2 minutos
Peroxidasa interpretar los resultados para ello:
H2O2 + Cromgeno Cromgeno Comparar la tira reactiva con los bloques
oxidado + H2O de colores que aparecen en la caja de las
Procedimiento para la determinacin de tiras reactivas (cambios en la coloracin
fructosaminas: despus de 2 minutos no tienen
importancia clnica).
1. Vaciar en un tubo de ensayo 0.5 ml (500 l)
Composicin de las tiras reactivas es la
de reactivo 1 para fructosaminas.
siguiente:
2. Agregar 0.02 ml (20 l) de suero o plasma
problema. Glucosa, 10.54% de glucosa oxidasa
(Aspergillus, 250 UI), 0.2% de peroxidasa
3. Incubar 10 minutos a temperatura
(rbano, 2500 UI) y 5% yoduro de potasio.
ambiente.
Cetonas, 4.5% de nitroprusiato de sodio.
4. Agregar 0.1 ml (100 l) de reactivo 2 para
fructosaminas. Referencias
1.Gonzlez de Buitrago JM. Bioqumica
5. Mezclar, leer la absorbencia inicial al cabo
clnica. McGraw-Hill Interamericana
de 30 segundos a 620 nm.
Editores; 1999.
6. Leer nuevamente la absorbencia al cabo de 2.DOcon, C. Fundamentos y tcnicas de
1 minuto. anlisis bioqumico. Editorial Paraninfo;
1998.
Clculo:
3.Chernecky CC. Pruebas de Laboratorio
Anotar la A del tubo e interpolar en la grfica y Procedimientos Diagnsticos. 2a. ed.
de A contra concentracin de fructosamina McGraw-Hill Interamericana Editores;
en mol/l que ser proporcionada en la 1999.
coordinacin de prcticas. 4.Gaw, A. Bioqumica clnica. 2a. ed.
Valores esperados 122 - 236 mol/l. Editorial Harcourt; 2001.
5.Anderson SC, Cockayne S. Qumica
El mtodo es lineal hasta 1734 mol/l.
clnica. Mxico: McGraw-Hill
Determinacin de glucosa y de cuerpos
cetnicos en orina con tiras reactivas Interamericana Editores; 1995.
6.Actis SM, Rebolledo O. Avances en la
Aunque los cuerpos cetnicos son productos valoracin de fructosamina: ventajas de un
intermedios del metabolismo de los cidos nuevo equipo diagnstico aplicado a
grasos, la variacin de sus niveles en sangre estudios poblacionales. Acta Bioqum Cln
y en orina informa indirectamente acerca del Latinoamer. 1991; 25 (4): 391-402.
metabolismo de los carbohidratos.

Recolectar una muestra de orina en un

recipiente de plstico o de vidrio limpios (si la
muestra no se procesa durante la primera
hora despus de su obtencin, deber
refrigerarse).
Sumergir la tira reactiva en la orina y retirarla
inmediatamente.

161
 Prctica 10
Determinacin de lpidos
y lipoprotenas plasmticas.
Tiempo de prctica: 2 horas
Objetivos
1. Recordar la estructura de los diferentes
lpidoscirculantes y sus funciones.
2. Describir las diferentes fuentes de colesterol,
su funcin y la dinmica del colesterol
plasmtico.
3. Investigar el papel del colesterol y otros lpidos
en el desarrollo de la aterosclerosis.
4. Describir la composicin y la funcin de las
lipoprotenas.
5. Describir los principios analticos para la
determinacin del colesterol total, colesterol de
HDL y de LDL, apolipoprotenas y triacilgliceroles
plasmticos.
6. Calcular la concentracin de colesterol de
VLDL y de LDL a partir de las concentraciones
de colesterol total, de colesterol de HDL y
triacilgliceroles.
INTRODUCCIN
Los dos lpidos de la sangre con un mximo
inters en el diagnstico clnico son el
colesterol y los triacilgliceroles (TAG); ambos
se transportan en las lipoprotenas, que son
partculas globulares de alto peso molecular
con un ncleo formado por lpidos
hidrofbicos ; TAG y steres de colesterol; ,
los cuales aportan la mayor parte de la masa
de la partcula, y por una sola capa
superficial de molculas de fosfolpidos,
colesterol y protenas o polipptidos que
rodean al ncleo y estabilizan la partcula
para que permanezca en solucin dentro del
plasma. Las lipoprotenas principales que
circulan en el plasma humano son los
quilomicrones, las lipoprotenas de muy
baja densidad (VLDL), las lipoprotenas
de baja
densidad (LDL) y las lipoprotenas de
alta densidad (HDL).
El colesterol es esencial para el
crecimiento y la viabilidad de las clulas
de los organismos superiores; sin
embargo, los altos niveles de colesterol
srico son considerados como un
importante factor de riesgo de
enfermedad y muerte porque
contribuyen a la formacin de placas
aterosclerticas. El colesterol se
transporta en la sangre por tres
diferentes lipoprotenas: LDL, HDL y
VLDL. Los estudios epidemiolgicos
han establecido con claridad que
mientras mayor sea el valor del
colesterol-LDL mayor ser el riesgo de
enfermedad cardiaca aterosclertica;
por el contrario, mientras mayor sea la
concentracin del colesterol-HDL
menor ser el riesgo de enfermedad
cardiaca coronaria. En otras palabras,
las cifras elevadas de LDL son
atergenas, en tanto que las de HDL
son protectoras, por lo que el clculo
del cociente colesterol-HDL/colesterol-
LDL que es normalmente de 0.34
0.11 constituye un ndice de
aterogenicidad.
En general, se cree que las
lipoprotenas que contienen apoB 100
son potencialmente atergenas.
162
ALTERACIONES DE LAS LIPOPROTENAS
PLASMTICAS Y ATEROGNESIS
Desde el punto de vista clnico se ha atribuido a
determinadas lipoprotenas el papel de factores
esenciales directos en el desarrollo o en la
prevencin de ciertas enfermedades,
principalmente de tipo vascular. Las anomalas
en el transporte de lpidos ocurren bsicamente
en los sitios de produccin o en los de utilizacin
de las lipoprotenas del plasma y provocan varios
tipos de hipo e hiperlipoproteinemias disminucin
o elevacin de los niveles plasmticos de
lipoprotenas.
El anlisis de las lipoprotenas plasmticas tiene
valor diagnstico, ya que permite el
reconocimiento de defectos primarios
hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia
familiares, deficiencia familiar de lipoprotena
lipasa o apoprotena CII, etctera; y es de gran
valor para describir la alteracin lipoproteica
subyacente a otro trastorno clnico, como la
diabetes, la obesidad, la hepatitis, el
hipotiroidismo, el consumo de alcohol, el uso de
anticonceptivos orales.
Cabe destacar que la mayor parte de las
hiperlipo-proteinemias, aquellas que consisten
en una elevacin de la concentracin de
colesterol de LDL, de VLDL y de Lp(a), conllevan
un alto riesgo de producir accidentes cardio y
cerebrovasculares, necrosis o prdida de la
funcin en las extremidades, lo cual se debe a
que el colesterol es el agente causal de la
aterosclerosis subyacente en dichos
padecimientos. De ah el inters actual por el
diagnstico temprano y el tratamiento de estas
hiperlipoproteinemias.
Se desconoce el mecanismo exacto por el cual
la hipercolesterolemia conduce a la
aterosclerosis. Sin embargo, se cree que al
alterarse la relacin colesterol/fosfolpido que
lleva consigo un incremento en la viscosidad y
maleabilidad de las membranas se inducen
cambios en el endotelio y en los monocitos con
un aumento en su migracin y adherencia
probablemente la primera anomala celular
de la aterognesis.
Segn la hiptesis de respuesta a la
lesin, la ms aceptada sobre la
patognesis de la aterosclerosis,
cualquier lesin en el endotelio o
msculo liso de la pared vascular que
puede ser causada por la
hipercolesterolemia,
hipertrigliceridemia, el estrs mecnico
de la hipertensin arterial, agresiones
qumicas como el
tabaquismo, etctera altera la relacin
existente entre el endotelio vascular, las
clulas del msculo liso, los monocitos,
los macrfagos, las plaquetas y los
componentes de la sangre circulante,
en particular los lpidos, y genera una
respuesta inflamatoria fibroproliferativa,
con la participacin de un gran nmero
de factores de crecimiento, citocinas y
molculas vasorreguladoras, que dan
origen a las placas aterosclerticas.
Por otro lado, se ha observado que las
partculas LDL oxidadas por los
macrfagos lo cual ocurre normalmente
causan lesin al endotelio, lo que
puede ser, de manera particular,
atergeno. La formacin de anticuerpos
contra LDL oxidadas tambin puede ser
importante en la formacin de la placa.
Por tanto, hay un inters clnico cada
vez mayor en la funcin de los
antioxidantes, como las vitaminas C, E
y el -caroteno. Los estrgenos
tambin pueden actuar como
antioxidantes en la prevencin de
aterosclerosis. Inclusive, se ha visto
que las lipoprotenas HDL tienen
efectos antioxidantes in vitro.
Tradicionalmente, las anomalas de los
lpidos sanguneos se han valorado con
un examen global de colesterol y TAG.
En la actualidad estos datos son
insuficientes para valorar correctamente
una hiperlipemia, por lo que se deben
163
 investigar tambin las diferentes fracciones
lipoproteicas.
FUNDAMENTO DE LAS DETERMINACIONES
La evaluacin de pacientes en los que se
sospecha alguna alteracin en los lpidos
plasmticos puede incluir la medicin de
colesterol total y TAG y de una o ms
lipoprotenas. Adems, la cuantificacin de Lp(a),
apoAI y apoB, o la actividad de la lipoprotena
lipasa u otras enzimas, est siendo ampliamente
valorada para incluirla como procedimiento
clnico de rutina.
Determinacin del colesterol total. El colesterol
total es igual a la suma del colesterol contenido
en las tres lipoprotenas que lo transportan:
Colesterol total = colesterol VLDL + colesterol
HDL + colesterol LDL
Adems, el colesterol existe en el organismo en
dos fracciones: una en estado libre y otra
esterificado 60 a 75%, por lo que, para la
determinacin del colesterol total, se utiliza una
serie de reacciones enzimticas en donde, en
una primera reaccin, los steres se hidrolizan
dejando libre el grupo 3-OH del colesterol. En la
segunda reaccin este grupo se oxida y se
obtiene, como
un producto, el perxido de hidrgeno, el cual,
por efecto de la peroxidasa, transfiere uno de
sus oxgenos a un aceptor cromgeno. La
absorbencia del cromgeno 4-benzoquinona-
monoimino-fenazona) se determina a 546 nm y
es proporcional a la concentracin de colesterol.
La reaccin global es la siguiente:
Colesterol esterasa
steres de colesterol colesterol + cidos
grasos
Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 4-colestoma + H2 O2
Peroxidasa
2 H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol cromgeno +
H2O
Determinacin de triacilgliceroles. El
mtodo utilizado se basa en la hidrlisis
de los TAG por una lipasa y la
determinacin del glicerol liberado en la
reaccin. Para ello, el glicerol es
fosforilado por la glicerol cinasa
formando glicerol-3-fosfato, el cual se
oxida por la glicerolfosfato oxidasa a
dihidroxiacetona fosfato generando en
la reaccin perxido de hidrgeno. La
peroxidasa cataliza la transferencia de
oxgeno del perxido a un aceptor que
es cromgeno, como la 4-
aminoantipirina (4-AAP) y el 3,5-dicloro-
2-hidroxibencensulfonato (DHBS), que
se colorean al oxidarse. La absorbencia
del cromgeno oxidado a 520 nm es
proporcional a la concentracin de
TAG.
La reaccin completa se expresa:
Lipasa
TAG glicerol + cidos grasos
Glicerol cinasa
Glicerol + ATP glicerol-3-fosfato +
ADP
Glicerolfosfato oxidasa
Glicerol-3-fosfato + O2
dihidroxiacetona fosfato + H2O2
Peroxidasa
H2O2 + 4-AAP + DHBS cromgeno
oxidado + H2O
Determinacin de colesterol-HDL. Por regla
general, el anlisis de las lipoprotenas del
plasma requiere, primero, la separacin de
las clases de lipoprotenas y, segundo, la
medicin de la lipoprotena o del
componente lipoproteico de inters.
La determinacin es relativamente simple
si se precipitan todas las lipoprotenas que
contienen apoB100 VLDL, IDL, LDL y
Lp(a) a excepcin de las HDL con un
polianin, generalmente
glucosaminoglicanos con carga negativa
164
heparina, dextran o fosfotungsteno y un catin
bivalentepor lo comn, Mn2+ o Mg2+ y se
determina el colesterol-HDL que queda en
solucin por el mtodo descrito para el colesterol
total.
La relacin colesterol total/colesterol-HDL se
considera como un indicador de riesgo coronario.
Normalmente esta relacin es menor de cinco;
mientras menor sea el valor, mejor ser el
pronstico para el paciente.
Determinacin de colesterol-VLDL. En general,
la concentracin de TAG en el plasma sanguneo
proporciona un parmetro excelente de la
concentracin de las lipoprotenas ricas en TAG
como las VLDL. Esta apreciacin parte de que
en condiciones normales de ayuno no se
encuentran quilomicrones en el plasma y la
proporcin TAG/colesterol de la VLDL es
invariable de 5:1 en mg/dl o de 2.2:1 en mmol/l
, de tal modo que la cuan-tificacin de la
concentracin de TAG es suficiente para calcular
la concentracin de la VLDL con un porcentaje
de error pequeo en la estimacin. Si la
concentracin de colesterol-VLDL es la quinta
parte de la concentracin de TAG cuando sta
se expresa en mg/dl, entonces:
TAG
Colesterol- VLDL = -----------
5 valor del colesterol total (colesterol en
o si las concentraciones se expresan en mmol/l:
TAG
Colesterol- VLDL = -----------
2.2
Esta frmula no es apropiada para muestras con
una concentracin de TAG mayor a 400 mg/dl
(10.390 mmol/l) o en muestras que tengan
quilomicrones.
Determinacin del colesterol LDL.
Aproximadamente las dos terceras partes del
colesterol plasmtico total son transportadas en
las LDL de tal manera que, la concentracin de
este lpido proporciona una medida bastante
precisa del nivel de LDL en la mayora de
las personas. Por ello es posible estimar
con bastanteexactitud, en casi todos los
casos, la concentracin de LDL sobre la
base del conocimiento de la concentracin
de VLDL (estimada por los TAG) y la del
colesterol total. No obstante, para estimar
con mayor exactitud la concentracin de
LDL debe cuantificarse la concentracin de
colesterol de las HDL, lo cual es
relativamente simple.
Las LDL se estiman como sigue:
Colesterol LDL = colesterol-total
(colesterol-HDL + colesterol-VLDL)
Si se determina la concentracin de lpidos
en moles en lugar de en peso y se
sustituye el valor estimado de VLDL a partir
de la concentracin de TAG, la frmula
equivalente se transforma en la expresin
descrita por Fridewald (1972):
Colesterol LDL = colesterol total
(colesterol HDL + TAG/2.2)
Otra forma sencilla de determinacin
indirecta del colesterol-LDL es el mtodo
del polivinilsulfato (PVS). El PVS provoca la
precipitacin de las LDL y deja en el
sobrenadante las VLDL y las HDL. El valor
del colesterol-LDL se calcula restando al
VLDL, LDL y HDL) el valor del colesterol en
el sobrenadante de la precipitacin
(colesterol en VLDL y HDL).
Colesterol LDL = colesterol total
colesterol en el sobrenadante (colesterol-
HDL y colesterol-VLDL)
La determinacin de LDL se puede hacer
directamente mediante procesos
inmunoqumicos que requieren una
especial destreza y un equipamiento
especfico, por lo que resulta de difcil
adaptacin a fines acadmicos. La tcnica
consiste en hacer reaccionar esferas de
165
ltex revestidas con anticuerpos contra
apolipoprotenas de las LDL. Estas partculas se
separan del resto y se determina el colesterol.
Quilomicrones. Cuando existen quilomicrones
pueden ser detectados si se deja el tubo de
ensayo que contiene el plasma sanguneo en el
refrigerador durante una noche. Los
quilomicrones de mayor tamao, pero no las
VLDL, se ubicarn en la superficie del tubo
formando una capa cremosa que puede
detectarse visualmente. La presencia de
quilomicrones en el plasma en ayunas se
considera anormal.
; 160 U/l, colesterol oxidasa
100 U/l y
Determinacin de Lp(a). La Lp(a) se determina
2 000 U/l.
directamente por mtodos inmunoqumicos al
igual que las LDL y, como ya se dijo, su
concentracin constituye un factor independiente
de riesgo coronario. Normalmente la Lp(a) se
precipita junto con las lipoprotenas que
contienen apoB, por lo que la medicin del
colesterol de la LDL incluye la contribucin de
colesterol de la Lp(a).
1 000
1000 U/l, glicerol
Determinacin de apoAI y apoB. La
determinacin de apolipoprotenas,
particularmente la apoA y la apoB, es un dato
complementario para la cuantificacin de otros
componentes lipoproteicos y ayuda a evaluar si
un individuo tiene un riesgo aumentado de
cardiopata coronaria, sobre todo en los estados
hiperlipidmicos donde hay un aumento de TAG
en los quilomicrones o en las VLDL, y cuando las
LDL y HDL contienen menos cantidad de steres
de colesterol y ms TAG en su ncleo debido al
intercambio de los componentes de stos entre
las lipoprotenas. En tales circunstancias, la
cuantificacin de las apoprotenas proporciona
clculos ms seguros y tiles de la
concentracin de partculas lipoproteicas.
La mayora de los mtodos de
cuantificacin, todos los cuales requieren un
equipamiento especial, se basan en la
identificacin inmunolgica de las
apolipoprotenas. La tcnica ms usada es el
inmunoanlisis ligado a enzimas y de
fluorescencia (ELISA).
Material
Gradilla con 8 tubos de ensayo.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Pipetas automticas
Puntas para pipetas automticas
Solucin de enzimas para colesterol:
amortiguador Tris 100 mmol/l, pH 7.7;
MgCl2 50 mmol/l, 4-amino-antipirina 1
mmol/l, fenol 6 mmol/l; colesterol esterasa
peroxidasa
Patrn de colesterol de 170 de 200
mg/dl (5.17 mmol/l) para colesterol total.
Solucin de enzimas para TAG:
amortiguador Tris 100 mmol/l, pH 6.7, ATP
0.7 mmol/l, MgCl2 4 mmol/l, 4-
aminoantipirina 0.4 mmol/l, 3,5-dicloro-2-
hidroxibencen-sulfonato 0.8 mmol/l, lipasa
U/l; glicerol cinasa
fosfato oxidasa 4000 U/l y peroxidasa
2000 U/l.
Patrn de TAG (triolena) de 250 mg/dl
(2.8 mmol/l) o de 100 mg/dl.
Reactivo precipitante para HDL: sulfato de
dextrn 10g/l, MgCl2 0.5 mol/l.
Espectrofotmetro a 520 y 540 nm.
Jeringa, ligadura y torundas con alcohol.
Gotero con anticoagulante.
Mtodo
1.Obtener plasma de un voluntario. El
plasma posprandial contiene
quilomicrones, lo que puede aumentar
marcadamente la concentracin plasmtica
de TAG, por ello es importante permanecer
en ayunas durante 12 horas antes de la
puncin venosa. La estabilidad del plasma
es de 3 das a 4o C.
166
Proceder a determinar colesterol total, TAG y
colesterol-HDL como se describe a continuacin
2. A 0.5 ml de plasma agregarle 0.05 ml (50 l)
de la solucin precipitante de VLDL y LDL
para determinacin de colesterol-HDL; mezclar
perfectamente y dejar reposar 10 minutos.
Centrifugar 10 minutos a con el blanco.
3 000 rpm. El sobrenadante libre de
lipoprotenas, excepto HDL que contina siendo
soluble, ser utilizado para determinar el
colesterol.
3. Para la determinacin de colesterol total y
colesterol-HDL preparar la siguiente serie de
tubos:
Preparacin de los tubos (volumen en ml)
Tubo 1 2 3 4
H2O (blanco) 10 l - - - As
Agregar a todos los tubos 1 ml de solucin
de enzimas para TAG.
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
durante 10 min.
4. Leer la absorbencia (A) en el
espectrofotmetro a 540 nm; calibrar a cero
Resultados
1. De acuerdo al estndar de colesterol,
calcular la concentracin de colesterol
correspondiente a los tubos 3 y 4 (tubos
que contienen el plasma y el sobrenadante)
de la siguiente manera:
Cs
[Colesterol] = ------ X Ap

Estndar de - 10 l - - Cs = Concentracin del estndar en mg/dl

colesterol o mmol/l.
Plasma - - 10 l - As = Absorbencia del estndar.
Ap = Absorbencia del problema.
Sobrenadante - - - 20 l
con HDL 2. Calcular la concentracin de TAG de
la siguiente manera:
Agregar a todos los tubos 1 ml de solucin de
enzimas para colesterol. Mezclar e incubar a Cs
temperatura ambiente durante 10 min. [Triacilgliceroles] = ------ X Ap
As
4. Leer la absorbencia (A) en el
espectrofotmetro a 520 nm; calibrar a cero con
el blanco.
Cs = Concentracin del estndar en mg/dl
Para determinar los TAG preparar la siguiente
serie de tubos: o mmol/l.
As = Absorbencia del estndar.
Preparacin de los tubos (volumen en ml). Ap = Absorbencia del problema.
Tubo 1 2 3 3. Compare sus resultados con los valores
Blanco - - normales del colesterol total, del colesterol-
- HDL y de los triacilglicridos en el plasma.
Estndar - 10 l - 4. Calcular la concentracin de colesterol
de TAG VLDL por la frmula: colesterol-VLDL=
Plasma - - 0.01 l TAG/5.

167
5. Calcular la concentracin de colesterol LDL a Completar los datos que hacen falta en
partir de las concentraciones de colesterol total, los cuadros anteriores (tomar en cuenta
HDL y VLDL. que no puede hacerse el clculo de la
6. Estimar el cociente colesterol-HDL/colesterol- concentracin de VLDL si los TAG son
LDL y de colesterol total/colesterol-HDL (ndices mayores de 400 mg/dl).
aterognicos). Constatar la evolucin temporal de los
7. Analizar el significado de los datos obtenidos y niveles de colesterol y TAG.
hacer un informe de los resultados y de las Detectar la presencia de hbitos de alto
conclusiones que de stos se deriven. riesgo y hacer notar la importancia de las
8. A continuacin se resumen dos casos modificaciones en esos hbitos.
clnicos: Al ser iguales todos los factores de riesgo
para ambas personas: cul tendra mayor
En enero de 1997, un hombre de 38 aos riesgo de enfermedad coronaria?
asisti a una evaluacin mdica. Pes 93 kg, Detectar cmo dos personas con el
tena presin arterial alta 160/108, realizaba mismo colesterol total tienen perfiles
poco ejercicio, tomaba de 5 a 10 cervezas y lipdicos distintos.
fumaba 2 a 3 cajetillas de cigarros a la semana.
El peso y las concentraciones de los lpidos Ene 97 Oct 97 Feb 98
durante los meses siguientes estn resumidos Peso (Kg) 93 90 95
en la tabla siguiente: Colesterol total mg/dl 275 295 320
TAG mg/dl 490 470 550
B) Una mujer de 23 aos de edad solicita una HDL mg/dl 35 33 29
determinacin de lpidos debido al LDL directa mg/dl - - 259
antecedente familiar importante de Colesterol total/ - - -
cardiopata. La paciente no fuma y pesa colsterol-HDL
55 kg. Los resultados de la determinacin (ndice atergeno)
de los lpidos iniciales despus de un ao
y tres meses de haber iniciado la Referencias
administracin de anticonceptivos orales 1.Allain CA, Poon LS, Chan CSG,
desogestrel, son los siguientes: Richmond W, Fu PC. Enzymatic
determination of total serum cholesterol.
Ene Ene Abr Clin Chem. 1974; 20: 470-475.
97 98 98 2.Montgomery R. Bioqumica. Casos y
Peso (kg) 55 56 58 texto. 6a.ed. Barcelona: Editorial Harcourt-
Colesterol total 285 263 315 Brace; 1998: 332-389.
mg/dl 3. Pennachio D. Lineamientos para la
TAG mg/dl 85 90 124 deteccin de hipercolesterolemia. Atencin
HDL mg/dl 40 37 44 Mdica. 1997; 10/2: 30-43.
Colesterol-VLDL 4.Alba Zayas EL, Pereira RG, Aguilar BA.
LDL mg/dl Lipoprotena (a): estructura, metabolismo,
Colesterol gentica y mecanismos patognicos. Rev
total/colesterol-HDL Cubana Invest Biomed. 2003; 22(1): 32-40.
(indice atergeno) 5. Masa-aki K, Rader JD. Gene therapy
for lipid disorders. Curr Control Trials
Cardiovasc Med. 2000; 1:120-127.

168
6. Russet G.W. Dextran sulfate-Mg2+
precipitation procedure for quantitation of HDL
cholesterol. Clin Chem. 1982; 28(6): 1379-88.
7.Samaniego V, Lpez D. Lpidos. Sinopsis del
informe del panel de expertos sobre niveles de
colesterol sanguneo en nios y adolescentes.
Aterosclerosis. 1999; 2(1): 22-24.
8.Vogel AA. Coronary risk factors, endothelial
function, and atherosclerosis. Clin Cardiol. 1997;
20:426-432.
9. Velzquez CA. Papel de las especies
reactivas del oxgeno en la arterioesclerosis.
IATREIA. 2000; 13 (3) septiembre.
10. Mohammed HM, Frohlich J. Effects of dietary
phytosterols on cholesterol metabolism and
atherosclerosis: clinical and experimental
evidence. Am J Med. 1999; 107: 588-592.

169
 Prctica 11
El efecto del tetracloruro de carbono sobre
las transaminasas
Tiempo de Prctica: 2 Horas
Esta prctica es una simulacin
compuratizada de un fenmeno
bioqumica; tiene el propsito de que los
alumnos se ejerciten en el manejo de los
datos obtenidos por medio de
experimentacin simulada estrictamente
controlada.
Mtodo
1. Encender la computadora y localizar el
icono del programa. El efecto de la
insulina sobre la glucemia de la rata.
Hacer doble clic sobre este icono.
2. Hacer clic sobre los botones que
indican cada de las partes de la prctica;
empezar por leer las instrucciones, los
objetivos y el fundamento de la prctica
para continuar con la parte experimental.
3. Seguir todos los pasos de la prctica;
poner especial atencin en la obtencin
de los datos
experimentales que debern ser
anotados en papel como cualquier
prctica convencional.
4. Repetir el experimento las veces que
el usuario quiera, o las veces que sean
necesario, hasta obtener los datos
completos del experimento. Se sugiere
repetirlo por lo menos dos veces y hacer
un promedio de los datos obtenidos.
5. Hacer una tabla con dichos datos,
graficarlo, analizar el significado de los
mismos y, de acuerdo a lo anterior,
validar o rechazar la hiptesis del
experimento.
Referencias
1. Stryer L. Bioqumica. 5a. ed.
Barcelona: Editorial Revert; 2003.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto
con aplicaciones clnicas. 5a. ed.
Barcelona: Editorial Revert; 2001.
3. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
170
 Prctica 12
Estudio de los productos finales
del metabolismo nitrogenado

Tiempo de prctica: 2 horas Los compuestos derivados de aminocidos,

adems de las protenas celulares, incluyen
Objetivos hormonas (como la tiroxina, epinefrina e
insulina), neurotransmisores, creatina
1. Identificar los sustratos, enzimas y
fosfato, el hemo de la hemoglobina y de los
productos finales del catabolismo de los
citocromos, el pigmento de la piel (la
compuestos nitrogenados.
melanina), las purinas y las pirimidinas,
2. Identificar al amonaco y a la urea como
etanolamina, colina, esfingosina, el glutatin,
los productos finales del metabolismo de las
los cidos glicoclico y tauroclico, la
protenas y los aminocidos.
tioetanolamina de la CoA, el xido ntrico y
3. Identificar a la creatinina y al cido rico
las poliaminas entre muchos otros. Se puede
como productos mayoritarios del
decir que todos los compuestos
metabolismo de otros compuestos
nitrogenados del organismo son sintetizados
nitrogenados.
a partir de aminocidos.
4. Conocer las causas y consecuencias de la
Los aminocidos son fuente de energa, sus
sobreproduccin de los productos finales del
esqueletos de carbono son directamente
metabolismo nitrogenado.
oxidados o convertidos a glucosa y sta es
5. Conocer las tcnicas analticas y los
oxidada o almacenada en forma de
requerimientos para la determinacin de los
glucgeno. Los aminocidos tambin
principales productos finales del
pueden ser convertidos en triacilgliceroles
metabolismo nitrogenado en suero y/o orina.
para ser almacenados en el tejido adiposo.
6. Llevar a cabo las determinaciones
A pesar de la uniformidad de los
analticas de urea, creatinina y cido rico en
aminocidos como bloques estructurales de
suero o plasma e interpretar los resultados
las protenas, no existe un planteamiento
obtenidos.
unitario en cuanto a su metabolismo, ya que
su estructura hidrocarbonada es diversa y,
INTRODUCCIN
aunque algunos de ellos pueden
interconvertirse mediante reacciones
Las protenas de la dieta son la fuente
metablicas, cada uno es un compuesto
primaria de nitrgeno en el cuerpo. Los
nico, con un metabolismo y funciones
aminocidos producidos por la digestin de
biolgicas individuales. Quiz la parte de su
protenas son absorbidos a travs del
metabolismo ms uniforme sea el destino de
epitelio intestinal y entran a la circulacin
su parte nitrogenada. El nitrgeno se libera
portal. Las clulas incorporan los
como amonaco, cuya mayor parte se
aminocidos, los cuales son usados para la
convierte en urea, un compuesto no txico,
sntesis de protenas y otros compuestos
muy soluble en agua, que se excreta
nitrogenados o son oxidados para producir
fcilmente por los riones.
energa.

171
La sntesis se realiza principalmente en el Azoemia es una designacin bioqumica que
hgado, donde se lleva a cabo la mayor parte se refiere a cualquier aumento de la
de la biosntesis de aminocidos no
esenciales y Compuesto Concentracin Cantidad

gran parte de la degradacin de todos los Nitrogenado Plasmtica Excretada

aminocidos. En orina/da
Urea 20-30 mg/dl 12-20 g de
EL NITRGENO NO PROTENICO EN LA nitrgeno
SANGRE ureco
El nitrgeno no protenico en la sangre se cido rico 3-6 mg/dl 250-750 mg
encuentra en un grupo heterogneo de
sustanciasque incluye la urea, la creatinina, Creatinina 1-2 mg/dl Hombres:14-26
la creatina, el cido rico, los aminocidos mg/Kg
no proteicos ornitina y citrulina, algunos Mujeres:11-20
pptidos como el glutatin y otros, con una mg/Kg
concentracin total de nitrgeno de 25 a 40 NH4+ 10-70 l/dl 140-1500 mg de
mg/dl. La urea es el principal compuesto nitrgeno de
nitrogenado no proteico del plasma, otros amonio
constituyentes principales en orden concentracin plasmtica de compuestos
decreciente de contribucin de nitrgeno son nitrogenados no proteicos, principalmente
los aminocidos, el cido rico, la urea y creatinina.
creatinina, la creatina y el amonio.
Las cantidades exactas de cada componente Material
varan segn la ingesta de protenas y el 3 Gradillas con 2 y 3 tubos.
estado fisiolgico del organismo. y Pipetas automticas
Aunque la urea es el mayor producto final Puntas para pipetas automticas
del metabolismo nitrogenado, el nitrgeno es 3 Pipetas de 1 ml.
tambin excretado en otros compuestos: la Suero y orina.
creatinina es producida a partir de la creatina Estndar de urea 50 mg/dl.
fosfato, el cido rico a partir de la Estndar de creatinina 2 mg/dl.
degradacin de las bases pricas y el Estndar de cido rico 5.3 mg/dl.
amonio es liberado por la glutamina, Espectrofotmetro a 340, 492 y 520 nm.
particularmente en el rin como una va de UREA DE LA SANGRE O NITRGENO DE LA UREA
excrecin de H+ por la orina. Otros DE LA SANGRE (BUN-BLOOD UREIC NITROGEN)
productos nitrogenados derivados del
La urea es el principal producto final del
metabolismo de neurotransmisores,
catabolismo protenico. Se forma en el
hormonas y dems compuestos
hgado y en el rin a partir de bixido de
especializados son excretados tambin por
carbono y amoniaco en el ciclo de la urea.
la orina aunque representan una mnima
parte del nitrgeno eliminado. Algunos de
La expresin "nitrgeno ureico" surge del
estos productos, como la bilirrubina (formado
hecho de que tradicionalmente la urea se
en la degradacin del grupo hemo), son
determina a partir del nitrgeno contenido en
excretados principalmente en las heces.
el amoniaco que se forma por la accin de la
enzima ureasa sobre la urea. Aunque es un
trmino similar, no es equivalente al de urea,

172
y se puede establecer una correlacin entre
ambos mediante la expresin: urea (mg) =
nitrgeno ureico (mg) x 2.14 (el peso
molecular de la urea es de 60 e incluye 2
tomos de nitrgeno por molcula. Por lo
tanto el BUN = 60/28= 2.14). Por ello un
valor de BUN de 20 mg/dl equivale a una
urea de 20 x 2.14 42.8 mg/dl.
La concentracin srica de urea vara
bastante en los individuos normales y
depende de factores tan diversos como la
ingesta diettica de protenas y el estado de
hidratacin del organismo.
La elevacin de sus valores en el torrente
circulatorio se denomina uremia. Los
sntomas clnicos pueden presentarse con
valores cercanos a 50 mg/dl (>8 mmol/l). El
catabolismo protenico rpido y el deterioro
de la funcin renal son las principales
causas de su elevacin.
La urea se filtra normalmente libre a travs
de los glomrulos renales de modo que, una
pequea cantidad se absorbe en los tbulos
y el resto se excreta en la orina. Sin
embargo, el cambio en la concentracin de
la urea sangunea no es indicativo de una
causa determinada ya que muchas
enfermedades pueden provocar alteraciones
en su concentracin. Las modificaciones en
la concentracin de urea srica suelen
clasificarse por su origen en prerrenales,
renales o postrenales.
Las causas prerrenales pueden agruparse
en factores que resultan de perfusin renal
inadecuada y, por tanto, de una menor
filtracin glomerular (deshidratacin, shock,
disminucin del volumen sanguneo y fallo
cardiaco congestivo) o trastornos resultantes
de valores anormalmente altos de protenas
sanguneas. La ingestin excesiva de
protenas y el incremento del catabolismo de
las protenas (fiebre, estrs y quemaduras)
son otras causas adicionales del incremento
de urea srica.
Las causas renales son aquellas con
alteracin de la filtracin glomerular y, por
tanto retencin de urea como consecuencia
de una enfermedad renal crnica o aguda.
Por ltimo, las causas posrenales se deben
a padecimientos que causan obstruccin de
las vas urinarias inferiores, con paso de la
urea de la orina estancada a la circulacin
sangunea.
Tambin son significativos los valores bajos
de urea en la enfermedad heptica grave, ya
que un hgado lesionado es incapaz de
sintetizar urea, lo cual permite la
acumulacin de amonio en la sangre
causando encefalopata heptica (asterixis,
ataxia, coma, confusin, estupor, lenguaje
lento y somnolencia).
La determinacin de urea, por s sola, es de
poco valor diagnstico, y deben realizarse
valoraciones comparativas a lo largo del
tiempo o utilizarse conjuntamente con otras
pruebas.
La determinacin de urea se basa en la
accin de la enzima ureasa sobre la urea
para producir amoniaco y cido carbnico. El
amonio formado se valora hacindolo
reaccionar con cido -cetoglutrico en
presencia de la glutamato deshidrogenasa.
La disminucin de la absorbencia frente al
tiempo ( Absorbencia) a 340 nm,
correspondiente a la oxidacin de NADH a
NAD+, es proporcional a la concentracin de
urea.
Urea + H2O + 2 H+ 2 NH4+ + CO2
2 NH4+ + 2 -cetoglutarato + 2 NADH
H2O + 2 NAD+ + 2 glutamato
Mtodo
Como la urea es degradada rpidamente por
accin bacteriana, las muestras tomadas
para proceder a su determinacin deben ser
refrigeradas hasta su procesamiento.
173
 Pipetear en los siguientes tubos:
Tubo 1 2
Muestra
(suero, plasma u 10 l
orina
Estndar - En vista de la toxicidad del amonio, una
10 l
Solucin reactiva 1 ml 1 ml
para urea
Mezclar y poner en marcha el cronmetro,
anotar las absorbencias a los 30 (A1) y a los
90 (A2) segundos, calcular: = A1 - A2.
Leer frente a agua destilada en el
espectrofotmetro a 340 nm.
Con las diferencias de absorbencia
anotadas (A), aplicar la siguiente ecuacin:
A Muestra
X [Estndar] =
[Urea]
A Estndar
El resultado se obtiene en mg/dl (x 0.1665 =
mmol/l); mg/dl de urea x 0.466 = mg/dl de
urea /BUN.
El mtodo es lineal hasta valores de 500
mg/dl.
Diluir la orina 1:50 con agua destilada.
No emplear suero o plasma turbios o
hemolizados.
AMONIO
La produccin de urea es un medio de
destoxificacin del amonio derivado del
catabolismo proteico, de la flora intestinal y
de la desaminacin oxidativa de los
aminocidos.
El intestino es una fuente importante de
amonio, en donde se forma por degradacin
bacteriana de las protenas de la dieta y de
la urea. La mayor parte de este amonio es
separado de la sangre de la vena porta por
el hgado para ser convertido en urea.
En otras condiciones, las pequeas
cantidades de amonio que escapan a la
destoxificacin y a la excrecin renal, se
encuentran presentes en la sangre; la
- concentracin normal del nitrgeno del suero
debido al ion amonio suele ser menor de 70
mg/dl.
elevacin apreciable de los niveles de
amonaco en sangre podra afectar
seriamente el equilibrio cido-base y a la
funcin cerebral.
Las hepatopatas graves traen como
consecuencia un aumento de la
concentracin del amonio en la sangre, el
plasma y el lquido cefalorraqudeo. Las
enfermedades hepticas en las que se
encuentran tales elevaciones tienen muy mal
pronstico, ya que indican lesin intensa del
hgado con inminente insuficiencia heptica,
la cual va acompaada de diversas
manifestaciones txicas, particularmente en
el cerebro.
Las deficiencias de cualquiera de las
enzimas del ciclo de la urea, aunque muy
poco frecuentes, son todas ellas causas
importantes de incremento de los niveles
plasmticos de amonaco y de las
manifestaciones txicas.
En las acidosis metablicas, la excrecin
renal del in amonio (por la hidrlisis de
glutamina) aumenta porque el rin lo
secreta para eliminar junto con l protones
en la orina.
Las muestras para la determinacin del
amonio deben obtenerse de preferencia de
sangre arterial o de los capilares del lbulo
auricular, ya que el metabolismo del amonio
en el msculo aumenta los valores de ste
en sangre venosa y, por lo tanto, tambin el
ejercicio puede causar un aumento en la
concentracin de amonaco. La muestra de
sangre recin obtenida se debe vaciar en un
tubo refrigerado, colocarse en agua helada y
enviarse de inmediato al laboratorio para su
anlisis (el retraso en el procesamiento
puede ocasionar resultados falsamente
elevados).
174
Los niveles de amonaco varan con la siendo la masa muscular el factor
ingestin de protenas. condicionante ms directo de su formacin y
Este compuesto es principalmente excretado excrecin total por da.
por la orina pero tambin hay prdidas La depuracin de la creatinina es una prueba
importantes por las heces y la piel. rutinaria de eleccin por la facilidad con que
La medicin de amonio se basa en el mismo se practica. No es, sin embargo, una medida
principio que la determinacin del nitrgeno real de la filtracin glomerular, ya que una
de la urea. pequea parte de la creatinina se secreta a
nivel tubular. A pesar de ello es una prueba
CREATINA Y CREATININA adecuada para seguir la evolucin de los
padecimientos que afectan al glomrulo.
Estas sustancias nitrogenadas no proteicas
Debido a que el rin la excreta continua y
junto con la urea pueden ser consideradas
fcilmente, los valores aumentados en suero
en su conjunto porque las concentraciones
y disminuidos en orina indican disminucin
que alcanzan en el suero muy
en la velocidad de filtracin glomerular.
frecuentemente se ven afectadas
Por consiguiente, la creatinina es un
simultneamente en cualquiera de las dos
indicador muy especfico de la funcin renal.
direcciones (aumento o disminucin) por los
La variacin diurna de la creatinina puede
mismos factores.
estar relacionada con los alimentos, con
La creatina es sintetizada en el hgado y en
valores mnimos que se presentan alrededor
el rin a partir de tres aminocidos:
de las 7:00 horas y valores mximos
arginina, glicina y metionina en forma de S-
alrededor de las 19:00 horas. Por tanto, esta
adenosilmetionina. La creatina as formada
prueba realizada con un espcimen urinario
es transportada a los msculos por la
recolectado en 24 horas refleja tanto los
sangre, donde es fosforilada hasta formar
valores mximos como los mnimos de
fosfato de creatina, compuesto de gran
creatinina. Las mediciones de creatinina se
importancia como fuente de energa para la
hacen en suero y en orina de 24 horas.
contraccin muscular intensa durante breves
La recoleccin de orina debe ser de
periodos. Normalmente, la fosfocreatina se
preferencia en un periodo de 24 horas, pero
desdobla en creatinina. En algunos
esto no es necesario si se conoce el tiempo
padecimientos, en particular las
de la recoleccin con exactitud, an si es
enfermedades musculares, se libera creatina
menor, por ejemplo 22 4 horas.
en cantidades mayores a la circulacin y se
La medicin se basa en la reaccin de Jaff,
puede determinar en la orina.
en la que la creatinina se trata con solucin
La creatinina se forma de manera continua
alcalina de picrato (17.5 mmol/l) para
en los msculos a partir del fosfato de
producir un complejo de color naranja rojizo
creatina; alrededor de 2% de la creatina se
brillante. Hay varias sustancias en el suero y
convierte directamente en creatinina; posee
orina que actan como cromgenos
gran difusibilidad y es fundamentalmente
inespecficos (glucosa, protenas y otros
excretada por los riones, adems de las
cromgenos no derivados de la creatinina),
pequeas cantidades que se eliminan por
lo que representa un problema para la
heces.
determinacin. Por este motivo se adapta la
La concentracin srica de creatinina es
reaccin de Jaff a un mtodo, que consiste
relativamente constante en virtud de su
en medir el cambio en la absorbancia
relativa independencia de factores como la
durante un breve perodo de tiempo. La
dieta (ingesta de protenas), grado de
medida del incremento de color al inicio de la
hidratacin o metabolismo de protenas,

175
reaccin valorar principalmente la
creatinina, ya que sta reacciona ms
rpidamente con el picrato alcalino que los
otros cromgenos inespecficos. El
incremento de color detectado al poco
tiempo de iniciarse la reaccin ser debido
nicamente a la concentracin de la
creatinina presente y, por tanto, no valorar
las posibles interferencias.
Mtodo
Pipetear en los siguientes tubos:
TUBO 1 2
MUESTRA 100 l - sangre puede deberse a un aumento en el
ESTANDAR - 100 l
SOLUCION 1 ml 1 ml
REACTIVA DE
CREATININA
Mezclar y poner en marcha el cronmetro,
anotar las absorbancias a los 30 (A1) y a los
90 (A2) segundos, calcular: = A2 -A1.
Leer en el espectrofotmetro frente a blanco
de reactivos a 492 nm.
Clculos:
Con las diferencias de absorbencia anotadas
(A), aplicar la siguiente ecuacin:
A MUESTRA
------------------- X [ESTANDAR] = [CREATININA]
A ESTANDAR
El resultado se obtiene en mg/dl
mg/dl Creatinina x 88.4 = mmol/l.
No utilizar sueros lipmicos.
La creatinina tiene una estabilidad de menos
de 24 horas en refrigeracin.
El mtodo es lineal hasta valores de 15
mg/dl.
Diluir la orina 1:50 con agua destilada.
CIDO RICO
El cido rico es el producto final del
catabolismo de las purinas en el hombre y se
forma a partir de la xantina, por la accin de
la xantina oxidasa en una reaccin que
requiere de oxgeno molecular.
En animales inferiores, el cido rico es
oxidado por accin de la uricasa y se
transforma en alantona, que es su producto
de excrecin. Algunos peces excretan cido
alantoico; los anfibios y peces, urea; y
finalmente, los invertebrados marinos,
amonio.
La cantidad de cido rico formado depende
de la velocidad del catabolismo de las
purinas endgenas y de la degradacin de
las purinas provenientes de la dieta. El
aumento del nivel de cido rico en la
metabolismo de purinas endgenas, una
disminucin en la eliminacin de cido rico,
un aumento en la ingestin de purinas o a
una reutilizacin disminuida de purinas.
La medicin del cido rico del suero es muy
til para el diagnstico de la gota, que es un
sndrome provocado por la acumulacin de
cristales de cido rico en las articulaciones
y el rin.
El mtodo de determinacin de cido rico
consiste en incubar el suero con uricasa, que
cataliza la hidrlisis especfica de cido rico
a alantona. En una reaccin catalizada por
la peroxidasa (POD), el perxido de
hidrgeno formado en la reaccin anterior
oxida al indicador (cido 2,4,6-tribromo-3-
cido hidroxibenzoico y 4-aminoantipirina,
compuestos que son incoloros en su forma
reducida.) originando un derivado colorido
(quinoneimina). La intensidad del color es
proporcional a la concentracin del cido
rico en la muestra; se mide en el
fotocolormetro a 520 nm.
176
Mtodo
Pipetear en los siguientes tubos: 5. DOcon, C. Fundamentos y tcnicas
de anlisis bioqumico. Editorial
TUBO 1 2 Paraninfo; 1998.
MUESTRA 100 l - 6. Chernecky CC. Pruebas de laboratorio
ESTANDAR - 100 l y procedimientos diagnsticos. 2a. ed.
SOLUCION 1 ml 1 ml Mxico: McGraw-Hill Interamericana
REACTIVA DE Editores; 1999.
ACIDO URICO 7. Gaw A. Bioqumica clnica. 2a. ed.
Editorial Harcourt; 2001.
Mezclar e incubar 10 min. a temperatura
ambiente.
Leer la absorbencia (A) en el
espectrofotmetro frente a blanco de
reactivos a 520 nm.
La estabilidad del suero es de 3 das en
refrigeracin.
Clculo de la concentracin de cido rico:
MUESTRA

------------------- X [ESTANDAR] = [ACIDO URICO]

ESTANDAR
El mtodo es lineal hasta valores de 25
mg/dl.
Expresar el resultado obtenido en mg/dl y
mmol/L (peso molecular del cido rico
168.1).
Compare sus resultados con los valores
normales de cido rico en suero.

Referencias
1. Gonzlez de Buitrago JM. Bioqumica
clnica. Mxico: McGraw-Hill Interamericana
Editores, 1999.
2. Fossati P. Use of 3,5-dichloro-2-
hydroxy-benzensulfonic acid/4-
aminophenazone chromogenic system in
direct enzymic assay of uric acid in serum
and urine. Clin Chem. 1980;26:227.
3. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto
con aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2004.
4. Montgomery R. Bioqumica: Casos y
texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-
Brace; 1998.

177
 Prctica 13
Huella gnica
Objetivos
1. Que el estudiante conozca la aplicacin de
las tcnicas de DNA recombinante.
2. Que el estudiante sea capaz de analizar e
interpretar los datos generados a partir de una
prueba de huella gnica.
3. El alumno adquirir la capacidad de
manejar muestras para anlisis de cidos
nucleicos.
4. El alumno desarrollar destreza en
la interpretacin de resultados de
metodologas bsicas de anlisis molecular. Estas regiones pueden ser aisladas del DNA
FUNDAMENTO
El DNA es un polmero lineal formado
por desoxirribonucletidos que contienen a las
bases nitrogenadas adenina, guanina,
citosina, timidina. La interaccin de las bases
nitrogenadas por puentes de hidrgeno
permite la formacin de la doble cadena de
DNA. Cada grupo fosfato est unido al
carbono 5 de una subunidad de azcar y al
carbono 3 de la subunidad de azcar del
nucletido contiguo.
Las cadenas se mantienen unidas por
puentes de hidrgeno entre las bases. Las
cuales son completamente lineales.
En la molcula de DNA que reside la
informacin gentica de un organismo,
especficamente en la secuencia de los
nucletidos, de tal manera que cada tres
bases forman un codn que corresponde a su
vez a uno de los 20 aminocidos, teniendo un
total de 64 codones posibles, los cuales
conforman el cdigo gentico. En el DNA se
encuentran dos tipos de secuencia, la que es
capaz de ser leda para dar origen a una
protena lo que permite que una clula u
organismo crezca desarrolle tambin la no
codificante una que codifica para las
funciones celulares y otra no codificante, que
participa en la regulacin de su expresin.
Algunas de las secuencias de nucletidos no
codificantes se caracterizan por ser cortas,
estn alineadas en tndem y se repiten miles
de veces de manera constante a lo largo del
DNA. Un ejemplo de esta secuencia puede
ser la siguiente.
ATTCGGTATTCGGTATTCGGT. A estas
secuencias se les denomina STR por sus
siglas en ingls (Short Tandem Repeat). El
genoma eucaritico contiene muchas de estas
secuencias de DNA, y se ha visto que el
nmero de unidades repetidas presenta
diferencias de individuo a individuo que con
las huellas digitales. En el caso de gemelos
idnticos estas secuencias son idnticas.
con enzimas de restriccin apropiadas y
separadas de acuerdo a su longitud mediante
electroforesis en gel. Cuando se completa el
proceso de separacin el resultado se parece
a un cdigo de barras de un envase de
supermercado. Este cdigo de barras de DNA
ha permitido esclarecer algunos hechos
criminales y pruebas de paternidad, a la cual
se denomina tcnica de Huella gnica
Es muy frecuente que en la escena de
un crimen se encuentren, en pequeas
cantidades muestras de naturaleza biolgica a
partir de las cuales se puede extraer el DNA
como son la sangre, la saliva, la piel, el
msculo, el cabello, el semen, los dientes y el
hueso, entre otros.
Un mtodo que permite tomar una
pequea cantidad de DNA y en pocas horas
sintetizar millones de copias de una porcin,
es el mtodo de amplificacin conocido como
PCR (reaccin en cadena de la polimerasa),
el cual se desarrollo por K. Mullis (1990), En
este mtodo se requiere conocer la secuencia
de nucletidos de los extremos del fragmento
que se desea amplificar. Estas secuencias se
usan para disear desoxioligonucletidos
sintticos de DNA complementarios a cada
uno de estos extremos de la cadena de la
doble hlice. La muestra de DNA se coloca en
una solucin que contiene una DNA
polimerasa, grandes cantidades de
desoxinucletidos y los desoxioligonucletidos
sintetizados previamente. El mtodo se basa
en la repeticin cclica de tres reacciones
178
sucesivas: en la primera reaccin, la solucin
se calienta para que el molde de DNA se
separe en sus dos cadenas. En la segunda
reaccin, la temperatura se reduce para
permitir que los desoxioligonucletidos se
apareen por complementariedad de bases
con el DNA molde y en la tercera reaccin, la
DNA polimerasa cataliza la sntesis
simultnea de las dos cadenas a partir de
cada desoxioligonucletido que acta como
cebador. Al cabo del primer ciclo de tres
reacciones, el fragmento de DNA elegido se
ha duplicado y por lo tanto, la cantidad de
DNA molde disponible para el segundo ciclo
es doble, lo mismo ocurre cada ciclo de
duplicacin.
La obtencin de mltiples copias requiere 20
a 40 veces la repeticin de los ciclos. El xito
de esta tcnica radica en el uso de una DNA
polimerasa termoestable, que no se
desnaturaliza por los repetidos ciclos de
calentamiento. Esta enzima se aisl
originalmente de la bacteria termfila Thermus
aquaticus.
La base de la tcnica conocida como
huella gnica se basa en las diferencias
individuales de estas secuencias. Esto,
generalmente se trata de cambios en un solo
par de bases pertenecientes a diferentes
individuos, que se presentan una vez cada
500 a 1,000 pares de bases, como promedio.
forense. Acta Cientfica Venezolana. 50: 24-
28, 1999.
Andra Carla de Souza Ges, Dayse
Aparecida da Silva, Cristiane Santana
Domingues, Joo Marreiro Sobrinho, Elizeu
Fagundes de Carvalho. Identification of a
criminal by DNA typing in a rape case in Rio
de Janeiro, Brazil. So Paulo Medical Journal.
Revista Paulista de Medicina. 120 (3): 77-80,
2002.
Centre for Genetics Education. Genetic
Testing and Screening II Forensic and Other
Applications. Directory of Genetics Support
Groups, Services and Information. Genetics.
235-239, 2004-2005.
Jeffreys Alec Genetic Fingerprinting Naure
Medicine Vol 11(10).1035-1039. 2005.
Mullis K.B the Unusual Origen of the
Polymerase Chain Reaction Science Am. 262
(4) 56-65. 1990.

Referencias
Curtis, H; Barnes, N; Biologa. Sexta edicin.
Editorial Mdica Panamericana.

Lewin, B; Genes VI. Editorial Oxford.

Nelson, D; Cox, M; Lehninger. Principios de
Bioqumica. Tercera edicin. Ediciones
Omega.

Yuri Sivolap, Ph.D., G. Krivda, Ph.D., N.

Kozhuhova., S. Chebotar., and Mark Benecke,
PH.D. A Homicide in the Ukraine. DNA-based
identification of a Boiled, Skeletozined, and
Varnished Human Skull, and of Bone
Fragments Found in a Fireplace. The
American jouenal of Forensic Medicine and
Pathology. 22 (4): 412-414 ,2001.

Lennie Pineda Bernal. El anlisis de DNA

para pruebas de paternidad e identificacin

179
SESIN 1 DE LABORATORIO PARA LA tratamiento dental, ya que ha presentado
PRCTICA DE HUELLA GNICA sangrado y prdida de algunas piezas
dentales. Los otros sospechosos son los dos
ESCENA DEL CRIMEN empleados de la casa, el jardinero que tiene
El crimen se lleva a cabo en la calle Lago una antigedad de 4 aos y presenta una
Manitoba No. 520, Col. Ampliacin Granada, lesin en el brazo que confiesa se hizo
Delegacin Miguel Hidalgo, en el sof de la arreglando el jardn y la cocinera quien tiene
sala se encuentra el cuerpo de la duea de la slo 3 meses laborando en la casa.
casa, una mujer de 42 aos de edad. El Con esta evidencia se compara el DNA de
cadver presenta signos de estrangulamiento cada sospechoso para encontrar al culpable
pero sin marcas de sogas o cinturones; o culpables del crimen, por lo que debe
tampoco se encuentran huellas digitales en su determinar si las muestras de sangre,
cuello. La vctima presenta una lesin cabellos, pieza dental y saliva sirven para
defensiva en el brazo derecho con arma estudiar el DNA y establecer las
punzo cortante. En el sof se observan varias caractersticas que permiten utilizar alguna o
manchas de sangre, algunas de ellas secas. todas las muestras para el estudio.
Las ms abundantes todava estn frescas. Cada equipo debe escoger alguna de las
Se ignora si la sangre pertenece a la vctima o evidencias previamente descritas y justificar
a sus agresores. su eleccin.
El laboratorio forense se encarga de recopilar Para realizar la comparacin entre el DNA
la informacin de la escena dando a conocer encontrado en la escena con el DNA de los
los siguientes aspectos: el cuerpo de la sospechosos deben contarse con muestras
vctima se descubri 20 minutos despus del proporcionadas por los mismos. Mencione de
asesinato. Presentaba con un golpe en la dnde obtendra dicho material. En el caso del
cabeza, presenta seales de forcejeo en su esposo debe tenerse en cuenta que no se
brazo y debajo de las uas se encuentran conoce su paradero, por lo cual la muestra
depositados restos de piel, sangre, y de debe ser extrada de algn objeto de uso
cabellos. Algunos de ellos presentan folculos. personal; defina cul sera ste y justifique la
Todo seala que la vctima forceje con su o eleccin del mismo.
sus agresores.
En el lugar tambin se hall un florero con
restos de sangre, la cual no se sabe si
corresponde a la de la vctima o a los
agresores. En un extremo del sof se
encuentra una pieza dental y, debido a que la
vctima conserva su dentadura completa, es
probable que el diente sea del victimario. En
el brazo izquierdo, la victima presenta varias
mordidas, algunas con sangre coagulada y
otras con restos de saliva mezclados con
sangre.
En el interior de la casa faltan algunas piezas
de valor, lo que sugiere que el mvil fu el
robo.
La polica cuenta con varios sospechosos,
entre los que se encuentra el esposo, con el
cual la vctima tuvo una discusin la noche
anterior. Se desconoce el tema de la
discusin y el paradero el esposo. Otros
sospechosos son los dos repartidores del gas
que una hora antes haban proporcionado el
servicio. Uno de ellos tiene problemas con la
dentadura y aclara que se encuentra en

180
SESION 2 DE LABORATORIO PARA LA 3.-A cada tubo adicionar 10 l de la muestra
PRCTICA FINGERPRINTING correspondiente; utilizar una punta nueva para
MATERIAL cada muestra.
- DNA de la escena del crimen con
amortiguador. 4.-Adicionar 10 l de la mezcla de enzimas de
- DNA del sospechoso 1 con amortiguador. restriccin a cada uno de los tubos que
- DNA del sospechoso 2 con amortiguador. contienen la muestra de DNA. Se debe tener
- DNA del sospechoso 3 con amortiguador. cuidado de no contaminar la mezcla de
- DNA del sospechoso 4 con. Amortiguador. enzimas, por lo cual se sugiere el empleo de
- DNA del sospechoso 5 con amortiguador. una punta nueva por cada tubo.
- Mezcla de enzimas de restriccin EcoRI/Pstl,
1800 U. Muestras Enzimas de Volumen
- Agua estril, 2.5 ml. de DNA restriccin total de
- Marcador de DNA de fago lambda digerido EcoRI y la
con Hind III 0.2g /l, 100 l. PstI reaccin
1.- 23,130 pb
2.- 9,416 pb Muestra de 10 l 10 l 20 l
3.- 6,557 pb la escena
4.- 4,361 pb Sospechoso 10 l 10 l 20 l
1 azul
5.- 2,322 pb
Sospechoso 10 l 10 l 20 l
6.- 2,027 pb 2 naranja
- Colorante de DNA (Biorad biosafe). Sospechoso 10 l 10 l 20 l
- Microtubos de colores. 3 violeta
- Microtubos blancos. Sospechoso 10 l 10 l 20 l
- Geles de agarosa al 1.0%. 4 rojo
- Amortiguador de electroforesis TAE (Tris- Sospechoso 10 l 10 l 20 l
Acetato-EDTA). Tris-base 39 mM, cido 5 amarillo
actico glacial 18 mM, EDTA 10 mM.
- Gradillas para microtubos. 5.-Cierre los microtubos y mezcle la muestra
- Recipiente para teir geles. golpeando suavemente los tubos con los
- Pipeta automtica de 10-100 l. dedos. Si se cuenta con una microfuga
- Puntas para pipetas automticas. aplique un pulso de 2 segundos para
- Marcador indeleble. asegurarse que toda la muestra se quede en
- Fuente de poder. el fondo del microtubo, permitiendo que se
- Cmara horizontal de electroforesis. mezcle adecuadamente y se lleve a cabo la
- Parrilla para bao mara. reaccin.
- Vaso de precipitado de 300 ml.
- Recipiente con hielo. 6.-Coloque los tubos en la gradilla e incbelos
- Microfuga. a 37C por 45 minutos.

PROCEDIMIENTO 7.-Transcurrido el tiempo de incubacin,

1.-Marcar los microtubos de la siguiente
forma:
a) Tubo verde (muestra de la escena)
b) Tubo azul (sospechoso 1)
c) Tubo naranja (sospechoso 2)
d) Tubo violeta (sospechoso 3)
e) Tubo rojo (sospechoso 4)
f) Tubo amarillo (sospechoso 5)
adicione 10 l del amortiguador de carga a
cada tubo tpelos y agtelos suavemente con
los dedos.
8.-Coloque en la cmara de electroforesis el
gel de agarosa, teniendo cuidado que los
pozos se encuentren orientados hacia el
ctodo [polo negativo (terminal negra)].

2.-Colocar los tubos marcados en la gradilla. 9.-Adicione 275 ml del amortiguador de

corrida o lo que se requiera para que se
cubran los pozos.

181
 del pozo y el centro de la banda de DNA. Con
10.-Coloque las muestras en el gel los datos obtenidos se llena la siguiente tabla.
empleando una punta nueva para cada B. Estructura de los cidos nucleicos y sus
muestra, las cuales se depositan de izquierda funciones
a derecha amortiguador en el siguiente orden:
Referncias
a) Carril 1: marcador de peso 1.-Biotechnology Explorer DNA Fingerprinting
molecular, HindIII,10; l Kit
b) Carril 2: escena del crimen verde, Instruction Manual BIORAD
10 l
c) Carril 3: sospechoso 1 azul, 10 l
d) Carril 4: sospechoso 2 naranja, 10
l
e) Carril 5: sospechoso 3 violeta, 20
l
f) Carril 6: sospechoso 4 rojo, 10 l
g) Carril 7: sospechoso 5 amarillo,
10 l
11-Cierre la cmara de electroforesis y
asegrese que concuerden las terminales rojo
con rojo y negro con negro. Conecte la
cmara a la fuente de poder, manteniendo la
orientacin de las terminales.

12.-Encienda la fuente de poder. Ajuste el

voltaje a 100 V y realice la electroforesis por
40 60 minutos.
Cortar en pequeas
13.-Detenga la electroforesis cuando la piezas con enzimas -ve Ms
muestra llegue a una distancia aproximada de de restriccin grandes
2 cm del final del gel. Apague la fuente de
poder, remueva la tapa y retire DNA total Fragmentos
cuidadosamente el gel. de una de DNA en el
persona gel

14.-Coloque en una charola 120 ml de la

+ve
solucin teidora 100X y el gel, asegurndose
que se encuentre sumergido en la solucin.
Fragmentos separados y
Tia los geles por 2 minutos. transferidos a membrana
de nylon
15.- Despus se deben colocar los geles en Ms
pequeas
una charola que contenga 500 700 ml de
agua limpia y caliente (40-55C), agite
suavemente el gel por aproximadamente 10
segundos y retire el agua, realizar los lavados
que sean necesarios con agua limpia hasta la
aparicin de las bandas de DNA y hacer la
comparacin de las muestras.

16.- Para realizar un anlisis cuantitativo de

las muestras, se debe medir con una regla la
distancia que migr cada uno de los
fragmentos de las muestras (en mm),
Tomando como punto de partida la parte baja

182
 Prctica 14
Determinacin de glucosa en sangre total
Objetivos
1. Que el estudiante comprenda el metabolismo de
la glucosa en sujetos sanos en diferentes
condiciones metablicas.
2. Que el estudiante corrobore los cambios de
glucosa que ocurren despus de la ingesta de
alimentos.
4. Que el alumno sea capaz de analizar e
interpretar los resultados obtenidos a partir de la
determinacin de glucosa en sangre total.
INTRODUCCIN
La glucosa es el proveedor de energa ms
importante del organismo junto con los cidos
grasos y los cuerpos cetnicos.
El principal aporte proviene del intestino (glucosa
alimentaria), el hgado y los riones.
En los animales superiores el metabolismo de los
carbohidratos est sujeto a mecanismos de
regulacin complejos en los que participan las
hormonas, los metabolitos y las coenzimas.
El cerebro, la mdula suprarrenal y los eritrocitos
son los que ms dependen del suministro continuo
de glucosa, por que no disponen de ninguna
reserva importante de la misma1.
El sistema nervioso requiere de aproximadamente
150 gr de glucosa al da para realizar sus funciones
normales2.
La principal funcin bioqumica de la glucosa
es la de proporcionar energa para los
procesos de la vida. El adenosn trifosfato
("ATP") es la fuente de energa universal para
las reacciones biolgicas. La oxidacin de la
glucosa por las vas glucoltica y del cido
ctrico es la fuente principal de energa para la
biosntesis del ATP.
El exceso de glucosa es almacenado en las
clulas como el polmero glucgeno para
demandas posteriores de energa.
El papel de la insulina es desviar la glucosa
extracelular a los sitios de almacenamiento
intracelular en la forma de macromolculas
(como el glucgeno, lpidos y protenas). Es as
que la glucosa es almacenada en tiempos de
abundancia para los momentos de necesidad.
Algunos minutos despus de la ingesta de una
comida, los niveles de insulina sangunea
aumentan. La glucosa y los aminocidos de la
dieta tales como la leucina, isoleucina y lisina,
son estimulantes potentes de las clulas beta
del pncreas haciendo que stas segreguen
insulina. La mayor parte de las clulas
perifricas responden al aumento de la
glucosa sangunea con un aumento rpido del
transporte de la glucosa dentro de las clulas.
De esta manera, los niveles de glucosa
sangunea aumentan solamente de un 20% a
un 40% en los individuos no-diabticos. Sin
embargo, aproximadamente el 80% de la
entrada de glucosa no es insulino dependiente,
ya que el cerebro, los glbulos rojos, el hgado
y los intestinos no requieren de insulina para la
entrada creciente de glucosa cuando est
presente glucosa sangunea elevada. El
msculo es el tejido dependiente de insulina
ms importante. Los niveles crecientes de
insulina y glucosa sanguneas inhiben la
liplisis as como a aproximadamente el 60%
de la liberacin normal de glucosa heptica3.
Se han realizado estudios del comportamiento
de la glucosa en sangre en sujetos normales
en la cual se puede observar que a los 30 a 60
minutos posteriores a la ingesta de alimentos
la concentracin de glucosa alcanza su
concentracin mxima y a las dos horas
vuelve a su estado basal6.
Algunos minutos despus de la ingesta
de una comida, los niveles de insulina
sangunea aumentan6.
Las concentraciones de glucosa en el suero
son aproximadamente 15% ms altas que las
concentraciones de glucosa en la sangre total
esto es debido a que la gluclisis contina en
los eritrocitos.
El uso del glucmetro es de mucha utilidad en
el autocontrol de pacientes diabticos, lo que
ayuda a medir una glucosa en sangre casual.
El valor calrico total diario de los alimentos
deber ser entre 25 y 30 Kcal/Kg/da, para las
personas sedentarias y de 30 a 40 Kcal/Kg/da
para una persona fsicamente activa o que
realiza ejercicio de manera regular4,5.
183
 Referencias 2.- Dos sujetos con actividad fsica constante, uno
1.-Koolman J, Roehm KH (2004). Bioqumica de los cuales consumir una dieta rica en
Texto y Atlas: 3 Edicin, Ed. Mdica carbohidratos y el otro una dieta rica en lpidos.
Panamericana, pp.: 158, 308-310 3.- A cada uno de los sujetos en cualquiera de
las condiciones y consumo de dietas se les
2.-Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M. (2005). determinar la concentracin de glucosa en
Marks Basic Madical Biochemestry. 2a Edicin. sangre total por medio de un glucmetro en los
Ed. Lippincott Williams & Wilkins. Pag. 24-26 siguientes tiempos:

3.-Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica Clnica. 0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
Teora, anlisis y correlacin. 3 Edicin. Ed.
Pesce Kaplan Publicaciones, Captulo: 32. 30 minutos, 60 minutos y 120 minutos,
despus de ingerir los alimentos
4.- NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-
SSA2-1994, Para la prevencin, tratamiento y Para realizar la determinacin de glucosa en
control de la diabetes mellitus en la atencin sangre total seguir los siguientes pasos:
primaria. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
de la Secretara de Salud. 4.-Para Insertar la lanceta
a) Gire la tapa One Touch
5.-MODIFICACIN a la Norma Oficial Mexicana UltraSoft hacia la izquierda
NOM-015-SSA2-1994, Para la prevencin, para quitarla
tratamiento y control de la diabetes. Listado de
Normas Oficiales Mexicanas de la Secretara de
b) Inserte una lanceta en el
Salud.
portalancetas y empjela
firmemente hasta que quede
6.- Manual para el manejo de las insulinas 2001.
bien asentada
2 Edicin. Subsecretara de Prevencin y
Proteccin de la Salud. Centro Nacional de
Vigilancia Epidemiolgica. SSA. Mexico.
5.- Cargue el dispositivo de
Material
puncin. Deslice el botn
cargador hacia atrs hasta que
Dietas:
haga clic. El dispositivo de
a).-Rica en carbohidratos (X gr. spaghetti).
puncin ya esta preparado
b).- Dieta rica en lpidos (hamburguesa).
para su uso.
Dos sujetos sanos sedentarios y dos horas
mnimas de ayuno.
6.- Lave sus manos y limpie
Dos sujetos con actividad fsica constante y dos
con una torunda de algodn
horas mnimas de ayuno.
con alcohol la zona donde se
Glucmetros One Touch Ultra.
realizar la puncin.
Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa oxidasa
(Aspergillus nger)].
Dispositivo de puncin.
Lancetas estriles con discos protectores One 7.- Coloque el dispositivo
Touch UltraSoft. de puncin en posicin.
Recipiente para material punzo cortante. Sostenga el dispositivo
Recipiente para material biolgico-infeccioso. firmemente contra el
Jabn para manos. costado de su dedo.
Torundas de algodn con alcohol. Presione el botn de
liberacin
Mtodo

1.- Dos sujetos sedentarios, uno de los cuales 8.- Aplique masaje a la
consumir una dieta rica en carbohidratos y el otro punta de su dedo.
una dieta rica en protenas.

184
Un suave masaje en la punta del dedo le ayudar 14.-Es importante desechar con mucho
a obtener cuidado la lanceta usada luego de cada uso,
una gota de sangre adecuada. con el fin de evitar que se produzcan lesiones
No exprima en exceso el rea de puncin. accidentales con las
puntas de la lancetas.
9.- Inserte la tira reactiva en el puerto de anlisis, Para el desecho de
con el extremo de las barras de contacto de las lancetas siga los
primero y mirando hacia arriba. siguientes pasos:
Empjela hasta que no

10.-Acerque y mantenga la 15.- Gire la tapa One

gota de sangre en el canal Touch Ultra Soft en
estrecho del borde superior de direccin contraria a
la tira reactiva las manecillas del
reloj.

11.- Hasta que la ventana de 16.- Apunte el

confirmacin este dispositivo de puncin hacia a hacia usted.
completamente llena de Presione el botn de liberacin
sangre, antes que el medidor para asegurarse que el dispositivo de puncin
comience la cuenta regresiva. no est en posicin de cargado. Deslice el
botn cargador hacia delante y deposite la
lanceta en un recipiente para material punzo
a) Muestra adecuada cortante
b) Muestra insuficiente
17.- Desechar las tiras reactivas en una bolsa
para material biolgico-infeccioso junto con las
torundas de algodn empleadas en la prctica.
b
18.-Con los datos obtenidos completar el
cuadro 14.1 y hacer una grfica de todas las
12.- Inserte la tira reactiva en variantes en papel milimtrico.
el puerto de anlisis, con el
extremo de las barras de
contacto de primero y Tabla 14.1 Resultados
mirando hacia arriba.
Empjela hasta que no Fecha:_________________
avance ms.
Nombre:
Edad: Sexo:
13.-Lectura Sedentario:
El resultado de la prueba de Actividad fsica constante:
glucosa de su sangre Tipo de dieta
aparecer despus de que el
medidor cuente en forma Tiempo [Glucosa mg/dl]
regresiva de 5 a 1. (min.)
Anotar el resultado en la 0
tabla correspondiente Tabla 30
14.1. 60
120

185
 Prctica 15
Integracin Metablica
Integracin Metablica
Objetivos
1.-Que el alumno pueda integrar las vas
metablicas de los carbohidratos, de los
lpidos y protenas en (condiciones
normales) en un paciente sano.
2.-Que el alumno reconozca los sitios
denominados encrucijadas metablicas y
las enzimas de las vas reguladoras.
3.-Que el alumno pueda correlacionar el
papel que tienen las hormonas en la
regulacin de las vas.
4.-Que el alumno sea capaz de analizar
los datos de las pruebas clnicas en un
sujeto normal.
5.-Que el alumno relacione que vas se
encuentran alteradas en un paciente
diabtico.
Los alimentos que ingerimos deben estar
constituidos por los 6 componentes
bsicos que son protenas, carbohidratos,
lpidos, vitaminas, minerales y agua, la
cantidad que se requiere ingerir de cada
uno de los componentes vara de acuerdo
a la constitucin y la actividad fsica que se
realiza, tanto la falta como en el exceso de
consumo de alguno de los componentes
bsicos conlleva a diversos trastornos
metablicos.
Aproximadamente del 40 al 45% de
nuestra ingesta calrica proviene del
consumo diario de carbohidratos
complejos los cuales al ser digeridos dan
lugar a los diferentes monosacridos entre
los que se encuentra la glucosa, la cul se
distribuye por la sangre a las clulas para
poder captar la glucosa, siendo la principal
15
fuente de energa. Algunos tipos celulares
son dependientes de la liberacin de
insulina por el pncreas como es el caso
de las clulas musculares. Si la insulina no
funciona adecuadamente, la glucosa se
queda en el flujo sanguneo causando
elevacin de los niveles de glucosa en la
sangre y a esto se le denomina
hiperglucemia; una de las enfermedades
que se caracteriza por la hiperglucemia en
sus primeras etapas es la diabetes
mellitus.
La diabetes mellitus esta caracterizada por
una hiperglucemia resultante de defectos
en la secrecin de insulina, en la accin de
la insulina o en ambas. La hiperglucemia
crnica de la diabetes est asociada a
lesiones, disfuncin y fallo de varios
rganos, especialmente de los ojos, los
riones, el corazn y los vasos
sanguneos.
Varios procesos patognicos estn
implicados en el desarrollo de la diabetes.
Estos van desde una destruccin
autoinmunolgica de las clulas  del
pncreas, con la consiguiente deficiencia
de insulina, hasta anormalidades, en las
que el pncreas no produce suficiente
insulina o la que produce no es eficiente.
La accin deficiente de la insulina en los
tejidos diana es la responsable del
metabolismo anmalo de los carbohidratos
de carbono, grasas y protenas en la
diabetes.
La accin deficiente de la insulina
ocasiona una respuesta inadecuada en
uno o ms puntos de la compleja trama
186
metablica en la que esta hormona tiene
papel regulatorio.
Frecuentemente coexisten en el mismo
paciente una inadecuada secrecin de
insulina as como defectos de la accin de
sta, en la actualidad no se sabe si una de
estas anormalidades es la consecuencia o
la causa de la otra. En cualquier caso, el
resultado es la hiperglucemia.
La gran mayora de los casos de diabetes
pueden incluirse en dos amplias
categoras etiopatognicas. En el primer
caso (diabetes de tipo I) la causa es una
deficiencia absoluta en la secrecin de
insulina. Los individuos con alto riesgo de
desarrollar este tipo de diabetes pueden
ser a menudo identificados mediante
evidencias serolgicas de un proceso
autoinmune que se produce en los islotes
pancreticos y tambin mediante
marcadores genticos. En la segunda
categora (diabetes de tipo II), mucho ms
prevalente, la causa es una combinacin
de una resistencia a la accin de la
insulina y de una inadecuada respuesta
secretora compensadora. La diabetes tipo
II se caracteriza por estar presente
muchos aos antes de ser detectada una
hiperglucemia sin sntomas clnicos (sed,
perdida de peso), pero suficiente para
ocasionar cambios patolgicos y estos valores se ven aumentados se
funcionales sobre los rganos blanco.
Durante este perodo asintomtico, es
posible demostrar trastornos en el
metabolismo de los carbohidratos
midiendo la glucosa plasmtica en ayunas
o despus de una sobrecarga de glucosa
por va oral.
El exceso en la ingesta de carbohidratos
no solamente mantiene la reserva de
energa en forma de glucgeno sino que
tambin el exceso de carbohidratos es
convertido en triacilgliceroles. En el hgado
los triacilgliceroles se sintetizan a partir de
acil CoA y glicerol 3-fosfato siendo
empaquetados con apoprotenas y en
lipoprotenas de muy baja densidad
(VLDL), secretados al torrente sanguneo
siendo almacenados en tejido adiposo.
Para su consumo los triacilgliceroles son
hidrolizados a glicerol y cidos grasos. En
la dieta es importante la presencia de
lpidos ya que son precursores de
diferentes componentes de la clula como
los fosfolipidos, uno de los lpidos que
tiene una gran importancia en la clula es
el colesterol, ya que proporciona rigidez a
las membranas celulares y es precursor de
las sales biliares as como de hormonas
esteroideas. El colesterol se puede
obtener por la alimentacin y por sntesis
del propio organismo, siendo las clulas
hepticas y las suprarrenales las de mayor
sntesis. Para llevar a cabo la sntesis de
colesterol se requiere la presencia de
acetil-CoA el cual proviene de la
degradacin de glucosa, cidos grasos y
aminocidos por lo cual se denomina a la
acetil-CoA la encrucijada metablica.
El colesterol es insoluble en agua por lo
que transportado en la sangre por tres
lipoprotenas que son de muy baja
densidad (VLDL), de baja densidad (LDL)
y las de alta densidad (HDL). Los niveles
normales de colesterol total en sangre en
un adulto son de < 200 mg/dl y cuando
asocian a la formacin de placas
ateroscleroticas que pueden ocluir los
vasos sanguneos y como consecuencia
provocar infarto al miocardio y alteraciones
cardiovasculares.
La cuantificacin de las LDL representa un
papel clave en la esclerosis coronaria ya
que concentraciones elevadas indican
desarrollo de la aterosclerosis.
En el caso de las HDL al dismunuir su
concentracin aumenta el riesgo de
desarrollar aterosclerosis.
Las protenas constituyen la fuente
primaria del metabolismo del nitrgeno en
el organismo,
187
Los aminocidos producto de la digestin proporcional a la masa muscular corporal.
de las protenas que se consumen en los La cantidad de creatinina que se elimina
alimentos, son utilizados para la sntesis diariamente puede utilizarse como
de protenas y de compuestos indicador de la normalidad de la funcin
nitrogenados o se puede oxidar para renal
producir energa.
El hgado es el rgano principal en donde Material.
se realiza la oxidacin de los aminocidos. Dietas:
El nitrgeno de los aminocidos forma Dos sujetos sanos sedentarios y dos horas
amoniaco el cual es toxico para el mnimas de ayuno.
organismo. El amoniaco y los grupos Dos sujetos con actividad fsica constante
amino se convierten en urea en el hgado, y dos horas mnimas de ayuno.
que no es toxica y se elimina fcilmente a).-Dieta rica en carbohidratos (g
por la orina ya que es hidrosoluble. spaghetti).
Otro de los componentes del metabolismo b).-Dieta rica en lpidos (Hamburguesa).
nitrogenado son los nucleotidos. Las Determinacin de glucosa
purinas y las pirimidinas, que son Glucmetros One Touch Ultra.
esenciales para la sntesis de nucletidos Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa
y cidos nucleicos. oxidasa (Aspergillus nger)].
Los nucletidos son precursores del DNA Dispositivo de puncin.
y el RNA, as como tambin forman parte Lancetas estriles con discos protectores
de la estructura de muchas coenzimas One Touch UltraSoft.
adems de ser componentes del Recipiente para material punzo cortante.
metabolismo energtico. Recipiente para material biolgico-
La degradacin de las purinas no genera infeccioso.
energa y el producto de la degradacin Jabn para manos.
del anillo purnico es el cido rico, que se Torundas de algodn con alcohol.
elimina por la orina, tiene una solubilidad Glucmetros.
limitada por lo que su exceso da como Determinacin de colesterol y
resultado la formacin de cristales en triacilgliceroles
regiones del organismo como pueden ser Accutrend Roche para determinacin de
los dedos gordos del pie, trastorno que se colesterol y triacilgliceroles.
conoce como gota. Tiras reactivas para determinacin de
Los valores elevados de cido rico se colesterol.
presentan en: ingestin de alimentos ricos Tiras reactivas para determinacin de
en nucleoprotenas, insuficiencia renal, triacilgliceroles.
azoemias prerrenales. Lancetas estriles.
Otro de los componentes del metabolismo
nitrogenado es la creatinina que en el Determinacin de hemoglobina
msculo en su forma fosorilada sirve como glicosilada.
almacn de alta energa y se transforma Micromat HbA1c BIO-RAD para
con facilidad en ATP por la enzima determinacin de hemoglobina glicosilada
creatina fosfocinasa. La creatina fosfato es en sangre total.
inestable y se cicla espontneamente Lancetas estriles.
forma la creatinina que se elimina en la Las determinaciones de urea, creatinina y
orina. La produccin de creatinina es cido rico, se realizaran en orina.

188
La muestra de orina deber ser del alumno
a quien se le haya determinado glucosa,
colesterol y triacilgliceroles para poder
discutir todos los valores en conjunto y
poder enlazar en un mismo individuo el
efecto que tiene la dieta sobre el
metabolismo.
Determinacin de urea
Pipetas automticas (10 a 200l)
Puntas para micropipetas
Propipetas.
Reactivo para urea.
Estndar de urea (50 mg/dl).
Espectrofotmetro.
Celdas.
Agua destilada.
Pipetas Pasteur de plstico.
Determinacin de creatinina
Reactivo para creatinina.
Estndar de creatinina (2 mg/dl).
Determinacin de cido rico
Pipetas de 5 ml.
Gradilla con 2 tubos de ensaye.
Reactivo para cido rico.
Estndar de cido rico (6 mg/dl).
Mtodo
Determinacin de glucosa
1.-Dos sujetos sedentarios, uno de los
cuales consumir una dieta rica en
carbohidratos y el otro una dieta rica en
lpidos.
2.-Dos sujetos con actividad fsica
constante, uno de los cuales consumir
una dieta rica en carbohidratos y el otro
una dieta rica en lpidos.
3.-A cada uno de los sujetos en cualquiera
de las condiciones y consumo de dietas se
les determinar la concentracin de
glucosa en sangre total por medio de un
glucmetro en los siguientes tiempos:
0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
30 minutos, 60 minutos y 120 minutos,
despus de ingerir los alimentos. Para
realizar la determinacin de glucosa en
sangre total seguir los
siguientes pasos:
4.-Para Insertar la lanceta
a) Gire la tapa One Touch
UltraSoft hacia la izquierda
para quitarla.
b) Inserte una lanceta en el
portalancetas y empjela
firmemente hasta que quede
bien asentada.
5.- Cargue el dispositivo de
puncin. Deslice el botn
cargador hacia atrs hasta
que haga clic. El dispositivo de
puncin ya esta preparado para
su uso.
6.- Lave sus manos y limpie
con una torunda de algodn
con alcohol la zona donde se
realizar la puncin.
7.- Coloque el dispositivo de
puncin en posicin. Sostenga
el dispositivo firmemente contra
el costado de su dedo.
Presione el botn de liberacin.
8.- Aplique un suave masaje a
la punta de su dedo que le
ayudar a obtener una gota de
sangre adecuada No exprima
en exceso el rea de puncin.
9.-Acerque y mantenga la gota
de sangre en el canal estrecho
del borde superior de la tira
reactiva
189
 a b

10 a) Muestra adecuada b) 16.- Apunte el dispositivo de puncin hacia

Muestra insuficiente el recipiente para el material punzo
cortante Presione el botn de liberacin
para asegurarse que el dispositivo de
puncin no est en posicin de cargado.
Deslice el botn cargador hacia delante
11.- Inserte la tira reactiva y deposite la lanceta en un recipiente
en el puerto de anlisis, para material punzo cortante.
con el extremo de las
barras de contacto de b17.- Desechar las tiras reactivas en una
primero y mirando hacia bolsa para material biolgico-infeccioso
arriba. Empjela hasta que junto con las torundas de algodn
no avance ms. empleadas en la prctica.

18.-Con los datos obtenidos

12.- Hasta que la ventana completar el cuadro 15.1 y hacer
de confirmacin este una grfica de todas las variantes
completamente llena de en papel milimtrico.
sangre, antes que el
medidor comience la Cuadro 15.1 Resultados
cuenta regresiva.
13.-Lectura el resultado de la prueba de Fecha:_________________
glucosa de su sangre aparecer despus
de Nombre:
que el medidor cuente en forma regresiva Edad: Sexo:
de 5 a 1. Sedentario:
Actividad fsica constante:
Anotar el resultado en la Tipo de dieta
tabla correspondiente Tabla 15.1
Tiempo [Glucosa mg/dl]
14.-Es importante desechar con mucho (min.)
cuidado la lanceta usada luego de cada 0
uso, con el fin de evitar que se produzcan 30
lesiones 60
accidentales con las puntas de la 120
lancetas.
Determinacin de colesterol y
Para el desecho de las lancetas siga los triacilgliceroles
siguientes pasos: AccutrendGCT.
1.-Lavarse las manos cuidadosamente
15.- Gire la tapa One esto es con la finalidad de retirar residuos
Touch Ultra Sof en de crema o grasa en las manos para
direccin contraria a las evitar determinaciones errneas
manecillas del reloj. principalmente cuando se realiza la
determinacin de triacilgliceroles.

190
2.- Con la ayuda de unas pinzas extraer
una tira reactiva del envase y taparlo
inmediatamente para evitar que las tiras se
sequen.
3.-Con la tapa cerrada D inserte en la
ranura F, en la direccin indicada por la
flecha, la tira reactiva con el cuadrado
amarillo hacia arriba hasta que encaje y
deje verse la marca TG o CHOL impresa
en la tira reactiva.
4.-Frote y masajee la yema del dedo para
facilitar la extraccin y aplicacin de la
sangre.
5.-Con la lanceta introduzca para hacer la
puncin y realice la toma de muestra.
6.-Aplicar directamente la gota de sangre a
la tira reactiva y proceder a la lectura de la
concentracin de colesterol y
triacilgliceroles segn sea el caso, si no se
llena completamente el equipo le marca R-
5.
7.-Realice la lectura.
8.-Anote la lectura.
9.-Si esto llegara a suceder volver a tomar
otra tira reactiva para proceder a iniciar
completamente desde el paso uno.
Determinacin de hemoglobina
glicosilada
Gua rpida Micromat II. (Deteccin de
hemoglobina glicosilada).
1.-Insertar el cartucho de anlisis.
2.-Girar el cartucho a la posicin 1.
3.-Extraccin de muestra capilar o venosa.
4.-Comenzar la incubacin, presionar
enter
5.-Invertir 3 veces.
6.-Dispensar la muestra en el embudo
central.
7.-Girar el cartucho a la posicin 2, sacar
el tubo de la solucin de lavado (tapn
azul).
8.-Verter la solucin de lavado al embudo
central.
9.-Girar el cartucho a la posicin 3, sacar
el tubo de la solucin eluyente (tapn
transparente).
10.-Verter el eluyente al embudo central.
11.-Girar el cartucho a la posicin de
partida.
12.-Extraer el cartucho de anlisis, el
resultado se observar en la pantalla.
13.-Presionar enter para un nuevo anlisis.
Determinacin de urea en orina
La urea presente en la muestra reacciona
con el o-ftaldehdo en medio cido
originando un complejo coloreado puede
identificarse espectrofotomtricamente.
Urea + o-ftaldehdo Isoindolina
La urea es estable 5 das a 2-8 C.
1.-Diluir la muestra 1:50 con agua
destilada mezclar y multiplicar el resultado
por el factor de dilucin (50).
2.-Para realizar la dilucin 1:50 recupere la
orina con la pipeta
Celda 1 2
Orina 100 -
l
Estndar - 100
l
Solucin 1 ml 1 ml
reactiva
de creatinina
Pasteur de plstico hasta la marca (lo que
corresponde a 0.5 ml) y colquelo en un
tubo Falcn que ya contiene 24.5 ml de
agua, con ello se tendr una dilucin 1:50,
de ah tomar la muestra como se
esquematiza en el cuadro.
La determinacin se realiza directamente
en las celdas con la finalidad de tomar la
lectura de las absorbancias exactamente
al minuto (A1) y a los dos minutos (A2).
191
 Celda 1 2 Con las diferencias de absorbancias
Muestra 25 l -- anotadas A, aplicar la siguiente ecuacin:
A Muestra X [Estndar] = [Creatinina]
Estndar -- 25 l
A Estndar
Solucin reactiva 1 ml 1 ml
para urea
El resultado se obtiene en mg/dl.
Mezclar y poner en marcha el cronmetro,
Determinacin de cido rico en orina.
anotar las absorbancias a los 60 (A1) y 120
1.-Diluir la muestra 1:10 con agua
(A2) segundos.
destilada, mezclar y multiplicar el resultado
Leer frente blanco de reactivos en el
por el factor de dilucin (10).
espectrofotmetro a 520 nm.
2.-Para realizar la dilucin 1:10 recupere la
Calcular el incremento de la absorbencia
orina con la pipeta Pasteur de plstico
A = A2 A1.
hasta la marca (lo que corresponde a 0.5
Con las diferencias de absorbancias
ml) y colquelo en un tubo Falcn que ya
anotadas A, aplicar la siguiente ecuacin:
contiene 9.5 ml de agua, con ello agregue
agua hasta la marca de 5 ml con ello
A Muestra X [Estndar] = [Urea]
tendr una dilucin 1:10 de ah tomar la
A Estndar
muestra como se esquematiza en el
El resultado se obtiene en mg/dl.
cuadro.
La determinacin se realiza en tubos de
Determinacin de creatinina en orina
ensaye.
1.-Diluir la muestra 1:50 con agua
destilada mezclar y multiplicar el resultado
Mezclar e incubar 10 minutos a
por el factor de dilucin (50).
temperatura ambiente.
2.-Para realizar la dilucin 1:50 recupere la
Leer la absorbancia (A) en el
orina con la pipeta Pasteur de plstico
espectrofotmetro frente a blanco de
hasta la marca (lo que corresponde a 0.5
reactivos a 520 mn.
ml) y colquelo en un tubo Falcn que ya
contiene 24.5 ml de agua, con ello se
Clculo de la concentracin de cido rico.
tendr una dilucin 1:50, de ah tomar la
muestra como se esquematiza en el
A Muestra X [Estndar] = [cido rico]
cuadro.
A Estndar
La determinacin se realiza directamente
en las celdas con la finalidad de tomar la
El resultado se obtiene en mg/dl.
lectura de las absorbancias exactamente a
los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos.
Tubo 1 2
Mezclar y poner en marcha el cronmetro, Orina 100 l -
anotar las absorbancias a los 30 (A1) y a Estndar - 100 l
los 90 (A2) segundos. Solucin reactiva 1 ml 1 ml
Leer frente blanco de reactivos en el de cido rico
espectrofotmetro a 492 nm.
Calcular el incremento de la absorbencia
A = A2 A1.

192
Referencias
1.-Koolman J, Roehm KH (2004).
Bioqumica Texto y Atlas: 3 Edicin, Ed.
Mdica Panamericana, pp.: 158, 308-310

2.-Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M.

(2005). Marks Basic Madical
Biochemestry. 2a Edicin. Ed. Lippincott
Williams & Wilkins. Pag. 24-26

3.-Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica

Clnica. Teora, anlisis y correlacin. 3
Edicin. Ed. Pesce Kaplan Publicaciones,
Captulo: 32.
4.- NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-
015-SSA2-1994, Para la prevencin,
tratamiento y control de la diabetes
mellitus en la atencin primaria. Listado
de Normas Oficiales Mexicanas de la
Secretara de Salud.

5.-MODIFICACIN a la Norma Oficial

Mexicana NOM-015-SSA2-1994, Para la
prevencin, tratamiento y control de la
diabetes. Listado de Normas Oficiales
Mexicanas de la Secretara de Salud.

6.- Manual para el manejo de las insulinas

2001. 2 Edicin. Subsecretara de
Prevencin y Proteccin de la Salud.
Centro Nacional de Vigilancia
Epidemiolgica. SSA. Mxico.

7.- NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-

030-SSA2-1999, Para la prevencin,
tratamiento y control de la
hipertensin arterial. Listado de Normas
Oficiales Mexicanas de la Secretara de
Salud.

193
 III

Casos de correlacin bioqumica

y prctica mdica

194
 Caso 1
Clera

Conceptos y reas de aprendizaje

Un hombre de 38 aos de edad con peso
1. Describir la composicin, las
de 71 kg relata que su padecimiento actual
propiedades y las funciones de las
se inici con anorexia, dolor abdominal y
membranas biolgicas.
diarrea. Un da despus sigui con nusea
2. Estudiar la base bioqumica de algunos
intensa, vmito y diarrea muy abundante y
trastornos que afectan la funcin de las
lquida. Ingres al hospital con hipotensin
membranas.
postural y deshidratacin. Se pudo aislar
3. Modelos de transporte transepitelial.
Vibrio cholerae toxgeno de sus heces. El
4. Describir los mecanismos por los cuales
paciente mejor rpidamente al reponerle
los organismos enteropatgenos
agua, electrlitos y administrarle tetraciclina
ocasionan prdida intestinal de agua y
por va oral.
electrolitos.
5. Control del agua y de la osmolaridad.
Preguntas de bioqumica
6. Equilibrio cido-base.
1. Qu procesos de la membrana
7. Deshidratacin y tratamiento de
resultan afectados por Vibrio cholerae
reposicin hidroelectroltica.
en un caso de clera?
2. Qu valores de laboratorio clnico
REFERENCIAS
podran estar alterados en este
1. Villazn SA, Crdenas CO, Villazn DO,
paciente?
Sierra UA. Fluidos y electrlitos. Mxico:
3. Cules seran los datos de laboratorio
JGH Editores; 2000.
que permitiran precisar el tratamiento 2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto
hidroelectroltico? con aplicaciones clnicas. 4a. ed.
4. Por qu en este caso hay que aadir Barcelona: Editorial Revert; 2004.
glucosa al tratamiento hidroelectroltico 3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y
por va oral? texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial
5. Cules son los signos de Harcourt-Brace; 1998: cap. 4 y 12.
deshidratacin?
6. Cul fue la situacin cido-base del
paciente al momento de su ingreso al
hospital?

195
 Caso 2

Oclusin intestinal. Acidosis metablica.

Deshidratacin grave

Se trata de un paciente masculino de 35 El tratamiento consisti, primero, en el

aos de edad quien acude al servicio de restablecimiento del balance de lquidos
urgencias de un hospital por presentar con solucin salina a 0.9%, electrlitos
+
dolor abdominal intenso acompaado de (reposicin de K ) y ciruga.
vmitos frecuentes y abundantes de
contenido intestinal. El paciente presenta Preguntas de bioqumica
un cuadro de deshidratacin importante. 1. Evaluar el estado cido-base del
A la exploracin fsica se obtuvieron los paciente; tomar en cuenta los valores
siguientes datos: de pH y presin parcial de bixido de
Tensin arterial (TA): 80/50 mmHg carbono (pCO2), el valor de bicarbonato

Frecuencia cardiaca (Fc): 120/min plasmtico (HCO3 ), etctera.
Frecuencia respiratoria (Fr): 32/min
2. Es normal el estado cido-base del
Temperatura (T): 36o C paciente? Qu tipo de desequilibrio
Los estudios de laboratorio mostraron lo presenta? Cul podra ser la causa de
siguiente: ese desequilibrio?
3. Qu relacin existe entre el
Electrolitos sricos:
+ metabolismo de los electrolitos y el
Na = 128 mEq/l
+ agua y entre los trastornos cido-base y
K = 2.8 mEq/l
los electrolitos?
Cl = 100 mEq/l
4. Qu tipos de alteraciones de lquidos y
Gasometra arterial: electrolitos corporales existen?
CO2t = 12 5. Calcule la osmolaridad srica (tome en
pH = 7.29 cuenta la concentracin de las
pCO2 = 24 mmHg sustancias que mayormente contribuyen
pO2 = 95 mmHg a establecerla) como aparecen en las
HCO - = 11.2 mmol/l
3
pags. 98 y 113.
6. Cules son los signos de
EB (exceso de base) = 20
deshidratacin?
Qumica sangunea: 7. Qu teraputica recomendara a este
Glucosa = 5.2 mmol/l (95 mg/dl) paciente para equilibrar sus lquidos y
BUN = 15 mmol/l electrolitos?

Conceptos y reas de aprendizaje

1. Propiedades fisicoqumicas del agua.
2. Concepto de pH.

196
3. Explicar el significado de las variaciones REFERENCIAS
de los valores normales de pH y de la 1. Harrison. Principios de medicina interna.
composicin electroltica de la sangre. 15a. ed. Madrid: McGraw-Hill
4. Sistemas amortiguadores del plasma, Interamericana Editores; 2001; cap:
lquido intersticial y clulas. La Lquidos y electrlitos y Obstruccin
aplicacin de la ecuacin de Henderson intestinal aguda. p. 184.
y Hasselbalch al clculo del pH y de la 2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto
concentracin de bixido de carbono y con aplicaciones clnicas. 4a. ed.
bicarbonato. Barcelona: Editorial Revert; 2004.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y
5. Equilibrio cido-base y su
texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial
mantenimiento.
Harcourt-Brace, 1998; cap. 4.
6. Equilibrio hidroelectroltico y su
4. Laguna J, Pia E. Bioqumica de
mantenimiento.
Laguna. 5a.ed. Mxico: Editorial El
Manual Moderno; 2002: 41-76.
5. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn DO,
Sierra UA. Fluidos y electrlitos. Mxico:
JGH Editores; 2000.

197
 Caso 3

Hipoglucemia secundaria
a intoxicacin alcohlica

Se trata de un paciente de 58 aos,

alcohlico crnico , cuyos familiares relatan
que ha ingerido una gran cantidad de
alcohol en los dos ltimos das con un
consumo muy escaso de alimentos. Inici
su padecimiento con nusea, vmito,
mareo, sudacin, cefalea, visin borrosa y
confusin; present, en una sola ocasin,
una convulsin, por lo que es llevado al
servicio de urgencias. A la exploracin se
encuentra semiconsciente con aliento
alcohlico e hipotermia.
Se procede a un lavado gstrico para
remover el alcohol an no absorbido; se
mantienen permeables las vas
respiratorias; se instala oxgenoterapia y se
le administra solucin glucosada por va
endovenosa.
Los resultados de laboratorio muestran:
Alcohol 300 mg/dl
Glucosa 2.0 mmol/l
Lactato 9.0 mmol/l
pH 7.2
Preguntas de bioqumica
1. Cules son los sntomas de la
hipoglucemia?
2. De qu forma el etanol produce acidosis
lctica e hipoglucemia? Cmo se
encuentra la relacin intracelular de
+ aguda por alcohol etlico.
NADH/NAD ? Qu procesos metablicos
se favorecen con los niveles altos de
NADH?
3. El alcoholismo es la base de muchas
deficiencias vitamnicas. Qu
implicaciones metablicas tienen estas
deficiencias (complejo B)?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Hipoglucemia. Regulacin de la glucemia.
2. Acidosis lctica.
3. Metabolismo de carbohidratos.
4. Trastornos del metabolismo de vitaminas.
5. Metabolismo del etanol.
REFERENCIAS
1. Murray KR, Granner DK, Mayes PA,
Rodwell VW. Bioqumica de Harper. 16a.
ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno;
2004. p. 980-981
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2004.
3. Harrison. Principios de medicina interna.
15a. ed. Madrid: McGraw-Hill
Interamericana Editores; 2001. Captulos:
Acidosis lctica, hipoglucemia, alcohol y
alcoholismo, deficiencia y exceso de
vitaminas.
4. Academia Nacional de Medicina. Tratado
de medicina interna. 2a. ed. Mxico:
Editorial El Manual Moderno; 1994.
Captulos: Acidosis lctica e intoxicacin

198
 Caso 4
Cetosis por inanicin. Obesidad
Una mujer de 27 aos llega al servicio de
urgencias mdicas despus de haber sufrido
un desmayo. Al interrogarla, relata que lleva
15 das a dieta de agua, t y verduras
cocidas para bajar de peso, sin ningn
control mdico. Se detect aliento con olor a
manzana, cetonuria, cetonemia, cidos
grasos libres elevados, triacilgliceroles
elevados, hipoglucemia y presin arterial
baja; su peso al iniciar la dieta era de 78 kg y
su estatura de 1.59 m. Se diagnostica
cetoacidosis por inanicin y obesidad
exgena.
El estudio de su dieta mostr que gran
parte de su ingesta calrica era en forma de
carbohidratos (galletas, chocolates, pasteles,
refrescos, dulces, etctera).
El tratamiento consisti en administrar
parenteralmente solucin glucosada y
continuar con una dieta normocalrica.
Preguntas de bioqumica
1. En esta mujer de 27 aos: corresponde
el peso a su talla? Determinar su ndice
de masa corporal, grado de obesidad y el
porcentaje de sobrepeso.
2. Cmo es posible que se formen grandes
almacenes de energa en forma de
grasas, si la dieta contiene
predominantemente carbohidratos?
3. Cules son las interrelaciones
metablicas de los principales tejidos
(hgado, tejido adiposo,
cerebro, msculo, etctera) en la
obesidad?
4. Cules son las interrelaciones
metablicas de los principales tejidos en
el estado de ayuno temprano y en la
inanicin?
5. Cul es el papel de los cuerpos
cetnicos en el metabolismo?
6. Qu rgimen diettico recomendara a
esta persona para bajar de peso?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Describir las principales rutas de
biosntesis, catabolismo y
almacenamiento de lpidos.
2. Conocer la estructura y funcin de los
triacilgliceroles, cidos grasos y cuerpos
cetnicos.
3. Establecer las bases bioqumicas de la
cetosis y obesidad producidas por
anomalas en el metabolismo de los
lpidos.
4. Describir las alteraciones del equilibrio
cido-base que se producen en la cetosis.
5. Conocer las interrelaciones metablicas
de los principales tejidos corporales en los
estados de buena nutricin, de ayuno
temprano, de inanicin, de renutricin, de
homeostasis calrica, etctera.
REFERENCIAS
1. Harrison. Principios de medicina interna.
15a. ed. Madrid: McGraw-Hill
Interamericana Editores; 2001.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2004.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto.
6a. ed. Harcourt-Brace; 1998.
4. Casanova E. Nutriologa mdica. Editorial
Mdica Panamericana; 1995.
199
 Caso 5
Hipercolesterolemia y aterosclerosis
Un hombre de 56 aos acudi al mdico por
presentar dolor precordial en reposo que se
incrementaba con el esfuerzo. Se le detect
hipercolesterolemia que, al anlisis de los
lpidos plasmticos, mostr que la mayora
del colesterol plasmtico elevado se
encontraba en la fraccin de lipoprotena de
baja densidad (LDL). Se le realiz una
arteriografa coronaria la cual mostr un
estrechamiento de las arterias. La evaluacin
de la dieta indic que consuma gran
cantidad de alimentos ricos en colesterol,
aunque en los ltimos meses haba seguido
una dieta baja en grasas.
Fue diagnosticado de aterosclerosis en las
arterias coronarias.
El tratamiento consisti en una dieta sin
colesterol y en administrar preparados de
lovastatina, un inhibidor de la HMGCoA
reductasa.
Fue tratado tambin con colestiramina,
una resina que capta las sales biliares. La
resina no se absorbe y permanece en la luz
intestinal donde se une a las sales y aumenta
la cantidad de las mismas que se excreta con
las heces.
Preguntas de bioqumica
1. Cules son algunos alimentos ricos en
colesterol?
2. Cul es el destino del colesterol de la dieta?
3. Cul es la funcin de la bilis en la digestin?
4. Qu conexin metablica existe entre el
colesterol y las sales biliares?
5. Cmo disminuye la resina de colestiramina
la concentracin plasmtica de colesterol?
6. Por qu se le ha llamado al colesterol-LDL:
colesterol malo y al colesterol-HDL:
colesterol bueno?
7. Cmo puede la hipercolesterolemia producir
aterosclerosis, infarto del miocardio,
xantomatosis, etctera?
8. Por qu el hecho de disminuir la
concentracin plasmtica de colesterol puede
ser til para la salud de este paciente?
9. Qu papel desempea la HMG-CoA
reductasa en la biosntesis del colesterol?
10. Cul es la razn del uso de la lovastatina
para el tratamiento del paciente?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Estructura del colesterol y otros esteroles
importantes.
2. Biosntesis, metabolismo y excrecin del
colesterol y de los cidos biliares.
3. Describir la funcin de la bilis y su relacin
con el colesterol.
4. Considerar el papel del colesterol en el
desarrollo de la aterosclerosis y de la relacin
entre hipercolesterolemia e ingesta diettica
de lpidos en esta enfermedad.
5. Comentar los principios del transporte de
lpidos en el sistema circulatorio.
6. Describir la composicin, estructura,
metabolismo y funcin de los principales
tipos de lipoprotenas plasmticas.
7. Describir los defectos del metabolismo
lipdico que tienen relevancia clnica en
relacin con la hipercolesterolemia.
REFERENCIAS
1. PLM. Diccionario de especialidades
farmacolgicas. 49 ed. 2004.
200
2. Montgomery R. Bioqumica. Casos y texto.
6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-Brace,
1998: cap. 10 y 11.
3. Harrison. Principios de medicina interna. 15a.
ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana
Editores; 2001: Captulos: Aterosclerosis y
otras formas de arteriosclerosis e
hiperlipoproteinemias y otros trastornos del
metabolismo lipdico.
4. Pennachio D. Lineamientos para la deteccin
de hipercolesterolemia. Atencin Mdica
1997;10/2:30-43.
5. Vogel RA. Coronary risk factors, endothelial
function, and atherosclerosis. Clin Cardiol
1997; 20:426-432.
6. Goodman & Gilmans. The pharmacological
basis of therapeutics. 10th ed. McGraw-Hill
Interamericana Editores; 2002.
7.Mecanismo de accin de los
hipercolesterolemiantes. Rev Mdico
General. 1997; 2(7): 71-74.

201

GOTA
Un hombre de 53 aos relata que su
padecimiento actual se inici con una
inflamacin aguda del ortejo mayor del pie
derecho e intenso dolor, el cual se
intensificaba con el fro y el movimiento.
Adems, asegura que poco antes de
presentar este episodio agudo el paciente
haba incrementado el consumo de carne,
vsceras, leguminosas y vino de mesa en
abundancia.
Fue tratado con fenilbutazona, pero
present dao gstrico, por lo que se cambi
el medicamento por alopurinol y naproxn.
Preguntas de bioqumica
1. Qu alteraciones metablicas pueden traer
como consecuencia un aumento en los
niveles sricos de cido rico?
2. Son necesarias las purinas y las pirimidinas
en la dieta?
3. Qu alimentos son ricos en purinas y
pirimidinas?
4. Qu valores de laboratorio podran estar
alterados en este paciente?
5. Son importantes los antecedentes familiares
de este paciente?
6. Cul es la base bioqumica para sospechar
que una dieta rica en protenas puede
provocar ataques de gota en pacientes
susceptibles?
7. Cmo se relaciona la ingestin de etanol
con el incremento de la concentracin
plasmtica de cido rico?
Caso 6
8. Qu rgimen diettico le recomendara a
esta persona para mejorar sus niveles de
cido rico?
9. Cul es la base bioqumica para la accin
de los medicamentos utilizados en la gota?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Caractersticas estructurales de los cidos
nucleicos.
2. Biosntesis y catabolismo de purinas y
pirimidinas.
3. Explicar cmo interfieren algunos
medicamentos utilizados en el tratamiento de
la gota con el metabolismo de los
nucletidos.
REFERENCIAS
1. Harrison. Principios de medicina interna. 15a.
ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana
Editores; 2001.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Revert; 2004.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto.
6a. ed. Barcelona: Editorial Harcourt-Brace;
1998: Cap. 13.
4. Rodrguez Carranza R y col. Vademcum
acadmico de medicamentos. 4a. ed.
Mxico: Facultad de Medicina, UNAM y
McGraw-Hill Interamericana Editores; 2004.
202