Enfermedades psiquitricas, comportamiento y genes

De la gentica a la clnica en los

trastornos psiquitricos:
factores de vulnerabilidad/proteccin

1. ..Los genes alterados, por s solos, no explican todas las

variantes de la enfermedad mental. Los factores sociales y
del desarrollo contribuyen de forma importante...
2."...Las alteraciones en la expresin gentica inducidas por
el aprendizaje, originan cambios en los patrones de conexin
neuronal...
3. "...La psicoterapia y la intervencin psicosocial (que ocasionan
cambios a largo plazo en el pensamiento y comportamiento)
afectan la expresin gentica, ya que producen modificaciones
de las conexiones sinpticas, as como cambios estructurales
en los patrones anatmicos de interconexin de las vas
neurales..."

Unidad de Trastornos Adictivos

Servicio de Psiquiatra
Hospital Universitario 12 de octubre
Madrid
2004

Complejidad de los caracteres relacionados con el pensamiento y la conducta

La plasticididad neuronal como respuesta al medio ambiente
Kandel E. A New Intellectual Framework for Psychiatry. American Journal of Psychiatry 1998 April; 155(4): 457-469

Heredabilidad (h2)
Proporcin de la varianza para un rasgo en la poblacin que se debe a factores genticos

A: heredabilidad ( variacin fenotpica debida a factores genticos )

C: variacin fenotpica debida a ambientes comunes
E: variacin fenotpica debida a ambientes no compartidos
R. Plomin y col. Behavioral Genetics (2001)

1.
2.
3.

Indice de recurrencia
roCcno
i cnad
a l c i n a c : m eg l e
tE s i d u s o e d i c p o d a
n

so

mi z o n

t g

i so c

y id i z tg

Los familiares cercanos de alcohlicos tienen un riesgo triple o

cudruple
Cotton, 1979; Goodwin, 1988
Hay mayor concordancia en gemelos monocigticos que en
dicigticos.
Schuckit, 1981
Nios adoptados de padres biolgicos con alcoholismo, tienen
un riesgo cuatro veces mayor.
Goodwin et al, 1973 y 1975

i so c

Herencia y abuso de drogas

Herencia y alcoholismo

Factores hereditarios en TDAH

Estudios familiares
mayores tasas de trastornos por uso de drogas entre familiares de adictos.
mayores tasas de depresin, personalidad antisocial y alcoholismo
mayores tasas de familiares con trastornos por uso de drogas entre adictos a
opiceos

Importante asociacin familiar compatible con un modelo

autosmico dominante con alta penetrancia, y mayor
componente hereditario en mujeres (Faraone et al, 1992)

Rounsaville et al, 1991; Merikangas et al, 1998

Estudios de gemelos
Mayor concordancia entre gemelos monocigticos
Grove et al, 1990

Mayor concordancia para varones

Mayor frecuencia de TDAH en padres biolgicos que en padres

adoptivos de nios con TDAH (Cantwell 1972, Morrison y
Stewart, 1973)

Pickens et al, 1991

Mayor heredabilidad para el caso de los opiceos, y menor para el cannabis

Golberg et al, 1993; Tsuang et al, 1998; Kendler et al, 1999

Estudios de adopcin
correlacin significativa con alcoholismo en el padre biolgico
no correlacin con alcoholismo en el padre adoptivo.

Mayor concordancia en gemelos monozigticos (51%) que en

dizigticos (33%)(Goodman y Stevenson, 1989)

Cadoret et al, 1986 y 1995

Factores hereditarios en psicopata

Asociacin en familias y estudios de adopcin (Cadoret et al,
1980, 1991)
Mayor concordancia en gemelos monocigticos (51%) que en
dicigticos (22%) (McGuffin y Gottesman, 1985)
Mayor heredabilidad para el trastorno antisocial del adulto
(Raine et al, 1995)

Factores hereditarios en esquizofrenia

Los familiares de primer grado tienen un riesgo entre 5 y 15 veces mayor

Concordancia en gemelos monocigticos triple que en dicigticos

Concordancia en estudios de adopcin: Heredabilidad global del 89%

Los factores genticos constituyen el riesgo mas importante para la esquizofrenia

Kendler y Gruenberg, 1984

Ingram y Ketty, 2000
Cardno y Gottesman, 2000

Teora de los dos umbrales: mayor heredabilidad en mujeres,

mayor sensibilidad al ambiente (interno o externo) en hombres.

Valores de concordancia entre gemelos monocigticos

No afectado

El riesgo de esquizofrenia a lo largo de la vida se correlaciona con

la proximidad gentica a una paciente con esquizofrenia

Afectado

Genes compartidos
Poblacin general
12,5% Familiares de
tercer grado

1
2
2
4

25% familiares de
segundo grado

5
6
6

46% de los gemelos MZ presentan concordancia para esquizofrenia

50% familiares de
primer grado

9
13
17
48

100%

0
Riesgo para la descendencia
~ 15%

20

40

60

Riesgo de padecer la enfermedad

Kringlen and Cramer, 1989; Gottesman and Bertelsen, 1989

Hiptesis actual:
En la etiologa de la esquizofrenia intervienen mltiples genes con
diferente contribucin, que interaccionan entre ellos y con el medio
ambiente

Vulnerabilidad a la enfermedad
La esquizofrenia es un trastorno del neurodesarrollo

Gentica Molecular Humana

a. Trastorno de Herencia Mendeliana: su presencia depende de un
nico gen (rasgo mendeliano)
b. Trastorno de Herencia compleja: expresin depende de la contribucin de muchos genes y su interaccin con el ambiente
c. Trastornos mitocondriales

Anormalidades en las conexiones sinpticas

Herencia Mendeliana o Monognica

Gentica Molecular de trastornos psiquitricos
Autosmica dominante

*Caracteres cualitativos
* Un solo gen con dos alelos

Excepcin: Mutaciones en un nico gen causan la

enfermedad (esquizofrenia)

Autosmica recesiva

* Dominancia-recesividad

Ligada al cromosoma X dominante

Mltiples genes, sus interrelaciones y el ambiente

R

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/omim/

Reto actual: Identificar las variantes allicas de

susceptibilidad

Ligada al cromosoma X recesiva

Ligada al cromosoma Y

Gentica Molecular Humana de enfermedades monognicas

Complicaciones de la herencia mendeliana:

En las enfermedades mendelianas el anlisis gentico comienza con el rbol genealgico

*Heterogeneidad gentica: un mismo fenotipo producido por cambios

en diferentes genes
*Penetrancia: frecuencia de expresin de un alelo
*Expresividad variable: una mutacin esta asociada a diferentes
fenotipos
*Genes modificadores: interacciones entre diferentes pares gnicos
*Influencia del medio ambiente
Bsqueda de mutaciones

Mutaciones
Las mutaciones consisten en cambios en la secuencia del ADN

WKL1
Gen: 12 exones (280 Kb)
Cromosoma:22q13.33
Protena nueva: canal inico que se expresa en cerebro
Clnica: esquizofrenia catatnica

Tipos:
*Inserciones
*Deleciones
*Puntuales
*Reorganizaciones

Meyer y col, 2001

WKL1

Mutacin : 1121C/A
Leu309Met
Anlisis de expresin

SYNGR1
Gen: 6 exones
Cromosoma: 22q13
Protena: Sinaptogirina1
Funcin: plasticidad sinptica
Clnica: Esquizofrenia paranoide

Mecanismo patolgico: cambios conformacionales en la protena mutante

Verma y col, 2004

Meyer y col, 2001

Mutacin Puntual:
Trp27Stop

SYNGR1

Anormalidades cromosmicas en esquizofrenia:

Traslocacin balanceada y recproca (1:11) (q42;q14.3)
Gen: DISC1 y DISC2
DISC1 regulacin del citoesqueleto
(migracin neuronal y trasporte intracelular)
DISC1 interacciona con WKL1

Microdelecin del cromosoma 22q11 (2% de pacientes)

Sndrome 22qDS asocia a esquizofrenia (25-30%)
Gen: COMT codifica catecol-o metil-transferasa
Ratones knock-out para COMT: aumento de dopamina solo en la corteza
prefontal

Mecanismo patognico: haploinsuficiencia

Esquizofrenia de herencia compleja

Mltiples genes con diferente contribucin que determinan
diferentes subtipos clnicos
La esquizofrenia podra ser un sndrome donde se solapan
un conjunto de sntomas o sndromes
Los sntomas se relacionan con variaciones de alelos de
susceptibilidad, que se combinan produciendo la varianza en
el cuadro clnico

Herencia compleja: Genes y Ambiente

Alelos de vulnerabilidad o
proteccin
Gen A
Gen B
Gen C

Rasgo 1

Gen A
Gen D
Gen E

Rasgo 2

Gen E
Gen F
Gen G

Rasgo 3

Gen F
Gen D
Gen H

Sndromes
Ambiente
Desarrollo
Farmacolgicos

B
A

Rasgo 4

El RETO: identificar los alelos implicados

Estudio de ligamiento en familias :

Estudios genticos en familias con esquizofrenia

1.

Ligamiento gentico: determina regiones en el genoma que se trasmiten

con la enfermedad en familias afectadas. 1200 familias
Resultados: evidencias de ligamiento con varios loci

El anlisis de ligamiento permite identificar las regiones en el

genoma que se trasmiten con la enfermedad en familias con
varios individuos afectados

2004: 6p24-22, 1q21-22 y 13q32-34

2.

Asociacin gentica: determinar los alelos (variantes de un mismo gen) que

son ms o menos frecuentes en las poblaciones de pacientes cuando se
comparan con poblacin control sana.
Requerimiento: Escoger regiones candidatas en el genoma

Loci de los genes implicados en la enfermedad

Familias

Intervalo
de ligamiento

Clones

Mapa Gentico
Anlisis de ligamiento
Anlisis intensivo

Genes
Secuencia
Candidatos
Met A
T
G
Val G
T
C
Ser T
C
A
Leu C
T
G
Gln C
A
A
Pro C
C
G

A
T
G
G
T
C
T
C
A
C
T
G
T
A
A
C
C
G

Met
Val
Ser
Leu
Stop

Resultados actuales de ligamiento gentico:

1q21-22
6p24-22
13q32-34
8p21-22
6q21-25
22q11-12
5q21-q23
10p15-p11
1q42

Identificacin de la
mutacin

Meta-anlisis de 20 bsquedas genmicas:

El anlisis de ligamiento de familias no ha permitido identificar
los genes implicados en la esquizofrenia

a. Herencia polignica
b. Baja contribucin de cada gen

1q21-22, 6p24-22, 13q32-34

Lewis y col, 2003

Como identificar los genes implicados en los loci de la

esquizofrenia?
Estudio de genes candidatos en familias

Estudios de Asociacin

Seleccin de genes candidatos

a. Localizacin en las regiones de inters
b. Conocimiento de los mecanismos fisiolgicos
y patolgicos implicados

Los polimorfismos son variaciones en el DNA

Las variaciones en el DNA se asocian a las
variaciones biolgicas

Anlisis de polimorfismos
Los polimorfismos son variantes de un gen o alelos
con frecuencia mayor del 1% en la poblacin

Algunos tipos de polimorfismos del genoma:

1.VNTRs o minisatlites: poliallicos
2.STRS o microsatlites: poliallicos, muy informativos,inestables
3.SNPs: biallicos, muy frecuentes, estables

1. Cada persona tiene un genoma ligeramente diferente

2. Algunas diferencias alteran la funcin biolgica

DRD4
Cromosoma 11p15.5
D4 en reas lmbicas implicadas en cognicin y emocin
Polimorfismos:
VNTR(48pb2-11) 32 a 176 aa
capacidad de unin ligandos
SNP
microsatlites
deleciones

Como podemos saber el genotipo

1. Reaccin en cadena de la ADN polimerasa (PCR) de la regin
genmica que contiene polimorfismo
2. Anlisis del producto amplificado
3. Anlisis estadstico

DRD4

Receptor de Serotonina 5HTT

Secuencia de la regin que contiene el microsatlite AATn

tggtggcacg
cagtgagcca
aaaaacaaca
ctgtgtccat
aacatggcac
ttaaagtata
acctctttcc
gggagaaggg

tgcctgtagt
agatcatgcc
aacaaacaaa
gtgttctcat
atgtatacat
ataataataa
cttaatggca
tgaaagaaaa

cccagctact
attgcactcc
cataaaaaag
tgttcaattc
atgtaactaa
taataataat
gggttaacag
aggaagatgg

cgggaggctg
agcctgggtg
aatacatctc
ccacctatga
cctgcatgtt
aataataata
aagcagcatt
attcctttaa

aacccaggaa
ttgcagggag
ggtgtgtgat
gtgagaacat
gtgcacatgt
ataataataa
ttgtgacaca
taagggtgta

gtggaggttg
actccgtctc
gttccccttc
gcagcacacc
accctaaaac
taaagattac
tgattgtgct
gtgctctttt

AGGAGCGTGTACTACCCCAGGACGCATGCAGGGCCCCCAC

Tamao del fragmento amplificado: ~270 pb

Presencia o ausencia de 44 pb

Los pacientes alcohlicos con probable ADHD infantil presentan mayor proporcin de
alelos 5 para AATn

Anlisis del microsatlite (AAT)n de CNR1 en pacientes

Genotipo

(AAT)16

Allelo 10

<5

Muestra
5 5

5<5

<5<5

ADHD (-)
n:60(56)

23(38,3)

27(45)

10(16,7)

ADHD (+)
n:47(44)

30(63,8)

16(34,1)

1(2,1)

n:92

36(39,1)

47(51,1)

9(9,8)

Pacientes

(AAT)7
Alelo 1

Controles

ADHD () indica ausencia de ADHD infantil y ADHD (+) presencia de este trastorno.
Todos los datos se presentan como nmero (%) de individuos. Las diferencias fueron consideradas significativas cuando p < 0.05.
ADHD (+) vs. ADHD (-):X2 = 9.665 DF=2 p=0.008
ADHD (+) vs. controles: X2 = 8.525, DF=2, p=0.014
ADHD (-) vs. controles: X2: 1.659; DF: 2; p: 0.436
alcoholics vs. controls: X2: 2.509; DF: 2; p=0.285

Grupos definidos para el anlisis estadstico:

1)alelos iguales o mayores que 5
2)alelos menores 5

Ponce y col, 2003

SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms)

La asociacin entre CNR1 y el subgrupo de pacientes
con antecedentes de ADHD en la infancia es cuantitativa.

Wurs n:107
Alelo de mayor
tamao en el
genotipo

Correlacin de
Pearson

TCI n:99
Alelo de mayor
tamao en el
genotipo

Correlacin de
Pearson

Factor 1

Factor 2 (trastorno

Factor 3

Factor 4 (dficit

(dificultades emocionales)

del comportamiento)

(hiperactividad)

de atencin)

0.246

0.179

0.217

0.157

0.277

0.011

0.065

0.025

0.105

0.004

Bsqueda de
novedades

Evitacin del
dao

Depencia de
recompensas

Cooperacin

Autodireccin

0.308

0.072

-0.132

-0.133

-0.188

0.002

0.480

0.194

0.189

0.062

Alelo 1

.... G A T C A C G A .....

Alelo 2

.... G A T A A C G A .....

Definicin:
Polimorfismo de un nucletido en una posicin gentica especfica en la cual dos
o mas alelos alternativos estn presentes en la poblacin con una frecuencia
mayor del 1%
1.

Marcador ms abundante en el genoma: 1/1000 pb Mapa genmico: 1,42 millones

de SNPs

2.

Muy estable: adecuado para estudios de asociacin allica

3.

Su anlisis se puede automatizar

Seleccin de los SNPs apropiados para estudiar una poblacin

Genotipado del polimorfismo TaqI A del gen del receptor 2

de la dopamina (DRD2)

Clasificacin de los SNPs

1.

Si cambia el aminocido
Funcin de la protena
Estabilidad de la protena

2.

Si no cambia el aminocido:
Alterando la expresin
Elemento del promotor
Estructura del mRNA

Genotipado del polimorfismo TaqI A del gen del receptor D2

de la dopamina (DRD2)

Secuencia del fragmento amplificado

agccaccacggctggccaagttgtctaaatttccatctcggctcctggcttagaaccaccc
agagtggccactgacggctccttgccctctaggaaggacatgatgccctgctttcggctgc
ggagggccagttgcaggggtgtgcagctcactccatcctggacgtccagctgggcgcctg
cctcgaccagcactttgaggatggctgtgttgcccttgagggcggccaggtgggcgggtgt
ccagcccaccttgttgcgggcgtggacatttgcgtgatgttctakgaggttgatgacactcag

SNP: C/T

Diana del enzima: tcga

Alelo 1 : tcga
Alelo 2: ttga

El polimorfismo TaqI A del gen del receptor D2

de la dopamina (DRD2) se asocia a rasgos antisociales y al
endofenotipo niveles de HVA en alcohlicos
Los alcohlicos portadores del alelo TaqI-A1 tienen niveles de HVA situados
en rango alto de la normalidad (OR 2,22)
Ponce y col 2004
El alelo TaqI-A1 aparece con mayor frecuencia en los alcohlicos Tipo 2
que en los controles (48,31% vs 28,17; p = 0,015) y que en alcohlicos tipo 1
(28,31%)
Ponce y col 2003

5 = HZ [TT] (alelo A1)

1,2,4,6,7,8,9 = HZ [CC] (alelo A2)
3,10 = DZ [TC] (alelo A1 y A2)

10
310 pb (A1)
185 pb (A2)
125 pb (A2)

No es suficiente el genotipado de un polimorfismo

Estudio de haplotipos:
grupo de alelos que se transmiten juntos
Los alelos de polimorfismos de un nucletido (SNPs)
que estn cercanos:
-Estn en desequilibrio de ligamiento
Estn fuertemente asociados (40 a 1000 Kb)
-Forman parte de un haplotipo:

Electroforesis en gel de agarosa

Estudios genticos de asociacin aplicados a enfermedades

complejas
Las variantes genticas comunes tienen mayor impacto clnico
y sobre las enfermedades complejas que los alelos raros
y de baja penetrancia dominantes

Estrategias:
Directa: Catlogo de todas las variantes comunes en regiones reguladoras
y codificantes de los genes
Aplicacin: a medio plazo (necesaria la identificacin de
todos los genes y sus variantes)
Indirecta: Estudio de ligamiento y/o asociacin entre la enfermedad y
polimorfismos repartidos por el genoma

Estudios genticos aplicados a enfermedades complejas

Estrategia directa:
1. Comparticin de alelos (IBD)
- No se asume modelo de herencia
- Sib-pair analysis

Seleccin de genes candidatos

2. Estudios de asociacin
- No implican estudios familiares

*Localizacin en las regiones de inters

3. TDT (trasmition disequilibrium test):

test que mide en familias la transmisin
de la asociacin allica

Genes candidatos en la esquizofrenia

*Conocimiento de los mecanismos fisiolgicos y patolgicos implicados

Bases de datos de polimorfismos

genticos

Gen ,locus
Straub y col, 2002

DTNBP1
6p24-22

1.

Genes implicados en la transmisin dopaminrgica (DRD1,DRD2,DRD3,DRD4,

DRD5, COMT,CCK) y serotoninrgica

Stefasson y col, 2002

2.

Sistemas glutamatrgico y GABAergico

Chumakov y col,2002

3.

Neurodesarrollo y neuromodulacin

Chumakov y col,2002

NRG1
8p22-p21

G72
13q32-34

DAAO
12q

4.

Protenas de la sinapsis
Mirnicks y col, 2001

RGS4
1q21-q22

Bray y col, 2003

COMT
22q-11-12

Protena, funcin
Disbindina
Regulador de receptores nicotnicos, NMDA
(estructura de la sinapsis?)
Neuroregulina 1 protena sinptica que regula expresin y
regulacin de receptores NMDA, de clulas gliales y
mielinizacin
PLG72
Activador del enzima D-amino cido oxidasa (DAO)
DAO
Modular a receptores glutamatrgicos a travs de la
oxidacin de Serina
Detoxificacin
RGS4
acoplados a receptores a protenas G aumentando
respuesta a agonistas
COMT
Catabolismo de la dopamina

Defectos en la trasmisin glutamatrgica:

PLG72 (G72) activador de DAAO (DAO)

Defectos en la transmisin dopaminrgica :

Combinaciones allicas especficas

incrementan el riesgo

RGS4. disminudo en cerebro de pacientes

Disminuyen actvidad

COMT: haplotipo con una expresin menor

Regulacin de sealizacin glutamatrgica en receptores neuronales NMDA

Calcyon: aumento de esta protena que estimula y regula la

afinidad dopaminrgica del receptor D1 en la corteza
prefrontal

Disminuyen actvidad

Neuroregulina 1 (NRG1) Disbindina (DTNBP1 )

Datos farmacolgicos:

Datos farmacolgicos:

Antagonistas del receptor dopaminrgico D2 alivian los sntomas

Antagonistas glutamatrgicos pueden inducir sntomas
indistinguibles de la esquizofrenia (Fenil-ciclidina)

Agonistas dopaminrgicos pueden provocarlos

Distribucin de genotipos para el SNP de DRD2 C957T en pacientes psiquitricos

60

60
40

50
40
30

30

60

20

20

40

SCHIZOPHRENICS

CONTROLS

ALCOHOLICS

SCHIZOPHRENICS

(X2: 4,813; df:4; p:0,307)

CC
CT
TT

10

10

(X2: 3,022; df:4; p:0,554)

CONTROLS

50

80

ALCOHOLICS

100

Mujeres

C
70

SCHIZOPHRENICS

120

20

Sntomas

Varones

80
70

CONTROLS

Desinhibicin en regiones cerebrales del sistema lmbico y neocortex

A
140

ALCOHOLICS

(exitatorio/regulador del tono inhibitorio-NMDA)

Nmero de individuos (N)

Reduccin de la actividad glutamatrgica

D2 regula
Actividad de receptor NMDA

(X2: 9,537; df:4; p:0,049)

Hoenicka y col, 2004

Identificacin de nuevos genes

1. Estudios de expresin
cuantitativa:
Microarrays

Genes implicados
en la secrecin
pre-sinptica

*
*

2. Estudios de protenas
Geles bidimensionales

10

Expresin de enfermedades complejas

Factores de riesgo genticos implicados

en las conductas adictivas:

Vulnerabilidad
Eficacia en el tratamiento

Farmacogentica y Farmacogenmica

Factores genticos:
Pronstico de respuesta
farmacolgica
Toxicidad

Cintica de un frmaco
Diseo de nuevos
frmacos
Administracin

Medicina Personalizada: alta eficacia, bajo riesgo

Accin Farmacolgica

Absorcin
Metabolismo
Distribucin

Estmulo
Efecto

Reto: anlisis molecular en la prctica mdica

Futuro: tratamiento farmacolgico segn genotipo

Excrecin

Complejo
Frmaco-Receptor

Transferencia del
estmulo

Mecanismos reguladores

Ensayos farmacogenticos con Clozapina

Farmacogentica en la esquizofrenia:
Antipsicticos tpicos: haloperidol
Respuesta: variable
Reaccin adversa: diskinesia tarda

Antipsicticos atpicos: clozapina

Respuesta: variable
Reaccin adversa: induce ganancia de peso

11

PET tras tratamiento con Haloperidol: fluoro-2-deoxi-glucosa

Estudio farmacogentico con haloperidol

DRD3
Cromosoma 3q13.3
Esquizofrenia:
Estudios de asociacin Ser 9Gly

Ser9Gly

Homozigotos Gly: muestran un incremento del metabolismo , discinesia tarda

Efecto aditivo de las variaciones de riesgo para los dos genes

Implicaciones actuales sobre la prctica clnica

1.

2.
3.

Colectar y clasificar de forma apropiada los pacientes

1. Grupos de pacientes y controles no relacionados, tnicamente homogneos
2. Pares de familiares afectados
3. Tros compuestos por paciente/padres
Definir endofenotipos informativos
Replicar los hallazgos genticos e identificacin de las variantes

Carcter polignico

Gentica Molecular Humana

Secuencia del Genoma Humano

Psiquiatra

Fenotipo patolgico/genes implicados

Diagnstico Molecular

Consejo Gentico

Mejor conocimiento del origen de la enfermedad

Diseo de nuevos Frmacos
Farmacogentica

12