Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Manual de Protocolos
Manual de Protocolos
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA INGENIERA CIVIL
UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA
BOGOT 2012
CONTENIDO
Pg.
PRESENTACIN....................................................................................................................... 8
PREPARACIN DE SOLUCIONES ............................................................................................. 9
A. SOLUCIN H2SO4 1.0N ................................................................................................... 9
B. SOLUCIN H2SO4 0.5N 0.05N ...................................................................................... 9
C. FACTOR DE DILUCIN .................................................................................................. 10
ANLISIS FSICOS .................................................................................................................. 11
1. COLOR MTODO N 2120 ...................................................................................... 11
A. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO ......................................................................... 11
B. PRINCIPIO DEL MTODO ............................................................................................. 11
C. EQUIPOS Y MATERIALES .............................................................................................. 11
D. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 12
E. CLCULOS ...................................................................................................................... 12
10.
11.
12.
14.
15.
ANLISIS MICROBIOLGICOS............................................................................................... 61
16.
TCNICA DEL FILTRO MEMBRANA PARA MIEMBROS DEL GRUPO COLIFORME ... 61
BIBLIOGRAFA ....................................................................................................................... 68
PRESENTACIN
El Laboratorio de Saneamiento de la Universidad Militar Nueva Granada presenta en este
documento las tcnicas de laboratorio para el anlisis de la calidad del agua residual y
suelos con el objetivo de unificar los procesos seguidos por los usuarios del laboratorio en
el desarrollo de las diferentes prcticas.
Para la elaboracin de este manual se consultaron las normas del Standard Methods for
the Examination of Water and Wastewater de AWWA, APHA y WEF ao 2005, as como el
Manual Prctico de Anlise de gua de Funasa Brasil ao 2006 y el manual de Mtodos
Analticos del Laboratorio de Suelos del IGAC 2006.
En la primera parte del manual se abordan los anlisis fsicos que permiten establecer
caractersticas organolpticas en aguas residuales. En la segunda parte se tratan
parmetros de anlisis qumicos de compuesto inorgnicos y orgnicos presentes en las
aguas residuales. En la tercera parte se presentan anlisis para suelos y extractos de suelo.
En la cuarta parte se muestra una metodologa para la determinacin de microorganismos
del grupo Coliforme tanto en aguas como en suelos. En la ltima parte se presenta un
ensayo biolgico para la determinacin de toxicidad en aguas.
De acuerdo con lo anterior deseamos que este documento se utilidad para aquellas
personas que deseen realizar ensayos de calidad del agua residual y suelos.
PREPARACIN DE SOLUCIONES
A. SOLUCIN H2SO4 1.0N
Para preparar una solucin de H2SO4 1N diluir cuidadosamente 30mL de H2SO4
concentrado en un baln de 1000mL con agua destilada.
B. SOLUCIN H2SO4 0.5N 0.05N
A partir de la solucin de H2SO4 normalizada se obtienen las respectivas soluciones
empleado la siguiente ecuacin:
Donde:
V1 = Volumen a tomar
C1 = Concentracin conocida
V2 = Volumen a preparar
C2 = Concentracin esperada
Como ejemplo para concentraciones de 0.5N se requiere diluir 500mL de solucin 1N en
un baln de 1.0L con agua destilada de acuerdo con lo siguiente:
C. FACTOR DE DILUCIN
Para obtener diferentes concentraciones de muestras se requiere realizar diluciones de la
misma para esto se emplea el Factor de Dilucin, el cual se presenta en la siguiente
ecuacin:
Donde:
F.D = Factor de Dilucin
VF =
VT =
C=
Concentracin
10
ANLISIS FSICOS
1.
A. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO
Usualmente cuando se examina el agua, las primeras propiedades que se suelen
considerar son las siguientes: color, sabor y olor, caractersticas inherentes a ella. El agua
de uso domstico e industrial tiene como parmetro de aceptacin la de ser incolora,
pero en la actualidad, gran cantidad del agua disponible se encuentra coloreada y se tiene
el problema de que no puede ser utilizada hasta que no se le trata removiendo dicha
coloracin.
Las aguas superficiales pueden estar coloreadas debido a la presencia de iones metlicos
naturales (hierro y manganeso), humus, materia orgnica y contaminantes domsticos e
industriales como en el caso de las industrias de papel, curtido y textil; esta ultima causa
coloracin por medio de los desechos de teido los cuales imparten colores en una amplia
variedad y son fcilmente reconocidos y rastreados
B. PRINCIPIO DEL MTODO
Se pueden efectuar dos medidas de color en el agua: real y aparente. El color real del agua
natural es el que presenta cuando se ha eliminado la turbidez (filtrando o centrifugando),
siendo principalmente causado por materiales hmicos coloidales. Por el contrario, el
color aparente es determinado directamente de la muestra original (sin filtracin ni
centrifugacin), es debido a la existencia de slidos en suspensin.
Para la determinacin de color en el agua existe el mtodo espectrofotomtrico, el cual se
usa principalmente en aguas industriales contaminadas que tienen colores poco usuales,
y que no pueden ser igualados por el mtodo colorimtrico. El color se determina
mediante un espectrofotmetro, cuyo esquema de funcionamiento se recoge en la figura,
a tres longitudes de onda distribuidas por el conjunto del espectro visible: 1 = 436nm;
2= 525nm y 3 = 620 nm, de acuerdo con lo sugerido por ee (1999).
C. EQUIPOS Y MATERIALES
Fotmetro: Espectrofotmetro.
Bomba de vaco.
Membrana de filtracin.
Probeta 50mL.
11
D. PROCEDIMIENTO
Para determinar el color real se debe filtrar la muestra en filtro de fibra de vidrio de 1,2
m o en filtro de acetato de celulosa de 0,45 m y para color aparente tomar la muestra
de agua directamente de la original.
1. Encender el espectrofotmetro y seleccionar la longitud de onda en 436nm.
2. Calibrar el equipo con la lectura inicial del blanco.
3. Realizar la lectura de la absorbancia de la muestras de agua.
a) Paso 1
b) Paso 2 a 3
c) Paso 4
12
2.
A. MTODO GRAVIMTRICO
Los slidos se refiere a la materia en suspensin o disuelta en agua o agua residuales. Los
slidos pueden afectar el agua o adversamente la calidad del efluente. Aguas con alto
contenido de slidos disueltos en general son de menor potabilidad y pueden inducir a
reacciones fisiolgicas en el consumidor. Por estas razones, un lmite de 500mg de slidos
disueltos/l es el deseado para el consumo en aguas.
B. PRINCIPIO DEL METODO
Son los materiales suspendidos y disueltos en un agua. Se obtienen despus de someter al
agua a un proceso de evaporacin a temperaturas comprendidas entre 103 y 105C. La
porcin filtrable representa a los Slidos Coloidales Totales Disueltos y la no-filtrable son
los Slidos Totales en Suspensin.
El contenido de slidos voltiles se interpreta en trminos de materia orgnica, teniendo
en cuenta que a 55050C la materia orgnica se oxida formando el gas carbnico y agua
que se volatilizan. Sin embargo, la interpretacin no es exacta puesto que la prdida de
peso incluye tambin prdidas debido a descomposicin o volatilizacin de ciertas sales
minerales como por ejemplo las sales de amonio o carbonato de magnesio.
C. EQUIPOS Y MATERIALES
Desecador
Bomba de vaco.
Balanza analtica.
Horno tipo mufla 550C.
Estufa (103C y 105C).
Embudo tipo Buchner para membrana con dimetro de 47mm.
Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio, con tamao nominal de abertura de
0,45m-1,2m.
Capsulas de porcelana.
Pinza metlica.
Probeta de 50mL.
Guantes para mufla.
D. PROCEDIMIENTO
PREPARACIN DE CPSULA Y MEMBRANA PARA ST - SST
13
a. Calcinar la capsula de porcelana en mufla a 550C hasta que la masa sea constante
(aproximadamente 15 minutos) y dejar enfriar en el desecador.
b. Colocar una membrana filtrante en el sistema de filtracin.
c. Hacer 3 lavados a la membrana con el sistema de filtracin utilizando 20mL de
agua destilada para cada lavado (total de 60mL) que deben ser despreciados.
d. Colocar la membrana en la capsula de porcelana y calcinar en la mufla por 15
minutos y dejar enfriar.
1. DETERMINACIN DE SLIDOS TOTALES (ST)
Este procedimiento es limitado a una cantidad de slidos secos de 200mg, debido a la
posibilidad de la formacin de una capa que impide el secado de los residuos.
a.
b.
c.
d.
)(
)
(
Ecuacin 1
)(
(
)(
)
(
(
Ecuacin 2
)
)
(
Ecuacin 3
)
(
Ecuacin 4
Figura 2. Paso d a f
4. DETERMINACIN DE SLIDOS SUSPENDIDOS FIJOS Y VOLTILES (SSF SSV)
a. Despus de la determinacin de la concentracin de slidos suspendidos totales,
colocar el conjunto en la mufla, a 550C por un tiempo suficiente hasta conseguir
una masa constante (aproximadamente 15 minutos) y despus de enfriar en
desecador determinar la masa M6 en (mg).
b. Calcular SSF con la Ecuacin 5 y SSV con la Ecuacin 6.
(
)
(
)
(
Ecuacin 5
Ecuacin 6
15
Slidos
Suspendidos
Voltiles (SSV)
Slidos
Suspendidos
Fijos (SSF)
Slidos
Disueltos
Voltiles (SDV)
Slidos
Disueltos
Fijos (SDF)
16
ANLISIS QUMICOS
3.
E. PREPARACIN DE REACTIVOS
Solucin normalizada de Acido sulfrico (H2SO4) 1N
Pipetear 27.5mL de (H2SO4) concentrado y transferir lentamente a un baln volumtrico
de 1L con aproximadamente 500mL de agua y completar el volumen del baln.
17
M H 2 SO4
masa ( g )boraxx1000
volumenH 2 SO4 (mL ) x381,42
Para preparar una solucin de H2SO4 0,05N tomar de la solucin patrn 1,0N.
Solucin normalizada de Hidrxido de sodio (NaOH) 1N
En un beaker limpio disolver 40 g de NaOH con agua destilada. Dejar enfriar y transferir la
solucin cuantitativamente para el baln volumtrico de 1000 ml. Completar el volumen
del baln hasta la marca con agua destilada, agitar para homogenizar y transferir para la
bureta.
La solucin de NaOH es inestable: la reaccin con CO2 atmosfrico exige normalizacin
semanal.
La normalizacin de NaOH debe ser hecha utilizando como patrn primario Biftalato cido
de Potasio (KPH).
El KPH se debe secar previamente en el horno a 120 C, por 24 horas y enfriar en
desecador. La normalizacin deber ser realizada por triplicado. Se deben determinar
masas de KPH prximas de 0,1022 g para normalidades menores o iguales de 0.05N pesar
0,01022g, y debe anotarse el valor exacto de cada una. Posteriormente, se disuelven en
cerca de 25 ml de agua destilada, en frascos erlenmeyer.
En los frascos erlenmeyer que contienen la solucin de KPH, adicionar 2 gotas de solucin
de fenolftalena, trabajar en fondo blanco, luego entonces, adicionar la solucin de NaOH
hasta alcanzar una leve coloracin rosada que persista, anotar cada volumen.
La molaridad o normalidad de la solucin normalizada se calcula con la siguiente ecuacin:
M NaOH
massaKPH ( g ) x1000
volumeNaOH x 204 ,22
18
19
2. ALCALINIDAD INTERMEDIA
a.
b.
c.
d.
Donde:
N = Normalidad de H2SO4.
= Volumen gastado en la titulacin de H2SO4 (ml)
= Volumen de muestra, (ml)
2. ALCALINIDAD INTERMEDIA
20
Donde:
N = Normalidad de H2SO4.
= Volumen gastado en la titulacin de H2SO4, (ml)
= Volumen de muestra, (ml)
3. ALCALINIDAD TOTAL
Donde:
V3 = V1+V2
N = Normalidad de H2SO4
= Volumen gastado en la titulacin de H2SO4, (ml)
=Volumen de muestra, (ml)
Donde:
Vtitulado = Volumen de la muestra titulada, (ml)
NNaOH = Normalidad del Hidrxido de Sodio
Vmuestra = Volumen de la muestra, (ml)
21
4.
Mortero.
D. REACTIVOS
23
Donde:
V =Volumen gastado en la titulacin de sodio (ml).
N= normalidad del Na2S2O3. =0.1N
eq = Numero del equivalente en gramos del Ozono = 24mg/m eq
t = Tiempo de ozonizacin (min)
24
( )
( )
= Volumen de tiosulfato gastado en la titulacin de la muestra menos volumen
gastado en la titulacin del blanco (ml).
= Volumen de yoduro de potasio ozonizado (ml).
= Volumen de la muestra de yoduro de potasio titulado (ml).
t = Tiempo de contacto (min)
N = Normalidad del tiosulfato de sodio, preferible 0.025N normalizada.
DOSIS APLICADA (
( )
DOSIS EFECTIVA
(
( )
25
( )
5.
A. MTODO ARGENTOMTRICO
Los cloruros, en forma del in cloruro (Cl-), son unos de los mayores aniones inorgnicos
presentes en las aguas. En el agua potable, el sabor salado producido por la concentracin
de cloruros es variable e independiente de la composicin qumica del agua. En algunas
aguas que contienen 250 mg Cl-/l se puede detectar sabor salado si el catin es sodio. Por
otro lado, el sabor salado tpico puede estar ausente en aguas que contienen hasta 1000
mg/l cuando los cationes predominantes son calcio y magnesio.
La concentracin de cloruros es mayor en aguas residuales que en agua cruda por causa
del cloruro de sodio (NaCl) el cual es un elemento comn de la dieta alimenticia y pasa a
travs del sistema digestivo sin cambios. A lo largo de las costas, los cloruros pueden estar
en altas concentraciones por causa de la fuga del agua salada dentro de los sistemas de
alcantarillado. Este tambin puede aumentar por procesos industriales.
Un alto contenido de cloruros puede daar las tuberas metlicas y las estructuras, as
como afectar el crecimiento de las plantas.
B. PRINCIPIO DEL MTODO
En una solucin neutra o ligeramente alcalina, el cromato de potasio puede indicar el
punto final de titulacin del nitrato de plata de los cloruros. El cloruro de plata se precipita
cuantitativamente antes de que se vuelva rojo el cromato de plata.
C. EQUIPOS Y MATERIALES
D. REACTIVOS
26
E. PREPARACIN DE REACTIVOS
Solucin indicadora de cromato de potasio
Disolver 50g de K2CrO4 en un litro de agua destilada. Adicionar solucin de AgNO3 hasta
que se forme un precipitado rojo. Esperar por 12h, filtrar y diluir a 1.0l con agua destilada.
Solucin titulante estndar de nitrato de plata 0.0141N
Disolver 2395 g de AgNO3 en agua destilada y diluir hasta completar 1000 ml. Estandarizar
con NaCl 0.0141 N; 1.00 ml = 500 g Cl-. Almacenar en una botella caf.
Cloruro de sodio estndar 0.0141 N
Disolver 824mg de NaCl (secados a 140C) en agua destilada y diluir a 1000ml; 1.00ml =
500g Cl-.
F. PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.
Figura 4. Pasos 1 a 6
27
G. CLCULOS
Donde:
A = ml del titulante gastado para la muestra,
B = ml de titulante gastado para el blanco, y
N = Normalidad del AgNO3.
28
6.
Fotmetro: Espectrofotmetro.
Bomba de vaco.
Balanza Analtica.
Pipeta automtica de 10ml.
Balones volumtricos de 100ml.
Pipetas automticas de 200L y 1000l.
Campana de extraccin.
Agitador magntico.
Beaker.
Barras agitadoras.
Perlas de vidrio.
Erlenmeyers.
D. REACTIVOS
Fenolftalena.
Fosfato dihidrogeno de potasio (KH2PO4).
Acido sulfrico (H2SO4).
Persulfato de Potasio (K2S2O8).
Acido Ntrico (HNO3).
Molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24 4 H2O.
Cloruro estagnoso dihidratado (SnCl2.2H2O).
29
Glicerol (C3H8O3).
Hidrxido de sodio (NaOH).
E. PREPARACIN DE REACTIVOS
Solucin estndar de fosfato (KH2PO4):
Disolver 219.5mg de Fosfato dihidrogeno de potasio (KH2PO4) en 1L de agua destilada.
Solucin Acido Sulfrico (H2SO4) 1.59N:
Diluir 15mL de Acido Sulfrico (H2SO4) en 35mL de Agua destilada.
Acida Fuerte
En un baln volumtrico adicionar a 60mL de agua destilada 30ml de acido sulfrico
concentrado (H2SO4), 0.4mL de acido Ntrico (HNO3) y llenar hasta 100ml con agua
destilada.
Solucin de Molibdato de amonio
Disuelva 25g de molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24 4 H2O.en 175ml de agua destilada.
En 400mL de agua destilada agregar 280mL de Acido sulfrico (H2SO4) concentrado, dejar
enfriar y luego agregar la solucin del paso 1.
Cloruro estagnoso
Disuelva 2.5g de Cloruro estagnoso dihidratado (SnCl2.2H2O) en 100ml de glicerol
(C3H8O3). Calentar la solucin al bao mara y revolver con varilla de vidrio. Este reactivo
es estable y no requiere preservativos ni almacenamiento especial.
Hidrxido de sodio (NaOH) 1N.
Disuelva 40g de Hidrxido de sodio (NaOH) en 1l de agua destilada.
F. PROCEDIMIENTO
DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRACION
1. En un erlenmeyer adicionar el volumen de la solucin estndar de fosfato
determinada (Tabla 1) y llenar hasta 50mL con agua destilada.
1ml de solucin estndar P = 0.05mg P
30
0.0
0.20
4.0
0.01
0.2
0.25
5.0
0.05
1.0
0.30
6.0
0.08
1.6
0.40
8.0
0.10
2.0
0.50
10.0
0.15
3.0
Figura 5. Pasos 1 a 7
31
ml
Abs.cm-1 mg P
ml
Abs.cm-1
0.00
0.0
0.000
0.20
4.0
0.160
0.01
0.2
0.039
0.25
5.0
0.250
0.05
1.0
0.045
0.30
6.0
0.300
0.08
1.6
0.055
0.40
8.0
0.400
0.10
2.0
0.085
0.50
10.0
0.600
0.15
3.0
0.140
Para la curva de calibracin, dibujar la absorbancia medida en el eje de las abscisas, versus
la cantidad de mg P/l en el eje de las ordenadas y determinar la ecuacin de la recta
obtenida (Figura 7).
0.60
0.50
(mgP)
0.40
0.30
y = 0,8706x + 0,0213
R = 0,9713
0.20
0.10
0.00
0.000
0.200
0.400
0.600
ABSORBANCIA (cm-1)
32
0.800
33
7.
A. MTODO TURBIDIMTRICO
Los sulfatos (SO42-) estn altamente distribuidos en la naturaleza y pueden estar presentes
en el agua en concentraciones que varan de pocos a cientos de miles de miligramos por
litro. Los residuos del drenaje de la minera pueden contribuir con grandes cantidades de
SO42- a travs de la oxidacin de la pirita.
B. PRINCIPIO DEL MTODO
El Ion sulfato (SO42-) es precipitado en un medio de cido actico con cloruro de Bario
(BaCl2) para formar sulfato de de bario (BaSO4) en cristales de tamao uniforme. La luz de
absorbancia del (BaSO4) es medida por un fotmetro y la concentracin de sulfato (SO42-)
es determinada por la comparacin de la lectura en la curva de calibracin.
C. EQUIPOS Y MATERIALES
Fotmetro: Espectrofotmetro.
Bomba de vaco.
Balanza Analtica.
Pipeta automtica de 10ml.
Balones volumtricos de 100ml.
Pipetas automticas de 200l y 1000l.
Campana de extraccin.
Agitador magntico.
D. REACTIVOS
E. PREPARACION DE REACTIVOS
Solucin estndar de sulfato:
Disolver 147.9 mg de Sulfato de Sodio (Na2SO4) en 1l de agua destilada.
34
Solucin Buffer:
Disolver 30g de Cloruro de Magnesio (MgCl2), 5g Acetato de Sodio (CH3COONa), 1g de
Nitrato de potasio (KNO3) y 20ml de Acido actico (CH3-COOH (C2H4O2).en 500ml de agua
y completar a 1l en un baln volumtrico.
F. PROCEDIMIENTO
DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRACION
1. En un erlenmeyer adicionar el volumen de la solucin estndar determinada (Tabla
3) y completar a 100mL con agua destilada.
1ml de solucin estndar de sulfato = 0.1mg SO2
Tabla 3. Volmenes de la solucin estndar de sulfatos para la curva de calibracin
mg SO4
ml
mg SO4
(Sol. Estndar)
ml
(Sol. Estndar)
0.0
2.0
20
0.1
2.5
25
0.5
3.0
30
1.0
10
3.5
35
1.5
15
4.0
40
35
ml
Abs.cm-1
UNT
(Sol. Estd)
(420nm)
0.0
0.15
0.1
0.5
1.0
1.5
mg SO4
ml
Abs.cm-1 NUT
(Sol. Estd)
(420nm)
2.0
20
0.12
65
5.25
2.5
25
0.17
75
0.03
30.10
3.0
30
0.22
95
10
0.045
40.40
3.5
35
0.29
145
15
0.080
54.00
4.0
40
0.37
155
Para la curva de calibracin, dibujar la absorbancia media en el eje de las abscisas, versus
la cantidad de mgSO4 en el eje de las ordenadas y determinar la ecuacin de la recta
obtenida (Figura 8).
5.0
4.5
4.0
(mgSO4)
3.5
3.0
y = 10,936x + 0,3609
R = 0,9599
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
0.000
0.100
0.200
0.300
0.400
ABSORBANCIA (cm-1)
37
8.
A. MTODO MACRO-KJELDAHL
El Nitrgeno es uno de los nutrientes de mayor importancia en el vertido de las aguas
residuales tratadas. Un agua que contenga gran cantidad de nitrgeno acelerar la
eutrofizacin de embalses, ros y lagos, y puede provocar el estmulo del crecimiento de
algas y plantas en cursos de agua poco profundos. La reduccin de la concentracin de
oxgeno disuelto en las aguas receptoras y la toxicidad para la vida acutica son algunos de
los efectos negativos de la elevada concentracin de nitrgeno amoniacal en efluentes
tratados.
El anlisis de este ensayo suele determinar el NTK (Nitrgeno Total Kjendahl) que incluye
el nitrgeno orgnico y el amoniacal.
B. PRINCIPIO DEL MTODO
La suma de amonio libre y compuestos orgnicos nitrogenados que son convertidos a una
sal de amonio (NH4)2SO4 despus de la digestin de la muestra en medio cido y en
presencia de un catalizador. El amonio es destilado en medio alcalino y recuperado
nuevamente para su cuantificacin.
La presencia de acido sulfrico (H2SO4), sulfato de potasio (K2SO4), y sulfato de cobre
(CuSO4), como catalizador, convierten el nitrgeno amonio de cualquier material orgnico
a amonio. El amoniaco liberado tambin es convertido a amonio, despus se adiciona
base y el amoniaco es destilado del medio alcalino y absorbido en cido brico o sulfrico.
El amonio liberado es determinado titulando con una solucin estndar de cido sulfrico
(H2SO4). Los resultados se expresan en mgN /L.
C. EQUIPOS Y MATERIALES
D. PREPARACIN DE REACTIVOS
Hidrxido de Sodio 6N (NaOH):
38
50
8-80
25
20-200
10
2. Para muestras de lodos y sedimentos, pesar una porcin de muestra hmeda que
contenga entre 0.2mg y 2mg de nitrgeno orgnico. Transferir la muestra al tubo
de digestin limpiando el recipiente de pesaje varias veces con pequeas
39
Donde:
V(H2SO4).= Volumen gastado de H2SO4 en la muestra, (ml).
VBlanco= Volumen gastado de H2SO4 en el blanco, (ml).
Vm= Volumen inicial de la muestra, (ml).
40
9.
A. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO
La demanda qumica de oxigeno es la medida del oxigeno necesario para oxidar la
materia orgnica e inorgnica susceptible de oxidacin, contenida en una muestra bajo
condiciones de un agente especifico, temperatura y tiempo. Los valores de este
parmetro estn asociados al grado de avance de la oxidacin de los contaminantes.
B. PRINCIPIO DEL METODO
Las sustancias orgnicas e inorgnicas oxidables presentes en la muestra, se oxidan
mediante reflujo en solucin fuertemente cida (H2SO4) con un exceso conocido de
dicromato de potasio (K2Cr2O7) en presencia de sulfato de plata (AgSO4) que acta como
agente catalizador, y de sulfato mercrico (HgSO4) adicionado para remover la
interferencia de los cloruros. Despus de la digestin, el remanente de K2Cr2O7 sin reducir
se titula con sulfato ferroso de amonio; se usa como indicador de punto final el complejo
ferroso de ortofenantrolina (ferroina). La materia orgnica oxidable se calcula en trminos
de oxgeno equivalente.
C. EQUIPOS Y MATERIALES
Espectrofotmetro.
Bomba de vaco.
Balanza Analtica.
Pipeta automtica de 5.0ml.
Digestor de DQO.
Dispensadores de 5.0ml.
Estufa (103C y 120C).
Embudo tipo Buchner para membrana con dimetro de 47mm.
Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio.
Balones volumtricos de 10.0ml, 500ml, y 1000ml.
Beaker de 500ml y 1000ml.
Pipetas automticas de 200l y 1000l.
Tubos DQO.
Campana de extraccin.
D. REACTIVOS
E. PREPARACIN DE REACTIVOS
Solucin de sulfato de plata en acido sulfrico
Solucin de 5.5g/Kg de H2SO4 ,96-97% Pureza. ATENCION: Trabajar en la campana.
Triturar con bastn de vidrio 10.12g de sulfato de Plata (Ag 2SO4) y transferir para un
frasco con un contenido de 1l de cido sulfrico (H2SO4, 96-97% Pureza), adicionar ene le
mismo frasco de origen del acido). Cerrar el frasco hermticamente. La mezcla deber ser
mantenida en oscuro durante dos das antes de ser utilizada.
Solucin de Digestin (2l)
Solucin de K2Cr2O7 + HgSO4. ATENCIN: Trabajar en campana y con guantes. Secar cerca
de 25g de K2Cr2O7 a 103C en una estufa durante 24 horas. Enfriar en el desecador.
Transferir 1.5L de agua destilada para un beaker de 2.0l. Adicionar cuidadosamente
334mL de cido sulfrico (H2SO4) sobre un bao de hielo. Retirar del bao, adicionar 66.6g
de HgSO4 y agitar para disolver. Adicionar 20.432g de K2Cr2O7 previamente seco a 105C
por 2 horas y mantener en agitacin. Dejar Enfriar y transferir a un baln volumtrico de
2.0L y completar el volumen con agua destilada.
La utilizacin de una nueva solucin de digestin exige una nueva preparacin de una
recta de calibracin.
F. PROCEDIMIENTO
DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRACION
1000mg de Hidrogenoftalato de Potasio (KHP)= 1.176mg DQO
1. Secar aproximadamente 500mg de KHP en capsulas de porcelana a 120C en
estufa hasta que la masa sea constante (24h) y enfriar el KHP en desecador.
2. Disolver cerca de 0.425g aproximadamente de KHP en agua destilada, transferir
cuantitativamente al baln volumtrico de 500ml y completar el volumen con agua
destilada.
Entonces como caso de ejemplo:
42
1000mg KHP1176mgDQO
436.9mg KHP
X=513.79mgDQO
Lo llevamos a Litros:
513.79mgDQO500mL
X1000mL
X=1027.58mgDQO/L
X=1.02758mgDQO/ml
Luego aplicar C1V1=C2V2 para determinar DQOTeorica.
(1.02758mgDQO/ml)V1= DQOTeorica 2.5mL
DQOTeorica=
43
Sol.KHP
100
41.10
200
ABS
(Xmed)
0.006
0.003
82.21
0.016 0.016
0.016
400
164.41
0.04
0.040
0.040
600
246.62
0.063 0.080
0.072
1000
411.03
0.119 0.119
0.119
1600
657.65
0.177 0.172
0.175
1800
739.86
0.199 0.198
0.199
2000
822.06
0.228 0.216
0.222
2200
904.27
0.238 0.241
0.240
2400
986.48
0.268 0.283
0.276
2500
1027.58
0.273 0.276
0.275
44
1200.00
1000.00
y = 3489,1x + 53,611
R = 0,9792
800.00
600.00
400.00
200.00
0.00
0.000
0.100
0.200
0.300
ABSORBANCIA
45
10.
46
B. EQUIPOS Y MATERIALES
C. REACTIVOS
D. PREPARACIN DE REACTIVOS
Solucin Buffer de Fosfato
Disolver en aproximadamente 600mLde agua destilada, 8.5g de fosfato monobsico de
Potasio (KH2PO4), 21.75g de fosfato bibsico de Potasio (KHPO4), 33.4g de Fosfato bibsico
de sodio heptahidratado (Na2HPO4.7H2O) y 1.7g de Cloruro de Amonio (NH4Cl).
Transferir para un baln volumtrico de 1L y completar el volumen con agua destilada, tal
solucin debe ser guardada en baja temperatura y en ausencia de luz.
Solucin de Sulfato de Magnesio (MgSO4.7H2O)
Disolver 22.5g de sulfato de magnesio heptahidratado en aproximadamente 800ml de
agua, transferir para un baln volumtrico de 1l y completar el volumen; tal solucin debe
ser guardada en baja temperatura y en ausencia de luz.
47
49
Rango de DQO
(ml)
(ml)
0.001
128000-130000
300-1050
0.002
118000-125000
120-420
0.005
60000-115000
10
60-210
0.02
12000-42000
20
30-105
0.1
6000-21000
50
12-42
0.2
300-10000
100
6-21
600-2100
300
0-7
)(
50
)(
Donde
51
11.
Espectofotmetro
Filtro de fibra de vidrio
Bomba de vacio.
C. PROCEDIMENTO
1.
2.
3.
4.
52
[ ]
Donde:
UVpH =Valor medio de absorcin UV, cm-1 (el subndice denota la longitud de onda, nm, y
denota el pH empleado si es diferente de 7.0).
b=
D=
53
12.
C. REACTIVOS
D. PREPARACIN DE REACTIVOS
Solucin de Hidrxido de sodio (NaOH) 1N
En un beaker limpio disolver 40 g de NaOH con agua destilada. Dejar enfriar y transferir la
solucin cuantitativamente para el baln volumtrico de 1000 ml. Completar el volumen
del baln hasta la marca con agua destilada.
E. ESQUEMA DEL MONTAJE
F. PROCEDIMENTO
55
ANLISIS DE SUELOS
13.
C. REACTIVOS
56
57
Donde:
V = Volumen de EDTA gastados en la titulacin.
N = normalidad del EDTA
58
14.
A. EQUIPOS Y MATERIALES
Potencimetro.
B. REACTIVOS
D. PROCEDIMIENTO
1. Se coloca el suelo al aire para poder tamizarlo por un tamiz No. 10 (2mm).
2. Se pesan aproximadamente 10g de suelo seco al aire. Se coloca el suelo en un
recipiente de vidrio y se aaden aproximadamente 20ml de
0.01M. se
mezcla por 30 minutos y se deja reposar por 30 minutos.
3. Leer el pH del medidor.
59
15.
A. EQUIPOS Y MATERIALES
Horno.
Balanza (sensibilidad de 0.01g).
Mufla.
Crisoles o platos de evaporacin.
Desecadores.
B. PROCEDIMIENTO
PREPARACIN DE LA MUESTRA
1. Se deber tomar una muestra representativa, que pese al menos 100g, de una
porcin de material que pase el tamiz de 2mm.
2. Se coloca la muestra en un recipiente y se lleva al horno a una temperatura de
105C para secarla hasta peso contante. Posteriormente se remueve la muestra
del horno y se lleva a un desecador y se permite su enfriamiento.
MEDICIN MATRIA ORGNICA
1. Se coge una muestra que pese aproximadamente de 10 a 40g, se coloca en crisoles
tarados o en platos de evaporacin de porcelana y se pesa.
2. Se coloca el crisol o el plato que contiene la muestra dentro de la mufla durante 6
horas a 44510C. Se saca la muestra de la mufla, se coloca en un desecador y se
permite su enfriamiento.
3. Se remueve del desecador la muestra y se pesa.
C. CLCULOS
El contenido orgnico deber expresarse como un porcentaje del peso del suelo en el
horno de la siguiente forma
Dnde:
A = Peso del crisol ms el suelo antes de la ignicin.
B = Peso del crisol o plato de evaporacin despus de la ignicin.
C = Peso del crisol.
60
ANLISIS MICROBIOLGICOS
16.
Placas de cultivo.
Unidades de filtracin.
Filtro de membrana dimetro de poro de 45 micras.
Almohadillas absorbentes (Pads).
Pinzas sin dientes esterilizados.
Incubadora.
Lupa para aumento.
C. REACTIVOS
Medio M-FC
D. PREPARACIN DE REACTIVOS
Medio M-FC
La necesaria uniformidad obliga a emplear medios deshidratados. Nunca se preparan
medios a partir de sus ingredientes bsicos, si se dispone de medios deshidratados
adecuados.
61
Para la rehidratacin se siguen las instrucciones del fabricante. Para este caso y de
acuerdo al producto que se tiene, se disuelve el 3.7g del polvo en 100ml de agua
purificada o destilada, aadiendo 1ml de cido roslico al 1 por 100. Se debe calentar
hasta casi ebullicin y dejar enfriar. Luego ajustar si es necesario el pH a 7.4. El medio
debe ser usado para un solo da, luego desecharlo.
E. PROCEDIMIENTO
1. En el caso del suelo, en el laboratorio se debe tomar 5g del mismo en un tubo para
centrifuga con 10ml de agua destilada y centrifugar a 2000 revoluciones durante 5
minutos. Luego tomar el sobrenadante como muestra para filtrar.
2. La seleccin del tamao de la muestra depender de la densidad bacteriana que se
espere, y estar limitada por el grado de turbidez o por el crecimiento de no
Coliformes en el medio. Un volumen ideal de muestra es el que proporciona
alrededor de 20 a 60 colonias fecales por membrana.
3. Se filtran 10 ml de cada muestra si la dilucin es menor a estos.
4. A cada caja Petri debidamente esterilizadas se pone un pad y se impregna con la
pipeta alrededor de 2 a 3 ml del medio M-FC, preparado como se ha descrito,
hasta saturar el pad.
5. Se coloca con pinzas estriles un filtro de membrana estril con la trama hacia
arriba sobre la placa porosa del receptculo, se sita la unidad de embudo sobre el
receptculo y se fija. Se filtra la muestra diluida o no segn el caso y se hace un
enjuague final con un poco de agua destilada. La filtracin se lleva a cabo bajo un
vacio parcial.
6. Luego se desconecta el proceso de vaco, se desbloquea y retira el embudo,
inmediatamente se quita el filtro de membrana con unas pinzas estriles
colocndolo sobre el pad impregnado con el caldo M-FC.
7. Se tapa cada caja y se voltea. Luego se llevan a incubacin durante 24 2 horas a
44.5C 2C.
8. Las colonias producidas por bacterias Coliformes Fecales en el medio M-FC
presentan distintos matices de azul. Las colonias se cuentan a simple vista o
mediante la lupa.
F. CLCULO
La densidad de Coliformes se presenta como el total de Coliformes Fecales por 100ml. Se
calcula a partir de las cantidades de muestra que producen recuentos en FM dentro de los
lmites deseados de 20-80 colonias de Coliformes Fecales. Empleando la siguiente
ecuacin:
(
62
ANLISIS BIOLGICOS
17.
Potencimetro.
Balanza analtica.
Tubos de ensayo.
Gradilla.
Pipeta.
Agitador.
D. REACTIVOS
63
Al 25% 25 mg/L
Al 15%
15 mg/L
Al 5%
5 mg/L
64
Efluente
Efluente
Afluente
%crecimientoraiz
longitudraiztratamientox100 %
longitudmediacontro ln egativo
66
% crecimiento tratamiento 2
38,78
64,24
100
44,90
65,31
50
67,35
89,90
25
61,25
80,61
12,5
100
Trat 1
Trat 2
75
50
25
CE50=45%
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Figura 103. Determinacin del CE50 para un ensayo de toxicidad utilizando Allium cepa L.
67
BIBLIOGRAFA
APHA, AWWA, WEF. (2005). Standard methods for the examination of water &
wastewater (21st ed.). Baltimore: Port City Press.
EEN, F. (1999). Investigation of sustrate degradation and nonbiodegradable portion in
several pulp bleaching wastes. Water Science and Technology , 40 (11-12), 305-312.
FUNASA. (2006). Manual prctico de anlise de gua (2a ed.). Braslia: Fundao Nacional
de Sade.
IGAC. (2006). Mtodos analticos del laboratorio de suelos (6a ed.). Bogot: Instituto
Geogrfico Agustn Codazzi.
68