FIQIA - UNPRG

PRODUCCIN DE LEVADURA Saccharomyces PARA CONSUMO

HUMANO

1. INTRODUCCIN
Conocida desde la antigedad, la levadura del pan, del vino y de la cerveza,
Saccharomyces cerevisiae, se ha convertido en un organismo de estudio comn en el
laboratorio. La investigacin biotecnolgica ha mantenido el uso tradicional que se ha
hecho de esta levadura, mejorando e innovando los procesos de panificacin y de
produccin de bebidas alcohlicas. A la vez, este organismo ha ganado protagonismo
en el laboratorio al convertirse en un potente modelo biolgico de organismos
eucariotas.
La secuenciacin completa del genoma de Saccharomyces cerevisiae -concretamente,
de la cepa de laboratorio S288C- se finaliz en 1996, tras cuatro aos de un proyecto
liderado por la Unin Europea y la participacin de ms de cien laboratorios de todo el
mundo. Fue el primer organismo eucariota en ser secuenciado y actualmente es el
genoma eucariota mejor conocido.
Desde hace algn tiempo, Per se ha caracterizado por las cosechas de caa de
azcar a lo largo del ao, lo que hace importante aprovechar al mximo materias
primas como la melaza para la produccin de biomasa y para la obtencin de
diferentes productos biotecnolgicos por vas fermentativas. Se prefiere el uso de
melaza ya que esta presenta ventajas econmicas y nutricionales frente a otros
medios de cultivo comerciales como el caldo YPG (Extracto de levadura, Peptona y
Glucosa), el cual es utilizado normalmente para la obtencin de biomasa
levaduriforme.
En la actualidad se ha venido mejorando la salud nivelando la carga microbiana
intestinal mediante la inclusin de microorganismos vivos como los probiticos, los
cuales regulan la microflora intestinal, aumentan la asimilacin de los alimentos,
reducen niveles de colesterol y estimulan el desarrollo del sistema inmune entre otras
caractersticas. Es por esta razn, que especies de Saccharomyces han sido
frecuentemente utilizadas en la industria, por lo que la produccin de biomasa a gran
escala se convierte en un factor primordial para el desarrollo biotecnolgico del pas.
En Per, el uso de la melaza como sustrato para la produccin de Saccharomyces
cerevisiae es una alternativa vlida ya que reduce costos para industrias nacionales y
adems evita el frecuente uso de productos importados que incrementan costos en
Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG
procesos biotecnolgicos. Este proyecto se plantea en dos etapas. En la primera, se
evaluaron diferentes concentraciones de melaza a nivel de erlenmeyer para obtener la
mayor cantidad de biomasa levaduriforme, realizando paralelamente un seguimiento
de la viabilidad y el consumo de sustrato. En la segunda etapa, se determinaron
parmetros cinticos evaluados por medio de fermentaciones con la concentracin de
melaza escogida a nivel de erlenmeyer y biorreactor de 1.5L en trminos de (Yx/s)
rendimiento de biomasa en sustrato, (x) velocidad especfica de crecimiento, (Td)
tiempo de duplicacin y Productividad.

2. OBJETIVOS
Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG

2.1. Objetivo general

Evaluar la melaza de caa como sustrato para la produccin de
Saccharomyces cerevisiae.

2.2. Objetivos especficos.

Evaluar diferentes concentraciones de melaza de caa con el fin
de seleccionar la ms adecuada para la produccin de biomasa
levaduriforme.
Calcular parmetros cinticos de rendimiento de biomasa a
partir de sustrato Y x/s (g/g), velocidad especfica de crecimiento
ux(h-1), tiempo de duplicacin td (h) y productividad (gL-1/h) de
la cepa en estudio y de una cepa control.
Evalaur la productividad de la melaza de caa a la
concentracin seleccionada por medio del Mtodo Ecomtrico.

3. MARCO TERICO
3.1 CAA DE AZCAR
3.1.1 Caractersticas generales
La Caa de Azcar es una gramnea tropical, un pasto gigante emparentado con el
sorgo y el maz, en cuyo tallo se forma y acumula un jugo rico en sacarosa, compuesto
que al ser extrado y cristalizado forma el azcar. Forma espiguillas pequeas
Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG
agrupadas en rosetas y rodeadas por largas fibras sedosas. Se conocen diversas
variedades cultivadas que se diferencian por el color y la altura de los tallos. El tallo de
la caa es el que contiene el tejido esponjoso y dulce del cual se extrae el azcar (ICA,
1981).
3.2.2 Subproductos
3.2.2.1 Mieles
La miel o tambin llamada melaza, es un lquido denso y viscoso de color oscuro, es
producto final de la fabricacin o refinacin de la sacarosa procedente de la Caa de
Azcar. Este subproducto se usa para alimentos concentrados para animales y como
suplemento alimenticio para el hombre. (Leeson y Summers, 2000).
3.2.2.2 Cachaza
Residuo que se elimina en el proceso de clarificacin del jugo de caa durante la
fabricacin del azcar. Es un material rico en fsforo, calcio, nitrgeno y materia
orgnica, pero pobre en potasio. Se usa principalmente como abono, ya que mejora
algunas propiedades fsicas y cidas del suelo, aunque tambin se emplea en
alimentacin de ganado vacuno y en la obtencin de ceras y aceites (Leeson y
Summers, 2000).
3.2.2.3 Bagazo de Caa
Desecho que queda despus de la molienda de la Caa de Azcar. Est formado por
un conjunto de partculas de diferentes tamaos cuyo promedio oscila alrededor de 2 a
2.5mm el resto consta de slidos solubles e insolubles. Es utilizado normalmente como
combustible en las calderas que le dan energa a los ingenios (Leeson y Summers,
2000).

3.2 MELAZA DE CAA DE AZCAR

3.2.1 Definicin
Las melazas, mieles finales o melazas blackstrap, suelen ser definidas, por muchos
autores como los residuos de la cristalizacin final del azcar de los cuales no se
puede obtener ms azcar por mtodos fsicos.

Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG
La Norma ICONTEC 587 de 1994, define como miel final o melaza (no cristalizable) al
jarabe o lquido denso y viscoso, separado de la misma masa cocida final y de la cual
no es posible cristalizar ms azcar por mtodos usuales (ICONTEC, 1994).
La denominacin melaza se aplica al efluente final obtenido en la preparacin del
azcar mediante una cristalizacin repetida. El proceso de evaporacin y cristalizacin
es usualmente repetido tres veces hasta el punto en el cual el azcar invertido y la alta
viscosidad de las melazas ya no permitan una cristalizacin adicional de la sacarosa
(Swan y Karalazos, 1990).
La melaza es una mezcla compleja que contiene sacarosa, azcar invertido, sales y
otros compuestos solubles en lcali que normalmente estn presentes en el jugo de
caa localizado, as como los formados durante el

proceso de manufactura del

azcar. Adems de la sacarosa, glucosa, fructosa y rafinosa los cuales son

fermentables, las melazas tambin contienen sustancias reductoras no fermentables
(Tabla1). Estos compuestos no fermentables reductores del cobre, son principalmente
caramelos libres de nitrgeno producidos por el calentamiento requerido por el
proceso y las melanoidinas que si contienen nitrgeno derivadas a partir de productos
de condensacin de azcar y aminocompuestos (Honig, 1974).

Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG

3.2.2 Proceso de Obtencin

Las melazas se obtienen como un subproducto final en la elaboracin del azcar de
caa. Una breve resea de los principales pasos del proceso, se encuentran
resumidos en la Figura 1.
Sin entrar en mayores detalles, brevemente se explica en que consiste cada uno de
los pasos que llevan a la obtencin de la melaza de caa de azcar.
3.2.2.1 Almacenamiento
La caa despus de ser cortada es llevada a patios de almacenamiento en el ingenio.
Este almacenamiento no debe ser muy prolongado, puesto que los efectos del sol
disminuyen el rendimiento del jugo, lo mismo que su calidad; por este motivo, debe
pasarse a la molienda en el menor tiempo posible despus de haber sido cortada;
dentro de lo posible debe procurarse que este tiempo no sobrepase las 48 horas para
evitar prdidas (Swan y Karalazos,1990).
3.2.2.2 Preparacin y Extraccin del Jugo
Estas dos operaciones se llevan a cabo en una forma continua, por lo cual
generalmente se conoce bajo el nombre de Extraccin del jugo. Este proceso, se
lleva a cabo en una serie de cuchillas desmenuzadoras y molinos extractores. La
caa es desmenuzada en preparacin para la molienda con cuchillas giratorias y
desmenuzadoras para facilitar una mejor extraccin del jugo (Ospina y Palacios,1994).
La caa desmenuzada pasa a los molinos donde se efecta el proceso de extraccin
del jugo; luego, esta caa es rociada con agua y jugos claros a medida que sale de
cada molino, en esta forma se diluye el azcar que queda en el bagazo a la salida de
cada molino y se obtiene un mayor rendimiento en la extraccin. En esta forma, se
extrae mas del 90% del azcar que hay en la caa, quedando una parte remanente en
el bagazo, el cual va a las calderas como combustible (Ospina y Palacios,1994).
3.2.2.3 Clarificacin

Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG
El jugo es bombeado de los molinos a los clarificadores por medio de bombas
centrfugas hechas de materiales resistentes a la abrasin y a los cidos. La
clarificacin se lleva a cabo por medio de cal y calor. La acidez del jugo es
neutralizada con cal y luego se eleva la temperatura hasta su punto de ebullicin. El
precipitado que se forma por accin de la cal y el calor, se deja sedimentar en los
tanques clarificadores continuos y el jugo clarificado es decantado de la espuma, barro
y desperdicios y es llevado a la estacin evaporadora (Ospina y Palacios,1994).
3.2.2.4 Evaporacin
El jugo clarificado pasa a un evaporador de efecto mltiple sin ningn tratamiento
previo. Los evaporadores consisten en una serie de techos de vaco, de tal manera
que se logre la ebullicin a temperatura ms baja (Ospina y Palacios,1994).

3.2.2.5 Cristalizacin
Se hace en tanques de vaco de efecto simple a presin reducida. El jarabe o las
aguas madres de cristalizaciones anteriores (melazas), se evaporan hasta su
saturacin de azcar; en este punto, los granos son separados de la masa en
ebullicin y sirven como ncleo para la formacin de cristales. El tanque es cargado a
medida que el agua se evapora y su contenido de azcar es depositado sobre los
cristales presentes sin la formacin de cristales adicionales. En este punto, la mezcla
de cristales y jarabe, constituye una masa densa denominada Templa (Ospina y
Palacios,1994).
3.2.2.6 Centrifugacin
La Templa es derramada sobre un mezclador y de all pasa a centrfugas verticales de
alta velocidad. Los cristales de azcar son retenidos en la centrfuga y pueden ser
lavados con agua si se desea. Las aguas madres que se separan, se denominan
melazas de primera. Completada la centrifugacin, se remueve el azcar quedando la
mquina lista para una nueva carga (Ospina y Palacios,1994).
El azcar obtenido pasa a los depsitos para su despacho, mientras que las melazas
se envan a un nuevo evaporador y de ah a la centrfuga B, donde se obtiene el
azcar y las melazas de segunda. Estas melazas se someten a un proceso similar a
los anteriores, obtenindose en esta oportunidad azcar de semilla y melazas finales.
Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG
Estas melazas finales, han sido consideradas en los ingenios como producto sobrante
y al cual son muy pocos los usos que se le dan (Ospina y Palacios,1994).

3.2.3 Clasificacin
La Asociacin Americana de Control Oficial de Alimentos (AAFCO), recomienda
diferentes clasificaciones para las melazas, segn el azcar total y el contenido de
humedad, as:

Melaza Superior Blackstrap: Melaza de caa que contiene 23.4% de agua o

menos, y 53.5% o ms de azcares totales.

Melaza Blackstrap: Melaza compuesta por 23.5% a 26.4% de agua y 48.5% a
53.5% de azcares totales (Castro, 1993).

Otra clasificacin de las melazas, se da por el porcentaje de materia slida en peso, o

grados Brix, de la siguiente manera:

Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG

Melaza Blackstrap: Es el subproducto de la elaboracin del azcar, cuyo

porcentaje de materia slida en peso (grados Brix), diluido con igual peso de

agua es de 42.5 grados Brix.

Melaza de Caa Alimenticia: Es la melaza blackstrap diluida con agua, hasta
una concentracin en grados Brix, no menor de 39.75; a este producto no se le
ha especificado un valor de concentracin de azcares.

Melaza High Test o Jarabe Invertido: Es el producto obtenido por la

concentracin del jugo clarificado, hasta un porcentaje de materia slida en
peso de 85% e invertido con cido o con invertasa (Castro, 1993).

3.2.4 Composicin
La composicin de las melazas es muy heterognea y puede variar considerablemente
dependiendo de la variedad de caa de azcar, suelo, clima, perodo de cultivo,
eficiencia de la operacin de la fbrica, sistema de ebullicin del azcar, tipo y
capacidad de los evaporadores, entre otros. Por otro lado, la melaza de caa se
caracteriza por tener grados Brix slidos disueltos de 68- 75% y un pH de 5.0- 6.1%
(Castro, 1993).
3.2.4.1 Azcares
Los principales azcares en la melaza son la sacarosa (60% - 63% en peso), la
glucosa o dextrosa (6% - 9% en peso), y la fructosa o levulosa (5% - 10% en peso);
estas dos ltimas constituyen la mayor porcin de los azcares reductores
encontrados en los anlisis. La fructosa puede sufrir transformaciones al igual que la
glucosa, debido a reacciones dependientes de la temperatura. El contenido de glucosa
y fructosa en las melazas puede variar a causa de la hidrlisis de la sacarosa, a
valores de pH cido y a temperaturas altas (Castro, 1993).
3.2.4.2 No azcares
Los no azcares estn compuestos por 33% de sustancias inorgnicas (Fe+++, K+,
Na+, Ca2+, Mg2+, Zn2+, As3+, Cd2+, Hg+, Pb+ y Cl-, NO3-, SO2-); el 42%
corresponde a sustancias nitrogenadas (aminocidos, pptidos, colorantes); y el 25%
a sustancias orgnicas libres de nitrgeno (cidos carboxlicos, alcoholes, fenoles,
steres, vitaminas, gomas y dextranos) (Castro, 1993).
Tecn. de Azcar y Derivados.

FIQIA - UNPRG
3.2.4.3 Cenizas
En general la composicin de las cenizas de las melazas, es cualitativamente similar a
la del jugo, del cual se obtiene stas. Casi todos los anlisis publicados, muestran que
el contenido de potasa vara alrededor de 40% del peso del carbono total de la ceniza;
el contenido de cal es de 10% al 20%, el de sulfatos vara entre el 10% y el 20%, y las
sales de magnesio, sodio, aluminio, la slice, los cloruros, fosfatos y los xidos de
hierro, completan el resto del contenido de cenizas (Castro, 1993).
3.2.4.4 Compuestos nitrogenados
Estn constituidos principalmente por aminocidos mono y dibsicos, amidas cidas,
betanas y pequeas cantidades de peptonas y nitratos. Cuando los azcares
reductores, glucosa y fructosa, son sometidos a los procesos de clarificacin, en el
tratamiento subsiguiente, se producen varias reacciones, siendo la ms importante la
de los aminocidos con estos azcares, en la cual se forman productos coloreados
como las melanoidinas y los residuos fermentables a los cuales se les ha encontrado
un contenido aproximado de 68% de nitrgeno combinado, en melazas.
El Nitrgeno total de las melazas, vara entre 0.4% y 1.5% del peso total de la melaza.
La protena cruda frecuentemente se determina como porcentaje en peso del
contenido de nitrgeno (Castro, 1993).
3.2.4.5 cidos
El cido acontico, es el ms abundante de los cidos orgnicos presentes en la caa
que se acumula en las melazas, representando aproximadamente el 6% del peso de
slidos en la melaza. Los cidos mlico y ctrico estn presentes en cantidades
apreciables en las melazas. El cido Frmico est presente como producto de
descomposicin;

la

mayora

de

estos

cidos

son

metabolizados

por

los

microorganismos, como fuente de carbono y no presentan problemas de inhibicin de

crecimiento (Castro, 1993).
3.2.4.6 Vitaminas
Aquellas vitaminas resistentes a la accin del calor y de los lcalis, aparecen
encontradas en las melazas. La niacina, cido pantotnico y riboflavina, importantes
para el crecimiento microbiano, pueden estar presentes en cantidades significativas y
otras vitaminas lo estn en cantidades muy pequeas (Castro, 1993).
3.2.4.7 Fenoles y Compuestos voltiles
Tecn. de Azcar y Derivados.

10

FIQIA - UNPRG
Los fenoles presentes en las mieles finales, provienen de la parte fibrosa de la caa,
stos se derivan los cidos hidroxicinmico y parahidroxibenzic.
Es necesario tener en cuenta, que desde el punto de vista de la fermentacin, algunos
fenoles son indeseables, por presentar actividad inhibitoria sobre el crecimiento de los
microorganismos, a concentraciones de 0.5g/L. Los cidos fenlicos que mayor
actividad bacteriosttica han demostrado son el cloragnico, el p-cumrico y el
telrico; estos dos ltimos son capaces de inhibir totalmente el crecimiento de algunas
bacterias (Castro, 1993).
3.2.5 Valor nutricional
Aunque hay muchos reportes sobre el valor nutritivo de las melazas, como
ingredientes de las raciones para rumiante, parece haber poca concordancia entre los
resultados obtenidos por los diversos investigadores. Aunque algunos de ellos llegan a
la conclusin de que el valor nutritivo de las melazas es equivalente aproximadamente
al 85% del maz en grano (Tocagni, 1981).
Cuando las melazas son suministradas como alimento a novillos de engorde en
proporcin del 10%, stas suministran una energa neta relativamente alta (EN). Sin
embargo, cuando el nivel es incrementado a 25 y 40%, la EN sereduce en casi 100%
(Olsen y Allermann, 1991).
La melaza es portadora de energa de fcil aprovechamiento por el animal, la cual
representa del 70 al 75% del valor energtico del maz (Olsen y Allermann, 1991).

3.2.6 Propiedades fisicoqumicas

3.2.6.1 Viscosidad
Las relaciones entre concentracin y viscosidad para soluciones de azcar pura son
igualmente vlidas para las melazas. La viscosidad de las soluciones saturadas de
azcar impuro, aumenta rpidamente con el contenido de impurezas debido al
incremento de la concentracin de slidos.
El efecto de las sales minerales sobre la viscosidad de las soluciones de azcar es
variable. Un enriquecimiento de iones Ca2+ aumenta la viscosidad, mientras que un
incremento de iones K+, la disminuye (Swan y Karalazos, 1990).

Tecn. de Azcar y Derivados.

11

FIQIA - UNPRG
Los compuestos orgnicos no azcares, tienen un profundo efecto sobre la viscosidad,
pues

los

componentes

de

alto

peso

molecular

pueden

incrementarla

considerablemente (Swan y Karalazos, 1990).

La aireacin influye marcadamente sobre la viscosidad aparente de las soluciones de
azcar, y si se disminuye el contenido de aire en las melazas, disminuye la viscosidad
(Swan y Karalazos, 1990).
El efecto de las variaciones del pH sobre la viscosidad de las soluciones de azcar es
insignificante, excepto cuando el pH es superior a 11; en este caso, la viscosidad
aumenta. El efecto de la concentracin y la temperatura sobre la viscosidad de las
melazas, tiene importancia prctica en la cantidad de melaza que fluye por las tuberas
y bombas, as como la descarga por gravedad natural, o el desplazamiento por fuerza
centrfuga. Si se considera que la viscosidad de las melazas decrece a una
temperatura dada, con una disminucin de la concentracin, y tambin cuando la
concentracin es constante y la temperatura aumenta (Swan y Karalazos, 1990).
La regin de viscosidad crtica en la melaza de caa, est en un intervalo de
concentraciones en grados Brix entre 81 y 85. Esto significa que un aumento de solo
algunas dcimas en el valor de la concentracin, determina un incremento notable en
la viscosidad (Swan y Karalazos, 1990).
3.2.6.2 pH
Las melazas de caa son ligeramente cidas, tienen un pH entre 5.5 y 6.5; un pH bajo
es atribuible a la presencia de cidos alifticos y al bajo pH de la clarificacin, si es
cida (Swan y Karalazos, 1990).
El pH de las melazas cambia con la temperatura y depende tambin de la naturaleza y
de la cantidad de material estabilizador del pH que posea (Swan y Karalazos, 1990).
La accin estabilizadora del pH tiene efecto sobre la melaza para resistir la adicin de
cidos o lcalis, sin cambiar su naturaleza cida o bsica. En la melaza la accin
estabilizadora depende del contenido de no azcares y de las caractersticas de la
melaza (Swan y Karalazos, 1990).
La estabilizacin del pH en las melazas de caa tiene un patrn uniforme, es decir, no
existen variaciones irregulares debidas a relaciones de cambio de peso entre las
sustancias que intervienen, por lo tanto la actividad estabilizadora se modifica (Swan y
Karalazos, 1990).

Tecn. de Azcar y Derivados.

12

FIQIA - UNPRG
3.2.6.3 Calor especfico y Conductividad Trmica
En las soluciones de azcar, el calor especfico depende de la temperatura, de la
concentracin y de la composicin. Se ha comprobado, que el calor especfico
disminuye al aumentar la concentracin de las soluciones impuras de azcar; es
necesario, conocer el calor especfico de las melazas para calcular la transferencia de
calor durante el calentamiento o enfriamiento (Swan y Karalazos, 1990).
3.2.6.4 Densidad
En la prctica, la densidad se determina mediante equivalencia con la concentracin
en grados Brix. Adems, para su determinacin se usan tres instrumentos
densimtricos: el hidrmetro, la balanza de Westphal y el picnmetro, de los cuales el
primero es el ms utilizado (Swan y Karalazos, 1990).
3.2.7 Microorganismos de la melaza
Mediante ensayos adecuados con soluciones diluidas de melazas, se ha demostrado
que stas, a pesar de su bajo contenido de fsforo, constituyen un buen medio
nutritivo para muchos microorganismos, tales como levaduras, hongos y bacterias
(Ariza y Gonzlez, 1997).
Se considera importante la presencia de microorganismos mesfilos y termfilos
dentro de la melaza. Los organismos mesfilos se desarrollan bien durante la dilucin
de las melazas (Ariza y Gonzlez, 1997).

3.2.8 Aprovechamiento de la melaza

La melaza ha sido suministrada al ganado de carne y de leche por muchos aos,
principalmente como aditivo para incrementar la gustosidad o facilitar la reduccin a
comprimidos de las raciones convencionales mezclados en seco.
Tambin ha sido utilizada como vehculo en varios tipos de alimentos lquidos; como
suplemento para el ganado en pastoreo solo o adicionado con otros componentes
como urea y cido fosfrico. Igualmente ha sido comn como ingrediente alimenticio
para pollos y cerdos, en donde constituye un subproducto de primer orden para su
alimentacin, ya que puede ser utilizada a niveles hasta de 40%, logrando
alimentacin adecuada en los animales (Ariza y Gonzlez, 1997).
Tecn. de Azcar y Derivados.

13

FIQIA - UNPRG
Por otro lado, se usa como fertilizante para suelos, mezclada con bagazo y otros
componentes, en casos especiales de abundancia. Tambin es frecuentemente
utilizada como combustible, para la preparacin de pavimentos. Los diferentes usos de
la melaza se resumen en la Tabla 2.

3.2.9 Almacenamiento de la melaza

Los principales cambios notados durante el almacenamiento son: prdida de sacarosa,
ganancia de azcares reductores, incremento del porcentaje de compuestos orgnicos
no azcares, prdida de slidos totales, y gran incremento de color (Honig, 1974).
La descomposicin se atribuye principalmente a la reaccin de las sustancias
orgnicas inestables, con los azcares reductores, formndose impurezas coloidales
coloreadas, con alto contenido de carbono. Estos productos llegan a contener entre un
15 y 50% del nitrgeno total de la melaza, en forma no asimilables por los
microorganismos (Honig, 1974).

Tecn. de Azcar y Derivados.

14

FIQIA - UNPRG
Para reducir la probabilidad de cambios qumicos originados por las altas temperaturas
(climas tropicales), la melaza recin centrifugada debe enfriarse, a la menor
temperatura posible, antes de ser almacenada. La cantidad de melaza almacenada y
la duracin del perodo de almacenamiento, son factores que deben considerarse en
las medidas de seguridad (Honig, 1974).
La prdida de sacarosa, azcares reductores y azcares totales est acompaada de
un aumento de las sustancias reductoras no fermentables. Normalmente, el aumento
de stas ltimas, es ms rpido durante los tres primeros meses de almacenamiento.
La formacin de estos productos va acompaada de desprendimiento de anhdrido
carbnico y adems est en relacin inversa con la magnitud de la temperatura de
almacenamiento (Honig, 1974).
Es necesaria la limpieza peridica de los tanques de almacenamiento, ya que los
slidos sedimentables se adhieren y se compactan con facilidad, principalmente en el
fondo, siendo necesario removerlos con elementos cortantes (Honig, 1974).
3.3 Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae es la especie de levaduras utilizada por excelencia para la
obtencin de etanol a nivel industrial debido a que es un microorganismo de fcil
manipulacin y recuperacin, no es exigente en cuanto a su cultivo, no presenta alto
costo, tolera altas concentraciones de etanol, en la fermentacin produce bajos niveles
de subproductos, es osmotolerante, capaz de utilizar altas concentraciones de
azcares, presenta alta viabilidad celular para el reciclado y caractersticas de
floculacin y sedimentacin para el procesamiento posterior (Carballo, 2000). La
clasificacin taxonmica de la levadura se observa en la Tabla 3.

Tecn. de Azcar y Derivados.

15

FIQIA - UNPRG
Las levaduras, son organismos eucariticos unicelulares, por lo tanto sus estructuras
se encuentran formadas por pared celular, ncleo diferenciado y organelos como
ribosomas y mitocondrias; la formacin de una cpsula de polisacaridos, la ausencia o
presencia de vacuolas y el desarrollo de las mitocondrias dependen de las condiciones
fisicoqumicas y de la edad del cultivo (Tuite y Oliver 1991). Las caractersiticas
generales de las levaduras se resumen en la Tabla No. 4.

Saccharomyces cerevisiae es una levadura cuya colonia es de color crema o blanco,

apariencia hmeda y brillante, de bordes irregulares (Figura 2). La temperatura ptima
de crecimiento es de 25 a 30C. Puede producir ascosporas cuando hay
requerimientos nutricionales adecuados.

Sus dimensiones son: 2.5 10 micras de ancho y 4.5 21 micras de largo.

Microscpicamente se observan redondas y ovoides, elipsoides, a veces cilndricas y
filamentosas. Fermenta glucosa, galactosa, sacarosa y maltosa y no fermenta lactosa.

Tecn. de Azcar y Derivados.

16

FIQIA - UNPRG
Asimila galactosa, sacarosa, maltosa y rafinosa. La aireacin ptima es de 0.6 0.9
vvm (Ariza y Gonzlez, 1997).
El nombre de Saccharomyces significa azcar de hongos. Producen una fermentacin
vigorosa y es conocida como la levadura de la cerveza, sirve como fuente de enzimas
(invertasa), como extracto de levadura autolisado para sustituir los sabores naturales
del extracto de carne, hace fermentar la masa del pan, interviene en la fabricacin del
vino y como fuente de protena, vacunas, cidos grasos y aceites (Ariza y Gonzlez,
1997).
Saccharomyces

pertenece

al

gnero

de

las

levaduras

de

la

familia

Saccharomycetaceae; las clulas son esferoidales, elipsoidales o cilndricas (Figura 3):

La reproduccin vegetativa ocurre por mecanismos multilaterales: los pseudomicelios
pueden ser formados por algunas especies, pero presenta ausencia de hifas
verdaderas. En presencia del 02 las cepas pueden metabolizar oxidativamente
sustratos como glicerol, etanol y lactato(Yepez, 1995).

Saccharomyces cerevisiae y otras especies de levaduras en general, realizan

fermentacin alcohlica, en la cual el etanol es formado a partir de la Dglucosa; ste
azcar es convertido en piruvato por la va de EmbdenMeyerhof Parnas en la cual el
piruvato es descarboxilado a acetaldehdo por la piruvato descarboxilasa y la tiamina
pirofosfato y el acetaldehdo reducido finalmente a etanol (Halasz y Laszlity, 1991).
3.3.1 Requerimientos nutricionales
Saccharomyces cerevisiae requiere ciertos nutrientes y condiciones ambientales para
su apropiado crecimiento y reproduccin. Algunos elementos son bsicamente
necesarios como por ejemplo carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y fsforo
(Ospina y Palacios, 1994).

Tecn. de Azcar y Derivados.

17

FIQIA - UNPRG
El carbono sirve como fuente de energa y como material constitutivo de la masa
celular. El nitrgeno se encuentra en la clula formando parte esencial de las
protenas, aminocidos y cidos nucleicos; el fsforo se encuentra en los cidos
nucleicos, en la lecitina y en diversos compuestos fosforilados que participan
activamente en los procesos de degradacin oxidativa y de intercambio energtico
(ATP, ADP, AMP, NADP). Para que las fuentes de Nitrgeno, Fsforo y Carbono
presentes en el sustrato sean aprovechados por la levadura se requiere que se
encuentren en forma asimilable (Ospina y Palacios, 1994).
3.3.2 Requerimientos fsico-qumicos
El crecimiento de S. cerevisiae se ve favorecido por un pH prximo a 4.0 5.0 y no se
desarrollan bien en medio alcalino a menos que se hayan adaptado al mismo. A pesar
de la tolerancia bastante amplia de esta levadura para las variaciones de pH a partir
de los sustratos habitualmente usados en los medios de cultivo forman productos en
especial cidos que influyen en el crecimiento celular, produccin enzimtica y
utilizacin de glucosa. As por ejemplo, algunas investigaciones han observado que
con un pH inicial del medio a valores entre 4.0 y 4.5 se obtiene mejor crecimiento y
utilizacin de glucosa, mientras que la mxima produccin de enzima se observa a un
pH de 3.0 (Tuite y Oliver, 1991).

3.3.3 Composicin qumica

Las levaduras contienen un 75% de agua y un 25% de materia seca
aproximadamente. La composicin de la materia seca de la levadura se presenta en la
Tabla 5.

Tecn. de Azcar y Derivados.

18

FIQIA - UNPRG

Las sustancias minerales de las levaduras representan por lo general un 5 9% del

peso seco. Los componentes principales son cido fosfrico, alrededor del 50% y
potasio del 30% (Haehn, 1991).
Las sustancias nitrogenadas de la levadura representan unas dos terceras partes de
su peso seco (30 75%), contienen entre 5 y 12% de Nitrgeno (Castellanos, 1991).
Estas sustancias se reparten en un 64% de protena, 10% de peptonas y aminocidos,
8% de amonio, 10% de purina y el resto consiste en pirimidinas y vitaminas. El
contenido normal de aminocidos depende de la alimentacin, de la cantidad de
oxgeno, de la temperatura del cultivo, etc. (Tuite y Oliver, 1991).

3.4 PROCESO DE FERMENTACIN

3.4.1 Fermentacin a escala industrial
A travs del tiempo se han introducido diferentes modelos de fermentacin tales como
los sistemas discontinuos y sistemas continuos. La mayora de las fermentaciones son
procesos discontinuos, cuya cintica propia permite que los equipos sean operados en
intervalos. Al final de dicho tiempo, se procede a la recuperacin de la levadura por
centrifugacin. Es un sistema que presenta facilidad en sus operaciones, ya que
disminuye los requerimientos para obtener su completa esterilizacin, evitando as, el
riesgo de prdidas financieras y facilitando el manejo de materias primas.
Como desventaja de este sistema, se muestra la decreciente productividad en la
fermentacin debido al largo tiempo de rotacin y retraso en el crecimiento inicial
(Quintero, 1981).
a. ETAPAS
Etapa 1: Preparacin de la melaza y materias primas

Tecn. de Azcar y Derivados.

19

FIQIA - UNPRG
La produccin de levadura lleva aproximadamente cinco das y se inicia utilizando una
fuente de energa para el crecimiento de la levadura. Comnmente se emplea la
melaza de caa de azcar porque sus azcares son fcilmente fermentables. Adems,
para crecer la levadura necesita minerales, vitaminas y sales que usualmente se
agregan a las melazas antes de la esterilizacin flash que producir el pur usado
para alimentar la levadura cuando crece.
Etapa 2: Preparacin del cultivo o levadura madre
La produccin de levadura comienza con un tubo de cultivo puro o un vial congelado
de la cepa apropiada de levadura. Esta levadura sirve como inculo para el tanque de
cultivo pre- puro donde la siembra crece bajo condiciones estriles antes de ser
transferida a un fermentador de cultivo puro ms grande. Desde el tanque de cultivo
puro, las clulas producidas son trasladadas a fermentadores de siembra y semisiembra progresivamente ms grandes. Estos ltimos tramos son conducidos como
fermentaciones de alimentacin batch donde la levadura es alimentada con melaza,
cido fosfrico, amonaco y minerales.
Etapa 3: Fermentacin y cultivo
Al final de la fermentacin semi-siembra, las melazas agotadas se remueven y la
levadura es lavada con agua fra y mantenida en un tanque de almacenamiento a 1C
antes de que se inocule en los tanques de fermentacin comerciales. Estos
fermentadores comerciales tienen hasta 200 mil litros de capacidad y son el paso final
en el proceso de fermentacin.
Tras la adicin de la levadura de siembra se inician la aireacin, enfriamiento y
agregados de nutrientes para comenzar una fermentacin de 15-20 horas. Al principio
de la fermentacin, la levadura lquida de siembra y el agua adicional pueden ocupar
entre un tercio y la mitad del volumen del fermentador solamente. Los agregados
constantes de nutrientes durante el curso de la fermentacin llevan el fermentador
hasta su volumen final.
La tasa de adicin de nutrientes se incrementa a lo largo de la fermentacin y hacia el
final del proceso el nmero de clulas de levadura se habr incrementado entre 5 y 8
veces. Durante la fermentacin la temperatura se mantiene a aproximadamente 30C
y el ph en el rango de 4,5- 5,5.
Etapa 4: Filtracin y envasado

Tecn. de Azcar y Derivados.

20

FIQIA - UNPRG
Al final de la fermentacin, el caldo resultante es separado, lavado con agua y
recentrifugado para obtener una crema de levadura, que es entonces enfriada a
aproximadamente 7C.
La crema de levadura puede cargarse directamente en tanques para entrega directa a
los clientes o ser bombeada hacia una prensa filtro y escurrida hasta que toma una
consistencia similar a la de una torta, que se corta en pedazos y se refrigera. Los
envases de levadura pueden despus ser distribuidos a los clientes en camiones
refrigerados.
Cuidado del medio ambiente
Aunque haya soluciones alternativas, en realidad la fuente principal de materia prima
para la levadura es un subproducto de la industria del azcar (la melaza). Este
producto contiene, el 60 % de azcar fermentable y el 40 % de productos que no son
azcar, la mayor parte de los cuales no puede ser utilizado por la levadura. Los
constituyentes que no son azcar pueden representar una sensible contaminacin si
fueran desechados en el ambiente. Lo recomendable es someterlos a un tratamiento
bioqumico en anaerobiosis y/ o aerobiosis y utilizarlos como alimento para ganado o
fertilizante.
Asimismo, cabe destacar que estos tratamientos descontaminantes representan una
parte importante de los costos de produccin e inversiones necesarias para operar una
planta moderna de levadura.
Por otra parte, la industria de la levadura contribuye fuertemente a la proteccin del
medio ambiente ya que emplea como insumo uno de los subproductos de la industria
del azcar, del almidn, etc. (Fuente: COFALEC)

3.4.2 Fermentacin discontinua

Llamados tambin procesos en Batch o lote, son de gran importancia comercial para
su amplio uso. Las tcnicas de instalacin de los cultivos discontinuos, van a depender
de si el proceso es aerobio o anaerobio (Doran, 1998).
Una fermentacin discontinua Batch puede considerarse como un sistema cerrado.
A tiempo cero (t0), la solucin esterilizada de nutrientes se inocula con
microorganismos y se permite que se lleve a cabo la incubacin en condiciones
ptimas de fermentacin. A lo largo de toda la fermentacin no se adiciona nada,
Tecn. de Azcar y Derivados.

21

FIQIA - UNPRG
excepto oxgeno (en forma de aire), un agente antiespumante y cidos o bases para
controlar el pH. La composicin del medio de cultivo, la concentracin de la biomasa y
la concentracin de metabolitos, cambia generalmente en forma continua como
resultado del metabolismo de las clulas (Doran, 1998).
3.4.2.1 Condiciones que deben medirse y controlarse durante una fermentacin
discontinua
Una vez que un microorganismo y un sustrato han sido seleccionados es necesario
encontrar las condiciones de operacin ms adecuadas y que optimicen el sistema.
Desde el punto de vista de la operacin es muy importante decidir las siguientes
variables: temperatura, pH y productividad entre otras. Unas de estas variables se
miden de manera continua, mientras que otras se miden a intervalos de tiempo. Las
variables que se deben medir continuamente son: temperatura, pH, aireacin, adicin
de nutrientes, y las variables mediadas de manera intermitente son: biomasa, producto
y consumo de sustrato (Quintero, 1981).
3.4.2.1.1 Temperatura
La temperatura ptima de crecimiento de las levaduras especialmente de
Saccharomyces cerevisiae es de 30 a 35C.
La temperatura afecta el crecimiento de manera notable, principalmente porque los
microorganismos de una especie dada solo pueden crecer en un rango restringido de
temperaturas, esto afecta de manera importante el crecimiento microbiano (Quintero,
1981).
3.4.2.1.2 pH
El pH es la medida de la concentracin de iones hidrgeno y tiene un marcado efecto
en la velocidad de crecimiento y el rendimiento. Tambin el pH es ptimo para algunas
especies como la de las levaduras que comprende un rango de 4.0 a 6.0. Un cambio
en el valor de pH del medio puede afectar su composicin y la naturaleza de la
superficie microbiana al disociarse cidos y bases. Este ltimo, puede afectar la
floculacin de la biomasa o su adhesin al vidrio. El pH tiene una gran influencia en los
productos finales del metabolismo anaerbico (Quintero, 1981).
3.4.2.1.3 Nutrientes
Un medio de cultivo debe tener todos los elementos necesarios para el crecimiento
microbiano, pero es conveniente sealar que las relaciones entre ciertos elementos
Tecn. de Azcar y Derivados.

22

FIQIA - UNPRG
son de particular importancia. Segn investigaciones realizadas, se ha encontrado que
en un cultivo para levaduras en melazas la relacin carbono/nitrgeno debe ser 1:1
para que la productividad celular sea mxima. Tambin la relacin fsforo/oxgeno es
relevante en lo que refiere a la eficiencia de conversin energtica y a la respiracin
(Quintero, 1981).
3.4.2.1.4 Aireacin
La

ausencia

abundancia

de

oxgeno

permite

una

seleccin

tanto

de

microorganismos como de productos del metabolismo. Cuando el cultivo se produce

en presencia de oxgeno molecular, la fermentacin se denomina aerbica y cuando
ste carece de oxgeno anaerbica. Si la fermentacin es anaerbica, la mayor parte
del carbono se emplea como energa y slo el 2% se asimila como material celular.
Saccharomyces cerevisiae es una levadura que posee alta actividad metablica, por lo
que en un proceso fermentativo en fase aerobia se caracteriza por la produccin de
biomasa y en fase anaerobia generalmente por la produccin de etanol (Owen, 1991).
3.4.2.1.5 Productividad
La productividad se define como la produccin de biomasa por unidad de volumen, por
unidad de tiempo del cultivo, dado en concentracin de biomasa (g/L) en funcin del
tiempo (h). Esta depende del diseo del fermentador, ya que afecta la transferencia de
oxgeno que se ve reflejada en el rendimiento obtenido al final de la fermentacin
(Quintero, 1981). Un microorganismo adecuado para su utilizacin industrial debe
producir la sustancia de inters, pero hay muchos otros aspectos a considerar. Es
preciso disponer del organismo en cultivo axnico (puro), debe ser genticamente
estable, y debe crecer en cultivo a gran escala (Stanbury et al., 1995).
3.4.2.2 Mecanismo de transformacin de azcar en biomasa
La levadura obtiene la energa a travs de dos tipos de metabolismo:
1. Asimilacin: En el cual la levadura toma las sustancias nutritivas que necesita
del medio en que se desarrolla.
2. Desasimilacin: En el cual, se degradan los hidratos de carbono incorporados a
la clula (Jorgensen, 1990).
Se distinguen dos formas de desasimilacin, la respiracin y la fermentacin. La
primera se define como un proceso metablico que conduce a una oxidacin total de
los hidratos de carbono incorporados bajo formacin de dixido de carbono, agua y
energa, generando biomasa (Ecuacin 1). Esta va se presenta como ruta catablica
Tecn. de Azcar y Derivados.

23

FIQIA - UNPRG
de glucosa; la mayora de las clulas que convierten glucosa en piruvato pasan al ciclo
del cido tricarboxlico, donde se convierte en dixido de carbono y agua. Lo anterior
se presenta enla siguiente ecuacin (Jorgensen, 1990):
Ecuacin 1:

3.5 TCNICAS Y MTODOS UTILIZADOS

3.5.1 Tcnica de Hidrlisis de la sacarosa
La sacarosa es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que
carece de poder reductor. Dado que es comn utilizar este azcar en procesos
fermentativos su determinacin por el mtodo de DNS requiere de hidrlisis cida
(HCl) enzimtica para la obtencin de glucosa y fructosa que son azcares
reductores. Este proceso se denomina inversin de la sacarosa y se puede observar
en la siguiente ecuacin (Godoy, 2002):
Ecuacin 2:

3.5.2 Tcnica del cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS)

Es una tcnica de oxido-reduccin que se basa en la capacidad de la glucosa para
reducir el cido 3,5-dinitrosaliclico bajo determinadas condiciones; esta reduccin
produce una coloracin que se hace ms intensa a medida que aumenta la
concentracin de azcares reductores. Se evidencia por medio de la lectura de la
absorbancia en espectofotmetro, lo que conlleva a la aplicacin de la Ley de BeerLambert (Miller, 1959).
El fundamento de esta tcnica consiste en la oxidacin de la glucosa, sin embargo, la
glucosa en solucin acuosa se encuentra en su forma cclica que es muy estable y por
lo tanto, no reacciona. Por esta razn, es necesario calentar la muestra para que el
anillo se abra dejando expuesto el aldehdo dando lugar a una reaccin de oxidacin
como se observa en la Figura 4 (Routh et al., 1990).

Tecn. de Azcar y Derivados.

24

FIQIA - UNPRG

Para que se de la reaccin tambin es necesario proporcionar un medio alcalino; esto

es posible gracias a la adicin de NaOH el cual es una base fuerte. En solucin
acuosa se ioniza liberando Na+ y OH- al medio, el cual se alcaliniza, permitiendo la
oxidacin de la glucosa; en esta oxidacin, el carbono del grupo aldehdo se convierte
en un cido carboxlico por la prdida de hidrgenos y la ganancia de oxgeno,
obtenindose de esta forma el cido glucnico; por otro lado, el cido 3,5
dinitrosaliclico es reducido gracias a la accin del tartrato de sodio y potasio y de la
oxidacin de la Glucosa. El cido pierde una de sus configuraciones 3 5,
principalmente la 3 por ser ms reactiva, quedando cido 3-amino-5nitrosaliclico el
cual produce una coloracin amarilla (Figura 5). La coloracin es proporcional a la
concentracin de glucosa (Routh et al., 1990).

Luego se frena la reaccin con hielo haciendo que la molcula de glucosa se cierre y
adquiera de nuevo su configuracin piranosa (Routh et al., 1990).

Tecn. de Azcar y Derivados.

25

FIQIA - UNPRG

3.5.3 Mtodo Ecomtrico

El Mtodo Ecomtrico es una tcnica sencilla en la cual se siembran por estra de
modo secuencial inculos de prueba, que producen unidades formadoras de colonia
(UFC) siempre decrecientes. Esta tcnica valora tanto la sensibilidad de los medios a
la colonizacin por los microorganismos buscados como tambin la resistencia a la
colonizacin por las cepas que interfieren (Mosell, 2003).
En este mtodo, el comportamiento de un medio determinado se valora inoculando
seis placas. Tres de ellas se siembran por estra con la cepa de prueba, la cual es de
esperar que crezca en el medio y forme colonias. Las otras tres placas se siembran
con el microorganismo interferente, por lo tanto, se espera que no se presente
crecimiento en el medio a evaluar. Las placas testigo o control se siembran de modo
similar y deben permitir el crecimiento de ambos grupos de microorganismos.
Idealmente las placas control deben tener la misma composicin que el medio prueba,
pero sin incorporar agentes selectivos (Mosell, 2003).
Un parmetro til para interpretar los resultados ecomtricos es el ndice de
crecimiento absoluto (ICA). Este ndice denota el ltimo sector de la placa en el que ha
habido un crecimiento significativo. Para evaluar el ndice de crecimiento absoluto
(ICA) para el microorganismo de prueba, se efectan las lecturas de las cajas despus
de la incubacin teniendo en cuenta que cada estra tiene un valor de 0.2 y la central
de 1.0. Posteriormente, se verifica en cuales estras se observa el crecimiento y se
multiplica por el valor correspondiente para cada estra. Si se observa crecimiento en
las cinco estras de cada cuadrante y en la central, el ICA es igual a 5. El ICA debe ser
evaluado para el medio de prueba con el microorganismo de prueba y para el medio
de prueba con el microorganismo interferente. Se realiza la misma operacin con el
medio de referencia (Mosell, 2003).
Despus de la incubacin apropiada, las lecturas se expresan como ndice de
crecimiento relativo (ICR). Esto es la relacin o cociente del ICA en la placa selectiva
con respecto al medio testigo o control (Mossel, 2003).
A nivel industrial se busca desarrollar medios de cultivo que sean altamente
productivos y en lo posible selectivos, cuando la segunda condicin no se logra
obtener mediante la formulacin, se entran a implementar otras medidas a nivel de
control de proceso para evitar la presencia de microorganismos indeseables (Mosell,
2003).
Tecn. de Azcar y Derivados.

26

FIQIA - UNPRG
La productividad o rendimiento se define como el nmero de colonias de los
microorganismos buscados en superficie del medio selectivo sobre el nmero de
colonias de los microorganismos buscados en superficie del medio control no
selectivo. Esta se evala en el medio de prueba con el microorganismo de prueba y
pueden encontrarse los siguientes resultados: ICA = 5: Medios altamente productivos;
ICA = 2.5 5.0: Medios medianamente productivos; ICA= Menor De 2.5: Medios poco
productivos; ICA = 0: Medios no productivos (Mosell, 2003).
La selectividad se define como el nmero de

colonias de los microorganismos

interferentes no buscados en superficie del medio selectivo sobre el nmero de

colonias de los microorganismos interferentes no buscados en superficie del medio
control. Esta se evala en el medio de prueba con el microorganismo interferente. El
ICA del medio evaluado con el microorganismo interferente no debe ser mayor de 2 y
se pueden obtener los siguientes resultados: ICA = 0: Medios Altamente selectivos;
ICA = 0-2: Medios medianamente selectivos; ICA = Mayor De 2: Medios no selectivos
(Mosell, 2003).

Tecn. de Azcar y Derivados.

27

FIQIA - UNPRG

4. RECOMENDACIONES

Evaluar el medio melaza con adicin de fuentes de nitrgeno como Urea, Fosfato y
Sulfato de Amonio a la melaza de caa para optimizar la produccin de biomasa en

fermentaciones a mayor escala debido a su bajo porcentaje de nitrgeno.

Evaluar la produccin de biomasa con niveles de oxgeno diferentes a 1vvm en medio

melaza.
Evaluar diferentes tratamientos para la utilizacin de la melaza como la clarificacin y
floculacin para retirar la mayor cantidad de slidos suspendidos y proporcionar un

medio de fermentacin menos turbio.

Utilizar tcnicas ms exactas como la cromatografa lquida de alta resolucin HPLC
para la determinacin del contenido de azcares totales en la melaza de caa, ya que
por mtodos convencionales como la hidrlisis de la sacarosa se puede ver afectado

por el color del medio y por la manipulacin de las muestras.

Evaluar la capacidad probitica con pruebas como la tolerancia a sales biliares, el
crecimiento a diferentes pH, diferentes temperaturas, adherencia frente a patgenos y
prueba de antagonismo con la biomasa de Saccharomyces cerevisiae obtenida a partir
de una concentracin de 20% de melaza.

Tecn. de Azcar y Derivados.

28

FIQIA - UNPRG

5. BIBLIOGRAFA

Glinas, P., J. Barrette, 2007. Protein enrichment of potato processing waste through

yeast fermentation. Bioresource Technology 98, 1138- 1143.

Ghl, B. 1991. Tropical feeds. FAO/Oxford Computer Journals LTD, Ver 1.7.
Hernndez Muoz A. 1998. Microbiologa, Editorial Paraninfo, cuarta edicin, Madrid

Espaa, p.576.
Israelidis, C. 2003.

Nutrition

http://www.biopolitics.gr/

Single

cell

protein,

HTML/PUBS/VOL1/isreali.htm

twenty

Jaimez,

J.

years

later.

A.

1996.

Enriquecimiento proteico de la cascara y bagazo de naranja por Candida utilis para la

alimentacin de Ganado lechero.

Tesis de licenciatura Universidad de las Amricas-Puebla. Mxico. Kondo, K., Y. Miura,
H. Sone, K. Kobayashi, , H. Iijima, 1997. High level expression of a sweet protein,

monellin, in the food yeast Candida utilis. Nature Biotechnol. 15, 453457.
Laskin, A. L. 1997. Single-cell protein. D. Perlman (Editor). Annual Reports on

Fermentation Process. I (7):151-175.

Leveau. J., Bovix. M. 2000. Los microorganismos de inters industrial. Acribia

Zaragoza. Espa-a. 608 pp.

Liang, G., X. Liao, G. Du, J. Chen, 2008. A new strategy to enhance glutathione
production by multiple H2O2-induced oxidative stressesin Candida utilis. Bioresour.

Technol. 100,350355.
Lucca, M. E., M. E. Romero, D. Callieri, 1995. Contiunuos cultura of Candida utilis:
Influence of medium nitrogen concentration. World Journal of Microbiology &
Biotecnology: 11, 515-519.

Tecn. de Azcar y Derivados.

29