Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Qa 2015 Proteinas Metodos PDF
Qa 2015 Proteinas Metodos PDF
TECNOLOGA
DE LOS ALIMENTOS
QUMICA
DE LOS ALIMENTOS
de la CANTIDAD DE
de
NITRGENO
TOTAL
aminocidos
i id
libres,
lib
pptidos
tid
pequeos,
cidos
nucleicos,
fosfolpidos aminoazcares,
fosfolpidos,
aminoazcares porfirina,
porfirina
algunas vitaminas, alcaloides, cido
rico, urea, iones amonio, etc.
Otras
Mtodo de Kjeldahl
j
Es
una
la
Mtodo de Kjeldahl
j
FUNDAMENTO
Posteriormente
el sulfato de amonio se
descompone
por
ALCALINIZACIN
con
hidrxido de sodio y DESTILACIN del
amonaco liberado captndolo en una solucin
cida.
Finalmente
del amonaco.
amonaco
Mtodo de Kjeldahl
j
Los elementos
L
l
carbono
b
e hidrgeno
hid
se
convierten en dixido de carbono y agua.
Durante
Esta
determinacin
incluye
todo
el
nitrgeno reducido presente (-NH2 y =NH),
de modo que los compuestos amoniacales,
urea y aminocidos libres son tambin
valorados.
valorados
Mtodo de Kjeldahl
j
ECUACIONES
Digestin:
n-C-NH2 + mH2SO4 + catalizadores
Neutralizacin y destilacin
(NH4)2SO4 + 2 NaOH
NH3 + H3BO3
Titulacin
H2BO3- + H+
H3BO3
Mtodo de Kjeldahl
j
UN POCO DE HISTORIA
El
sufriendo
Wilforth (1885)
Gunning (1889)
Arnold
Winkler
luego
Mtodo de Kjeldahl
UN POCO DE HISTORIA
Las
modificaciones
df
d l mtodo
del
d que han
h
resultado ms tiles emplean:
Mtodo de Kjeldahl
j
UN POCO DE HISTORIA
Cuando
titulando posteriormente
NaOH valorado.
valorado
su
exceso
con
Mtodo de Kjeldahl
j
UN POCO DE HISTORIA
La
Ventajas:
Mtodo de Kjeldahl
j
ESQUEMTICAMENTE
Mtodo de Kjeldahl
j
ESQUEMTICAMENTE
Mtodo de Kjeldahl
j
UNIDADES DE DIGESTIN Y DESTILACIN
Mtodo de Kjeldahl
j
ALGUNOS EQUIPOS
Los
equipos
p
mas modernos vienen con un
sistema
de
EXTRACCIN
Y
NEUTRALIZACIN DE GASES:
Mtodo de Kjeldahl
j
UNIDADES DE DIGESTIN, SCRUBBER Y BOMBA
Mtodo de Kjeldahl
j
DESTILADORES
Mtodo de Kjeldahl
j
DESTILADORES Y TITULADORES
Mtodo de Kjeldahl
VENTAJAS DEL MTODO
Apropiado
productos.
d
para
Alta confiabilidad.
Usado como mtodo
varios
tipos
de
de referencia.
Interfieren
proteicos.
proteicos
compuestos nitrogenados no
Mtodo de Kjeldahl
j
FACTOR DE CONVERSIN
El
El
Este
As,
As
Mtodo de Kjeldahl
j
FACTOR DE CONVERSIN
Actualmente
se conoce el contenido de N, y
por lo tanto el factor apropiado,
apropiado de una gran
cantidad de productos agrcolas.
Debido
bd
a lla confusin
f que podra
d derivarse
d
del hecho de utilizar el factor general de
conversin 6,25
6 25 o el especfico para la
protena en estudio
Mtodo de Kjeldahl
j
FACTOR DE CONVERSIN
Mtodo de Kjeldahl
j
ECUACIONES
Digestin:
n-C-NH2 + mH2SO4 + catalizadores
Neutralizacin y destilacin
(NH4)2SO4 + 2 NaOH
NH3 + H3BO3
Titulacin
H2BO3- + H+
H3BO3
Mtodo de Kjeldahl
j
CLCULOS
%N = V x N x 14 x 100
1000
p
%N = V x N x 0,014 x 100
p
V: mL de cido
N: normalidad del cido
P: gramos de muestra
,
equivalente
q
volumtrico del N
0,014:
Mtodo de Kjeldahl
j
Mtodo de Kjeldahl/Berthelot
Este mtodo
E
d combina
b
l d
la
digestin
hmeda
h d
del mtodo de Kjeldahl con la reaccin
colorimtrica de Bethelot.
Bethelot
Mtodo de Kjeldahl
j
Mtodo de Kjeldahl
j
/Berthelot
amonio.
Otros mtodos
m
Los alimentos son una matriz compleja
p j
por lo que se sugiere que estos mtodos
empricos
p
e indirectos sean calibrados con
el mtodo de Kjeldahl.
cuando la
l
relacin
l
N no
proteico/N proteico es baja y constante.
Son
satisfactorios
para
leche
y
cereales
l
e insatisfactorios
i
ti f t i
para la
l
mayora de los vegetales y mezclas de
alimentos.
alimentos
Otros mtodos
m
Mtodo de absorbancia a 280 nm
Otros mtodos
m
Mtodo de absorbancia a 280 nm
Es un mtodo
E
d
destructivo.
simple,
l
rpido
d
no
Es
un
mtodo
directo
para
la
determinacin
de
protenas
que
puede
aplicarse
li
en algunos
l
sistemas
i t
alimenticios.
li
ti i
Es necesaria la
protena estndar.
Generalmente
calibracin
con
una
que sirvan de
d
referencia
f
para
cuantificar otras protenas, que sern ms
precisas mientras la protena en cuestin
se parezca ms a la BSA.
Otros mtodos
m
Mtodo de absorbancia a 280 nm
La
solucin
l debe
d b ser clara
l
e incolora,
l
l
la
turbidez puede afectar los resultados.
Los
Otros mtodos
m
Mtodo de Biuret
Comprende
un ensayo colorimtrico de un
paso donde se cuantifica la formacin de un
p j estable entre p
protenas y cobre ((II))
complejo
de configuracin desconocida.
El
El
Otros mtodos
m
Mtodo de Biuret
Otros mtodos
m
Mtodo de Biuret
Otros mtodos
m
Mtodo de Biuret
Es rpido,
rpido simple y no detecta nitrgeno de
fuentes no proteicas o no peptdicas.
Altas
concentraciones de carbohidratos,
carbohidratos
lpidos pueden causar opalescencia en la solucin
f
final.
.
Otros mtodos
m
Mtodo de Lowry
El
mtodo
t d de
d Lowry
L
combina
bi
l reaccin
la
i de
d
Biuret con la reduccin del reactivo de FolinCiocalteu (cidos fosfomolbdico y fosfotngstico)
por la oxidacin de tirosina, triptofano, cistena,
cistina de las cadenas polipeptdicas (Nielsen,
1988).
1988)
El
Los
Este
E
t mtodo
t d es til para determinar
d t
i
pequeas
El
desarrollo
d
ll de
d color
l
es dependiente
d
di t del
d l pH,
H
que se debe mantener entre 10 y 10.5.
Otros mtodos
m
Mtodo de Lowry
Otros mtodos
m
Mtodo de Lowry
Tiene
Biuret.
La
La
L
iintensidad
t
id d del
d l color
l
no es estrictamente
t i t
t
proporcional a la concentracin de protena.
Los
Es
Es
afectado p
por la presencia
p
de azcares
reductores al igual que el mtodo de Biuret.
Otros mtodos
m
Mtodos de adhesin de colorante
Al
Comnmente
se usan colorantes
cuales reaccionan a pH cido con el
d la
de
l lisina
li i
y ell grupo guanidina
idi
d
de
imidazol de la histidina y un nmero
amino
am
n tterminales.
rm na .
Pueden
adherirse colorantes
CATINICOS
N
((BRADFORD).
DF D).
sulfonados los
grupo -amino
l arginina,
la
i i
ell
limitado de -
ANINICOS
Otros mtodos
m
Mtodos de adhesin de colorante aninico
El
El
El
Algunos
Otros mtodos
m
Mtodo de Bradford
Se
Las
Este
Entre
E
No
Otros mtodos
m
Mtodo de Bradford
Los
El
Esto
Otros mtodos
m
Mtodo de Bradford
Otros mtodos
m
Espectroscopia infrarroja
Se
Ventajas:
Es
un mtodo
multicomponentes
No
rpido
rpido,
anlisis
destructivo
destructivo.
Desventajas
Interferido por agua.
Proceso de calibracin
complejo
complejo.
de
Otros mtodos
m
Espectroscopia infrarroja reflectante
La muestra se ilumina
l
con seis longitudes
l
d
de onda cercanas a la radiacin infrarroja y
se detecta la luz reflejada.
reflejada
Consideracin
Es necesaria
la calibracin contra un
conjunto de muestras estadsticamente
significativas, analizadas por mtodos de
referencia tradicionales.
Ventajas
Rpido,
Rpido anlisis de multicomponentes.
multicomponentes
Aplicable a materiales slidos.
Cuantifica protena en presencia
agua.
de
Determinacin
m
de la secuencia de
aminocidos
La
L
d t mi
determinacin
i
d
de
l
la
composicin
m
i i
proporciona
protena.
protena
una
informacin
sobre
una
secuenciacin
i i de
d la
l cadena
d
polipeptdica
li
tdi
en
equipos
automatizados
llamados
secuenciadores de protenas.
protenas
Determinacin
m
de la secuencia de
aminocidos
Por
P
ell tamao
t m
d
de
l
las
m l l
molculas,
se
La
Se
Determinacin
m
de la secuencia de
aminocidos
Pehr
P h Edman
Edm
d
descubri
b i una secuencia
i de
d
reacciones que permiten identificar los Nterminales y que al realizarse repetidamente
permiten identificar la secuencia completa de
los p
polipptidos
p p
en cuestin.
El
El
conocimiento de la secuencia de
protenas es cada vez ms necesario para
identificar la presencia de variantes naturales
a la luz de los nuevos alimentos de origen
transgnico.
Determinacin
m
de protenas
p
por
p
electroforesis
Pueden
P d
realizarse
li
electroforesis
l t f
i
en
condiciones nativas en las que las protenas
migran
conservando
su
diversidad
y
propiedades fsicas, especialmente su punto
isoelctrico y p
peso molecular.
Es
Una
Determinacin
m
de protenas
p
por
p
electroforesis
La
L
PAGE puede
d
ll
llevarse
a cabo
b
en
condiciones denaturalizantes si se utilizan
tiol-reductores fuertes como mercaptoetanol
y ditiotreitol (DTT) y un detergente
desnaturalizante fuerte: el dodecil sulfato de
sodio (SDS).
El
Determinacin
m
de protenas
p
por
p
electroforesis
Las
L
tcnicas
t
i
2D permiten
mit
una segunda
d
separacin que discrimina protenas que en 1D
se traslapan,
traslapan
por ejemplo,
ejemplo
cuando son
especies moleculares mltiples, aun cuando se
trate de p
protenas p
purificadas.
Para
Esta
Determinacin
m
de protenas
p
por
p
electroforesis
Las
L
tcnicas
t
i
2D permiten
mit
una segunda
d
separacin que discrimina protenas que en 1D
se traslapan,
traslapan
por ejemplo,
ejemplo
cuando son
especies moleculares mltiples, aun cuando se
trate de p
protenas p
purificadas.
Para
Esta