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Higiene PDF
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A
Higiene
Parecera innecesario sealar la importancia que tiene el manejo sanitario de los
alimentos. Se sabe bien que cada ao ocurren miles de casos de infecciones,
intoxicaciones o toxiinfecciones, transmitidas por ellos y que una proporcin
considerable tiene un desenlace fatal. Estos problemas de salud causan tambin
prdidas econmicas por ausentismo e incremento en el costo de los servicios de
atencin mdica. Todo esto sucede debido a que, a pesar de los esfuerzos
desarrollados por las autoridades de los servicios de salud, todava hay volmenes
considerables de productos alimenticios que llegan al consumidor contaminados a
causa de un manejo deficiente.
El saneamiento de los alimentos significa eliminar o controlar en forma efectiva los
microorganismos presentes en ellos y en todo aquello con lo que entren en contacto.
La presencia numerosa de bacterias indica que algo no se hizo bien al prepararlos o
sea, que se manipularon deficientemente.
Pero la higiene en su manejo depende no solamente de la legislacin al respecto o del
equipo utilizado. El papel que desempean quienes preparan y quienes sirven
alimentos continuar siendo de gran responsabilidad, pues actan directamente sobre
el aparato digestivo de millones de consumidores. Ambos influyen decisivamente en
el grado de salud pblica de un pas.
La inocuidad de los alimentos, es producto de muchas acciones directas e indirectas,
dentro de las cuales los aspectos relativos al manejo higinico, as como el monitoreo
a travs del muestreo y anlisis tanto de superficies vivas e inertes como del
ambiente, son de suma importancia. La tendencia actual en la industria transformadora
de los alimentos, es implementar planes y programas de anlisis de riesgos y puntos
crticos de control (siglas en ingls HACCP), y es requisito entrenar a los obreros en
buenas prcticas de limpieza e higiene, e instruir un sistema de monitoreo para
asegurarse de que se estn siguiendo las instrucciones para reducir el riesgo de
contaminacin. El HACCP es un enfoque moderno cuya pretensin primaria consiste
en eliminar de los alimentos los riesgos a la salud asociados a su consumo. Por lo
tanto es de suma importancia el conocer metodologas analticas adecuadas para
efectuar (o bien solicitar a laboratorios de apoyo) el anlisis de superficies inertes,
vivas y medio ambiente y, con base en los resultados analticos, conocer las
condiciones de operacin reales que prevalecen en la industria. El anlisis de estos
resultados permitir mantener o bien emitir e implementar medidas correctivas
oportunas cuya finalidad es la obtencin de productos alimenticios dentro de
estndares de calidad y seguridad alimentaria.
A continuacin se presenta el significado de algunos trminos en el tema del manejo
higinico de los alimentos:
a. Contaminacin cruzada: Proceso por el que los microorganismos son trasladados
por medio de personas, equipos, materiales, de una zona sucia o contaminada a
una zona limpia.
b. Contaminacin: Es la presencia de cualquier material extrao en los productos
alimenticios que origina que sean inadecuados para el consumo.
c. Control de calidad: Significa un procedimiento planificado y sistemtico para tomar
todas las acciones necesarias para prevenir que los alimentos sean adulterados
i
Referencias:
Pascual, M. R & Caldern, V. (2000). Microbiologa Alimentaria. Metodologa
analtica para alimentos y bebidas. 2. Ed. Diaz de Santos. Madrid, Espaa.
Marshall, R. T. (1992) Standard methods for the examination of Dairy Products.
American Public Health Association. Copyright, Washington, D. C.
(1972). Tcnicas sanitarias en el manejo de los alimentos. ed. Pax-Mxico. Mxico,
D. F.
Harrigan, W. F. & Park, R. W. A. ((1991). Making safe food: A management guide
for microbiological quality. Academic Press. U.K.
Norma Oficial Mexicana NOM-093-SSA1-1994. Bienes y Servicios. Prcticas de
Higiene y Sanidad en la preparacin de alimentos que se ofrecen en establecimientos
fijos.
Norma Mexicana NMX-F.605-NORMEX-2000. Alimentos Manejo Higinico en el
Servicio de Alimentos Preparados para la Obtencin del Distintivo H.
Norma Oficial Mexicana NOM-120-SSA1-1994. Bienes y Servicios. Prctias de
Higiene para el Proceso de alimentos, bebidas no alcohlicas y alcohlicas.
ii
Objetivos:
Ejercicio:
1. Con base en bibliografa, qu grupo o grupos de microorganismos se sugiere
analizar en las superficies que estarn en contacto durante el proceso del
alimento que se le asign.
2. Cules son los lmites o especificaciones microbiolgicas recomendadas en
bibliografa especializada para considerar una superficie apta para manejar
higinicamente el alimento?
3. Y para considerar un ambiente limpio para manejar higinicamente el
alimento?
4. A qu nicho de consumidores se recomendara la utilizacin de las sustancias
desinfectantes y por qu?.
5. Qu medidas propone para disminuir la carga microbiana de un ambiente que
ponga en riesgo la calidad higinica del alimento?
6. Qu otras tcnicas conoce para realizar el anlisis de superficies?
7. Los resultados obtenidos concuerdan con lo que usted esperaba? Explique.
iii
OBJETIVO.
Este procedimiento proporciona las reglas para la toma y anlisis de superficies inertes
por los mtodos del hisopo, esponja, enjuague total y placa por contacto Rodac.
GENERALIDADES.
La higiene los alimentos implica una variedad de acciones, entre las cuales, el evitar
la contaminacin ocupa lugar relevante. Cada fuente de contaminacin que puede
actuar sobre los alimentos presenta sus propias peculiaridades y por ello requiere de
mtodos especiales para lograr su control. As ocurre con el agua, los manipuladores,
equipo, envases, superficies de trabajo, etc.
En el caso del equipo, ste puede ser un vehculo pasivo de microorganismos, o
puede constituirse en la base material sobre la cual, debido a un aseo deficiente,
entren en actividad y lleguen a introducirse, por millares, en el alimento.
La calidad sanitaria de los alimentos, depende de la materia prima utilizada en su
preparacin y de las condiciones higinicas en que han sido elaborados, manejados y
conservados, incluyendo todas las superficies que estn en contacto con ellos.
Dinero y esfuerzo invertido en una planta para seleccionar materias primas e instalar
equipo costoso, pueden perderse si la limpieza y desinfeccin en general, y
especficamente en los puntos crticos, no se realiza adecuadamente y/o si no se
evala su eficiencia correctamente.
Existen procesos de lavado y desinfeccin, que utilizan sustancias y condiciones de
tratamiento propios para cada necesidad, en las distintas ramas de la industria de
alimentos. Cuando las normas o recomendaciones para su aplicacin se siguen con
acierto, los resultados son claramente satisfactorios. El establecimiento de sistemas
de higiene (lavado y sanitizacin) adecuados del equipo, debidamente programados y
en manos de personal responsable y adiestrado, debieran ser una exigencia, motivo
de supervisin especial, dentro de cada industria y por parte de la autoridad sanitaria
competente. El laboratorio proporciona un valioso recurso que permite evaluar
satisfactoriamente la eficiencia de estos procesos. Para evaluar la eficiencia de la
limpieza y saneamiento de las superficies, se han desarrollado mtodos y propuesto
normas basadas en el nmero total de microorganismos por unidad de superficie.
Existen muchos mtodos para tal efecto, el recuento de microorganismos viables en el
equipo tratado es sencillo y confiable, aunque necesariamente requiere de tiempo para
disponer de los resultados.
Los mtodos pueden aplicarse ya sea para buscar microorganismos indicadores, o un
gnero especial, cuando se trate de un problema particular.
Existen varios procedimientos, dentro de los cuales describiremos los ms usuales:
PROCEDIMIENTO
iv
Fuente: Norma Oficial Mexicana NOM-093-SSA1-1994. Prcticas de Higiene y Sanidad en la preparacin de alimentos
que se ofrecen en establecimientos fijos.
MATERIAL
Tubos con tapn de rosca conteniendo 10,0 mL de solucin diluyente.
Hisopos estriles en sobres de papel manila o tubos de ensayo. Se pueden
conseguir en forma comercial.
Plantillas de papel aluminio de 12,0 cm por lado con un cuadro de 5,0 x 5,0 cm
recontado en el centro y esterilizadas dentro de papel manila.
TOMA DE LA MUESTRA.
Muestreo de superficies.
Colocar la plantilla o bien delimitar un rea aproximada de 5,0 x 5,0 cm 10,0 x 10,0
cm sobre la superficie que se va a muestrear. Sacar el hisopo aspticamente.
Si la superficie est seca, humedecer el hisopo en la solucin diluyente y presionar
contra la pared del frasco o tubo con un movimiento de rotacin para quitar el exceso
de lquido, en caso contrario no es necesario hacer esto.
Con el hisopo inclinado, frotar la superficie delimitada por la plantilla en 3 sentidos
diferentes (horizontal, vertical y oblicuo). Regresar el hisopo al tubo o frasco y romper
la parte que estuvo en contacto con los dedos.
Este mtodo tambin puede utilizarse para buscar patgenos, substituyendo la
solucin diluyente por el caldo de cultivo adecuado.
Muestreo de utensilios de comedor.
Utilizar tubos con l0,0 mL. Tomar un hisopo, mojarlo en la solucin diluyente y exprimir
el exceso de lquido sobre la pared del tubo. Tomar la muestra del utensilio con el
hisopo tratando de tomar de la superficie que est en contacto con el alimento o con la
boca. Regresar el hisopo al tubo y romper la parte que estuvo en contacto con los
dedos. Una vez tomada la muestra, se procede a hacer el recuento, por el mtodo
ms adecuado, generalmente cuenta en placa, con los medios de cultivo
recomendados para el grupo bajo estudio.
v
Calidad
bien
regular
pobre
ix
Medios de Cultivo
Agua Peptonada
Peptona
Cloruro de sodio
Agua destilada
1,0 g
8,5 g
1,0 L
7,0 g
3,0 g
5,0 g
10,0 g
1,5 g
0,03 g
0,002 g
13,0 g
1,0 L
La bilis de buey que contiene una mezcla de sales biliares y que se encuentra
en el medio, inhibe el desarrollo de bacterias Gram positivas, permitiendo el
desarrollo de bacterias coliformes cuyo Gram es negativo. Las sales biliares se
presentan como derivados del cido clico y desoxiclico, su estructura
qumica bsica es la del ciclo pentano perhidrofenantreno.
Mtodos Estndar para, agar
Peptona de casena
Extracto de levadura
Dextrosa
Agar
x
5,0 g
2,5 g
1,0 g
15,0 g
Agua destilada
1,0 L
Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada, calentar hasta ebullicin para
disolver por completo y ajustar el pH a 7,0 0,2 a 25C. Distribuir en tubos de ensayo
con tapn de rosca o en un matraz, despus esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Enfriar a 45-50C y vaciar en cajas Petri. Puede volverse a fundir una sola vez cuando
se necesite.
Principio de accin
La peptona de casena proporciona aminocidos y otras sustancias nitrogenadas
complejas necesarias para el crecimiento bacteriano. El extracto de levadura
proporciona vitaminas del complejo B y la dextrosa es utilizada por los
microorganismos como la fuente de carbono y energa. Es un medio general por lo que
no contiene inhibidores.
Papa dextrosa agar
Infusin de papa, (a partir de 200g de papa)
Dextrosa
Agar
Agua destilada
4,0 g
20,0 g
15,0 g
1,0 L
xi
Se pueden
PROCEDIMIENTO
a) METODO DEL HISOPO.
Esta tcnica se puede utilizar en superficies que sean regulares, lisas, pulidas.
Consiste en frotar un aplicador de madera u otro material de algodn (hisopo) estril,
humedecido con la solucin diluyente que recoge la flora microbiana en un rea
determinada para finalmente suspenderla en el diluyente.
Siguiendo las instrucciones del mtodo y contando con el siguiente valor normativo,
NOM-093-SSA1-1993. Prcticas de higiene y sanidad en la preparacin de alimentos
que se ofrecen en establecimientos fijos.
a) Manos de personal
Cuenta total de Mesoflicos aerobios
xiii
VENTAJAS
HIPOCLORITO
(oxidacin de enzimas esenciales
IODOFOROS
(inactivacin de protenas
por iodinacin)
-
SALES CUATERNARIAS
DE AMONIO
(Tenso activo, rompe
membrana
celular,
inactiva enzimas
xv
DESVENTAJAS
Barato
Fciles de aplicar en
pequeas cantidades
Se
usa
en
concentracin de 10
ppm
Tiempo de exposicin
corto (2 min 100 ppm)
Acta contra esporas
Compatible
con
detergentes aninicos
Se usa en contraccin
de 200 ppm
No presenta olor ni
sabor
No mancha
No son irritantes
Tienen
cualidades
humectantes
y
de
penetracin
Acta sobre bacterias,
hongos y virus
Esta incorporado a un
detergente tensoactivo
aninico no inico o
catinico
Es corrosivo
Se inactiva por materia
orgnica
Deja olor y sabor
desagradable
No
actan
contra
esporas bacterianas
Ms claro que el
hipoclorito.
Se inactiva por materia
orgnica
Actividad
antibacteriana limitada
No es efectivo contra
esporas ni muchos
virus
Es neutralizado por
jabones
Pueden
crecer
microorganismos en l
Deja
pelcula
en
superficies
OBJETIVOS:
Conocer la accin de los agentes destinados para la limpieza y desinfeccin de
equipo, utensilios, superficies, etc., en una planta procesadora de alimentos.
Evaluar la accin de los agentes destinados para lavado y/o desinfeccin de frutas y
verduras.
Conocer tcnicas utilizadas para evaluar la eficiencia de los desinfectantes.
Evaluar la accin de procesos de lavado y/o sanitizacin o combinacin de ellos.
PROCEDIMIENTO:
Cortar la cantidad necesaria para efectuar evaluaciones de una verdura o fruta cruda
sucia, lavada, desinfectada o combinaciones de estas condiciones. Aproximadamente
50,0 g. Utilizar coladera, tabla y un cuchillo limpio para realizar estas operaciones.
1. PRODUCTO SUCIO (sin lavar ni desinfectar)
Tomar 10,0 g de la verdura o fruta cruda y sucia y colocar en un frasco de dilucin con
90,0 mL de solucin diluyente (dilucin 10 1) practicar diluciones hasta 10-4 o las que
el tcnico analista juzgue convenientes, en tubos con 9,0 mL de solucin diluyente.
Para cada dilucin tomar alcuotas de 1,0 mL, depositar en tantas placas de petri como
grupos de microorganismos se quiera determinar y verter el medio de cultivo fundido y
enfriado segn corresponda.
Sugerido: Probar diluciones 10 1 a10 4 para la cuenta total de mesoflicos aerobios y
10 1 a10 3 para coliformes totales.
2. PRODUCTO LAVADO
Depositar 10,0 g de la verdura o fruta cruda y sucia en una coladera y lavarla con una
solucin jabonosa preparada con detergente en polvo o lquido, enjuagar con
suficiente agua del grifo y depositar los 10,0 g de la verdura o fruta (lavada) en un
matraz con 90,0 mL de solucin diluyente (dilucin 10-1) y realizar diluciones hasta 10-3
o las diluciones que el tcnico analista juzgue adecuadas, en tubos con 9,0 mL de
solucin diluyente. Para cada dilucin tomar alcuotas de 1,0 mL, depositar en tantas
placas de petri como grupos de microorganismos se requiera determinar y verter el
medio de cultivo fundido y enfriado segn corresponda.
Sugerido: Probar diluciones 10 1 a10 3 para la cuenta total de mesoflicos aerobios y
10 1 a10 2 para coliformes totales.
3. PRODUCTO LAVADO Y DESINFECTADO
Preparar un desinfectante comercial en cantidad y tiempo de acuerdo con las
indicaciones del producto. Sumergir 10,0 g de la verdura o fruta cruda lavada.
Procedimiento.- Escurrir la solucin diluyente del matraz 10-1 de la verdura o fruta
(producto lavado) del paso anterior. Sumergir en la solucin desinfectante durante el
tiempo indicado en el marbete del producto. Escurrir los 10,0 g (lavados y
desinfectados) y adicionar nuevamente 90,0 mL de solucin diluyente (diluyente 10-1) y
realizar diluciones hasta 10-2 o las diluciones que el tcnico analista juzgue adecuadas,
en tubos con 9,0 mL de solucin diluyente. Para cada dilucin tomar alcuotas de 1,0
mL, depositar en tantas placas de petri como grupos de microorganismos se requiera
determinar y verter el medio de cultivo fundido y enfriado segn corresponda.
Sugerido: Probar diluciones 10 1 a10 2 para la cuenta total de mesoflicos aerobios y
10 1 para coliformes totales.
PRODUCTO DESINFECTADO (sin lavar)
Preparar el desinfectante comercial en cantidad y tiempo de acuerdo con las
indicaciones del producto. Sumergir 10,0 g de la verdura o fruta cruda sucia.
Procedimiento.- Sumergir 10,0 g de la verdura o fruta sucia en una solucin
desinfectante durante el tiempo indicado en el marbete del producto. Escurrir los 10,0
xvi
g (desinfectados) y adicionar nuevamente 90,0 mL de solucin diluyente (diluyente 10) y realizar diluciones hasta 10-3 o las diluciones que el tcnico analista juzgue
adecuadas, en tubos con 9,0 mL de solucin diluyente. Para cada dilucin tomar
alcuotas de 1,0 mL, depositar en tantas placas de petri como grupos de
microorganismos se requiera determinar y verter el medio de cultivo fundido y enfriado
segn corresponda.
Sugerido: Probar diluciones 10 1 a10 3 para la cuenta total de mesoflicos aerobios y
10 1 a 10 2 para coliformes totales.
NOTA: En cada uno de los casos (sucia, lavada, desinfectada y/o lavada y
desinfectada) se utilizarn las diluciones adecuadas segn la experiencia del tcnico
analista, empleando los medios correspondientes para cada uno de los grupos
estudiados, y adems se pueden realizar las combinaciones que se requieran, es
decir, evaluar el desinfectante sobre la superficie o el producto mismo, habiendo
previamente lavado o no o las condiciones seleccionadas.
INCUBACION
Mesfilos aerobios-Agar cuenta estndar. Incubar a 35 2/48 2 h.
Organismos coliformes totales-Agar bilis y rojo violeta. Aadir doble capa una vez
solidificada la primera capa. Incubar a 35 2 /24 2 h.
Hongos y levaduras Agar papa dextrosa acidificado. Incubar a 26 2/3-5 das.
Incubar a la temperatura y tiempos sealados para cada uno de los grupos
microbianos.
INTERPRETACIN
Al finalizar el tiempo de incubacin, realizar los recuentos para obtener el % de
reduccin o efectividad.
Interpretacin: el producto debe cumplir con el valor de efectividad de 99,0 y 99.9% de
reduccin en el tiempo de contacto, dosis y bajo las recomendaciones descritas en el
marbete de cada producto.
EXPRESIN Y CLCULO DE RESULTADOS.
Utilizar la siguiente frmula para expresar el % de reduccin en cada una de las
etapas, sucia, lavada, desinfectada y/o lavada/desinfectada:
% de Reduccin = 100 B x 100
A
A = Cuenta inicial
B = Cuenta final obtenida
Ejemplo 1:
Cuenta total de mesoflicos aerobios:
Cuenta inicial (sucia)
90 x 104 UFC/g
:Con solucin desinfectante
cuenta obtenida (desinfectada)
8 x 102 UFC/g
70 x 103 UFC/g
Lavada y desinfectada:
cuenta obtenida (lavada y desinfectada)
10 UFC/g
xviii
xix
Lmite permitido
Mesoflicos aerobios
Coliformes totales
Hongos y levaduras
15 UFC/m3
0 UFC/ m3
3
15 UFC/m (para la sumatoria de ambos
cmputos)
BIBLIOGRAFIA
Manual of Food Quality Control. 12. Quality Assurance in the Food Control
Microbiological Laboratory. FAO.- Rome, 1991.
Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 16 th Ed. (1992). Robert T.
Marshall, Ph D, Editor. APHA, Washington D. C.
Garanta de Calidad de los Laboratorios de Microbiologa Alimentaria. Organizacin
Panamericana de la Salud. Organizacin Mundial de la Salud. Yolanda Ortega
Dvalos. Fernando Quevedo. Copyright 1991. Mxico, D. F.
xx
OBJETIVO
El mtodo se basa en determinar el porcentaje de reduccin de un nmero
determinado de microorganismos, cuando se pone en contacto con un germicida bajo
condiciones de pruebas especficas.
MATERIAL
MICROORGANISMOS DE PRUEBA
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 6538
ATCC 11229
ATCC 15442-2
PROCEDIMIENTO
1. Conservacin y preparacin de los microorganismos de prueba.
Conservar las cepas del microorganismo, resembrndolas quincenalmente en tubos
de 16,0 x 125,0 mm de agar nutritivo inclinado.
Incubar a una temperatura de 35-37 C por un periodo de 20-24 horas.
Posteriormente mantener los cultivos en refrigeracin.
Antes de realizar la prueba, efectuar 2 resiembras diarias consecutivas, incubando en
las condiciones indicadas anteriormente.
A partir de estos cultivos, resembrar 5 tubos de 22 x 175mm que contengan 12,0 mL
de agar nutritivo inclinado e incubar bajo las condiciones antes sealadas. Recuperar
xxi
el crecimiento de cada tubo con 1,5 mL de solucin salina estril 0,85 % y estandarizar
la suspensin en condiciones aspticas al 9,0% de transmitancia a 580,0 nm 10,0%
de transmitancia a 650,0nm para obtener un promedio de cuenta bacteriana de 10,2 x
109 UFC/mL.
Verificar por cuenta en placa, conservando la suspensin original en refrigeracin.
2. Preparacin de la muestra.
Usar el producto a la concentracin sealada por el fabricante (directo o diluido).
Medir exactamente y por duplicado 99,0 mL del producto o su dilucin.
Transferir a un matraz Erlenmeyer de 250,0 mL, estril con tapn de rosca.
Preparar otros 2 matraces con solucin reguladora de fosfatos diluida estril, los
cuales se emplean para determinar el nmero inicial de microorganismos: (Matraz con
99,0 mL (solucin reguladora de fosfatos) + 1,0 mL de cultivo estandarizado (10,2 x
109 UFC/mL= 75-125 x 106 UFC/mL) = Control Cuenta Inicial.
3. Inoculacin.
Agitar el matraz y suspender la agitacin justamente antes de la inoculacin para que
en el momento de la misma, an exista un movimiento residual y as facilitar la
incorporacin del inculo.
Inocular individualmente 1,0 mL de la suspensin del microorganismo en el centro y
sobre la superficie del lquido, evitando tocar con la pipeta el cuello o las paredes del
matraz durante la inoculacin.
Agitar y exactamente a los 30 segundos de la inoculacin, transferir 1,0 mL del cultivo
expuesto a 9 mL de la solucin neutralizante; mezclar y transferir alicuotas de 1,0 mL y
0,1 a cajas petri estriles por dulicado agregar de 12,0-15,0 mL de medio agar para
mtodos estndar con neutralizador (C).
Homogeneizar, solidificar, invertir e incubar las placas durante 48 horas a 35-37 C.
4. Determinacin de la cuenta inicial.
Transferir 1,0 mL de la suspensin microbiana (1,.2 x 109) a 99,0 mL de la solucin
amortiguadora de fosfatos diluida y efectuar una lectura de 580,0 nm esperando que
d 9,0 % y a 680,0 d 10,0 % .
Hacer las diluciones decimales necesarias para obtener placas que contengan entre
30 y 300 colonias por placa de la dilucin inicial (1:100) hacer diluciones 1:99 (aprox.).
Colocar alcuotas de 1,0 mL por duplicado de cada dilucin en cajas de petri estriles y
de la ltima dilucin, transferir alcuotas de 1,0mL y 0,10 mL por duplicado.
Agregar 12,0-15,0 mL de agar para mtodos estndares solidificar.
Invertir e incubar las placas 48 horas a 35-37C.
Despus del periodo de incubacin de todas las placas (control de inculo y del
producto), contar las UFC y ver el por ciento de reduccin del producto. Para que la
prueba sea vlida, el nmero de microorganismos en la suspensin del matraz 1:100,
debe estar entre 75 y 125 x 106 UFC/mL.
Para muestras que se analicen cada da, deben correrse paralelamente con un testigo
del inculo en igualdad de condiciones.
5. Interpretacin.
El producto debe cumplir con el valor de efectividad de 99,0 y 99.9,0 % de reduccin a
los 30 segundos de contacto.
xxii
EXPRESIN DE RESULTADOS.
% de Reduccin = 100 - B x 100
A
En donde,
A = Cuenta inicial
B = Cuenta obtenida
Ejemplo 1:
S aureus
En germicida A
Cuenta Inicial
Cuenta Obtenida
90 x 106
8 x 102
= 99,999%
Ejemplo 2:
S.aureus
Cuenta Inicial
90 x 106
En germicida B
Cuenta Obtenida
8 x 103
% de reduccin = 100 - 8 x 103 x 100 = 99,98%
90 x 106
Ejemplo 3:
S. aureus
Cuenta Inicial
110 x 106
En germicida B
Cuenta Obtenida
50 x 104
4
% de reduccin = 100 - 50 x 10 x 100 = 99,55%
110 x 106
BIBLIOGRAFA
AOAC Official Methods of Analysis. 1995 Seccin 960,09 16th Ed. p.70-71.
Actividades Antimicrobianas de Sanitizantes, Germicidas y Detergentes IMSS-1990.
xxiii
Agar Nutritivo
Extracto de carne
Peptona de gelatina
Agar
Agua destilada
pH final 5,8 +/- 0,2
3,0 g
5,0 g
15,0 g
1,0 L
5,0 g
2,5 g
1,0 g
15,0 g
1,0 L
Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada, calentar hasta ebullicin para
disolver por completo y ajustar el pH a 7,0 0,2 a 25C. Distribuir en tubos de ensayo
con tapn de rosca o en un matraz, despus esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Enfriar a 45-50C y vaciar en cajas Petri. Puede volverse a fundir una sola vez cuando
se necesite.
Medios de agar para cuenta estndar, con neutralizante.
Igual que agar para mtodos estndar, excepto que hay que adicionar 25,0 mL de
solucin neutralizante y preparar.
Pesar y re suspender la cantidad de cada uno de los medios indicados por el
fabricante para un litro de agua. Disolver por calentamiento hasta ebullicin durante
un minuto. Envasar de acuerdo a las necesidades y esterilizar a 121 C durante 15
minutos.
Solucin neutralizante
Azolecitano (lecitina de soya)
Polisorbato 80
Solucin amortiguador de fosfatos 0,25 M
40,0 g
280,0 g
1,25 mL
Mezclar los ingredientes, disolverlos en agua destilada hasta obtener un volumen final
de un litro; ajustar el pH a 7,2 y distribuir en porciones de 9,0 y 99,0 mL. Esterilizar a
121 C durante 15 minutos.
xxiv
xxv