Protenas y Aminocidos

PROTEINAS Y AMINOACIDOS
I.

FUNDAMENTO
En el presente tema abordaremos aspectos generales sobre
estructura y funcin de los aminocidos y las protenas en el
organismo, as como de los medios de laboratorio para identificar a
los mismos.
Por la importancia y el papel que desempea las protenas, es
necesario conocer la funcin de un grupo de ellas, como las protenas
plasmticas, para tal efecto realizaremos una revisin general de las
mismas.

II.

III.

OBJETIVOS
Conocer y determinar las diferentes propiedades fsicas y qumicas
de los aminocidos y protenas
Emplear tcnicas de reconocimiento de aminocidos y de
protenas.
MARCO TEORICO
Las protenas son bipolmeros de alto peso molecular,
conformadas por unidades monomricas bsicas, denominadas
aminocidos, de los que 20 son biolgicamente importantes. La
unin entre aminocidos se forma mediante la interaccin del
grupo carboxilo de un aminocido con el grupo amino de otro para
formar un enlace peptdico. Siendo as que la adicin secuencial de
aminocidos origina un pptido y finalmente una protena.
Las protenas forman estructuras de diversas complejidades que
podemos resumir en las siguientes caractersticas biolgicas:

Ejercen y tienen relacin estrecha entre estructura y funcin (las

del msculo actan transluciendo energa mecnica).
Disponen de flexibilidad importante de su estructura, de ah su
diversidad infinita (hemoglobina, miosina, albmina, colgeno y
todas en s).

Qumica Orgnica

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Protenas y Aminocidos

Disponen de un mecanismo de formacin que posee fidelidad

absoluta e inmutable para cada protena (esto quiere decir que
cada protena tiene una funcin determinada en el organismo).
Entre las principales caractersticas fsicas y qumicas de las
protenas sealamos las siguientes:
A. Propiedad Acido Base
Tanto las protenas como los aminocidos presentan varias
propiedades y caractersticas que se deben fundamentalmente a
su naturaleza inica anfotrica cido-base. La palabra anftero
proviene del griego, amphi, que significa ambos, por lo que a los
cidos tambin se les conoce como anfolitos, que es una locucin
abreviada de electrolitos anfteros.
El carcter anftero que presentan las protenas y los aminocidos
se debe a la presencia de los grupos (-COOH) y bsicos (-NH 2)
simultneamente en la misma molcula.
La interaccin (intramolecular) cido-base origina una forma
dipolar llamada tambin "sal interna" o Zwitterion". En este estado
las protenas o aminocidos es neutra. Cualquier variacin de pH
del medio dar lugar a que predomine una de las cargas, pudiendo
comportarse como cido o como base segn el pH al que se
encuentren; es decir su carcter anfotrico les confiere la
capacidad de recibir y donar electrones. Esta situacin hace que
exista un estado qumico conocido como "Punto Isoelctrico" o
de doble in, en que el aminocido tiene el mismo nmero de
cargas negativas que positivas, y por lo tanto la carga neta es
cero. Todas las protenas y los aminocidos son menos solubles en
su punto isoelctrico y el conocimiento de este es muy til en el
aislamiento o purificacin de estos.
Los aminocidos pueden tener tres estados de carga elctrica, que
dependen del pH: a pH correspondiente al punto isoelctrico se
encuentran en forma protonada o catinica; en el pH
correspondiente al punto isoelctrico su carga neta es cero, y por
encima del punto isoelctrico adquieren una carga negativa en
forma aninica.

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Protenas y Aminocidos
B. Desnaturalizacin de las protenas
Se llama desnaturalizacin de las protenas a la perdida de las
estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria),
quedando la cadena poli peptdica reducida a un polmero esta
estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija.
Estado
desnaturalizado

Estado nativo

La desnaturalizacin frecuentemente es irreversible pero, en una

serie de casos, la separacin de los agentes desnaturalizantes
conlleva a la restitucin de la conformacin inicial de la molcula
proteica y de sus propiedades naturales; es decir, la protena
desplegada y desnaturalizada se vuelve a plegar
espontneamente adoptando su estructura terciaria correcta y
recuperando su actividad cataltica.
RENATURALIZACION

a)

Agentes desnaturalizantes de protenas

La desnaturalizacin de protenas puede llevarse a cabo por accin

no solo del calor sino tambin de extremos de pH, ciertos
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Protenas y Aminocidos
disolventes orgnicos miscibles en agua como el alcohol o la
acetona, ciertos solutos tales como la urea o el cloruro de
guanidinio o mediante detergentes. El tratamiento con los agentes
desnaturalizantes no rompe enlaces covalentes de la cadena
polipeptidica. Los disolventes orgnicos, la urea y los detergentes
actan principalmente rompiendo las interacciones hidrofobicas
que forman el ncleo estable de las protenas globulares; los
extremos de pH alteran la carga neta de la protena, dando lugar a
la aparicin de repulsiones electrostticas ya a la destruccin de
algunos enlaces de hidrogeno. Los estados desnaturalizados
obtenidos con estos diversos tratamientos no son necesariamente
equivalentes.

Protena a diferentes
Phs.
La desnaturalizacin depende
de la hidropata de la
protena.

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Protenas y Aminocidos

Protenas en dilucin de sulfato de amonio:

La precipitacin por salado es la base de los procedimientos de

purificacin de protenas.
La solubilidad de protenas disminuye generalmente a
concentraciones elevadas de sal, un efecto denominado salting
out (salado). La adiccin de algunas sales en cantidades
apropiadas puede precipitar selectivamente algunas protenas,
permaneciendo las restantes en solucin. El sulfato de amonio
[NH4 (SO)4] es particularmente efectivo y se utiliza a menudo
para salar protenas.
Para tener la protena de inters aislada se debe de separar de los
disolventes en dilisis con papel filtro, aprovechando as el mayor
tamao de las protenas. El extracto purificado de protena se
obtiene por dilisis, para eliminar el sulfato de amonio.

Coagulacin de protenas por calentamiento:

La precipitacin de protenas por calentamientocoagulacines

caracterstica casi para todas las protenas (excepto la gelatina
que no se coagula por calentamiento). Particularmente, la
precipitacin de la protena ocurre ms completa y fcil en medio
dbilmente cido, cercano al punto isoelctrico. En medio neutro y
fuertemente cido la precipitacin es peor, y en medio alcalino no
se produce.
El proceso de plegamiento y cantidad de conformacin nativa
(coagulo) se puede ver, termodinmicamente.

Precipitacin de protenas con metales pesados y sales:

El mtodo se basa en la unin de los ines de metales pesados con

los grupos funcionales de los radicales laterales de los
aminocidos en la molcula proteica, como resultado de lo cual se
destruye su estructura espacial y ocurre la precipitacin de la
protena desnaturalizada. Al aadir un exceso de sales de metales
pesados (excepto AgNO3 y HgCl2) se produce la disolucin del
precipitado formado inicialmente, debido a la adsorcin del in
metlico y, como consecuencia de esto, la adquisicin de una
carga positiva por la molcula proteica.

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Protenas y Aminocidos

Precipitacin de las protenas con Iones

Las protenas reacciones con algunos cationes metlicos (Ag; Hg;

Cu; etc.) cuando estas se encuentran en su forma aninica o
bsica (a pH mayor que su punto isoelctrico) dando sales con los
ines carboxilato presente en las protenas. Similarmente, los
aniones (perclorato, picrato, ferricianuro, etc.) formarn sales con
las protenas cuando estas se encuentran en su forma catinica o
cida (a pH menor que su punto isoelctrico). Las sales formadas
son las que precipitan.

IV.

PARTE EXPERIMENTAL
1.1.
MATERIALES
Pipetas
Tubos de ensayos
Gradillas
Pipeta
1.2.

1.3.

MUESTRAS Y REACTIVOS:
Glicina
Clara de huevo (Albmina)
Casena
Sulfato de cobre
Nitrato de plomo
Bicloruro de Mercurio
Cloruro Frrico
Hidrxido de Sodio
cido Clorhdrico
Alcohol etlico
cido ntrico
Ferricianuro de Potasio
PROCEDIMIENTO:

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Protenas y Aminocidos
Coagulacin de protenas

Preparar una pila de 5 tubos y enumerarlos

A cada tubo echarle 2 ml de sol de albmina de huevo al 1%,
luego proceder segn como se indica a continuacin:
Tubo N1: Ponerlo al bao maria y tomar nota de la
temperatura de coagulacin.
Tubo N2: Agregarle 4ml de alcohol etlico
Tubo N3: Agregarle 2 gotas de HCL concentrado.
Tubo N4: Adicionar 2 gotas de HNO3 concentrado
Tubo N5: Adicionar 2 gotas de sol de NaOH 33%
Observar la coagulacin
Anotar los resultados

Figura: 1

Figura: 2

Figura: 3

Precipitacin de Protenas mediante Cationes

Preparar una pila de 6 tubos y enumerarlos

Se procede a agregar los siguientes reactivos a los tubos en el
orden presentado a continuacin:
Tubo N1: Agregarle 3 ml de agua destilada
Tubo N2: Agregarle 3 ml de sol de albmina de huevo 1%

Qumica Orgnica

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Protenas y Aminocidos
Tubo N3: Agregarle 3 ml de agua destilada y adicionar
gotas de HCl al 10%
Tubo N4: Agregarle 3 ml de sol de albmina de huevo 1%
adicionar 3 gotas de HCl al 10%
Tubo N5: Agregarle 3 ml de agua destilada y adicionar
gotas de NaOH al 10%
Tubo N6: Agregarle 3 ml de sol de albmina de huevo 1%
adicionar 3 gotas de NaOH al 10%
Luego agregar a todos los tubos 2 ml de sol de SO4Cu al 10%
Observar la precipitacin
Anotar los resultados

3
y
3
y

Figura: 5

Figura: 4

Precipitacin de las protenas mediantes Aniones

Preparar una pila de 3 tubos y enumerarlos

A cada tubo echarle 3 ml de sol de albmina de huevo al 1%,
luego proceder segn como se indica a continuacin:
Tubo N1: No se le adiciona nada
Tubo N2: Agregarle 3 gotas de HCL al 10%
Tubo N3: Agregarle 3 gotas de NaOH al 10%
Luego agregar a todos los tubos 2 gotas de sol de ferricianuro
de potasio al 1%
Observar en qu casos ocurre la precipitacin
Anotar los resultados

Accin de los metales pesados sobre las protenas

Preparar 4 pilas de tubos, con cuatro tubos cada uno y

enumerarlos.

Qumica Orgnica

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Protenas y Aminocidos
A todos los tubos con el N1 agregar 3 ml de sol de casena
al 1%.
A todos los tubos con el N2 agregar 3ml de albmina de
huevo 1%
A todos los tubos con el N3 agregar 3ml de glicina al 1%
A todos los tubos con el N4 agregar 3ml de agua destilada.
A la primera pila agregarle a todos los tubos 1ml de sol de cloruro
frrico
A la segunda pila agregarle a todos los tubos 1ml de bicloruro de
mercurio 1%
A la tercera pila agregarle a todos los tubos 1ml de sulfato de cobre
3%
A la cuarta pila agregarle a todos los tubos 1ml de nitrato de plomo
3%
Observar en que caso ocurre la precipitacin
Anotar resultados

Figura: 6

V.

Figura: 7

RESULTADOS

Figura: 8

Coagulacin de las protenas

Tubo N1

Qumica Orgnica

Se desnaturaliza teniendo
partculas grandes al agitar
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Figura: 9

Protenas y Aminocidos
Tubo N2

Tubo N3
Tubo N4
Tubo N5

Sin agitar se nota fcilmente

una coagulacin al tener una
color blanquecino
Tiene partculas pequeas al
agitar, menor intensidad
Se desnaturaliza y se obtiene
un color blanquecino
Se obtiene partculas
pequeas, es la de menor
intensidad de todas

Rango de intensidad: 2>4>1>3>5

Precipitacin de protenas mediante cationes

Tubo N1
Tubo N2

Tubo
Tubo
Tubo
Tubo

Qumica Orgnica

N3
N4
N5
N6

No hay precipitacin
Si hay precipitacin Si hay
precipitacin
porque
la
albumina tiene un catin que
al
reaccionar
con
un
lcali(NaOH)
forma
precipitado
No hay precipitacin
No hay precipitacin
No hay precipitacin
Si hay precipitacin porque la
albumina tiene un catin que
al
reaccionar
con
un
lcali(SO4Cu)
forma
precipitado

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Protenas y Aminocidos

Precipitacin de las protenas mediantes aniones

Tubo N1
Tubo N2
Tubo N3

No hay precipitacin
Reacciona formando un
precipitado de color amarillo
No hay precipitacin

Accin de los metales pesados sobre las protenas

Pila N1:
Tubo N1
Tubo N2
Tubo N3
Tubo N4

Pila N2:
Tubo N1
Tubo N2
Tubo N3
Tubo N4

Si hay precipitado color

amarillo
No hay precipitado
Si hay precipitado
No hay precipitado

Hay un mayor precipitado

color blanco
Si hay precipitado color
blanco
No hay precipitado
No hay precipitado

Pila N3:
Tubo N1

Qumica Orgnica

Si hay un precipitado color

celeste claro
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Protenas y Aminocidos
Tubo N2
Tubo N3
Tubo N4

Pila N4:
Tubo N1
Tubo N2
Tubo N3
Tubo N4

VI.

Si hay precipitado color

blanco
No hay precipitado
No hay precipitado

Si hay un mayor precipitado

color blanco
Si hay precipitado, color de la
solucin blanquecino
No hay precipitado
No hay precipitado

Concluimos que el aminocido con el que ms se nota un

precipitado mediante accin de metales pesados es la : Casena

DISCUSIONES
Segn Silvia Quesada Mora en su obra Manual de experimentos de
laboratorio para bioqumica nos dice que la precipitacin de
protenas por adicin de sales, esta tcnica se basa en la
solubilidad o insolubilidad de protenas en una solucin de sulfato
de amonio, la sal extrae el agua unida a las protenas y por tanto
estas precipitan al perder solubilidad.

En la prctica no se us sulfato de amonio pero se trabaj la

precipitacin de la protenas con el CuSO 4, que al reaccionar
este en una solucin bsica con albumina produce una
precipitacin morada.

Qumica Orgnica

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Protenas y Aminocidos
Segn Silvia Quesada Mora en su obra Manual de experimentos de
laboratorio para bioqumica nos dice que la albumina presente en
el plasma en la clara de huevo y en muchos fluidos biolgicos
puede ser separa de las otras protenas globulinas ya que la
albumina precipita nica si la solucin en la que se encuentra es
saturada con sulfato de amonio mientras que las globulinas
precipitan en solucin de 50% (m/V) de concentracin en sulfato
de amonio.

En la precipitacin de protenas mediante aniones se

observa la precipitacin de la albumina con el NaOH 10%
(concentracin) + el ferrocianuro de potasio lo que no
nicamente el sulfato de amonio permite la precipitacin de
la albumina.

Segn Silvia Quesada Mora en su obra Manual de experimentos de

laboratorio para bioqumica se puede determinar protenas por la
reaccin de BIURET, es un mtodo general para la determinacin
de protenas o pptidos. Se basa en la reaccin del sulfato de
cobre con compuestos que tengan 2 o ms enlaces peptdicos
presentes. Los dipeptidos y los aminocidos dan esta prueba
negativa.

La albumina precipita a color morado por la reaccin de

BIURET, adems esta se da en solucin bsica con el NaOH
al 10%.

Segn Silvia Quesada Mora en su obra Manual de experimentos de

laboratorio para bioqumica dice que toda protena se encuentra
en una solucin a un pH por debajo de su punto isoelctrico, tiene
carga positiva y reacciona con aniones de cidos. La ovoalbmina
(albumina presente en la clara de huevo tiene un punto
isoelctrico alrededor de 4.7. Si a una solucin de esta protena se
le agrega un cido como el pctrico o el tricloractico, reaccionan
con la ovoalbmina. El producto es insoluble en la solucin y
precipita.
Qumica Orgnica

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Protenas y Aminocidos

La ovoalbmina en la prueba de coagulacin de protenas

esta precipito con mayor intensidad al adicionarle HNO 3.,
reaccionando con el NO-3

Segn Silvia Quesada Mora en su obra Manual de experimentos de

laboratorio para bioqumica si se diera el caso en que se encuentra
a un pH mayor de su punto isoelctrico, tiene carga negativa y en
este caso reacciona con cationes de metales.

VII.

CONCLUSIONES

VIII.

IX.

El HgCl2 es un metal pesado que reacciono con la albumina

1% formndose la precipitacin de protenas.

Ese aprendi a reconocer las diferentes caractersticas de los

aminocidos como la manera en que reaccionan sus iones
aadiendo un lcali o acido, as como la coagulacin de las
protenas.
Se determin varios mtodos para reconocer una protena, al
hacerla reaccionar con metales pesados.

RECOMENDACIONES
Se recomienda usar como aminocido a la casena porque es un
aminocido que reacciona fcilmente sobre accin de metales
pesados.
Se recomiendo usar la clara de huevo (albumina) porque es el
aminocido ms comn y ms usado en el laboratorio para
pruebas exactas.
BIBLIOGRAFIA Y FUENTES DE INFORMACIN

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Protenas y Aminocidos

Chang R., QUMICA, 4ta ed., Editorial McGraw-Hill, Mxico (1992)

p.p 108.

Silvia Quesada Mora. Manual de experimentos de laboratorio para

bioqumica. [En lnea]. Costa Rica: Universidad estatal a distancia;
2007. [Fecha de acceso 16 de setiembre del 2013]. URL disponible
en
http://books.google.com.pe/books?
id=8SAtkthrFEkC&pg=PR41&dq=precipitaci
%C3%B3n+de+proteinas&hl=es&sa=X&ei=Ab43Uo_0KrTe4APRuY
H4AQ&ved=0CCwQ6AEwAA#v=onepage&q=precipitaci%C3%B3n
%20de%20proteinas&f=false

Henry Rakof, Norman C. Rose ,1 ed, Editorial Limusa,S.A,Mexico

(1971) p.p 825-830

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