FIJADORES

DEFINICIN : Es el proceso por el cual los elementos celulares son

conservados en un estado fsico y parcialmente en su estado qumico,
preparando los tejidos para el procesamiento de inclusin en parafina,
corte al micrtomo y coloracin.

TEORIA DE LA FIJACIN:
1.

Actan coagulando las protenas plasmticas sin combinarse con

ellas (formol, alcohol, cido pcrico).

2. Formando verdaderas combinaciones qumicas con las sustancias

orgnicas de los tejidos (bicromato de potasio).
3. Se reducen al ponerse en contacto con las sustancias orgnicas y
forman en su seno un precipitado sumamente fino. (bicloruro de
mercurio, cido smico).
4. La mayora de los fijadores actan como oxidantes (cido smico,
crmico, pcrico) preparando al tejido para la coloracin.

PROPIEDADES DE BUEN FIJADOR:

1. Un buen fijador debe matar de inmediato a la clula para impedir la
aparicin de alteraciones agnicas conservando de esta manera
detalles estructurales que presentaba en vivo.
2. Debe acrecentar la afinidad con los colorantes.
3. No debe retraer excesivamente los tejidos ni volverlos friables o
quebradizos.
4. Debe impedir la desaparicin de los elementos solubles de los tejidos
durante la fijacin o posteriormente.
5. Debe poseer un alto poder de penetracin cualidad necesaria para
asegurar una fijacin correcta.

FIJADORES QUMICOS
1.

Formol al 10%:
Formol comercial 40% . 10 ml.
Agua 90 ml.

2. Formol neutro por cada litro de formol agregar 9 gr. de cloruro de

sodio.
3.

FORMOL Bufferado
Formol comercial 10 ml
Agua destilada 90 ml
Fosfato monopotsico de sodio 3.5 gr
Fosfato de sodio dibasico. 6.5 gr.

4. Alcohol etlico 100% recomendable para demostracin de glucgeno

y frotices citolgicos.
5. Tetrxido de osmio o Acido smico de 1 -2% recomendado para las
sustancias grasas y la mielina
6. Bicloruro de mercurio solucin saturada aproximadamente 6%
permite la coloracin de los cortes con el mayor nmero de sustancias
colorantes especialmente las nucleares
7. Bicromato de potasio de 3 - 5%.
Acta como oxidante, se le considera un buen fijador protoplasm
tico, pero raramente se lo emplea solo, luego de la fijacin sumergir
las piezas ' en una solucin acuosa de sulfato de litio alumbre de
potasio al 5% donde permanecen por 24 hrs. Luego son lavadas por
24 hrs.

8. Lquido de Flemming.
Acido crmico al 1 %........................................15 ml
Acido smico al 2%.............................................4 ml
Acido actico.......................................................1ml.
9. Lquido de Zenker
Bicloruro de mercurio.............................................5 gr.
Bicromato de potasio...........................................2,5 gr.
Sulfato de sodio......................................................1 gr.
Agua destilada.....................................................100ml
Acido actico glacial...............................................5 ml.
Agregar al momento de usar. Es buen fijador para los trabajos
corrientes, luego de la fijacin lavar en agua corriente durante 24 hs y se
pasan luego al alcohol de 95%, yodado al 0.5% para eliminar el
precipitado de mercurio y luego tratar con tiosulfato de sodio 5% par a
eliminar el yodo.
9.

LIQUIDO DE HELLY:

Al lquido de Zenker agregar 5 ml. de formol comercial al 40% en lugar del

cido actico.
10.

LIQUIDO DE BOUIN:

Solucin saturado de cido pcrico...............................75 ml. x 5 = 37.5

Formol 40%..................................................................20 ml x 5 = 100
Acido actico glacial......................................................5 ml

x 5 = 25

Se considera un buen fijador est indicado..para los estudios topogrficos.

11. DESCALCIFICADOR:
ACIDO NITRICO AL 10%:
Agua destilada.. 700 ml.
Alcohol etlico 100%......................................................200 ml.
Acido ntrico ..100 ml.

12 .MEZCLA SULFOCROMICA:
Acido sulfrico 100 ml.
Bicromato de potasio.50 ml.
Agua destilada1000 ml.

13. ALBMINA DE MAYER:

Clara de huevo...33 ml.
Glicerina......33 ml.
Thimol

0.2 gr.

COLORACIN DE PAPANICOLAOU
1. HEMATOXILINA DE HARRIS.
2.

ACIDO FOSFOTUNGSTICO 1%

Alcohol fosfotungstico ... 1 gr.

Alcohol etlico 95%........................... csp 100 ml.
3. ACIDO ACETICO 1%
Acido actico glacial.... 1 ml.
Alcohol etlico 95%...........................................................99 ml
4. ORANGE G.
Orange G.............................................................................12.5gr.
Agua destilada.....................................................................200 ml.
Alcohol etlico 95%...............................................................800 ml.
Acido fosfotngstico............................................................. 0.5 gr.
PREPARACIN
Mezclar el Orange G con el agua destilada en fro.
- Agregar lentamente el alcohol de 95% y mezclarlo completamente.
- Agregar poco a poco el cido fosfotngstico. Mezclar bien.

- Filtrar y colocar en frasco color caramelo.

-

Madurar por 24 horas. Filtrar antes de usar.

5.- EA - 36: SOLUCION STOCK

Eosina yellow.........................................................................10 gr.
Agua destilada.......................................................................100 gr.
Bismarck Brown....................................................................10 gr.
Agua destilada.......................................................................100 gr.
Light green.
10 gr.
Agua destilada.......................................................................100 gr.
Se toma 1 It. de alcohol etlico de 95% y agregar
Sol. I................................................................50 gr.
Sol..II..................................................................10 gr.
Sol.III..............12.5gr.
Luego se agrega lentamente 4 gr. de cido fosfotngstico, mezclar
completamente, al final agregar solucin saturada de carbonato de Litio al
1% 20 gotas; mezclar bien y completar con 2000 ml. de alcohol etlico de
95%. Madurar 24 horas.
FIJACIN .- Fijar los frotices servicio vaginales en:
1.

Alcohol Etlico al 100%

2.

Alcohol Etlico al 1 00% con Eter Etlico v/v.

3.

Alcohol Etlico al 95%

4.

Nebulizaciones lacas (sprays)

METODO DE COLORACIN
1. Frotices fijados en sprays colocarlos en alcohol de-95% para
eliminar la laca. Luego lavar en agua corriente.
Frotices fijados en alcohol etlico lavar en agua corriente.
2. Coloracin nuclear con Hematoxilina de Harris x 3 min. Lavar en
agua corriente x 3 minutos.
Alcohol de 95% x 10 sumergidas.
3. Coloracin citoplasmtica con ORANGE 6 x 2 minutos. Alcohol
de 95%
4.

x 12 sumergidas.

Diferenciar con Acido actico al 1% x 2 sumergidas.

5.

Mordentar con cido Fosfotngstico al 1 % x 2 sumergidas. Alcohol

de 95% x 1 0 sumergidas.

6. Coloracin citoplasmtica con EQ-36 x 30 seg. 1 mint.

7.

Deshidratar en alcohol de 95% x 10 sumergidas.

Alcohol de 95% II x 10 sumergidas.
Alcohol de 95% III x 10 sumergidas.
Alcohol de 100% 1 x 10 sumergidas.
Alcohol de 100% Il x 10 sumergidas.
Alcohol de 100% III x 10 sumergidas.

8.

Aclarar con
Xilol I x 1 0 sumergidas.
Xilol II x 10 sumergidas
Xilol III x 10 sumergidas.

9.

Montaje con Blsamo de Canad o Mercoglass.

RESULTADOS:
NCLEOS

:AZUL

CITOPLASMA DE LAS CELULAS SUPERFICIALES :NARANJA

CITOPLASMA DE LAS CELULAS INTERMEDIAS

:CIANOFILAS

CITOPLASMA DE LAS CELULAS PROFUNDAS

:CIANOFILAS.

COLORACION DE RUTINA HEMATOXILINA Y EOSINA

REACTIVOS
1.HEMATOXILINA DE HARRIS:
Hematoxilina

10

grs.

Alcohol etlico absoluto

100

ml.

Alumbre de potasio

200

grs.

Agua destilada.

2000

ml.

Oxido rojo de mercurio....

grs.

PREPARACIN:
Disolver los 10 grs. Hematoxilina en 100 ml. de alcohol etlico absoluto
colocarlo en una estufa de 60 C..
Disolver en un matraz de 5 lts. Los 200 grs. De alumbre de potasio en 2
lt de agua destilada, llevarlo a hervir, una vez iniciada la ebullicin retirar
del fuego y agregar lentamente la
nuevamente colocamos al fuego

Hematoxilina disuelta en el alcohol,

calentarlo por espacio de 2 minutos ,

retirar del fuego el matraz y agregar los 5 grs. de Oxido rojo de mercurio
hasta la disolucin , retirar del fuego ; guardarlo en un lugar oscuro x
24 hs. Filtrar antes de usar.
2.- AGUA ACIDULADA 1%
Acido clorhdrico QP.
Agua destilada.

25 ml.
2500 ml.

3.- AGUA AMONIACAL

Hidroxido de Amonaco al 28% .

5 ml.

Agua destilada.

2500 ml.

4.- EOSINA Y
Eosina yellow

16 gr.

Alcohol 70%................................................................. 1440 ml.

Sol. Sat. de Acido pcrico 160 ml.
( se satura con 1.7 grs. x lt. de agua dest.)

PREPARACIN:
En solucin saturada da cido pcrico previamente filtrar,, agregar los
1440 ml. de alcohol de 70% .
Luego se agrega los 16 grs. Eosina yellow. Se recomienda usar despus de
las 24 horas.

Al momento de usar, si es necesario agregar por cada 100 ml. de Eosina

preparada 0.1 cc. de cido actico glacial.

METODO DE COLORACIN
1. Desparafinar en

Xilol I x 5 minutos
Xilol II x 5 minutos

2. Hidratar en

Alcohol de 100% x 10 sumergidas.

Alcohol de 95% x 10 sumergidas.
Alcohol de 50% x 10 sumergidas.
Agua corriente x 1 mint.

3.

Coloracin nuclear con Hematoxilina de Harris x 5 minutos.

Lavar en agua corriente.

4.

Diferenciar en el agua cida al 1% x 2 sumergidas rpidas.

Lavar en agua corriente.

5.

Viraje en el agua amoniacal x 3 minutos.

6.-

Lavar en agua corriente.

6.

Coloracin citoplasmtica con Eosina x 3 minutos.

Lavar en agua corriente.

7.

Deshidratar en

Alcohol de 95% I x 10 sumergidas.

Alcohol de 95% II x 10 sumergidas.
Alcohol de 100% I x 10 sumergidas.
Alcohol de 100% II x 10 sumergidas.

8.

Aclarar con

Xilol I x 10 sumergidas
Xilol II x 10 sumergidas

9.

Montaje con Blsamo de Canad.

RESULTADOS:

NCLEOS

: AZULES

CITOPLASMA

: ROSADO

MTODO DEL HIERRO COLOIDAL DE HALE

OBJETIVO: Demostrar la presencia de glucosaminoglicanos cidos.

FIJACIN: Es preferible el uso de fijadores a base de dicromatos y los metlicos

(como el subacetato de plomo). Tambin se obtiene buenos resultados con formol en
solucin salina, formol neutro y formol - alcohol.
MICROTOMA: Cortar secciones de parafina de 4 micrmetros de grosor. Deber
correrse una lmina patrn que bien puede ser trquea, y dos secciones del tejido
problema uno de los cuales no ser sometido a la solucin de hierro coloidal (lmina
blanco).
FUNDAMENTO: Los grupos aninicos de los glucosaminoglicanos cidos en
particular los radicales sulfatos (-SO4) y carboxilo (-COOH), poseen una gran afinidad
por los iones metlicos; esta propiedad se utiliza para fijar el hierro, el cual se
encuentra bajo la forma de hierro coloidal. Este hierro ligado as, es posteriormente
reconocido por el mtodo de Perls (azul de Prusia).
REACTIVOS:
Solucin acuosa de cloruro frrico al 10%

Cloruro frrico

g
Agua destilada c.s.p.

10.0
100.0

ml

Solucin stock de hierro coloidal

Solucin acuosa de cloruro frrico al 10%

ml
Agua destilada

ml
Hervir el agua y aadir el cloruro frrico agitando constantemente, la solucin

4.5
250.0

toma un color pardo rojizo.

Solucin de trabajo de hierro coloidal

Solucin stock de hierro coloidal

20.0 ml

Agua destilada

15.0 ml

cido actico

5.0 ml

Solucin acuosa de cido actico al 12 %

Solucin acuosa de ferrocianuro de potasio al 2 %
Solucin acuosa de cido clorhdrico al 2 %

PROCEDIMIENTO:
1.

Desparafinar e hidratar hasta agua corriente.

2.

Colocar el cido actico al 12 % por 30 segundos.

3.

Tratar la lmina problema y el patrn con solucin de trabajo de hierro

coloidal. Tratar la lmina blanco con agua destilada. Tiempo de exposicin una
hora.

4.

Lavar en agua destilada varias veces para quitar el exceso de hierro coloidal.

5.

Agregar a todas las lminas un volumen de ferrocianuro de potasio 2 %

y dejar actuar durante un minuto.

6.

Sobre el ferrocianuro agregar un volumen igual de cido clorhdrico 2 %

y hacer una mezcla homognea. Dejar que acte durante hasta que el tejido
tome una coloracin azul.

7.

Lavar en agua corriente durante 5 minutos.

8.

Colorear con la hematoxilina de Harris durante 2 minutos.

9.

Lavar en agua corriente durante 1 minuto

10.

Colorear con la eosina durante 15 segundos

11.

Lavar en agua corriente durante 20 segundos

12.

Deshidratar, aclarar y montar en blsamo de Canad.

RESULTADOS: Los glucosaminoglicanos cidos sulfatados y no sulfatados se

observan de color azul turquesa intenso (azul de Prusia), ncleos de color azul y
citoplasma de color rosado.

COLOIDAL HIERRO
Los mucopolisacridos Tincin manual - HIDRATOS DE CARBONO
PROPSITO: Para demostrar
mucopolisacridos carboxilados y sulfatados
y
glicoprotenas.
PRINCIPIO: coloidales iones frricos son, a un pH bajo, absorbido principalmente por
mucosustancias carboxilados y sulfatados. El exceso de reactivo se lava a cabo y la
clsica reaccin azul de Prusia (hierro mancha) se utiliza para demostrar hierro unido al
tejido.
CONTROL: control de uso de mucina, el intestino delgado
FIJACIN: formalina al 10%, evitar fijadores de cromato.
TCNICA: Los cortes de secciones de parafina de 4 m.
EQUIPO: Placas elctricas, cido limpia vidrio: botellas, cilindros y Coplin frascos, papel
de filtro.

REACTIVOS :
Mller coloidal de hierro
Solucin madre:
Agua destilada ebullicin .250.0 ml
29% de cloruro frrico-fresco. 4.4 ml
Mantenga el agua hirviendo y se agita cuando la adicin de cloruro frrico.
Revolver hasta que la solucin se vuelve de color rojo oscuro.
Retirar del fuego, enfriar. Conservar en limpia botella marrn, etiqueta con la fecha y la
inicial. La solucin es estable durante 6 meses.
Solucin de trabajo:
Foto coloidal 10.0 ml
Agua destilada.. 18.0 ml
El cido actico. 12.0 ml
Preparar fresca, desechar despus de su uso.
ATENCIN: Evitar el contacto y la inhalacin.

12% de cido actico:

cido actico glacial .. 24.0 ml
Agua destilada.. 176.0 ml
ATENCION: El cido corrosivo.

Ferrocianuro- H ydrochloric
ATENCION: El cido corrosivo.
cido solucin de trabajo(Tincin de hierro)
5% de potasio ferrocyanide.25.0 ml
5% de cido clorhdrico. 25.0 ml
Mezclar bien antes de usar, usar cido limpio cristalera. Desechar despus de su uso.

Nucleares Fast Red:

SEGURIDAD: Usar guantes, gafas y bata de laboratorio. Hervir la solucin en campana

extractora de humos.

Aadir cido al agua. Evite el contacto y la inhalacin.

cido actico: Irrita los ojos, piel y sistema respiratorio, rgano diana efectos sobre el
sistema respiratorio. Corrosivo. El cloruro frrico: corrosivo para metales. Causa
problemas gastrointestinales por ingestin.

PROCEDIMIENTO:
1. Desparafinar y secciones hidratar con agua destilada.
2. Lavar los portaobjetos en el 12% de cido actico.
3. Solucin de trabajo de hierro coloidal durante 1 hora.
4. Enjuague en el 12% de cido actico, 3 cambios, a 3 minutos cada uno.
5. Ferrocianuro cido clorhdrico solucin durante 20 minutos.
6. Lave en agua corriente del grifo durante 5 minutos.
7. Contra-tincin con Nucleares rojo rpido durante 5 minutos.
8. Lave en agua corriente del grifo.
9. Deshidratar, aclarar y montar.
RESULTADOS:
Mucopolisacridos
cidos
y
sialomucinas.azul
Ncleo rosa-rojo
Citoplasma rosa

profundo

COLORACIN METACROMTICA CON AZUL DE TOLUIDINA

FIJACIN: Formol al 10%
MICROTOMA: Cortar secciones de parafina 5 micrmetros de grosor. Se recomienda
usar como lmina patrn secciones de trquea.
SOLUCIONES:

Solucin colorante de azul de toluidina

Azul de toluidina (C.I. 52040)

Agua destilada c.p.s.

0.1 g.
100.0 ml

PROCEDIMIENTO:
1.

Desparafinar e hidratar hasta agua destilada

2.

Colorear con solucin de azul de toluidina entre 30 segundos a 1 minuto.

3.

Enjuagar en agua destilada.

4.

Cubrir las secciones con glicerina y con un cubreobjeto.

5.

Sellar el borde del cubreobjeto con esmalte de ua presionando la laminilla con la

ua.

6.

Examinar las secciones tan pronto como sea posible despus de la preparacin.
RESULTADOS: La metacromasia se observa de color azul por ejemplo ncleos. La
metacromasia se observa de color azul violceo por ejemplo glucosaminoglucanos
cidos no sulfatados (cido hialurnico) del cordn umbilical. La metacromasia se
observa de color rojo violceo por ejemplo glucosaminoglucanos cidos sulfatados
(cido condroitin sulfato) del cartlago hialino de la trquea. La metacromasia se
observa de color rojo, por ejemplo hongos.
OBSERVACIN METACROMTICA DE MUCOPOLISACRIDOS CIDOS CON AZUL
DE TOLUIDINA
1.-Glucosaminoglucanos cidos NO SULFATADOS muestran metacromasia con azul
de Toluidina a pH= 3, pero no a pH= 1.5
Glucosaminoglucanos cidos SULFATADOS muestran metacromasia a pH=1.5 con
Azul de Toluidina.

REACCION DEL ACIDO PERYODICO DE SCHIFF'S

P.A.S.

MATERIAL

TEJIDO Fijado en Formol al 10%

SOLUCIONES:
ACIDO PERYODICO AL 0.5%
Acido perydico (HI04).......................................... 0.5 gr.
Agua destilada...................................................... 100 ml.
SCHIFF'S:
Fucsina Bsica.......................................................1 gr.
Agua destilada....................................................... 200 ml.
Acido clorhdrico 1 N (Se prepara con 98.3 ml. de H. Cl. Q. P.
para 1000 ml. de agua destilada.) . 20 ml.
Bisulfito de sodio anhidro 1 gr.
PREPARACIN:
En un matraz colocar el agua destilada y la fucsina bsica, disolver bien
en calor, luego enfriar hasta 50 C , aadir el cido clorhdrico 1 N y el
bisulfito de sodio anhidro agitar y filtrar , dejarlo en oscuridad por 48
hrs. tiene que tener un color pajizo claro y transparente, si est muy
oscuro agregarle 0.5 gr. de carbn activado agitar y filtrar.

METODO DE COLORACIN:
1. Desparafinar e hidratar los cortes.
2. Colocar en Acido Peridico por 0.5% por 10 minutos.
3. Lavar en agua destilada.
4. Secar ligeramente las lminas con papel de filtro

5. Con un gotero y sobre fondo blanco agregar el reactivo de Schiff s por

15 minutos.
6. Lavar en agua corriente por 10 - 20 minutos.
7. Colocar los tejidos en Hematoxilina de Harris x 2 min. Y lavar
8

Eliminar el exceso de colorante con agua cida 1 % dos sumergidas

9. Lavar en agua corriente.

10. Azulamiento con agua amoniacal al 3/1000 x 2 - 3min.
11. Lavar en agua corriente.
12. Deshidratar, y montar.
RESULTADOS:
NCLEOS

Color Azulado.

CARBOHIDRATOS

Color magenta a prpura.

MUCINA DEL TRACTO DIGESTIVO, DEPOSITOS DE GLUCOGENO EN EL

HIGADO, MEMBRANAS BASALES, HIFAS Y ESPORAS DE HONGOS SON
POSITIVOS AL P.A.S

Alcian Blue pH2.5 - mucopolisacridos cidos

PROPSITO: Alcian blue mucosustancias azules manchas de cido actico y mucinas.
Las cantidades excesivas de no sulfatados mucosustancias cidos se ve en mesoteliomas,
ciertas cantidades se presentan normalmente en las paredes de los vasos sanguneos, pero
aumento de las lesiones iniciales de la aterosclerosis.
PRINCIPIO:Azul Alcian es un grupo de polivalentes colorantes bsicos que son el agua
soluble. El color azul es debido a la presencia de cobre en la molcula. La solucin 3%
de cido actico (pH2.5), Alcian manchas azules tanto sulfatado y mucopolisacridos
cidos carboxilados y sulfatados y carboxiladosialomucinas (glicoprotenas). Se cree para
formar enlaces de sal con el grupos de cido de mucopolisacridos cidos.
CONTROL: intestino delgado, el apndice o el colon.
FIJADOR:

formol al 10% , Bouin o de Hollande.

TCNICA: 4m secciones de parafina.

EQUIPO: Limpiar los recipientes de vidrio en agua desionizada. Recipientes, medidor
de pH, horno de microondas.
Reactivos:

Acido actico glacial 3%

El cido actico 3,0 ml
Agua destilada 100,0 ml
La solucin es estable durante 1 ao.
PRECAUCIN: Contiene cido.

Alcian Blue Solucin:

Azul alcin a pH 2,5:
Azul alcin (C.I. 74240) 8GX 1 g.
cido Actico 3%.. 100 ml.
Azul alcin a pH 1:
Azul alcin. 1 g.
HCl 0,1 N 100 ml.
Azul alcin a pH 0,5 :
Azul alcin . 1 g.
HCl 0,5 N .. 100
Mezclar, ajustar el pH a 2,5, utilizando actico cido. Filtrar, aadir un cristal de timol, la
etiqueta inicial y la fecha. La solucin es estable durante 2 a 6 meses.
Como colorante de contraste se puede usar una solucin de Rojo nuclear al 1 %.
PRECAUCIN: Contiene cido, evite el contacto y la inhalacin de colorante
HIDRATOS DE CARBONO

Alcian Blue
SEGURIDAD: Usar guantes, gafas y bata de laboratorio. Aadir cido al agua.
Servicios para los derrames de ms de 500 ml, contener los derrames con los kits de
derrame de cido. Preparar mancha en campana extractora de humos. Evite el contacto y
la inhalacin de los tintes.
cido actico: Irrita las vas respiratorias. Efectos sobre los rganos destino
sistema respiratorio por inhalacin. Corrosivo.
PROCEDIMIENTO:
1.
2.
3.
4.

Desparafinar e hidratar.
AcidoAcetico 3% 3 minutos
Tratar con la solucin deseada de azul alcin durante 30 min.
Si se us la solucin a pH 2,5, lavar con agua (d) ; si se us cualquiera de los otros
dos, secar slo con papel de filtro.
5. Contrastar si se desea con rojo nuclear Eosina.
RESULTADOS:
Mucinas cidas mucosustancias: azul
Los ncleos (con Fast Red nuclear) rosa rojizo

AlcianBlue-PAS
Esta tcnica puede diferenciar fcilmente la presencia de glicoconjugados y cidos y
neutros en un mismo preparado (Bancroft y Stevens, 1990).
Consiste en una primera tincin con el azul alcin a pH 2,5, seguida de la tcnica de PAS.
El uso en primer lugar del azul alcin permite colorear los glicoconjugados,
glicosaminoglicanos cidos.
Los glicoconjugados cidos que puedan reaccionar con el PAS aparentemente son
bloqueados por el azul alcin.

PROCEDIMIENTO:
1.
2.
3.
4.

Desparafinar e hidratar.
AcidoAcetico 3% 3 minutos
Tratar con la solucin deseada de azul alcin durante 30 min.
Si se us la solucin a pH 2,5, lavar con agua (d) ; si se us cualquiera de los otros
dos, secar slo con papel de filtro.
5. Lave en agua corriente del grifo, a 5 minutos, enjuague en agua destilada.
6. 0,5% de cido peridico, a 5 minutos.
7. Enjuague con agua destilada.
8. Reactivo de Schiff, 30 minutos, a temperatura ambiente
9. Lave en agua corriente del grifo durante 5 minutos, enjuague en agua destilada.
10. Hematoxilina, 1-3 minutos
11. Lave en agua corriente del grifo durante 5 minutos.
12. Deshidratar, aclarar y cubreobjetos.
La interpretacin de los resultados es la siguiente (Spicer, 1992):
PAS+, azul alcin- (color rojo o rosado): ha sido interpretado como indicador de
glicoprotenas neutras (raramente glicolpidos insolubles).
PAS+, azul alcin+ (el color depender de la entidad dominante y puede variar del azul
prpura, hacia el prpura o al violeta): glicoprotenas cidas o una mezcla de
glicoprotenas cidas y neutras o una mezcla de glicoprotenas cidas y neutras ms
glicosaminoglicanos.
PAS-, Azul alcin+ (color azul): se juzgan como glicosaminoglicanos y glicoprotenas
cidas libres de hexosas PAS reactivas. Tambin debe considerarse aqu la presencia de
glicoprotenas cidas con hexosas bloqueadas por la unin del alcin a la macromolcula
(Bancroft y Stevens, 1990).

COLORACIN HEMATEINA DE VERHOEFF

(PARA FIBRAS ELASTICAS)
REACTIVOS:
1. REACTIVO DE VERHOEFF:

Hematoxilina.............................................................. 1 gr.
Alcohol etlico absoluto...............................................20 ml.
Se disuelve calentando en un matraz y se aade
Cloruro Frrico al 10% en agua..................................8 ml.
Lugol..........................................................................8 ml.
Preparar al momento de usar.
2.

CLORURO FERRICO AL 2% EN AGUA DESTILADA

Cloruro frrico
Agua destilada

3.

2 gr.

...100 ml.

PICRO - FUCSINA DE VAN GIESSON

Solucin saturada de cido pcrico 95 ml.
Fucsina cida solucin acuosa al 1 %................................... 5 ml.

4.

LUGOL
Iodo. 2 gr.
Yoduro de Potasio.

4 gr.

Agua destilada. 100 ml.

5. Solucin de Tiosulfato de sodio al 5%

METODO DE COLORACIN:
1. Desparafinar, hidratar hasta agua corriente.
2. Colorear con el reactivo de Verhoeff x 20 mint.

Hasta que este

completamente oscuro.
3.- lavar en agua dest,
3. Diferenciar en solucin de cloruro frrico al 2%
Lavar x 10 mint. Si se produce sobre diferenciacin se puede volver a
colorear .
4. Pasar en alcohol de 75% y 95% para eliminar el exceso de yodo.
5. Coloracin de contraste con picro - fucsina de Van Giesson de
3 a 5 mint.
6. Lavar en agua destilada, deshidratar y aclarar.

7. Montar en blsamo de Canad

RESULTADOS:
FIBRAS ELASTRICAS = NEGRO.
CONTRASTE=ROJO Y AMARILLO.
Las fibras elsticas estn formadas por largas cintas festonadas de
estructura no fibrilar, frecuentemente anastomosadas entre si.

Muy

dbilmente birrefringentes cuando estn retradas. Resisten notablemente

los lcalis, los cidos y la ebullicin, de composicin qumica mal conocida
y probablemente heterogneo estaran formadas por largas cadenas de
polipptidos ricas en glicina, prolina y valina unidas por un material
mucoproteco.

FUNDAMENTO
EL METODO DE LA HEMATEINA DE VERHOEFF.- esta basada en la
coloracin de las fibras elsticas por la hemateina combinada al iodo y el
cloruro ferrico.
Mecanismo de accin . se sabe que el fierro ferrico es afin a un sin
numero de estructuras tisulares anionicas en comparacin con el
aluminio,
En este caso el mordiente determina la afinidad por la polivalencia de la
laca ferrica de hemateina .
La presencia de los mucopolisacaridos cidos en las fibras reticulares son
los responsables de la afinidad por la laca, el iodo juega un papel de
agente de retencin resistindose a la diferenciacin .

COLORACIN ACIDO - ALCOHOL RESISTENTE AL TEJIDO

PARA BAAR
REACTIVOS:
1.-COLORANTE DE ZIEHL - NEELSEN 0 CARBOL-FUCSINA:
SOLUCION A:
Fucsina bsica..........................3 gr.
Alcohol Etlico de 100.......................................10 ml.
Disolver el colorante
SOLUCION B:
Fenol Fundido.....................................................5 ml.
Agua destilada...................................................95 ml.
Mezclar y juntar ambas soluciones, dejar reposar.

2.- ALCOHOL ACIDO AL 1 %:

Acido Clorhdrico............................................ 1 ml.
Alcohol de 70%................................................99 cc

3.-AZUL DE METILENO DE LOFFEL:

SOLUCION A:
Azul de Metileno.................................................. 0.3 gr.
Alcohol Etlico..................................................... 30 ml.
SOLUCION B:
Hidrxido de potasio............................................ 0.01 gr.
Agua destilada.................................................... 100 ml.
Mezclar y juntar ambas soluciones y filtrar antes de su empleo.

PROCEDIMIENTO:
1. Desparafinar
2. Pasar por alcoholes de 100%, 95% y 50%
3. Lavar en agua corriente y luego agua destilada.
4. Pasar los cortes en el lquido de Ziehl Neelsen en estufa de 55-60C, de
15 a 20 mint. a temperaturas ambiente de 40-45mint.
5. Lavar en agua corriente.
6. Aclarar con alcohol - cido al 1 % hasta que est rosa plido.
7. Lavar con agua corriente.
8. Cubrir con azul de metileno por 10 mint.
9. Lavar
10. Pasar por alcoholes
11. Aclarar / montar.

RESULTADOS:
Bacilos de cidos alcohol resistentes :
Hemates

Rojo Brillante.

: Amarillo o anaranjado.

Otros tejidos

azul plido

En el bacilo de Koch lo importante es su pared celular que le confiere un

cierto grado de proteccin para su supervivencia

COLORACIN DE VON KOSSA AL NITRATO DE PLATA

Lavar cuidadosamente los cortes desparafinados con agua destilada a fin
de eliminar los eventuales cloruros.
Cubrir los portaobjetos a 1 hora en la oscuridad con una solucin de
nitrato de plata al 5% en agua destilada.
Despus, reservando la solusin de nitrato de plata, ponerlos a la luz solar rayos U.V).
Las porciones calcifidas amarillan y luego oscurecen o toman un color oscuro a negro.
Lavar con agua destilada.
Eliminar el exceso de nitrato de plata pasando rpidamente con una solucin de
hidrosulfito sdico al 5%.
Aclarar en agua destilada.
Coloracin de fondo (rojo slido o verde brillante).
RESULTADOS

Los depsitos calcreos aparecer en negro sobre un

fondo ligeramente teido.

OPSIONAL

La reaccin de las sales de plata en lugar de exponerla por

la luz se obtiene tambin por una solucin dbil de cido pirovlico al 2%.

OTRO METODO ES POR DESGASTE DEL DIENTE O TEJIDO OSEO

POR UNA LIJA HASTA UN GROSOR DE 5 mm
Colorear con el metodo convencional , con nitrato de plata o tinta
china.

METODO RADIOGRAFICO DE CAJAL O IMPREGNACION

ARGENTICA EN BLOQUE
FRAGMENTO DE TEJIDO DE 3 4 mm DE ESPESOR
REACTIVOS:
Sol. De Nitrato de Plata en solucin acuosa al 1.5%.
Sol. De Reductora de Cajal :
Acido pirovlico o hidroquinona1 - 2 gr.
Formol.5 - 10 ml.

Agua destilada..100 ml.

Se prepara al momento de usar.
PROCEDIMIENTO:
1. Las piezas de 3-4 mm de grosor sumergir al fijador por 15 das
cambiando diariamente los 7 primeros das.
2. Lavar en agua destilada por 1/2 hora.
3. Sumergir en el nitrato de plata en la oscuridad a 37 C por 5 a 6 das..
4. Lavar rpidamente en agua destilada.
5. Llevar el reductor de cajal por 24 horas.
6. Lavar en agua destilada.
7. Deshidratacin concluir parafina cortar de 5 a 6 micras.
8. Desparafinar y montar con resina sinttica blsamo de Canad.

NOTA:
Tanto al fijador como el nitrato de Ag. Deben tener un volumen 20 veces
superior al tamao de la pieza. En el nitrato de plata la pieza debe tener
un tinte

marrn

mi

informe

"si

hay

destellos

indica

defectuosa

impregnacin".
Para el material fijado en formol lavar 2 3 das en agua por 24 horas
en agua amoniacal. Lavar con H20 destilada y realizar el procedimiento
de coloracin.

HONGOS: PHYLO TALOFITAS

Todos los hongos son Gram positivos y algunas especies de Nocardia son
cido resistentes. Los hongos dan un resultado positivo a la tincin de

P.A.S. El Criptococus da una tincin con Mucicarmn., Los hongos son

microorgansmos no fotosintticos que poseen pared celular y usualmente
crecen como una masa de filamentos ramificados que se entrelazan (hifas)
y se conocen como micelios.

Las formas miceliares son : llamadas

mohos : algunas especies como las levaduras no forman micelios: sin

embargo, son fcilmente reconocibles como hongos gracias a la naturaleza
de su ciclo sexual de reproduccin y a la presencia de formas
transicionales.
Al microscopio, se observa que posee un ncleo verdadero con membrana
nuclear definida, mitocondrias y retculo endoplasmtico.

No es raro

encontrar muchos ncleos de una clula, tambin posee una pared

celular rgida constituida de quitina y celulosa.

COLORACIN GROCOTTS - GOMORI METENAMINE PARA HONGOS.REACTIVOS.1. ACIDO CROMICO.- 5%

Acido Crmico ..

5 gr.

Agua destilada..

100 ml.

2. NITRATO DE PLATA - 5%
Nitrato de plata .

5 gr.

Agua destilada ..

100 ml.

3. METENAMINE 3%
Hexametenamine

3 gr.

Agua destilada. 100 ml.

4. SOLUCION BORAX 5%
Brax..

5 gr.

Agua destilada.

100 ml.

5. SOLUCION STOCK DE NITRATO DE PLATA METENAMINE:

Nitrato de Plata 5%.........................................

5 ml.

Metenamine 3%.............................................

100 ml.

6. SOLUCION TRABAJO METENAMINE NITRATO DE PLATA:

A. Borax .

2 ml.

B. Metenamine Nitrato de Plata .

25 ml.

Se mantiene estable, filtrar antes de usar.

7. SOLUCION STOCK VERDE CLARO AMARILLENTO:
Verde claro amarillento
Agua destilada .

0.2 gr.
100.0 ml.

Acido actico glacial Q.P..

0.2 ml.

8. SOLUCION DE TRABAJO VERDE CLARO AMARILLENTO:

Solucin Stock Verde Claro amarillento 10 ml.
Agua destilada. 50 ml.

9. TIOSULFATO DE SODIO 1%:

Tiosulfato de sodio

gr.

Agua destilada 100 ml.

METODO DE COLORACIN:
1. Desparafinar en Xilol.
2. Hidratar en alcoholes decrecientes.
3. lavar en agua destilada.
4. Pasar a la solucin de cido crmico al 5% por 1 hora. Oxidacin
5. Lavar en agua destilada.
6. Pasar los cortes a tiosulfato de sodio al 1% por 1 mint.
7. Lavar en agua corriente por 5 a 10 minutos.
8. Lavar en agua destilada rpidamente 2 a 3 cambios.
9. Pasar los cortes a la solucin de trabajo de Nitrato de plata
metenamine durante 30 a 60 minutos en al estufa a 58 C a 60C
hasta que los cortes tomen un color tabaco oscuro a negro.
10. Lavar en agua destilada.

11. Poner el cloruro de oro al 0. 1 % por 1 mint.

12. Lavar en agua destilada.
13. Tiosulfato de sodio al 1% por mint.
14. Lavar en agua destilada.
15. Coloracin de contraste con Verde Brillante por 5 mint.
16. Deshidratar.
17. Aclarar.
18.

Montar en Blsamo de Canad.

RESULTADOS:

HONGOS

Color Negro

MUCINA

Gris Oscuro

FONDO

Verde Plido.

COLORACIN TRICOMICA DE MASSON - (FIBRAS

COLGENAS)

I.

HEMATOXILINA DE WEIGERTH .- Colorante nuclear, es coloracin

de un tiempo, utiliza lacas frricas, el hierro trivalente por oxidacin de la

hematoxilina da lugar a una laca frrica.
Solucin A:
Hematoxilina.

1 gr.

Alcohol de 1 00 %......................................

100 ml.

Solucin B
Cloruro frrico 29%....................................

4 ml.

Agua destilada..

95 ml.

Acido clorhdrico..

1 ml.

Mezclar A y B en partes iguales

II.

FUCSINA ACIDA - SCARILATA DE Biebrich

Solucin acuosa de fucsina cida 1 %.....................

10 ml

Scarlata de Biebrich solucin acuosa 1%.................

90 ml

Acido actico glacial

III.

1 ml

ACIDO FOSFOTUNOSTICO FOSFOMOLBDICO

Acido fosfotngstico

5gr.

Acido fosfomolbdico

5gr.

Agua destilada

200 ml.

IV.

SOLUCION DE AZUL DE ANILINA

Azul de anilina

5 gr.

Acido actico

2 ml.

Agua destilada

100 ml.

V.

SOLUCION COLORANTE LIGHT GREEN

Ligh Green 5 gr.

Agua destilada 200 ml.
Acido actico.....................
VI .

2 ml.

SOLUCION ACIDO ACETICO 1 %

Acido actico

ml.

Agua destilada..

2 ml .

METODO DE COLORACIN:
1 . Desparafinar.
2.

Hidratar

3.

Agua destilada

4.

Fijador Bouin x 1 hora a 56 C

24 horas a temperatura ambiente.

5. Lavar en agua corriente hasta que el color amarillo desaparezca.

6. Lavar en agua destilada.
7. Colorear con hematoxilina de Weigerth. de 10 a 20 mint.
8. Agua corriente x 1 0 a 20 minutos.

Agua destilada x 30 seg.

9. Solucin fucsina cida mas Scarlata de Biebrich x 1 0 a 15 minutos.
Lavar en agua destilada.
10. Acido fofotungstico -fosfomolbdico x 10 a 15 minutos.
11. Azul de anilina o light green x 5 a 10 mint.
12. Agregar cido actico al 1 % al colorante 3 mint.
13.

Eliminar el colorante y agregar cido actico al 1% x % mint. Lavar

en agua destilada.

14. Deshidratar, aclarar (95%, 95%, 100%, 100%).

15. Montar en blsamo de Canad.

RESULTADOS:

NCLEOS

AZUL OSCURO

MSCULO

ROJO

FIBRAS COLGENAS

AZUL 0 VERDE

Se llama coloracin tricrmica por usar tres colorantes distintos une para
el ncleos otro para el citoplasma v un tercero para las estructuras de
sostn y tejido conjuntiva en particular.

FIBRAS COLGENAS : Son largas cintas de 1 a 12 micras de espesor que

poseen una estriacin transversal y otra longitudinal cuya periodicidad es
de 646 AMSTRONG al microscopio electrnico.

Sus propiedades fsicas

son mas precisas que sus caractersticas qumicas, son ligeramente

precisas

que

sus

caractersticas

qumicas.

Son

ligeramente

birrefringentes a la luz polarizada, insolubles en agua fra y solubles en

agua caliente lo mismo que en los cidos y en las bases fuertes, resisten a

la digestin trpsica, a 37 grados centgrados en medio alcalino pero cede

a la pepsina en medio cido.
Las fib,ras colgenas son largas molculas de polipptidos ricos en
prolina, hidroxiprolina y glicina.

COLORACIN DE VAN GIESSON

REACTIVOS
1.

HEMATOXILINA DE WEIGERTH.
Solucin A

Hematoxilina......................................1 gr.
Alcohol de 100100cc.

Solucin B

Cloruro de hierro a 29%...................4 ml.

Agua destilada..................................95 ml.
Acido clorhdrico..............................1 ml.

Se mezclan ambas soluciones A y B al momento de usar 1: 1

2.

PICRO - FUCSINA DE VAN GIESSON

Solucin saturada de cido pcrico 95 ml.
Fucsina cida solucin acuosa al 1 % 5 ml. Se usa muestras fijadas
en formol y bouin.

METODO DE COLORACIN
1. Desparafinar, hidratar, lavar en agua destilada.
2. Colorear con hematoxilina de Weigerth x 5 a 6 mint. Lavar en agua
corriente x 5 mint.
3 . Colorear con picro - fucsina de Van Giesson x 5 mint. Lavar con agua
destilada.
4. Deshidratar, aclarar.
5. Montar en blsamo de Canad.

RESULTADO:

NCLEOS

= AZUL OSCURO

TEJIDO CONECTIVO = ROJO BRILLANTE

TEJIDO MUSCULAR

= AMARILLO

NOTA : No se debe lavar mucho tiempo en agua despus de haber

coloreado con hematoxilina de Weigerth por que tiende a salir el colorante
nuclear en caso de sobre coloracin se realiza con la
Solucin B.

COLORACIN DE MALLORY AZAN

1. SOLUCION AZO - CARMIN B
Azo-carmin G 0.2 gr.
Agua destilada.. 200 ml.
Hervir brevemente, enfriar y filtrar antes de usar, aadir 1 cc de cido
actico glaciar.

2. SOLUCION DE ANILINA ALCOHOLICA

Anilina pura 0.2 gr.
Alcohol de 95%............................................................. 200 ml

3. SOLUCION ALCOHOLICA DE ACIDO ACETICO GLACIAL AL 0.5%

Acido actico glacial 0.5 ml
Alcohol de 95%............................................................... 100 ml

4. SOLUCION ACUOSA DE ACIDO FOSFOTUNGSTICO AL 5%

Acido fosfotungstico. 5 gr.
Agua destilada 100 ml.

5. SOLUCION MADRE DE AZUL DE ANILINA Y ORANGE G

Azul de anilina.0.5 gr.
Orange G2 gr.
Agua destilada.100 ml

Hervir brevemente, enfriar, filtrar, y aadir 8 ml.. de cido actico

glacial, antes de usar diluir una parte de solucin madre en tres
partes de agua destilada.

METODO DE COLORACIN:
1. Desparafinar, hidratar hasta alcohol de 95%.
2. Mordentar en anilina alcohlica de 5 a 10 mint.
3. Lavar en alcohol de 95% de 2 a 4 mint.
Lavar en agua destilada de 2 a 4 mint.
4. Teir en solucin de Azo - carmn a la temperatura de 50 a 60 C
.de 45 a 60 mint.
5. Enfriar a temperatura ambiente y lavar en agua destilada.
6. Diferenciar en anilina alcohlica hasta que resalten los ncleos de
color rojo y el fondo apenas teido o decolorado.
7. Lavar en cido actico alcohlico al 0.5% para interrumpir la
diferenciacin x 1 a 5 mint.
8. Mordentar en cido fosfotngstico de 1 a 3 horas.
Lavar brevemente a agua destilada.
9. Teir en solucin diluida de Azul de anilina y Orange G de 1 a 3 horas.
Lavar brevemente en agua destilada.
10. Deshidratar, aclarar.
11. Montar en blsamo de Canad.

RESULTADOS: TEJIDO CONECTIVO = AZUL

CLARO MOCO = AZUL
NCLEO=ROJO
GLIA=ROJO
TEJIDO MUSCULAR = VIOLETA

ERITROCITOS = ROJO NARANJA

GRANULACIONES = ROJO, AZUL, AMARILLO.

COLORACIN DE WILDER'S PARA FIBRAS RETICULARES

1. SOLUCION DE ACIDO FOSFOMOLIBDICO AL 10%

2. NITATO DE URANIO AL 1%
3. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA AMONIACAL
Nitrato de plata al 10%
Agua amoniacal al 28%
Hidrxido de sodio al 3.1 %

PREPARACIN : A 5 ml. de solucin de nitrato de plata al 10% se agrega

gota a gota amoniacal al 28% hasta la desaparicin del precipitado,
agregar 5 ml. de hidrxido de sodio al 3.1% formndose nuevamente un
precipitado el cual se va a disolver agregando amonaco al 28% en
cantidad exacta para su disolucin.

Completar hasta 50 ml con agua

destilada y almacenar en frasco oscuro en refrigeracin.

4. SOLUCION REDUCTORA
Formol comercial0.5 ml.
Nitrato de uranio al 1%..........................................................1.5 ml.
Agua destilada40 ml.

Se preparar al momento de usar.

5. Cloruro de oro al 0.2%

6. Solucin de Tiosulfato de sodio al 5%

METODO DE COLORACIN
1. Desparafinar, hidratar hasta agua destilada.
2. Oxidar en cido fosfomolbdico al 10 % por 1 mint.
Lavar en agua destilada.
3. Sensibilizar en solucin de nitrato de uranio al 1% x 3 a 5 segundos.
Lavar en agua destilada.
4. Impregnacin en solucin de nitrato de plata amoniacal x 1. mint.
5. Reduccin en alcohol de 95% rpidamente.
6. Solucin reductora x 1 mint.
Lavar en agua destilada.
7. Diferenciar en solucin de cloruro de oro al 0.2% opcional
Lavar en agua destilada.
8. Fijacin de la coloracin en solucin Tiosulfato de Sodio al 5 %
1 a 5 mint.
9. Lavar en abundante agua corriente .
10. Deshidratar, aclarar y montar.
La coloracin de fondo es facultativa con light green o picro-fucsina de
Van Giesson .

RESULTADOS:

FIBRAS RETICULARES

= NEGRO

CONTRASTE

= VERDE

Las fibras reticulares o precolgenas tienen una composicin qumica

parecida a las fibras colgenas pero una estructura fsica distinta al

microscopio electrnico en razn de su delgadez, las mejores colocaciones

de fibras reticulares y de las membranas basales son la impregnaciones
argnticas.

COLORACIN DE OIL RED PARA LPIDOS

(GRASAS NEUTRAS)

FIJACIN

Formol al 10%
Formol Calcio de Baker.

FORMOL CALCIO DE BAKER:

-

Solucin de cloruro de calcio 10%....................................... 1 vol.

Formol al 40%......................................................................1 vol.

Agua destilada 8 vol.

Cortes por congelacin 5 - 15 micras.

REACTIVOS:

Colorante OIL RED

OIL RED.. 250 - 500 mg.

6 ml

ALCOHOL- ISOPROPILICO.................

100 ml.

AGUA DESTILADA.............................

4 ml.

(Filtrar antes de usar).

METODO DE COLORACIN:
1 . Cortes por congelacin 5 - 15 micras recogerlos en una placa petri con
alcohol al 50%.
2. Pasar el colorante al 50%.
3. Pasar en Agua destilada x 1 minuto.
4. Colorear con Hematoxilina de Harris x 3 minutos.
5. Agua destilada.
6. Agua amoniacal x 3 minutos.
7. Agua destilada.
8. Recoger los tejidos en una lmina portaobjetos
9. Montar en glicerina

RESULTADOS:
GRASAS NEUTRAS

ROJO BRILLANTE.

NCLEOS

AZULES.

COLORACIONES VITALES

METODO DE EXAMEN:

1. METODO INMEDIATO:

a) Sin reactivos modificadores.

b) Coloracin Vital Intra vitales : en vivo
Supra vitales : in vitro

2. METODO MEDIATO:

Post - fijacin.

REACTIVOS NO MODIFICADORES:
Son sustancias que no alteran a las estructuras ni a nivel celular ni
tisular.
Las sustancias son las que pueden mantener a los seres vivos sin alterar
su morfologa.
Ejemplo : Plasma, suero sanguneo, lquido amnitico, lquido asctico y
humor acuoso, dentro de los lquidos naturales; existen tambin lquidos
artificiales como los sueros isotnicos.

COLORANTES VITALES:
Son aquellas que introducidos al animal vivo no producen alteraciones ni
son capaces de producir la muerte del tejido.
Cuando uno emplea reactivos qumicos colorantes que actan sin
modificar,

los

hacen

respetando

la

vida

del

elemento,

sin

crear

modificaciones estructurales.
a) Coloracin Intra - Vital : Es cuando se inyecta al animal por va
digestiva u otras vas, sustancias colorantes no txicas en soluciones
muy diluidas y actan mientras el ser est vivo, siendo capaces de no
poner en relieve una determinada estructura celular sin producir la
muerte alterar su metabolismo.
b) Coloracin Supra Vital : Es cuando se toman clulas de un
organismo o porcin de tejido y se pone en contacto con el colorante
durante el tiempo que se prolongue la vida del elemento.

TIPOS DE COLORANTES:

COLORANTES INTRA-VITALES

COLORANTES SUPRA-VITALES

AZUL DE TIPAN 0 TIPANO

AZUL DE NILO

COLORANTES VITALES

BSICOS

Rojo Neutro
Azul de Metileno

ACIDOS

Azul de Tipan
Carmn litionado

Los colorantes cidos al ponerse en contacto con las clulas con

capacidad de acumular, primero se difunden por el protoplasma despus
floculan (se dispersan) y forman pequesimas vacuolas en el citoplasma;
estas vacuolas van aumentando de tamao hacindose visibles al
microscopio, es decir que en este proceso intervienen la dispersibilidad y
difusibilidad del colorante y tambin algo importante : la capacidad
fagocitara de la clula.
Los colorantes bsicos al penetrar en la clula en solucin son
concentrados por las formaciones granulosas vacuolares pre - existentes
en las clulas.
Los colorantes bsicos penetran cuando las clulas mueren.

Caractersticas : Protoplasma difusamente teido; el ncleo se nota

visiblemente con una coloracin muy diferenciada y se pueden ver los
nucleolos.

FORMA DE UTILIZAR LOS COLORANTES BSICOS:

Intra-vitalmente se inyecta al animal por va endovenosa por el saco

linftico unos 5 cc. de la sol. Azul de metileno Rojo neutro al 1/100
1/500 repitiendo esta operacin por varios das consecutivos o inter
diario, luego se sacrifica al animal y se procede al estudio de sus rganos
por disociacin al estado fresco.
Tambin se puede colorear animales acuticos vivos en soluciones muy
diluidas (protozoarios ) (parsitos):
Se sumergen trozos de tejidos extrados de un animal en soluciones en las
cuales permanecern varias horas, despus de las cuales se procede a
disociacin y observacin microscpica.
Es importante notar que las clulas del Sistema Retculo Endotelial se
colorean con los colorantes vitales cidos, tal es el caso de los histiocitos,
dichos colorantes en contacto con el citoplasma se difunde dentro de l
originando vacuo.las progresivamente de mayor tamao hasta hacerse
visibles en el microscopio, floculan formando gotas.
Por ejemplo uno de los organoides que se pueden visualizar mediante este
tipo son las mitocondrias que se ponen de manifiesto con el Verde Janus
B. Otras estructuras que se pueden visualizar mediante este tipo son las
de Kiuffer del hepatocito, son los macrfagos que se encuentran fonnando
parte del endotelio del sinusoide heptico.

COLORACIN DE PARASITOS EN SANGRE Y TEJIDOS

Algunos mtodos de coloracin son simples tinciones, otras colocaciones
son verdaderas reacciones qumicas, estos colorantes pueden ser cidos,
bsicos y neutros.
Acidos : La Eosina, Orange, Fucsina cida, van a teir estructurales y
grnulos cido flicos, Oxifilicos y hemates.
Bsicos :Azul de metileno, Violeta de metilo, tife el ncleo, protoplasma.
Neutros :Eosinato de azul de metileno de May Grunwald y el Azul Eosinato de giemsa, tien las estructuras neutrofilas, como partes del
protoplasma.
Esta coloracin es excelente para la conjuntivitis de Inclusin, parsitos
en sangre y mdula sea (Plasmodium, Leishmanias, Tripanosomas,
Toxoplasma y Espiroquetas) en la fiebre recurrente y enfermedad de Weil.
Adems se puede utilizar estas colocaciones en cortes histolgicos,
Rickettsias y bacterias, etc.

COLORACIN GIEMSA PARA PARASITOS EN SANGRE Y

TEJIDOS
REACTIVOS.1.

SOLUCION STOCK DE GIEMSA:

Giemsa en polvo.......................................1 gr.
Glicerina..................................................66 ml.
alcohol Metilico Absoluto.........................66 ml.

Disolver el giemsa en polvo en la glicerina a 60C durante 30 minutos a

2 hrs. Finalmente agregar el alcohol metlico absoluto madurar por 15
das.
2.

AGUA BUFFER PH 6.8:

II.

Solucin Concentrada "B"

Se

disuelve 27.6 gr. de fosfato sdico monobsico (0.2 M).en

ml. de agua destilada.

1000

III.

Solucin Concentrada "B"

Se disuelve 28.39 gr. de fosfato sdico dibsico (0.2 M)

Se mezcla: A - B
Solucin concentrada A: 51 ml.
Solucin concentrada B : 49 ml.
Aforar con agua destilada a 200 ml.

3.

SOLUCION DE TRABAJO DE GIEMSA

Solucin stock....................................... 50 gts.

Agua Buffer pH 6.8................................ 50 ml.

PROCEDIMIENTO:
1 . Desparafinar los cortes.
2. Hidratacin hasta agua corriente
3. Poner en agua Buffer pH 6.8 x 5'
4. Colocar las laminas en el Koplin con solucin trabajo de Giemsa x
24 horas.
5. Diferenciar en agua Buffer pH 6.8
6. Deshidratar, aclarar y montar.

RESULTADOS:

Ncleos

Azules violceos

Citoplasma

Rosado

Hemates

Rosa

Rojo naranja

Granulaciones Eosinfilas
NOTA:
Los cortes deben ser muy delgados.

Las colocaciones de los cortes histolgicos no son ,tan satisfactorias como

las obtenidas sobre frotis.
El xito de esta coloracin depende esencialmente de la fijacin de la
rapidez de la deshidratacin y del pH del agua destilada.
Si el agua es ligeramente alcalina los hemates toman un color azulado; y
si es cida son rojos.

GRAM HISTOLOGICOS BACTERIAS

VIOLETA DE ANILINA
Violeta de Genciana................5 gr.
Alcohol de 95'.........................10 ml
Anilina....................................2 ml.
Agua.......................................88 ml

Disolver la violeta de genciana con el alcohol; aadir lentamente la anilina

y despus el agua.
Esta preparacin se conserva bien. Fltrar antes de usar.

SOLUCION FUERTE DE LUGOL

Iodo...........................1 gr.
Yoduro de Potasio......2 gr.
Agua destilada...........200 ml.
XILOL-ANILINA:

Aceite de anilina..........1 Volumen

Xilol.............................1 Volumen

Precaucin

Los tejidos fijados en Buoin y Zenker dan mejores

resultados.

METODO DE COLORACIN DE GRAM HISTOLOGICO

1 . Desparafinar, hidratar hasta agua destilada.

2. Colorear los ncleos con Hemalum cido.
3. Diferenciar con Alcohol - Clorhdrico
4. Lavar con agua destilada.

5. Viraje con agua amoniacal.

6. Lavar con agua destilada.
7. Colorear con violeta de anilina en fro por 5 a 10 minutos.
8. Lavado rpido en agua.
9. Pasar por minutos en solucin de lugol como mordiente.
10. Lavar en agua.
11. Secar los cortes adecuadamente con papel filtro.
12. Diferenciar y deshidratar sumergiendo los portaobjetos uno a uno en
un mezcla de Xilol Anilina V/V.
13. Detener la diferenciacin en xilol.
14. Montar en Blsamo de Canad.

RESULTADO:

Los grmenes GRAM +, algunos PARASITOS Y FIBRINA:

Color Violeta oscuro, fondo Rosa Malva plido.

COLORACION DE AZUL DE PRUSIA PARA HEMOSIDERINA

FIJADORES

: BOUIN FORMOL NEUTRO

COLORACIN AZUL DE PRUSIA : Con esta reaccin, el hierro frrico es

puesto de manifiesto bajo la forma de ferrocianuro frrico azul de Prusia.

REACTIVOS:
A.
B.

Solucin de Ferrocianuro de Potasio al 4%

Solucin de Acido clorhdrico al 4% Mezclar a + b al momento de
usar.

C. Colorante nuclear Fast Red Komechtrat al 0. 1 % Eosina.

METODO DE COLORACION:
1 .Desparafinar
2. Hidratar, lavar en agua destilada.
3. Acido clorhdrico al 4% por 5 minutos.
4. Tratar los cortes durante 15 a 30 minutos en la sol. de ferrocianuro de
potasio al 4% y el cido clorhdrico al 4% v/v.
5. Lavar con agua destilada.

6. Coloracin nuclear con Kemechtrot Eosina

7. Deshidratar.
8. Aclarar y montar con resina neutra.

RESULTADOS :
HIERRO FERRICO

GRANULACIONES AZULES

FONDO Y NCLEOS

ROSADO

- Las preparaciones montadas de Blsamo de Canad, se oxida y

palidecen rpidamente.

COLORACIN GRAM

Permite la diferenciacin de dos grupos de microorganismos : un grupo

llamado Grampositivo y el otro Gramnegativo.
Los grmenes Gramnegativos tien de rojo, los Grampositivos se tien de
prpura. En las clulas Grampositivas la barrera se hace impenetrable
despus del tratamiento con mordiente y yodo, en las bacterias
Gramnegativas, las barrera es ms permeable y el alcohol acetona extrae
el complejo yodo - cristal violeta.
Las propiedades Gram colorantes parecen denotar algunas diferencias
biolgicas muy fundamentales entre Gram (+) y Gram

REACTIVOS:
1.
a.

CRISTAL VIOLETA
Violeta de Genciano.....................................1
Alcohol absoluto.........................................10

gr.
ml.

b.

Agua Fenicada al 1 %
Acido fnico fenol .. 1 ml.
Agua destilada. aforar .100 ml
Unir A + B

2.

FUCSINA FENICADA DE ZHIEL NEELSEN

3.

LUGOL
IV.

Yoduro de Potasio..................1 gr.

V.

Yodo metlico..........................0.5 gr.

VI.

Agua destilada. c.s.p.............100 ml.

4. ALCOHOL ACETONA
VII.

Alcohol 1 00' 50 ml VIII. Acetona Q.P 50 ml.

PROCEDIMIENTO:
1 . Hacer el extendido de secreciones sarro dentario.
2. Fijar al mechero alcohol de 1 00'
3. Agregar Violeta de Genciana por 60"
4. Lavar con agua corriente
5. Agregar lugol por 60"
6. Lavar con agua corriente
7. Decolorar con alcohol acetona
8. Lavar con agua corriente
9. Contrastar con la Fucsina fenicada por 1 0"
10. Lavar con agua corriente
11. Deshidratar rpidamente secar en la estufa.
12. Aclarar en Xilol.

RESULTADOS: Bacterias Gram Negativas Bacterias Gram Positivas

Clulas epiteliales

Color Rojo
Color Azul oscuro
Color rojo a rosado.

COLORACIN WAYSON PARA CAMPYLOBACTER

REACTIVOS: COLORANTE DE WAYSON

Solucin A:
Fucsina bsica....................................... 0.2

gr.

Alcohol de 100.......................................20.0

ml.

Azul de Metileno..................................... 0.75 gr.

Solucin B :
Fenol fundido..........................................10.0

gr. ml.

Agua destilada CSP.100.0

ml.

Mezclar la Solucin "A" y Solucin "B" madurar por 43 horas.

Este colorante tiene la duracin de 2 aos.

METODO DE COLORACIN

1. Desparafinar en xilol por dos cambios de 5 minutos.

2. Hidratar con alcohol de 100%, 95%, 50% por lo sumergidas en cada
uno.
3. Lavar en agua destilada.
4. Colorante Wayson por 10 segundos
5. Lavado en agua corriente.
6. Diferenciar en alcoholes de 95%, 100% por sumergidas rpidas.
7. Aclarar en Xilol
8. Montaje en Blsamo de Canad.

RESULTADOS:
CAMPYLOBACTER

Color Celeste Oscuro.

FONDO

Color Celeste Claro.

HEMATES

Color Malva Rosa.

TCNICA DE HEIDENHAIN

(Tejido Conectivo y Muscular)

1 .Desparafinar, hidratar.
2. Tejidos fijadas en Zenker
3. Lugol Yodo al 0.5% en alcohol 95% por 5'
4. Lavar en agua corriente
5. Agregar tiosulfato de sodio al 5% por 5' lavar.
6. Alumbre Frrico al 5% por 5'
7. Enjuagar en agua.
8. Teir con Hematoxilina al 0.5% madurada.
9. Lavar y observar al microscopio
10. Diferenciar en alumbre frrico al 2%. Lavar y observar al microscopio.
11. Lavar en agua corriente por 15 a 20 minutos para estabilizar la
coloracin.
12. Facultativo : coloracin de contraste con la Picrofucsina de Van
Gesson Eosina.
13. Deshidratar, aclarar y montar.

RESULTADOS:

COLOR

Ncleos

Negro

Citoplasma

Gris incoloro color de contraste

Fibras de tejido conectivo y eritrocitos

Msculo estriado

Gris oscuro.

= Gris negro

HEMATOXILINA CON ACIDO FOSFOTUNGSTICO DE

MALLORY (Para tejido muscular)
REACTIVOS
1.-HEMATOXILINA

Hematoxilina....................................1 gr.
Ac. Fosfotngstico..............................20 gr.
Agua destilada..................................1000 ml.

Disolver la hematoxilina en 300 ml. de agua aplicando calor ligero.

Disolver el Ac. Fosfotngstico soluciones.
Dejar enfriar y mezclar ambas soluciones.
Aadir 0. 177 gr. de Permanganato de potasio 2 ml. de perxido de
hidrgeno.
2. -Cortes Fijados en Zenker
Bicloruro de Mercurio 5.0 gr.
Bicromato de Potasio................. 2.5 gr.
Sulfato de sodio......................... 1.0 gr.
Agua destilada.........................1 00 ml.
Al usar agregar 5 ml. de cido actico glacial por cada 100 ml.
3.- Yodo al 5% en alcohol de 95%
4.-.Hiposulfito de sodio al 5%METODO:
1 . Desparafinar y pasar por alcohol al 95%
2.

Eliminar los precipitados de Mercurio con Yodo al 0.5% por 5 mint

3.

Lavar en agua corriente.

4.

Eliminar el Yodo con hiposulfito de sodio al 5% por 5 mint

5.

Lavar de 10 a 15 minutos en agua corriente.

6.

Se deja 5 mint en solucin recin preparada de permanganato de

potasio al 0.25%

7.

Lavar en agua corriente.

8.

Dejar por 5 a 10' en cido oxlico al 5 %

9.

Se lava 2'en agua corriente. Se enjuaga en agua destilada.

10.

Se tie toda la noche con hematoxilina fosfotngstica de Mallory. 24

horas a temperatura ambiente 4 horas a 50C.

11.

Lavar en agua corriente

12.

Deshidratar, aclarar y montar.

RESULTADOS:

Ncleos, mitocondrias, fibrina, fibrillas de neuroglia son hialinas, y las

partes contrstales de los msculos estriado y cardiaco se tiien de azul.
El hueso, la substancia de base cartlago, el retculo y la elastina
presentan tonos variables de anaranjado a pardo rojizo.

VIOLETA DE METILO - CRISTAL VIOLETA

PARA AMILOIDE
A.

REACTIVOS:

1.Cristal Violeta.....................................................................1 gr.

Violeta de Metilo...........................................0.5 gr.
Alcohol absoluto...........................................10 ml.
Agua destilada..............................................90 ml.
2. Acido Actico 0.25 hasta 1% en agua destilada.
3. Jalea glicerina :
Goma arbiga....................................................50 gr.
Cloruro de Sodio...............................................1 gr.
Thimol...............................................................0.2 gr.

Agua destilada..................................................100 ml..

B.

COLORACIN DE AMILOIDE:

1. Cortes en parafina congelacin de 10 - 12 micras.

2. Hidratar
3. Colocar de 1-3 minutos.
4. Lavar
5. Diferenciar con cido actico 0.1 %
6. Lavar con agua destilada x 2 minutos
7. Montar con glicerina.

RESULTADOS:

AMILOIDE

ROJO ROSADO.

COLORACIN DE LA SUSTANCIA AMILOIDE:

La sustancia amiloide es una sustancia homognea, translcida, de
distribucin extracelular que ensucia la sustancia fundamental y las
estructuras del tejido conjuntiva.
Su composicin qumica todava es mal conocida, solamente se sabe que
contiene una parte proteica importante, algunas lipoprotenas y una
pequea cantidad de glcidos.

SISTEMA NERVIOSO
En 1862, Camilo Golgi (Italia) realiz unos estudios con bicromato de
potasio en plata sobre tejido nervioso, producindose -un precipitado
negro.
Ramn y Cajal (Espaa) recopil cerca de 360 trabajos e hizo otros
ensayos pudo as estudiar el sistema nervioso, con colocaciones argnticas
y aricas como la de Ro Ortega, donde se puede clasificar sus formas y
funciones.

SISTEMA NERVIOSO CENTRAL:

Neuronas
Neurofibrillas.
Neuroglias. -

METODOS DE DEMOSTRACIN: Por congelacin

Procesamiento en parafina

PRINCIPALES FIJADORES: Formaldehdo al 10% (Ms recomendable)

Formol neutro al 1 0%
Alcohol 95%
Bicromato d potasio
Formol bromuro.
Licor de Miuller.
FORMULA DEL LICOR DE MIULLER
Agua destilada

100 ml.

Bicromato de potasio

2.5 gr.

Sulfato de cobre.

1. 5 gr.

FORMULA DE FORMOL BROMURO (Sirve para la neuroglia)

Formol comercial..

15

Bromuro de amonio.

Agua destilada

85

ml.
gr.
ml.

METODOS ESPECIFICOS PARA EL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL

Modificaciones de Roger Food a la impregnacin de Bielscharosky

 Panptica de Cajal modificado por Pollack

Luxor Fast Blue o Azul rpido de Luxor.
Cuando se habla de reacciones metlicas no se habla de coloracin en S,
sino de impregnacin del metal en determinadas estructuras como por
ejemplo el oro y la plata, se producen precipitados por reduccin dando
un color negro sobre los elementos celulares.
Estas colocaciones se pueden hacer en varios tiempos permitiendo
mostrar con mayor claridad las estructuras.
Una reaccin es negativa (-) cuando la plata se ha depositado en el
interticio en menor cantidad y es positiva (+) cuando la plata ha dibujado
los contornos de las clulas.

PROCESO DE IMPREGNACIN ARGENTICA

Se basa en la propiedad que tienen las sales de plata de trasformarse en
xido de plata por accin de lcalis fuertes,
2NO3 Ag + 20 HNA = Ag 20 + 2NO3Na+H20
El xido de plata forma un precipitado negro en la solucin alcalina, se
gota a gota amonaco formndose un precipitado negro o ceniza.
Ag 20 + 3NH4 = (Ag (NH)3)2)
Amonaco = xido diamino argntico
La solucin se toma de color claro quedando escaso sedimento al fondo.

IMPREGNACIN ARGENTICA - TCNICA DE PANPTICA PARA TEJ.

NERVIOSO
Fijador: Recomendable formol neutro al 10%
Cortes : Por congelacin o procesados en parafina de 15 a 20 micras.

PREPARACIN DE REACTIVOS
1. Nitrato de plata al 2%
2. Solucin de Ro Ortega
a. Nitrato de plata al 10% (30 ml).
b. Carbonato de sodio o potasio o bicarbonato al 5% 90 ml.
Al mezclar a y b se forma un precipitado cenizo, agregar amonaco
puro gota a gota hasta completar la disolucin.
Agregar agua en cantidad suficiente hasta completar 40 ml.
guardar en frasco oscuro y filtrar al momento de usar.
3. Piridina pura.
4. Amoniaco puro.
5. Solucin reductora formol al 1%
6. Creosota (Medio de montaje).

PROCEDIMIENTO DE IMPREGNACIN:
1 . Hidratar hasta agua destilada, trabajar los pasos 1,2,3 sobre fondo
negro.
2. Piridina de 1 a 2 hrs. (no lavar en agua al tejido).
3. Colocar el tejido en nitrato de plata al 2%, llevar a la estufa a 60C,
hasta que los tejidos queden de un color tabaco oscuro.

4. Pasar los tejidos a la solucin de Ro Ortega que contiene unas 2 a 3

gotas de amonaco puro por 3 a 4 minutos.
5. Luego llevarlos a la solucin de Ro Ortega Puro, sin amonaco.
Pasos 4 y 5 sobre fondo blanco.
6. Colocar los tejidos en solucin reductora por 1 a 5 minutos, tomando
los tejidos, un color marrn oscuro.
7. Agua destilada en un Petri grande.
Se lleva el tejido a una lmina porta objeto con ayuda del asa de vidrio y
un gotero; observar al microscopio; si no es satisfactorio el color, regresar
a la solucin de Ri Ortega (pasos 4 y 5) y darle ms tiempo; antes de
montar, pasar unas gotas de alcohol absoluto, escurrir y secar.
S. Montar agregando una gota de cerosota

RESULTADOS:

NCLEOS

Color negro.

NEURONA, NEUROGLIA, NEUROFIBRILLA

Color negro

FONDO

Color pardo.

COLORACIN DE ROGER FOOD PARA TEJIDO NERVIOSO

1. Los cortes de los tejidos procesados en parafina se realizan a 5
micras.
2. De 12 a 24 Hrs. Se colocan los cortes en alcohol de 95% que contenga
2 ml. de amonaco al 28%.
3. Lavar rpidamente en alcohol de 80%
4. Se pasa a una solucin de nitrato de plata al 40% a 30C por
10 minutos.
5. Se lava rpidamente en agua destilada.
6. Se cubre en una solucin de formol al 20% (un volumen de fonol
comercial ms 4 volmenes de agua destilada) de 3 a 5 minutos,
luego se cubre en formol al 5% y secar con papel filtro.
7. Se cubre durante 1 a 3' en una solucin de nitrato de plata amoniacal
(Preparacin: a 20 ml de nitrato de plata al 20% agregar gota a gota
amonaco fuerte y finalmente agua destilada completando 40 ml).

8. Reducir con formaldehdo al 20% por 5 mint.

9. Enjuagar en agua destilada.
10. Se refuerza en una solucin de cloruro de oro amarillo al 0.03 3%.
11. Cubrir con cido actico glacial al 1% por 15mint
12. Enjuagar en agua destilada.
13. Se intensifica durante 5' en formo neutro al 5% con cido oxlico
al 2%
14. Enjuagar en agua destilada.
15. Se fija con tiosulfato de sodio al 5% por 2 mint
16. Lavar esmeradamente en agua corriente.
17. Si se quiere aplicar coloracin de contraste, usar rojo neutro.
18. Deshidratar, aclarar, montar.

RESULTADOS:
Fibras nerviosas y neurofibrillas : en tonalidades de negro a marrn.
Contraste : Rojo

LUXOR FAST BLUE (S.N.C)

FIJADOR

Formaldehdo.

CORTE

Cortes de parafina de 15 a 20 mieras.

REACTIVOS:
Sol. 1

L.F.B
Alcohol etlico de 95%

Sol. 2:

Carbonato de Litio al 0.05%

PROCEDIMIENTO:
1. Desparafinar e hidratar.

1 gr.
100 ml..

2. Colorear toda la noche en sol. F.B.B. a 57C.

3. Lavar en alcohol de 95% para quitar el exceso de colorante
4. Lavar en agua destilada.
5. Comienza

la

diferenciacin

(introducir

el

corte

rpidamente

Carbonato de Litio al 0.05%).

6. Continuar la diferenciacin en alcohol de 60% hasta que la sustancia
gris y blanca se distingan.
7. Lavar en agua destilada.
8. Finalizar la diferenciacin lavando ligeramente en carbonato de Litio al
0.05% y luego efectuar pasos sucesivos de alcohol de 70% hasta que el
azul verdoso de la sustancia blanca haga un franco contraste con la
sustancia gris incolora.
9. Lavar bien en agua destilada.
10. Colorear durante 6 mint. en solucin de cresil violeta al 0.25% con 5
gotas de cido actico al
10%.
11. Diferenciar en pasos sucesivos de alcohol de 95% (2 pasos)
12. Deshidratar, aclarar y montar.
RESULTADOS:
Mielina
Clulas

= Azul verdoso
= Rosado violeta

METODO RADIOGRFICODE CAJAL 0

IMPREGNACIN

ARGENTICA EN BLOQUE

Fragmentos de 1 a 2 mm de espesor muy frescos e imnediatamente

fijados.
FIJADOR:

Alcohol de 97%.............................. 50

gr.

Amonaco .. 5 a 10 gts.
REACTIVOS:
Sol. de Nitrato de plata en solucin acuosa al 1.8%
Sol. Reductora de Cajal :
Acido piruvlido hidroquinona.. 1-2 gr.
Formol . 5 10 ml.
Agua destilada 160 ml.
Se prepara al momento de usar.

PROCEDIMIENTO:
1

Las piezas de 1-2 mm de grosor sumergir al fijador por 15 das

cambiando diariamente los 7 primeros das.

2. Lavar en agua destilada por x 2hora.

3. Sumergir en el nitrato de plata en la oscuridad de 37C por 5 a 6 das.
4. Lavar rpidamente en agua destilada.
5. Llevar al reductor de Cajal por 24 horas.
6. Lavar en agua destilada.
7. Deshidratar incluir en parafina, cortar de 5 a 6 micras.
8. Desparafinar y montar con resina sinttica Blsamo de Canad.

NOTA:

Tanto el fijador como el nitrato de Ag. deben tener un volumen 20 veces

superior al tamao de la pieza. En el nitrato de plata la pieza debe tener
una tinta marrn muy uniforme si hay destellos indica defectuosa
impregnacin.

Para el material fijado en formol lavar 2 3 das en agua por 24 horas

en agua amoniacal. Lavar en agua destilada y realizar el procedimiento de
coloracin.

FORMOL NEUTRO:

Formol comercial
Fosfato modobsico de sodio
Fosfato dibsico de sodio