ENSAYO DE DEMANDA BIOQUMICA

DE OXGENO (Rio LacramarcaChimbote)

INTRODUCCIN
Todos los animales requieren de oxgeno pues sin l las
reacciones celulares productoras de energa se detienen, la
obtencin de este oxigeno se realiza, mediante la respiracin. La
respiracin de los animales consiste en la captacin de O 2 del
medio, su utilizacin por el animal, la produccin de C0 2 por las
clulas y la liberacin del CO2 desde el animal hacia el medio.
La DBO es una inferencia de la cantidad de materia orgnica
presente en un efluente, medida por medio del consumo de
oxgeno por parte de la flora microbiana de la muestra al
degradarla.
La determinacin de la DBO es una prueba emprica que se
realiza para determinar los requerimientos relativos de oxgeno
de las aguas residuales, efluentes y contaminadas.
La prueba mide el oxgeno utilizado, durante un perodo de
incubacin especificado, para la degradacin bioqumica de la
materia orgnica (requerimiento de carbono), y el oxgeno
utilizado para oxidar materia orgnica, como los sulfuros e in
ferroso. Puede medir tambin el oxgeno utilizado para oxidar las
formas reducidas del nitrgeno (requerimiento de nitrgeno) a
menos que se impida la oxidacin por medio de un inhibidor.
Existen muchas variaciones de la determinacin de la demanda
de oxgeno basadas en los perodos de incubacin, entre las
cuales se encuentra la DBO5 (de 5 das) que ser la que
describiremos en el presente trabajo prctico.
El mtodo consiste en llenar un frasco, con cierre hermtico y
tamao especificado, con la muestra hasta rebosar. Incubarlo a
20 C durante 5 das, asegurndose de que la muestra tenga
bacterias, nutrientes y oxgeno suficiente. El oxgeno disuelto
(OD) se mide antes y despus de la incubacin y la DBO se

calcula por medio de la diferencia de la medicin inicial y final

(Manacorda, 2007).
OBJETIVOS

1.

Aplicar el mtodo de la DBO5, para cuantificar la

degradacin de materia orgnica biodegradable por accin
bacteriana.

2.

Propiciar la discusin de los resultados de la actuacin

bacteriana en el proceso de degradacin de materia
orgnica en condiciones de aerobiosis, en el marco de los
ciclos biogeoqumicos.

3.

Promover el desarrollo de las habilidades y destrezas de

los estudiantes en la aplicacin de tcnicas de estudio y
uso de equipos e instrumentos para investigacin de los
procesos de degradacin de la materia orgnica.

4.

Valorar los cuerpos de agua, como recursos importantes

para conservar la biodiversidad y sostenibilidad de la vida
sobre la tierra.

EQUIPOS Y MATERIALES

PROPORCIONADA POR EL LABORATORIO

EQUIPOS
1

Incubador termosttico para DBO 20C

Oxmetro 0.01mg.l-1 de sensibilidad

Destiladora de agua

GPS

pH metro

Salinometro

Termmetro

Estufa

MATERIALES

Baldes de 10 l

10

Frascos de plsticos o vidrio de 500 ml

11

Botellas DBO de 300ml

12

Matraces Erlenmeyer 250 ml

13

Pipetas graduadas de 1.5 y 10 ml

14

Probetas de 100 ml.

15

Manguera

16

Detergente

PROPORCIONADA POR EL ALUMNO

1

Hielo

Plumn tinta indeleble

Algodn

MTODOS

PREPARACIN DEL AGUA DE DISOLUCIN

Reactivos

Solucin buffer fosfato

-8.5 g de KH2PO4

-21.75 g de K2HPO4
-33.4 g de Na2HPO4.7H2O
-1.7 g de NH4Cl, y enrasar a 1000 ml.

Solucin de nutrientes

-Sulfato de magnesio (Pesar 22.5 g de MgSO 4.H2O, y enrasar

a 1000ml).
-Cloruro de Calcio (Pesar 27.5 g de CaCl2, y enrasar a 1000
ml).
-Cloruro Frrico (Pesar 0.25 g de FeCl 3.6H2O, y enrasar a
100 ml).

Solucin estndar control (Glucosa / Acido

glutmico)

-Pesar 150 g de glucosa, y enrasar a 1000 ml.

-Pesar 150 g de Acido glutmico, y enrasar a 1000 ml.

-Mezclar ambas soluciones en proporcin 1:1. Antes de
pesar la glucosa y el cido glutmico, deben ser secados a
estufa a 103C por 1 hora.

Preparacin
La dilucin se prepara a partir de agua destilada, usando botella
de vidrio.
-Por cada 1000 ml de agua destilada se agrega 1 ml de las tres
soluciones y la solucin buffer.
-Luego se airea el agua por burbujeo, por unas 3 horas (hasta
alcanzar la saturacin de oxgenos equivalente a 9mgo2 l -1),
luego dejar en reposo por 20 min.
- Indicar la temperatura del agua (20C)

PRUEBA CONTROL CON GLUCOSA CIDO GLUTMICO

La glucosa tiene una velocidad de oxidacin sumamente
alta y variable, el cido glutmico la estabiliza, y genera un
consumo similar a las aguas servidas municipales. Se
realiza usando 15 a 20 ml de la solucin estndar de control
glucosa/ acido glutmico, luego se enrasa a 1000 ml con
agua de dilucin inoculada. Con esta disolucin se llena 3
botellas DBO de 300 ml, sin generar burbujas de aire. La
DBO5 debe estar en un rango de 180 a 230 mg.l-1.
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR LA DEMANDA
BIOQUIMICA DE OXGENO
4

Eleccin del lugar de muestreo

-Rio Lacramarca-chimbote

ESTACIN 01: 9 6'55.77"S / 7833'9.17"W

ESTACIN 02: 09 6` 44.8`` S / 78 32 `59.2`` W
ESTACIN 03: 09 6` 32.9``S / 78 32 `51.9`` W

FIGURA 01: Ubicacin de las 3 estaciones de

Preparacin del laboratorio

-Realizar una limpieza general del laboratorio.

-Lavar y desinfectar todos los materiales a usar.

-Desinfectar con leja el lugar en el cual se proceder a realizar
la determinacin de DBO.

-Tener listo todos los materiales a utilizar.

Toma de la muestra

-Se recolecto agua del rio Lacramara en un balde de 10 l.

-Se midi transparencia con el disco de sechi.
-Se llenaron las botellas de 500 ml con la mitad del agua
recolectada, evitando hacer burbujas de aire.
-Con la otra mitad del agua recolectada se midieron parmetros
como Temperatura, pH, Oxigeno y conductividad.
7

Preservacin de la muestras

-Fueron trasladadas en un balde con hielo.

8

Muestras en el laboratorio

-Cuando las muestras llegaron al laboratorio se tom la temperatura

la cual esperbamos que estuviera a los 20C en caso contrario se

tuvo que adicionar agua a unas cubetas y despus incorporar los
frasco para elevar la temperatura a 20C+-1C, despus de haber
alcanzado la temperatura optima se procedi a tomar lectura del PH
de las muestras de las cuales estuvo alrededor de 8.5, para poder
bajar el PH tuvimos que adicionarle HCL 0.2% buscando estar en el
rango de 6.5-7.5, luego se realiz el protocolo para agua procedentes
de ambientes acucolaObtencin de datos

-Al cabo de 5 das las muestra son retiradas de la incubadora y

el oxgenos es medido.
-Si se pas ms de 5 das, de sacar la muestra delas incubadora
el resultado final de DBO5 se debe multiplicar por el factor de
correccin correspondiente.
-Se debe aplicar criterio de seleccin a las muestras, para saber
si el resultado es correcto (2.0 < Oi Of > Oi -0.80).
9

Clculo de la DBO5

-Una vez obtenidos los datos finales y teniendo los datos

iniciales de concentracin de oxigeno se aplica la siguiente
formula.
DBO5 (mg.l-1)
ODf) / Fd

(ODi

Dnde:
DBO5: Demanda bioqumica de oxgeno a los 5 das.
ODi: Concentracin de oxigeno inicial.
ODf: Concentracin de oxigeno final.
Fd: Fraccin volumtrica decimal de la muestra empleada en la
disolucin.
RESULTADOS

PARMETROS FSICOS
PARMETROS

ESTACIN 1

ESTACIN 2

ESTACIN 3

TEMPERATURA
AMBIENTE (C)

19.9

21.9

19.6

TRANSPARENCIA 15.8

16.5

16.75

OXIGENO (mg/l)

8.12

8.2

8.09

pH

7.5

6.9

7.8

14.22 Ms/cm

13.9 Ms/cm

9 6` 44.8``S

9 6`
32.9``S

CONDUCTIVIDAD 14.1 Ms/cm

COORDENADAS

9 6'55.77"S
7833'9.17"W

7832`59.2``W

7832 `51.9``W

TABLA 01: Parmetros fsicos de las 3 estaciones muestreadas

en el Rio Lacramarca..

REGISTRO DE OXGENO INICIAL Y OXGENO

FINAL
Estacin 1

Oxgeno Inicial
: 8.78 mg.l
Oxgeno Final : 8.77mg.l -1

-1

DBO5

: 0.01 mg.l

-1

DILUCIN

Oi (mg/L)

Of (mg/L)

Factor de
correccin
(0.907)

500:1000

6.65

3.81

3.45

500:1000

6.65

3.90

3.53

TABLA 02: Registros del Oxigeno inicial y Oxigeno final,

multiplicando el factor de correccin de la estacin1.

Estacin 2
Oxgeno Inicial
: 8.78 mg.l
Oxgeno Final : 8.27 mg.l -1
DBO5
: 0.51 mg.l -1
DILUCIN

250:1000

Oi (mg/L)

7.82

-1

Of (mg/L)

Factor de
correccin
(0.907)

5.44

4.93

5.68

5.15

5.89

5.34

5.71
TABLA 03: Registros del Oxigeno inicial y Oxigeno final,
5.80
7.90
5.26
multiplicando el factor de correccin de la estacin 2.
5.50
4.98
6.30

500:1000

Estacin 3
Oxgeno Inicial
: 8.78 mg.l
Oxgeno Final : 8.63 mg.l -1
DBO5
: 0.15 mg.l -1

DILUCIN

250:1000

500:1000

Oi (mg/L)

6.93

6.97

-1

Of (mg/L)

Factor de
correccin
(0.907)

5.45

4.94

5.42

4.91

5.46

4.95

5.26

4.77

5.45

4.94

5.34

4.84

TABLA 04: Registros del Oxigeno inicial y Oxigeno final,

multiplicando el factor de correccin de la estacin 3.

APLICACIN DEL CRITERIO DE SELECCIN

Estacin 1
DILUCIN

2.0

>Oi Of<

500:1000

2.0

3.2

500:1000

2.0

3.12

Oi x 0.80
5.32

5.32

TABLA 05: Aplicacin del criterio de seleccin en la estacin 1.

Estacin 2
DILUCIN

250:1000

500:1000

2.0

2.0

2.0

>Oi Of<

Oi x 0.80

2.89

6.25

2.67

6.25

2.48

6.25

2.19

6.32

2.64

6.32

2.92
6.32
TABLA 06: Aplicacin del criterio de seleccin en la estacin 2.

Estacin 3
DILUCIN

250:1000

500:1000

2.0

2.0

2.0

>Oi Of<

Oi x 0.80

1.99

5.54

2.02

5.54

1.98

5.54

2.02

5.57

2.04

5.57

2.13
5.57
TABLA 07: Aplicacin del criterio de seleccin en la estacin 3.

Los resultados ptimos tienen que ser: 2 < (Oi-Of) < (Oi
x 0.8)

CLCULO DE LA DBO5
Estacin 1

Oi Of

Fd

DBO5

3.2

500:1000

6.4

3.12

500:1000

6.24

PROMEDIO

6.32 mg.l-1

TABLA 08: Clculo de DBO5 en la

estacin 1.

Estacin 2
Oi Of

Fd

2.89
2.67

DBO5
11.56

250:1000

10.68

2.48

9.92

2.19

4.38

2.64

PROMEDIO

500:1000

2.92

5.28

10.72 mg.l-1

5.16 mg.l-1

5.84
PROMEDIO TOTAL

TABLA 09: Clculo de DBO5 en la

estacin 2.

7.94 mg.l-1

Estacin 3
Oi Of

Fd

1.99

DBO5

PROMEDIO

7.96

2.02

250:1000

8.08

1.98

7.92

2.02

4.04

2.04

500:1000

2.13

7.98 mg.l-1

4.08

4.12 mg.l-1

4.26
6.05
mg.l-1

PROMEDIO TOTAL

TABLA 10:
REGISTRO FINAL
DEClculo
DBO5de DBO5 en la
estacin 3.

ESTACIONES

DBO5 (mg/l-1)

Estacin 1

6.32 mg.l-1

Estacin 2

7.94 mg.l-1

Estacin 3
6.05 mg.l-1
TABLA 11: Registro final de DBO5 en las tres
estaciones.

VARIACIN DE DBO5 EN LAS TRES ESTACIONES

DE MUESTREO.

GRFICO DE
01: Variacin
dbo5 TRES
en las tres
estaciones
VARIACIN
O2 ENde
LAS
ESTACIONES
de muestreo.
9
8
7
6
5
Oxigeno mg.l-1)

4
3
2
1
0
Estacion 1

Estacion 2
Estaciones de muestreo

DISCUCIONES

Estacion 3

(Chaile et al., 2000) Si hay mucha materia orgnica fcilmente

biodegradable en una muestra, una poblacin de microorganismos
aerbicos, crecer sin dificultad, y s hay un crecimiento apreciable en
la poblacin de estos organismos, entonces ocurrir un descenso en
la concentracin de

oxigeno disuelto. Por tanto el descenso en la

concentracin de oxgeno disuelto en la muestra es directamente

proporcional a su concentracin en materia orgnica.
Talavera et al. (1996) afirman que la descomposicin de la materia
orgnica est influenciada por factores tales como: temperatura, pH y
naturaleza de la materia orgnica.
(Galindo et al 2001) Niveles altos de materia orgnica han sido
medidos en diversos ros como en el rio Sal a travs de
determinaciones

de DBO

a cinco

das

(DBO5).

LA DBO5

da

informacin acerca del contenido de materia orgnica biodegradable

(Chaile et al., 2000) la informacin que nos da el Rio Lacramarca es
que los compuestos orgnicos no biodegradables son escasas.

(Rodier, 1981) En la mayora de los casos el incremento de DBO5

con un Error: 5%, Slidos disueltos y suspendidos, son parmetros
que indican la calidad del agua, para este caso, sera un agua con
mala calidad. Sin embargo el valor ms confiable de la muestra de un
agua de mejor calidad es de aquella agua que tiene el DBO menor
que 3.

(Snoeying et al., 2004) Se puede notar que la DBO va aumentando

a medida que pasan los das, esto se debe a que hay un consumo
continuo de oxgeno disuelto; de igual forma se observa que los
valores obtenidos a una temperatura de incubacin de 35C son
mayores que a 20C; la marcada diferencia entre los valores de DBO,
se debe al hecho de que a mayor temperatura se acelera el consumo
de oxgeno disuelto, debido a una mayor actividad bacteriana y en
consecuencia un mayor requerimiento de energa necesaria para el
crecimiento y la reproduccin de las bacterias.

CONCLUSIONES

10

Se logr determinar la DBO5 del Rio Lacramarca- Per.

11

Los valores de DBO5 para la muestra de la estaciones 1, 2 y 3

fueron de respectivamente.

12

Con los valores encontrados se pudo determinar que el

ambiente acutico no est contaminado.

13

La dilucin de 50% por tener todas las repeticiones aptas en la

estacin 1, 2 Y 3 segn criterio de seleccin, es la que mejor
nos da la calidad del agua a un anlisis de DBO5

14

la tabla de la calidad de agua nos muestra que en las tres

estaciones presenta que el agua esta aceptable con indicios de
contaminacin.

15

En la mayora de estaciones existe riesgo moderado de

contaminacin, en tanto que en la estacin se detecta riesgo
poco ms alto

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Chaile, A. P., N. C. Romero, M. J. Amoroso, M. del V. Hidalgo,

M.
C.
Apella.
2000.
Presencia
del
Plaguicidas

Organoclorados en el Rio Sali, Tucuman Argentina. XVIII

Congreso Nacional del Agua. Las Termas de Rio Hondo
Santiago del Estero, Argentina.

Galindo, M., Vece, M., Perondi, M., Monserrat Araoz, M.,

Garca, M., Del V Hidalgo, M., Apella, M. & Blesa, M., 2001.
Chemical behavior of the Sal River, Province of Tucuman,
Argentina. Environmental Geology 40: 847-852.

Loayza, R. & L. Tapia. 2008. Gua de prctica Ensayo de la

demanda bioqumica de oxgeno (DBO5). Editorial
Universitaria de la Universidad Nacional del Santa.
Chimbote, Per. 35p.

Rodier, J. Anlisis de Aguas: aguas naturales, aguas

residuales, agua de mar. Omega, Barcelona, 1981.

Snoeying, V., Jenkins, D. Qumica del Agua. Editorial

Limusa, 2004. 70-72.

Talavera, V., M. Zapata & D. Snchez. 1996. Las bacterias y

la descomposicin de materia orgnica en los estanques
de Cultivo de camarn de mar. Boletn nicovita camarn de
mar.
Vol.
1.
Edic.01.Noviembre
1996
en
URL:
http://www.nicovita.com.pe/pdf/esp/boletines/bole_9611_0
1.pdf

Manacorda M. D, Cuadros & S, lvarez. 2007. MANUAL

PRCTICO DE MICROBIOLOGA - Tomo II: Microbiologa
Ambiental II. 3p.