PRCTICA NO.

Determinacin de protenas totales en suero

Universidad Anhuac Mayab

Grupo E
Equipo 4:
Maria Emilia Harrison Perez
Cristina Sosa Rosado
Virginia Simn Cervera
Edgar Alfaro Herrera
Jorge Martin Millet
Jos Ral Peniche Gamboa
ngel Briceo Zurita
Laboratorio de Bioqumica
Martes 27 de agosto de 2013.

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Resumen

En esta primera prctica de laboratorio de bioqumica, hicimos una extraccin de sangre

para despus analizar sus componentes y separar el plasma. As pudimos observar la
separacin del plasma y la de los glbulos rojos. Aprendimos las tcnicas para la correcta
extraccin de la sangre. Tambin aprendimos como utilizar la maquina de centrifugado,
aprendimos sobre el lquido Biuret, el cual tomaba un color morado al contacto con el
lquido plasmtico de la sangre.
Aprendimos el procedimiento de la extraccin de sangre, el cual es: limpiar fuertemente
con la torunda en el brazo para quitar bacterias. Enseguida poner el torniquete y proceder a
abrir la jeringa. Con un ngulo de 15 grados introducir la aguja a la vena sin atravesarla,
comenzar la extraccin y antes de finalizar quitar el torniquete y retirarla a una velocidad
adecuada.

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Laboratorio de bioqumica- Prctica 2

ndice

Resumen-------------------------------------------------------------------------------------------------2
Marco terico--------------------------------------------------------------------------------------------4
Planteamiento del problema---------------------------------------------------------------------------5
Objetivos-------------------------------------------------------------------------------------------------5
Mtodos y procedimientos------------------------------------------------------------- --------------6
Cuestionarios--------------------------------------------------------------------------------------------7
Presentacin de resultados---------------------------------------------------------------------------12
Anlisis y discusin-----------------------------------------------------------------------------------12
Conclusiones-------------------------------------------------------------------------------------------13
Referencias bibliogrficas----------------------------------------------------------------------------13

Marco terico
I Semestre

Determinacin de protenas totales en suero

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En qu consiste la reaccin del Biuret?

El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado formado por la condensacin de
dos molculas de urea con eliminacin de amonaco.
Reaccin del Biuret
Si una solucin fuertemente alcalina de sulfato cprico (CuSO4) se aade a una solucin de
protena se forma una complejo entre el ion cprico y los enlaces peptdicos, con aparicin
de una coloracin violeta-prpura, que presenta un mximo de absorcin a 540 nm.
Las caractersticas ms importantes de la reaccin son:
La reaccin del Biuret se aplica, a partir de los tetrapptidos, a todos los pptidos y
protenas.
Su rango de determinacin es de 1 a 6 mg/ml.
No depende de la composicin de aminocidos.
Algunos compuestos (NH4+, Tris, etc.) dan la reaccin.
Mtodo de Biuret
Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los
enlaces peptdicos en medio bsico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de
coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la
reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad
del mtodo es muy baja y slo se recomienda para la cuantificacin de protenas en
preparados muy concentrados (por ejemplo en suero).
Una centrfuga o centrifugadora es una mquina que pone en rotacin una muestra para
acelerar por fuerza centrfuga la decantacin o sedimentacin de sus componentes o fases
(generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad. Existen diversos tipos
de estos, comnmente para objetivos especficos.
Una aplicacin tpica consiste en acelerar el proceso de sedimentacin, dividiendo el
plasma sanguneo y el suero sanguneo en un proceso deanlisis de sangre.
La centrifugacin es una tcnica de sedimentacin, acelerada gracias al uso de fuerza
centrfuga. Se aplica al anlisis o a la separacin de mezclas departculas, clulas, orgnulos
o molculas.
Instrumental
1. Tubos
De vidrio o plstico. Resistentes qumicamente (disolventes, reactivos) y fsicamente
(tensin a las velocidades elevadas que se emplean). Diversos tamaos y formas. Plsticos
especiales para altas velocidades.

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2. Centrfugas
Se puede regular velocidad, tiempo, temperatura. Elevadas velocidades (102-105 rpm).
3. Rotores

Dos tipos: rotor angular o de ngulo fijo

rotor basculante

Planteamiento del problema

Calcular el nmero de protenas de la sangre por medio de la frmula que se desarrollar
posteriormente en el procedimiento. Conocer los valores normales de protenas en sangre.

Objetivos

I Semestre

Determinacin de protenas totales en suero

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Estudiar un mtodo de determinacin de protenas.

Comprender el concepto de un estndar y su utilidad, aplicndolo a la cuantificacin de
las protenas sricas.
Utilizar el mtodo de Biuret, el cual consiste en tartrato de sodio y potasio 18mM, iodato
de potasio, 10 mM, sulfato de cobre 12 mM, hidrxido de sodio 200 mM.
Mtodos y procedimientos
1- Centrifugacin 3000 rpm / 10 min

2- Reaccin para protena mtodo Biuret ( 2ml de reactivo /0.02 de suero)

Esta parte del procedimiento se fundamenta en el hecho de que al reaccionar un reactivo
alcalino de cobre con una sustancia que contiene 2 o ms enlaces peptdicos, se produce un
color violeta debido al complejo que se forma entre el in cprico y la protena.
Colocar 2 ml de reactivo en un tubo y 0.02 ml del estndar del albmina, mezclar y dejar
reposar 10 minutos. El estndar que se usar sirve de referencia para sacar las
concentraciones

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Tiempo de reaccin: 10 min

3- Lectura de absorbancia
Leer a 546 nm el espectrofotmetro ajustando a cero contra el blanco del agua, anotar
primero la lectura del estndar y despus de los problemas.
4- Clculos
Sacar un factor por el que se multiplicarn las lecturas de los problemas obtenido de la
siguiente forma:
Factor= (Lectura del problema) (concentracin del estndar)/ lectura del estndar
Estndar= 7g/dL (los estndares normales van de 6 a .5 g/dL)
Cuestionario
1) Definir estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria de las protenas
ESTRUCTURA PRIMARIA
La estructura primaria es la secuencia de aa. de la protena. Nos indica que las. componen
la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aas. se encuentran. La funcin de una
protena depende de su secuencia y de la forma que sta adopte.
ESTRUCTURA SECUNDARIA
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio.
Los aminocidos, a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas y
gracias a la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, la
estructura secundaria.
Existen dos tipos de estructura secundaria:
I Semestre

Determinacin de protenas totales en suero

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la a(alfa)-hlice
la conformacin beta
Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria.
Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O de un aminocido y el -NHdel cuarto aminocido que le sigue.
En esta disposicin los aas. no forman una hlice sino una cadena en forma de zigzag,
denominada disposicin en lmina plegada.
Presentan esta estructura secundaria la queratina de la seda o fibrona.
ESTRUCTURA TERCIARIA
La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un
polipptido al plegarse sobre s misma originando una conformacin globular.
En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por tanto
la terciaria.
Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as realizar funciones de
transporte , enzimticas , hormonales, etc.
Esta conformacin globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre los
radicales R de los aminocidos. Aparecen varios tipos de enlaces:
El puente disulfuro entre los radicales de aminocidos que tiene azufre.
Los puentes de hidrgeno
Los puentes elctricos
Las interacciones hifrfobas.
ESTRUCTURA CUATERNARIA
Esta estructura informa de la unin , mediante enlaces dbiles ( no covalentes) de varias
cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una
de estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero.
El nmero de protmeros vara desde dos como en la hexoquinasa, cuatro como en la
hemoglobina, o muchos como la cpsida del virus de la poliomielitis, que consta de 60
unidades proteicas.
2) Definir todos los tipos de enlaces que estabilizan una protena (puentes de H,
puentes disulfuro, atracciones electrostticas, etc)
Los enlaces que estabilizan la estructura terciaria de las protenas son:
1. Enlaces ionicos (salinos)
2. Enlaces de hidrgeno
3. Enlaces disulfuro
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4. Interacciones hidrfobas
5. Interacciones electrostticas
1. Enlace onico
El enlace inico, tambin llamado salino o electrovalente es el que se efecta entre metales
y no metales por transferencia de electrones. Siendo esta transferencia del tomo metlico
al no metlico (o ms electronegativo).
Un in es un tomo que gana o pierde un nmero de electrones. Los iones positivos
resultan de la prdida de electrones, y los iones negativos resultan de la ganancia de
electrones. Un enlace inico es debido a la fuerza de atraccin entre los iones positivos y
negativos. Los iones positivos se llaman cationes, debido a que son atrados por el ctodo,
los iones negativos se llaman aniones, por que se mueven hacia el nodo (En electrodo
positivo ocurre la oxidacin y en el electrodo negativo ocurre la reduccin).
Un ejemplo de enlace inico es cuando el sodio y el cloro reaccionan, para formar cloruro
de sodio. El tomo de sodio pierde su electrn y el tomo de cloro lo adiciona en su capa
externa.
Las propiedades de los compuestos que presentan enlace onico son:
Su estado fsico es slido y pueden ser duros o frgiles.
En solucin acuosa son conductores de corriente elctrica.
Sus puntos de fusin y ebullicin son altos.
La forma del cristal es geomtrica (cbica, rmbica, hexagonal)
Son solubles en solventes polares.
Los enlaces inicos forman redes cristalinas
2. Puente de Hidrgeno
En realidad no es un verdadero enlace y origina un comportamiento especial de las
sustancias que lo presentan como por ejemplo el agua, cido fluorhdrico, metanol, ADN.
El agua al solidificarse, el hielo presenta una estructura tetradrica en la que cada tomo de
oxgeno esta rodeado por otros cuatro y entre dos oxgenos est el hidrgeno, cada
molcula es individual y como resultado de la estructura abierta el volumen aumenta
cuando el agua se congela.
Las propiedades de las sustancias con puente de hidrgeno son:
Lquidos de alto poder de disociacin de los cristales inicos.
Puntos de fusin y ebullicin elevados.
3. Puentes disulfuro
I Semestre

Determinacin de protenas totales en suero

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Los enlaces covalentes son los enlaces qumicos mas fuertes que participan en la estructura
proteica. Como ya sabemos los enlaces covalentes se producen cuando dos tomos
comparten electrones.
Adems de los enlaces covalentes que conectan los tomos de cada aminocido y los
que participan en la formacin del enlace peptdico que une los aminocidos unos con
otros, es importante recordar el enlace covalente que puede unir las cadenas laterales de dos
residuos de cistena.
La cistena es el nico aminocido cuya cadena lateral puede formar enlaces covalentes
formando enlaces disulfuro con otra cistena: -CH2-S-S-CH2
4. Interacciones Hidrfobas
Los enlaces hidrofbicos constituyen fuerzas de la mayor importancia en la estructura de
las protenas.
Se forman por la tendencia de las cadenas laterales hidrofbicas de algunos aminocidos a
unirse para disminuir la prdida de estabilidad causada por la intrusin de molculas de
agua.
Las cadenas laterales hidrofbicas tienden a formar una estructura interior, centro
hidrofbico de las protenas, donde se asocian ntimamente protegindose de la presencia
del agua.
Sin embargo, no todas las cadenas hidrofbicas se encuentran en el interior de las protenas.
Cuando se encuentran en la superficie, expuestos a las molculas polares del agua, las
cadenas hidrofbicas tambin se asocian por enlaces hidrofbicos, provocando el
ordenamiento de las molculas de agua que las rodean.
5. Interacciones electrostticas
A. Enlaces inicos Puentes salinos: Los enlaces inicos se forman cuando los
aminocidos que llevan cargas de signos opuestos son yuxtapuestos en el centro
hidrofbico de las protenas. Este tipo de enlaces inicos centrales son poco frecuentes
porque la mayora de los aminocidos cargados tienden a ocupar las partes superficiales de
las protenas. A pesar de eso, las atracciones inicas centrales (puentes salinos) pueden ser
muy importantes en la estabilizacin de la estructura proteica porque pueden ser casi tan
fuertes como los enlaces covalentes.
B. Cubiertas hdricas y Residuos cargados superficiales: Los aminocidos cargados
elctricamente, casi siempre localizados en la superficie de las protenas, promueven el
plegamiento apropiado interaccionando con el solvente acuoso. Las molculas polares del
agua pueden formar cubiertas alrededor de los residuos cargados de estos aminocidos, lo
cual ayuda a solubilizar y estabilizar las protenas.
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Laboratorio de bioqumica- Prctica 2

3) Investigar 3 padecimientos en los que se encuentren alterados los valores

normales de las protenas totales de la sangre. Descrbalos brevemente.
1. Talasemia: Es un grupo muy heterogneo de anemias hereditarias caracterizadas por la
disminucin o ausencia total de la sntesis de una o varias cadenas de la hemoglobina. Este
trastorno sanguneo que se transmite de padres a hijos (hereditario) hace que el cuerpo
produzca una forma anormal de hemoglobina (la protena en los glbulos rojos que
transporta el oxgeno), lo cual ocasiona una destruccin excesiva de los glbulos rojos,
conduciendo con ello a una anemia.
2. Mieloma mltiple: Es un cncer que comienza en las clulas plasmticas en la mdula
sea. La mdula sea es el tejido suave y esponjoso que se encuentra en el interior de la
mayora de los huesos y ayuda a producir las clulas sanguneas.
Causas
Las clulas plasmticas ayudan al cuerpo a combatir la enfermedad produciendo protenas
llamadas anticuerpos. En el mieloma mltiple, las clulas plasmticas crecen fuera de
control en la mdula sea y forman tumores en reas de hueso slido.
La proliferacin excesiva de estos tumores seos hace que sea ms difcil para la mdula
producir plaquetas y glbulos sanguneos saludables.
El mieloma mltiple afecta principalmente a los adultos mayores. Un tratamiento pasado de
radioterapia aumenta el riesgo de sufrir este tipo de cncer.
3. Macroglobulinemia de Waldenstrom:
Es un cncer de los linfocitos B (un tipo de glbulo blanco) y est asociado con
sobreproduccin de protenas llamadas anticuerpos IgM.
4) Qu es la albmina?
La albmina es una protena producida por el hgado. El examen de albmina en suero
mide la cantidad de esta protena en la parte lquida y transparente de la sangre.
El rango normal es de 3.4 a 5.4 gramos por decilitro (g/dL).

I Semestre

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5) Investigar los Niveles de protena total en los humanos.

Entre el 15 y 20% del peso corporal de un adulto, en buen estado fisiolgico, est
constituido por protenas. Aproximadamente la mitad se encuentra en la musculatura, la
quinta parte en la piel y el resto, en otros tejidos y lquidos orgnicos, salvo en la bilis y en
la orina, donde no se encuentran en condiciones normales.
Presentacin de resultados
Para obtener la determinacin de protenas despus de que la sangre fue centrifugada, se
utiliz la siguiente frmula:
Estndar 7g/ dl entre 0.533 Abs
Numero de protenas * (0.533) / 7.7g =

8.26 protenas

Anlisis y discusin:
Las protenas de la sangre estn dentro del rango normal que es de 6 a 8.3, y se obtuvieron
esos resultados porque el tejido sanguneo. Las protenas son un constituyente muy
importante de las clulas y los tejidos del cuerpo humano. Hay diferentes tipos de protenas
con diferentes funciones, son as protenas los enzimas, algunas hormonas, la hemoglobina,
el LDL (transportadora de colesterol), el fibringeno, el colgeno, las inmunoglobulinas,
etc.
Las protenas totales del suero se pueden separar en dos grandes grupos: la albmina y las
globulinas. La albmina es la protena de ms concentracin en la sangre. La albmina
transporta muchas molculas pequeas (bilirrubina, progesterona, y medicamentos), y tiene
tambin la funcin de mantener la presin sangunea ya que favorece la presin osmtica
coloidal para mantener lquidos en el torrente sanguneo y que no pasen a los tejidos,
manteniendo un equilibrio. 5

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Por lo tanto, se puede concluir que el paciente que fue estudiado est sano en cuanto a
protenas, pues segn la determinacin que se le hizo, tiene un valor de 8.26 dentro de los
parmetros normales.
Conclusiones
Con esta prcticas aprendimos cmo cuantificar las protenas de la sangre utilizando la
centrifugadora y a determinar el valor de las protenas en el paciente. Tambin aprendimos
cmo usar el lquido de Biuret con el plasma de la sangre que, una vez aplicado, lo
convierte a un color morado. Gracias a esta prctica nosotros como alumnos logramos
obtener mediante las operaciones propias para esto el valor de las protenas de la sangre de
una persona, ubicando si su rango estaba dentro de lo normal. En nuestro caso el paciente
se encontr dentro de las medidas adecuadas, es decir que contaba con el nivel adecuado.
Referencias bibliogrficas
1) http://biomodel.uah.es/tecnicas/centrif/inicio.htm
2) http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000583.h
tm
3) http://www.guatequimica.com/tutoriales/proteinas/Estructura_de_la
s_proteinas.htm
4) http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000588.h
tm
5) http://www.pulevasalud.com/ps/contenido.jsp?
ID=60819&TIPO_CONTENIDO=Articulo&ID_CATEGORIA=103163&A
BRIR_SECCION=747&RUTA=1-747-1159-103163
6) http://docencia.izt.uam.mx/japg/RedVirtualJAP/CursoDRosado/2_Est
ructuradeCompuestosBioquimicos/5-3_Proteinas_Estructura.pdf
7) http://tiempodeexito.com/quimicain/15.html
8) http://www.monografias.com/trabajos10/compo/compo.shtml
9) http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003480.h
tm
10)
http://www.saludalia.com/vivir-sano/proteinas
I Semestre

Determinacin de protenas totales en suero

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11)

http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/27%20M

%C3%89TODOS%20PARA%20LA%20CUANTIFICACI%C3%93N%20DE
%20PROTE%C3%8DNAS.pdf
12)

http://ocw.uv.es/ocw-formacio-permanent/2.Practicaespectrofotometria.pdf

13)

http://www.binasss.sa.cr/revistas/rccm/v15n3-4/art4.pdf

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