Mtodos de generacin de Cerdos transgnicos

Introduccin
Desde el descubrimiento de la doble hlice de ADN en la dcada de los 50
se abrieron grandes posibilidades para comprender la estructura del
material gentico y los procesos de la expresin gnica. Posteriormente, en
la dcada de los 80 se desarroll la tecnologa capaz de manipular el
material gentico y producir animales transgnicos. Este desarrollo ha
permitido la aplicacin del conocimiento en diversos aspectos de la vida,
que tiene un beneficio directo sobre toda la humanidad como se pone de
manifiesto en el diagnstico rpido y preciso de enfermedades de origen
infeccioso y gentico, la seleccin de animales, el desarrollo de la terapia .
En este sentido, la posibilidad de crear animales transgnicos que
codifiquen un carcter de nuestro inters o anulen algn carcter
indeseable, puede tener una gran repercusin en la produccin animal y en
el desarrollo biotecnolgico.
La produccin de estos animales transgnicos es una empresa
tecnolgicamente compleja, a la par que apasionante, que requiere un
amplio equipo multidisciplinar (biologa molecular, reproduccin asistida,
bioseguridad etc.

Qu
es
transgnico ?

un

cerdo

Metodologa Caractersticas Referencia Inyeccin pronuclear Primeros

cerdos transgnicos Hammer et al., 1985; mediante virus Brem et al., 1985
Retrovirus aviares Primeros cerdos transgnicos producidos Petters et al.,
1987 mediante virus Inyeccin pronuclear Uso de ovocitos madurados y
fecundados in vitro Kubish et al., 1995 Transgnesis mediada por
espermatozoides Primeros cerdos transgnicos Sperandio et al., 1996
producidos mediante SMGT Transgnesis mediada por espermatozoides
Generacin de cerdos hDAF Lavitrano et al., 1997 Lentivirus Leucemia
murina de Moloney Infeccin de ovocitos Cabot et al., 2001 Transferencia
nuclear Primeros cerdos transgnicos producidos Park et al., 2001 mediante
transferencia nuclear Transgnesis mediada por espermatozoides e ICSI
Primer lechn transgnico SMGT-ICSI Lai et al., 2001 Transferencia nuclear
Primeros cerdos transgnicos knock-out Lai et al., 2002 Lentivirus Leucemia
murina de Moloney Inyeccin en el espacio perivitelino del zigoto Hofmann
et al., 2003 Lentivirus Anemia infecciosa equina Inyeccin en el espacio
perivitelino del zigoto.

Como se produce un cerdo

transgnico?
Inyeccin pronuclear Mediante esta tcnica se cre el primer animal
transgnico por Gordon et al. (1980), basndose en la microinyeccin de
genes directamente en el proncleo de ovocitos de ratn recin fecundados.
Esta tcnica ha sido la ms usada en la produccin de ratones transgnicos
desde la dcada de los 80 (Gordon y Ruddle, 1981) y a lo largo de los aos
ha sido adaptada para su uso en animales de granja. En la especie porcina
el proceso comienza con la obtencin de zigotos en estado pronuclear o
embriones de dos clulas procedentes de cerdas inseminadas, aunque de
forma alternativa tambin pueden usarse zigotos producidos in vitro
mediante tcnicas de FIV o ICSI (Kubish et al., 1995; Koo et al., 1997).
Posteriormente y mediante el empleo de un sistema de micromanipulacin
embrionaria se inyecta en el proncleo pequeos volmenes de una
solucin de ADN con agujas de pequeo calibre (Hammer et al., 1985; Brem
et al., 1985). El equipo de microinyeccin consta bsicamente de un
microscopio invertido y dos brazos de micromanipulacin. Uno de ellos est
conectado a una pipeta de sujecin, que por presin negativa mantiene fijo
el zigoto, por lo que habitualmente se le denomina holder. Una vez que el
zigoto est firmemente sujeto, se inyecta el ADN en el interior del ncleo
con el empleo de una microaguja adapatada al otro brazo de
micromanipulacin. Tras este proceso de inyeccin los embriones son
transferidos a una hembra receptora.

Conclusiones
del futuro

perspectivas

En los 25 aos transcurridos desde la generacin de los primeros cerdos

transgnicos hasta nuestros das, se ha producido un gran avance en las
tcnicas y mtodos. Sin embargo, este campo de la ciencia a un se
encuentra en una fase inicial de desarrollo. Probablemente se ver
potenciado en el futuro prximo por la demanda de nuevos modelos que
permitan estudiar enfermedades humanas. Es de esperar que para ello se
haga uso principalmente de la tcnica de transferencia nuclear por las
grandes ventajas que aporta en la generacin de animales knock-out (Tabla
2). Pero igualmente se potenciar el uso de lentivirus para aprovechar su
alto grado de eficiencia, o el uso de los espermatozoides como vectores,
una vez que puedan ser resueltos los problemas de repetitividad que ahora
adolece. Por otra parte, si se consigue desarrollar el aislamiento y
mantenimiento de las clulas madre embrionarias ayudara a desarrollar
nuevos modelos transgnicos. En ltimo trmino, la inyeccin pronuclear
seguir disponible para resolver algunos modelos aun cuando su eficiencia
sea reducida.

Cerdos
clonados
trasplant de rganos

para

Son miles las personas que esperan recibir trasplantes de rganos, pero los
donantes son escasos. Son miles los que fallecen cada da en la espera. Por
ello se ha pensado en la posibilidad de trasplantar rganos de cerdos a
humanos, pero ello no es fcil por el rechazo agudo y violento que se
produce del rgano trasplantado. Sin embargo, se est trabajando para que
esto no suceda. Algunos avances recientes abren esperanzas.
La demanda de rganos para trasplantes ha estado aumentando
rpidamente, en la misma medida que han ido mejorando las tcnicas
quirrgicas, los cuidados mdicos y el desarrollo de nuevas drogas utilizadas
para impedir el rechazo. Sin embargo, los donantes de rganos no han
aumentado en igual proporcin, de modo que cada vez son ms largas las
listas de espera. En este momento, slo en los Estados Unidos, 60.000
personas estn esperando un trasplante, y lo ms probable es que la mayor
parte
de
ellos
no
lo
va
a
lograr.
Es por esta razn que se ha pensado utilizar rganos provenientes de
animales para ser trasplantados a los humanos (xenotrasplantes). Para ello
se ha debido buscar aquellos animales que inmunolgicamente sean ms
parecidos al hombre. La primera idea ha sido utilizar rganos de primates,
dado que son los ms cercanos al hombre inmunolgicamente hablando (el
chimpanc tiene el 97% de los genes semejantes a los humanos). Sin
embargo, estos son difciles de manejar y reproducir. La segunda
alternativa, que parece ms plausible, han sido los cerdos. Ellos son ms
fciles de criar y manejar, y tambin tienen una gran semejanza
inmunolgica
con
el
hombre.
De esto se ha venido hablando desde hace algunos aos. Ya en 1992, por
primera vez se logr un cerdo modificado genticamente (se llam Astrid),
con el objeto de hacerlo ms semejante al humano desde el punto de vista
inmunolgico. En ese entonces, su creador vaticin que en los prximos tres
aos, ya estaran
listos para el ensayo del trasplante en
humanos (Trasplante de rganos y tejidos de una especie a otra) . Pas el
tiempo, pero ello no sucedi. De nuevo en 1998, se volvi a sostener que
todo estaba listo para el primer trasplante de rin. Pero tampoco nada
sucedi. Es que los ensayos previos de trasplantes de rganos de cerdo a
monos, evidenciaron un serio problema que no se haba considerado: el
rgano trasplantado despertaba en unas pocas horas una violenta e
inmediata reaccin inmunolgica, que se denomin "reaccin hiperaguda",
contra la que no haba nada que hacer, ya que se produca a pesar de
administrar todo tipo de drogas inmunosupresoras. El tejido trasplantado
era violentamente rechazado por una reaccin vascular que terminaba en
un bloqueo a la irrigacin del rgano y muerte por falta de
oxgeno (Trasplante
de
rganos
de
cerdos
a
humanos) .
Las investigaciones han continuado, ensayando trasplantes de tejidos de
cerdos a monos. Se ha logrado algn progreso, pero hasta ahora ninguno de
los monos trasplantados ha logrado sobrevivir ms all de algunos meses.

Pruebas
en
cerdos
alimentacin transgnica

con

Los investigadores trabajaron con un grupo de 168 cerdos de destete,

lechones que fueron separados de las madres para que empezaran a
alimentarse por s mismos y a los que se les realiz un seguimiento durante
227 semanas. Se formaron dos grupos de animales, la mitad de los cerdos
(84) comieron una dieta compuesta por maz y soja transgnica, la otra
mitad recibieron una dieta basada en los cultivos convencionales, maz y
soja sin modificaciones genticas. Los expertos explican que realizaron
comparativas en base a 20 parmetros distintos, el aumento de peso, las
posibles anomalas en los riones, aparicin de lceras de estmago, peso
del tero, etc. Los investigadores detectaron que los cerdos alimentados con
transgnicos tenan una tasa ms elevada de inflamacin del estmago
considerada grave y en un 25% de las hembras el peso del tero era mucho
mayor y no se corresponda con el peso corporal.
A los cerdos se les practic una autopsia ciega, los investigadores no saban
si el animal que estaban examinando perteneca a uno u otro grupo de los
animales del estudio. Se determin que la inflamacin del estmago variaba
en los animales, pero lo ms preocupante era que 23 cerdos del grupo
alimentado con semillas transgnicas tenan el estmago severamente
inflamado, en el grupo de los ejemplares alimentados con productos
tradicionales se detectaron slo 9 animales que tenan este problema. Los
expertos explican que tanto la soja como el maz transgnico utilizados en la
alimentacin eran similares a las variedades de trigo y soja tradicionales,
cumplan el principio de equivalencia sustancial. Los investigadores tuvieron
que comprar la alimentacin transgnica a los distribuidores de venta al por
menor, por cuestiones de patente no pudieron cultivar y producir la
alimentacin que se destinara a los cerdos, quiz esto hubiera sido lo ms
correcto y fiable en el desarrollo del estudio, con ello se tendra la certeza
de que las semillas no habran sufrido algn tipo de alteracin que hubiera
provocado los problemas citados.

Conclusiones
Mie parece fascinante todas las cosas impresionantes que se pueden
hacer y la multitud de utilidades que se les puede dar a todo esto,
pero tambin pienso que no se debe abusar el sentido de cosas
innecesarias, sino solo en las que pueden aportar beneficios.

Ya que todava no sabemos como este tipo de alteraciones genticas

a largo plazo puedan alterar nuestro ecosistema o incluso nuestros
organismos ya que hay productos destinados para el uso
comestible ,e incluso de trasplant de rganos para los humanos, y
creo que es importante resaltar como la tecnologa a ayudado a este
tipo de mtodos .